具有益肾健骨功效的组合物及其制备方法与流程

1.本发明涉及医药领域，特别是涉及具有益肾健骨功效的组合物及其制备方 法。


背景技术：

2.钙与生命活动和疾病有着十分密切关系。摄取钙量的不足及钙代谢的失调 会引起儿童佝偻病、中老年人骨质疏松等疾病。目前我国规定正常人的钙需要 量为800mg/天，因此，摄入足够量的钙是保证机体健康所必须。
3.目前，以天然生物原料生产的钙添加剂多为以下几类：骨粉—由动物骨骼 粉碎后制成。但不易被机体吸收，更值得注意的是，动物在食用饲料中摄入的 重金属都聚集在骨骼中，不易排出，如果人们再食用骨粉，实际上是重金属的 二次浓缩，对健康十分不利。蛋壳粉—属骨粉类，是将蛋壳粉碎后制得。但鸡 舍消毒剂以及饲料中的金属均能污染蛋壳。天然生物钙—它是贝壳粉碎后的产 品，未经特殊处理，属于天然碳酸钙类，不易被机体吸收。
4.因此，非常有必要提供一种补钙效果好、安全无毒的补钙产品。


技术实现要素：

5.基于此，本发明的目的是提供一种具有益肾健骨功效的组合物。
6.实现上述目的的技术方案包括以下：
7.一种具有益肾健骨功效的组合物，其活性成分由包括下列重量份的组分制 备而成：
8.对虾头壳干粉2000
‑
6000份、党参625
‑
1875份、山楂500
‑
1500份、甘草50
‑
150 份、生姜25
‑
75份和维生素d2 0.002
‑
0.004份。
9.在其中一些实施例中，所述组合物的活性成分由包括下列重量份的组分制 备而成：
10.对虾头壳干粉3000
‑
5000份、党参1025
‑
1475份、北山楂800
‑
1200份、甘 草80
‑
120份、生姜35
‑
65份和维生素d2 0.002
‑
0.004份。
11.在其中一些实施例中，所述组合物的活性成分由包括下列重量份的组分制 备而成：对虾头壳干粉4000份、党参1250份、北山楂1000份、甘草100份、 生姜50份和维生素d2 0.003份。
12.本发明的另一目的是提供一种具有益肾健骨功效的产品，其包括上述的组 合物，以及药品、食品或保健品中可接受的载体；其中，所述载体占产品总重 量的0.01
‑
99.99％。
13.在其中一些实施例中，所述产品的剂型为口服制剂。
14.在其中一些实施例中，所述产品为药品、食品或保健品。
15.在其中一些实施例中，所述药物制剂的剂型为片剂、胶囊剂、口含剂、颗 粒剂、丸剂、散剂、膏剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴丸剂 或贴剂。
16.本发明的再一目的是提供一种上述的组合物或产品在制备预防或治疗小儿 佝偻
性、绝经期妇女骨质疏松症及哺乳妇缺钙症的产品中的应用。
17.本发明的另一目的是提供一种上述的组合物的制备方法，其包括以下步骤：
18.取所述对虾头壳干粉，加入水和乳酸，混合，加热，进行固液分离，将所 得液相浓缩，析出沉淀，进行固液分离，取所得固相制备对虾头壳提取物；
19.取党参、北山楂、甘草、生姜，加水提取，滤过，取滤液浓缩成清膏，再 加入维生素d2的有机溶液，再与所述对虾头壳提取物混合。
20.在其中一些实施例中，所述对虾头壳干粉与所述乳酸的质量比为1： (0.5
‑
1.0)，优选为1：(0.8
‑
1.0)。
21.在其中一些实施例中，所述固液分离的方式为离心。
22.在其中一些实施例中，所述加水提取包括：加水煎煮1
‑
3小时，每次1
‑
3小 时。
23.在其中一些实施例中，所述加热包括煮沸1
‑
2小时。
24.在其中一些实施例中，上述的组合物的制备方法，其包括以下步骤：新鲜 对虾头壳，干燥，粉碎，得对虾头壳干粉；取所述对虾头壳干粉，加入水搅拌 成浆，加入乳酸继续搅拌，煮沸，离心分离，液相浓缩，低温静置，析出沉淀， 离心分离，沉淀物烘干，粉碎，得对虾头壳提取物细粉；称取党参、北山楂、 甘草、生姜，加水煎煮1～3次，每次1
‑
3小时，滤过，滤液浓缩成清膏；维生 素d2先用乙醇溶解，再加入上述清膏中，再与所述对虾头壳提取物细粉混合均 匀即得。
25.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
26.本发明的组合物，是特殊组合之良方，标本兼治。方中主药对虾头壳干粉 提供所需的钙、磷及多种微量元素，以达补钙健骨之效，佐以党参、北山楂、 甘草，益气健脾、助运化，缓解缺钙者之脾气虚、肾虚症状，各组分经科学、 合理的辩证配伍，相辅相成，共达益肾健骨之效。本发明的组合物通过动物试 验证明安全无毒，用于预防或治疗小儿佝偻性、绝经期妇女骨质疏松症及哺乳 妇缺钙症具有很好的疗效。
具体实施方式
27.本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或 按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售 产品。本发明中的“％”，如无特别说明，均为质量百分比。
28.除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技 术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是 为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。
29.以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
30.实施例1
31.对虾头壳干粉4kg，加入水搅拌成浆，加3.2kg乳酸，继续搅拌30分钟， 再添加水搅匀，煮沸1.5小时，离心分离，滤液减压浓缩成清膏，低温静置，析 出沉淀，离心分离，沉淀物烘干，粉碎过筛，得对虾头壳提取物细粉。称取党 参1.25kg、北山楂1kg、甘草0.1kg、生姜0.05kg，加水煎煮2次，每次1.5小 时，滤过，滤液减压浓缩成清膏；0.003g维生素d2先用乙醇溶解，再加入上述 清膏中；与对虾头壳提取物细粉混合均匀，烘干，粉碎，即得混合粒。
32.取上述混合粒，再加适量硬脂酸镁、滑石粉、混匀，充填，制成胶囊。
33.实施例2
34.取实施例1中的混合粒，再加适量硬脂酸镁、滑石粉、混匀，压制成片剂。
35.实施例3
36.取实施例1中的混合粒，再加蜂蜜制丸，干燥，用碳粉包衣，打光，制成 丸剂。
37.实施例4
38.取实施例1中的混合粒，粉碎，再加适量蔗糖和糊精，制成冲剂。
39.实施例5
40.取实施例1中的混合粒，粉碎，制成散剂。
41.1、对虾头壳不同乳酸加入量的对比研究
42.取9份对虾头壳干粉，每份均为100g，分别加入水搅拌成浆，各取3份分 别加入60g、80g、100g乳酸，继续搅拌30分钟，再添加水搅匀，煮沸1.5小时， 离心分离，滤液减压浓缩成清膏，低温静置，析出沉淀，离心分离，沉淀物烘 干，称重，计算收率。结果如表1所示，结果显示，对虾头壳用0.8
‑
1倍乳酸处 理后，具有很好的收率。天然海洋动物对虾，营养成分丰富，对虾的头壳含有 丰富的钙磷。对虾头壳中的钙主要是以碳酸钙(少量磷酸钙)的形式存在，水 溶性差，难吸收。本发明用乳酸处理后，虾头壳的钙由无机钙反应生成有机钙 (乳酸钙)。对虾头壳提取物除含乳酸钙外，还含有人体必需的多种微量元素 (硒铁等)及18种氨基酸，如谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸等。
43.表1对虾头壳不同倍数乳酸加入量的收率
[0044][0045][0046]
2、对虾头壳用0.8倍乳酸处理后的收率
[0047]
取对虾头壳干粉1份175g及9份525g，分别加入水搅拌成浆，然后各加入 140g及420g乳酸，继续搅拌30分钟，再添加水搅匀，煮沸1.5小时，离心分 离，滤液减压浓缩成清膏，低温静置，析出沉淀，离心分离，沉淀物烘干，称 重，计算收率。结果如表2所示。
[0048]
表2对虾头壳干粉用乳酸处理后的收得率
[0049][0050]
3、党参、北山楂、甘草、生姜十批提取结果
[0051]
按比例称取党参、北山楂、甘草及生姜，加水煎煮2次，第一次1.5小时， 第二次1小时，滤过，滤液减压浓缩成清膏，称重。取清膏，测定干固物，计 算干固物得率。结果如表3所示，干固物得率的均值为22.3％。
[0052]
表3党参等4味药材的提取得率
[0053][0054][0055]
4、钙含量测定结果
[0056]
对虾头壳提取物中钙含量测定方法采用先灰化，使钙溶解于盐酸成氯化钙 的形式，然后用edta
‑
2na标准溶液滴定测定钙。结果如表4所示，对虾头壳 提取物中钙的含量为16.30％。
[0057]
表4对虾头壳提取物中钙的含量
[0058]
序号钙(％)115.80216.94
316.26416.34515.95616.50均值16.30
[0059]
一、药效
[0060]
实验材料
[0061]
选择本发明实施例4的冲剂，使用时用温热蒸馏水稀释，试验药液1、试验 药液2的浓度分别为47％、79％，其中钙元素为9mg/ml、15mg/ml。
[0062]
活性钙片：市售光华药厂产品。每片含钙元素25mg，试验药液用蒸馏水稀 释，浓度为60％，其中钙元素为15mg/ml。
[0063]
低钙饲料：参照1975年aoac法制备。用18070
‑
70日立原子吸收分光光 度计测钙含量为0.35％。
[0064]
普通大白鼠饲料：由中山医科大学实验动物中心提供。用18070
‑
10日立原 子吸收分光光度计测钙含量为0.492％。
[0065]
动物：四周龄sd大鼠，体重55
‑
60克，雌雄各半，由中山医科大学实验动 物中心提供。
[0066]
给药方法
[0067]
1、动物分组和饲养
[0068]
动物在实验室饲养观察一周，然后按体重随机分成6组，每组10只，雌雄 各半。试验全过程动物单笼饲养、自由进食、饮双蒸水。空白对照组喂饲普通 大白鼠饲料，其余4组喂饲低钙饲料(见表5)。
[0069]
2、给药方法
[0070]
试验1、2组分别以试验药液1、2灌胃，容量为2ml/100g体重。活性钙 组以活性钙试验药液灌胃，容量为2ml/100g体重。试验对照组和空白对照组以 等体积双蒸水灌胃，各组动物连续给药42天。
[0071]
表5动物分组和给药
[0072][0073]
*试验前组动物于试验开始前一天脱颈椎处死，取双侧股骨，剔除肌腱，量 度长度、宽度，称鲜重。测股骨钙、磷含量。
[0074]
3、试验方法
[0075]
(1)生长情况：每天记录各鼠进食饲料量，试验结束时统计各组动物从饲 料中摄入钙量。并观察给药前、后体重变化情况。
[0076]
(2)测股骨长度、宽度和鲜重：各实验组动物在给药42天后，脱颈椎处 死，取双侧股骨，剔除筋腱，测长度、宽度、鲜重。
[0077]
(3)测双股骨灰分种以及其钙磷含量。钙含量测定：高锰酸钾滴定法；磷 含量测定：钼蓝比色法
[0078]
(4)钙代谢试验：各实验组动物于给药后第39天，开始连续收集3天的 粪和尿，测定其钙含量。粪、尿测定：18070
‑
70日立原子吸收分光光度计。
[0079]
(5)拍全鼠骨骼x光片：各实验组动物在给药42天后，分别麻醉、俯卧 固定，拍全鼠骨骼x光片。
[0080]
(6)数据处理：全部数据用spss软件包方差分析项。
[0081]
结果：
[0082]
1、动物生长情况
[0083]
结果见表6。在试验期内各组大鼠体重不断增加，实验结束时本发明试验1、 2组大鼠活动状态及毛色优于活性钙组，体重增重大于实验对照组和活性钙组， 但其差别无显著性(p＞0.05)。
[0084]
表6各组动物体重及增重(n＝10)
[0085]
组别实验前体重(g)实验后体重(g)增重(g)试验对照组76.40
±
19.33110.80
±
34.9834.40
±
16.70实验1组75.00
±
16.83128.14
±
31.0444.86
±
23.95实验2组74.50
±
16.16118.00
±
31.5139.13
±
20.79活性钙组75.50
±
16.93101.14
±
35.4026.14
±
19.76空白对照组75.90
±
19.81208.00
±
72.73127.67
±
58.06*
[0086]
*与其他组比较p＜0.05。
[0087]
2、对大鼠股骨长度、宽度、鲜重、灰分重的影响
[0088]
结果见表7。实验1、2组动物股骨鲜重及灰分量接近实验对照组和活性钙组，组间无显著性差异p＞0.05。空白对照组股骨骨宽、鲜重、灰分重与其他组比较有显著性p＜0.05，提示低钙饲料可影响大鼠的骨宽、鲜重、灰分重。
[0089]
表7各组动物股骨长度、鲜重、灰分比较(n＝10)
[0090]
组别骨长(cm)骨宽(mm)鲜重(g)灰分(g)试验对照组2.68
±
0.292.5
±
0.20.762
±
0.1910.168
±
0.057实验1组2.75
±
0.192.6
±
0.10.882
±
0.1770.263
±
0.058实验2组2.67
±
0.252.5
±
0.10.811
±
0.1760.228
±
0.08活性钙组2.58
±
0.23*2.4
±
0.10.714
±
0.1750.199
±
0.05空白对照组2.98
±
0.363.0
±
0.4**1.284
±
0.247**0.438
±
0.121**实验前组2.26
±
0.16**2.5
±
0.10.581
±
0.301 [0091]
*与空白对照组比较p＜0.05**与其他组比较p＜0.05
[0092]
3、对大鼠股骨钙、磷含量的影响
[0093]
结果见表8。实验1、2组剂量能明显提高股骨钙含量、磷含量，与试验对照组比较有显著性p＜0.05。并与空白对照组无显著性差异p＜0.05。且高于活性钙组，但无显著性差别p＞0.05。试验对照组股骨钙、磷含量显著低于空白对照组(p＜0.05)，提示：喂饲低钙饲料可致大鼠股骨钙、磷密度(含量)显著下降。
[0094]
表8各组动物双侧股骨钙、磷密度(含量)比较(n＝10)
[0095]
组别钙含量(％)磷含量(％)钙/磷比值试验对照组8.67
±
0.952.80
±
1.143.10:1实验1组11.52
±
0.90*5.68
±
0.43**2.03:1实验2组11.68
±
1.39*4.28
±
0.73**2.72:1活性钙组11.04
±
1.06*4.66
±
0.99**2.38:1空白对照组12.68
±
4.49*5.22
±
0.78**2.43:1实验前组7.70
±
0.854.00
±
1.12**1.92:1
[0096]
*与试验对照组、试验前组比较差异显著p＜0.05；**与试验对照组比较差异显著p＜0.05；钙含量％＝双侧股骨钙量/双侧股骨鲜重*100％；磷含量％＝双侧股骨磷量/双侧股骨鲜重*100％。
[0097]
4、对大鼠股骨钙储留量、利用率的影响
[0098]
结果见表9。试验1、2组增加大鼠双侧股骨钙量均高于活性钙组和试验对照组，但各组间无显著性差异p＞0.05。各组大鼠钙利用率为：试验1组＞试验2组＞试验对照组＞活性钙组，但组间差异无显著性p＞0.05。
[0099]
表9各组大鼠股骨钙储留量、利用率比较(n＝10)
[0100][0101]
*各组间均数比较p＞0.05；总摄入钙量＝(饲料钙量+药液中钙量)*42天； 利用率＝(实验组双侧股钙量
‑
试验前组双侧股钙量)/总摄入钙量*100％。
[0102]
5、体内代谢情况
[0103]
结果见表10。试验1、2组动物对钙的吸收率分别达82％、81％，活性钙组 吸收率84％比较，无显著差异p＞0.05；钙的储留率分别为97％、93％，与活性 钙组比较亦无显著差异p＞0.05。
[0104]
表10各组大鼠钙吸收率、储留率比较(n＝10)
[0105][0106]
吸收率＝(三天钙摄入钙量
‑
粪钙量)/三天摄入钙量*100％；储留率＝(三天 钙摄入钙量
‑
粪钙量
‑
尿钙量)/(三天摄入钙量
‑
粪钙量)*100％。
[0107]
6、各组大鼠骨骼x光片分析比较
[0108]
x线下骨化的骨骼由于x线穿透时吸收较多而显示致密白影，未骨化的软 骨组织及骨膜由于无钙质沉着，x线吸收较少，与肌肉不能分辨，在x光片上 显示较黑的软组织密度。因而，根据骨骼x光骨密度的改变程度，指定标准， 评定骨钙化量。
[0109]
本实验取位置相对固定和生理变异不大的骨盆、股骨及尾骨作观察对象， 结果见表11。
[0110]
表11各组大鼠x光片骨密度分析比较(n＝6)
[0111]
[0112][0113]
标准：“+～++(1
‑
2级)”骨皮质菲薄，边缘模糊。“+++～+++++(3
‑
5级)”骨 皮质边缘相对清晰，密度较高。“+++++～++++++(5
‑
6级)”骨皮质边缘最清晰， 密度高。各组动物骨骼x光片显示：股骨、骨盆骨化程度为：空白对照组＞活 性钙组＞试验1组、试验2组＞＞实验对照组。空白对照组动物股骨的骨皮质 较厚，边缘清晰，密度高，实验对照组动物股骨、骨盆的骨皮质菲薄，边缘模 糊。提示：喂饲低钙饲料可致大鼠骨骼骨皮质密度下降。
[0114]
可见，喂饲低钙饲料大鼠股骨钙含量、磷含量显著低于空白对照组、试验1 组、试验2组及活性钙组(p<1.05)。x光片也显示低密度的菲薄皮质。实验对 照组、试验1组、试验2组及活性钙组动物的体重增值、股骨长度、宽度和骨 灰分量均无显著差别p＞0.05。本发明的组合物对大鼠正常生长发育无不良影 响。本发明的试验1组、试验2组吸收率分别达82％、81％，体内储留率为97％、 93％，与活性钙组的吸收率84％，体内储留率95％无显著差别(p＞0.05)。 试验1组、试验2组剂量与大鼠股骨钙含量呈量效关系、并显著高于试验对照 组(p＜0.05)，而与活性钙组无差别(p>0.05)。全鼠骨骼x光片显示：试验 1组、试验2组剂量及活性钙都能提高大鼠股骨、骨盆骨密度。
[0115]
二、本发明的组合物急性毒性试验
[0116]
药物：本发明实施例4的冲剂，每克含生药3.45。试验时用蒸馏水配成 277.500g提取物/l浓药液。
[0117]
动物：昆明种小鼠，体重18～20g，由中山医科大学实验动物中心提供。
[0118]
方法与结果：
[0119]
取健康小鼠20只，雌雄各半。实验前禁食12小时但不禁水。每只动物按 0.35ml/10g体重灌服本发明组合物的浓药液，上、下午分别给药一次。两次给药 相隔12小时。每次给药后观察动物外观行为和毒性反应。结果表面给药后20 分钟动物活动减少、伏地，少数动物走路步态不稳。第二次给药后，动物除了 这些症状外，约有30％动物出现稀便现象。24小时后上述体征消失。连续观察 7天，无动物死亡。动物活动自如，皮毛光亮，大便正常，眼睛无异常分泌物， 动物体重增加。经计算动物给药剂量为19.420g提取物/kg,相当于67.030克生 药/kg，也相当于成人(60kg)日用量(0.424g生药/kg)的158倍。由于受药物 浓度和给药容积的限制，已不能再加大剂量进行d50测定。
[0120]
三、本发明的组合物长期毒性试验
[0121]
试验材料
[0122]
药物：实施例4制备的冲剂，每包8克。动物：8d大鼠，体重90～100克， 雌雄各半，由广东省医用动物中心提供。
[0123]
实验方法：
[0124]
1、动物：大白鼠60只，随机分成三组。每组20只，雌雄各半。
[0125]
2、成人(60kg计)日服量32克，即每公斤体重为0.53克。
[0126]
大鼠剂量：高剂量组：相当于成人日服量90倍。低剂量组：相当于成人日 服量30
倍。
[0127]
3、给药方法
[0128]
给药组每天上午投放药物饲料饼(每100克体重约10克)下午将撒落的饲 料称重，按重量数补回。待药物饲料全部吃完，才加上常规大鼠饲，每周称体 重一次，药物饲料量根据体重增加而调配。
[0129]
对照组给予常规大鼠饲料。
[0130]
药物饲料饼制法：本发明实施例4制备的冲剂与大白鼠常规饲料颗粒混匀， 加适量水，制成饼状，即为药物饲料饼。其中本发明的组合物与常规大鼠饲料 比重见表12。
[0131]
表12饲料饼中本发明的组合物和常规大鼠饲料量(g/100g饲料饼)
[0132][0133]
4、试验：动物在饲养实验室条件观察一周后，开始连续给药60天。实验 室：室温22
±
1℃、湿度30
‑
50％，雌雄分养、5鼠一笼。试验周期：根据新药审 批办法《有关中药部分的修补和补充规定》要求，将试验周期定为60天。
[0134]
5、检测项目：(1)试验全过程观察动物外观、活动状态、皮毛等情况。 (2)观察给药前后体重情况。(3)血常规：用日本r
‑
100sysmex血球计数仪 测定血常规：wbc、dc、plt。用日本r
‑
1000sysmes血球计数仪测定血常规： rbc、hb。(4)生化指标：用美国spectrum高校全能自动生化分析仪测定 bun、sgpt。(5)连续用药两月后全部动物进行解剖，心、肝、脾、肺、肾、 胃、睾丸、子宫等器官肉眼观察检察。(6)各组动物心、肝、脾、肾、睾丸、 子宫分别作病理学检查。
[0135]
1、一般情况：本发明组合物的二个剂量组和对照组的大白鼠行为、活动、 食欲正常，无稀便、眼内无明显分泌物、皮毛光滑。
[0136]
2、体重：本发明的组合物给药前及连续给药30天、60天各组动物体重变 化，见表13。
[0137]
表13给药前后各组动物体重变化(n＝20，)
[0138][0139]
经方差分析各组间均数值无显著差异p＞0.05。连续给药30天、60天二个 剂量组和空白对照组的动物体重与给药前均有增加。但给药30天和60天二个 剂量组与对照组动物体重组间均无显著差异(p＞0.05)。
[0140]
3、血常规：连续给药60天后，各组动物分别测定血常规wbc、dc、plt、 rbc、hb结果见表14。
[0141]
表14本发明的组合物给药60天对大鼠血常规的影响(n＝20，)
[0142][0143][0144]
*与低剂量组比较差异显著p＜0.05。各项目结果分别经方差分析，各剂量 组与对照组数值两两比较无显著差异(p＞0.05)。试验结果表明，二个剂量组 的大白鼠连续服用本发明的组合物60天，对wbc、、dc、plt、rbc、hb等 未见明显影响。
[0145]
4、生化指标
[0146]
连续用药本发明的组合物两月后，分别测定bun、sgpt项目，结果见表 15。
[0147]
表15给药60天对大鼠生化指标的影响
[0148]
组别bun(mmol/l)sgpt(iu/l)空白对照组10.6
±
1.363.3
±
13.7低剂量组10.8
±
1.358.7
±
6.2高剂量组8.9
±
1.057.3
±
7.0
[0149]
方差分析各组间数值无显著差异(p＞0.05)。结果表明，本发明的组合物 二个剂量组大白鼠连续服用本发明的组合物60天，各生化指标均在正常范围， 经方差分析，各组间无显著差异(p＞0.05)。
[0150]
5、试验结束后，各组动物脱颈椎处死，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、胃、 肠、睾丸、子宫未发现异常。各组动物的心、肝、脾、肺、肾、睾丸、子宫等 组织做组织学见擦汗，均未发现异常病理学改变。
[0151]
四、通过中山医科大学附属一院、三院、暨南大学附属医院等单位253例 临床验证，证明本发明的组合物对中医证属脾气虚、肾虚维生素d缺乏性佝偻 病小儿、绝经期妇女骨质疏松症及哺乳妇缺钙症状有比较好的辅助治疗作用。
[0152]
(一)、一般资料：
[0153]
1、病例选择：选择属中医脾气虚、肾虚维生素d缺乏性佝偻病小儿；足跟 骨x线诊断为骨质疏松症的绝经期妇女及缺钙哺乳妇为观察对象。全部病例均 来自上述三间医院门诊及少数住院病人。
[0154]
2、病例：临床设计病例180例，实际上完成175例；对照组临床设计总病 例70例，实际完成78例。各组病例完成情况详见表16。
[0155]
表16各组病例完成情况
[0156][0157]
4、年龄
[0158]
小儿维生素缺乏性佝偻病组年龄最小为6个月，最大为3.6岁；哺乳妇女组， 24
‑
34岁，多为初产妇；绝经期妇女组53
‑
60岁，绝经5年左右，详见表17。
[0159]
表17 253例病例年龄分布情况
[0160][0161]
5、病情，见表18。
[0162]
表18各医院病例病情分布情况
[0163][0164]
中山一院治疗组与对照组病情比：x2＝0.257，p＞0.05；中山三院治疗组与 对照组病情比：x2＝0.547，p＞0.05；绝经期妇女治疗组与对照组病情比： x2＝0.116，p＞0.05；哺乳期妇女治疗组与对照组病情比：x2＝0.970，p＞0.05。
[0165]
(一)治疗前两组小儿主要中医症状及症候比较
[0166]
1、治疗前两组小儿主要中医症状比较，见表19。
[0167]
表19治疗前两组小儿主要中医症状比较
[0168]
症状治疗组(90例)对照组(30例)x2p多汗71250.278＞0.05夜啼57210.440＞0.05夜惊47170.179＞0.05枕秃64154.458＜0.05牙迟35140.563＞0.05足软迟缓93
ꢀꢀ
食少便溏76221.855＞0.05瘦清长65172.516＞0.05面色苍白46130.545＞0.05头发稀少76240.320＞0.05囟宽项软62200.051＞0.05唇舌淡66181.904＞0.05
[0169]
治疗组与对照组除枕秃外其他症状之间均无显著差异。
[0170]
2、治疗前两组患者肾虚脾虚例数比较，见表20。
[0171]
表20两组治疗前肾虚脾虚例数比较
[0172]
组别总例数肾虚％脾虚％治疗组903842.225257.88对照组301136.771963.33
[0173]
x2＝0.287，p＞0.05；治疗前两组患者肾虚脾虚例数比，经统计学处理差别 无显著意义。
[0174]
(二)绝经期妇女组治疗前症状比较见表21
[0175]
表21 96例绝经妇女主要症状治疗前两组之间比较
[0176][0177][0178]
表20说明绝经妇女两组主要症状治疗前比较无显著性差异。
[0179]
(三)哺乳妇女组治疗前两组症状比较，见表22。
[0180]
表22哺乳妇女组治疗前两组症状比较
[0181][0182]
表22说明哺乳妇女治疗前两组症状比较无显著性差异。
[0183]
(二)、疗效结果比较
[0184]
(一)维生素d缺乏性佝偻病小儿总疗效比较
[0185]
1、两组总疗效比较，见表23。
[0186]
表23小儿缺钙组两组总疗效比较
[0187][0188]
x2＝2.7，p＞0.05。上述结果表明本发明的组合物总疗效与活性钙组总疗效 比较经统计学处理无显著意义。
[0189]
2、两组中医症状疗效比较，见表24。
[0190]
表24两组中医症状疗效比较
[0191]
[0192][0193]
表23说明本发明的组合物对维生素d缺乏性佝偻病小儿表现出的主要症状 有较好的疗效，其结果与活性钙相似。但对表现出食少便溏、溲清长、面色苍 白、唇舌淡等症状的疗效明显优于活性钙组。
[0194]
3、肾虚与脾虚疗效比较见表24
[0195]
表24肾虚与脾虚疗效比较
[0196][0197]
两组之间肾虚疗效比x2＝0.182p＞0.05两组之间脾虚疗效比x2＝0.774p ＞0.05。治疗组肾虚与脾虚疗效比x2＝0.08，p＞0.05说明书本发明的组合物对 肾虚和脾虚患者的疗效无选择性。
[0198]
(二)绝经妇女组缺钙疗效比较
[0199]
1、绝经后妇女组缺钙总疗效比较，见表25。
[0200]
表25绝经后妇女组缺钙总疗效比较
[0201]
组别总例数显效有效无效总有效率(％)治疗组5812311574.1对照组383231268.4
[0202]
两组疗效经统计学处理x2＝0.371p＞0.05差别无显著性意义。
[0203]
2，绝经后妇女组缺钙主要症状比较，见表26。
[0204]
表26 96例缺钙绝经妇女主要症状治疗后两组之间比较
[0205][0206]
结果表明本发明的组合物对绝经后缺钙妇女主要症状改善与活性钙相似。 (三)、哺乳期妇女组缺钙疗效比较
[0207]
1、哺乳期妇女组缺钙总疗效比较见表27
[0208]
表27哺乳期妇女组缺钙总疗效比较
[0209][0210][0211]
两组总疗效经统计学处理x2＝2.73p＞0.05差别无显著性意义。
[0212]
2、哺乳期妇女组缺钙主要症状比较见表28。
[0213]
表28哺乳期妇女缺钙主要症状治疗后两组之间比较
[0214][0215]
(三)、治疗组和对照组对生化指标的影响
[0216]
1、对血钙、血磷、碱性磷酸酶含量的影响见表29。
[0217]
表29 96例绝经妇女血钙、血磷、碱性磷酸酶治疗前后的观察
[0218][0219]
*治疗前后自身比较差异经统计学处理p＜0.01。表29结果说明本发明的 组合物可以明显提高绝经妇血钙浓度，对血磷浓度有较好的降低作用。
[0220]
2、对尿钙、羟脯氨酸的影响见表30
[0221]
表30缺钙小儿、绝经妇、哺乳妇尿钙、羟脯氨酸治疗前后观察
[0222][0223]
*治疗前后自身比较差异具有显著意义p＜0.05。
[0224]
通过对患维生素d缺乏性佝偻病缺钙小儿90例、绝经妇女96例、哺乳妇 37例的临床观察，发现本发明的组合物对这些患者表现的缺钙总疗效及主要症 状有较好的改善作用，与活性钙相比，疗效相近(p＞0.05)；对小儿伴有食少 便溏、溲清长、面色苍白、唇舌淡
等脾肾两虚所致的症状表现改善更为明显， 与活性钙相比(p＜0.05)。
[0225]
生化检验发现本发明的组合物能显著提高绝经妇女血钙浓度，显著降低血 磷浓度(治疗前后自身对照p＜0.01)，同时也能明显改善缺钙小儿、绝经妇、 哺乳妇的尿钙/肌酐浓度。
[0226]
本发明的组合物未发现对血液、心、肝、及肾有损害作用。
[0227]
五、本发明的组合物辅助治疗小儿缺钙(维生素d缺乏性佝偻病)的临床 验证
[0228]
(一)、合格受试者的确定
[0229]
(一)诊断标准：
[0230]
1、中医诊断辩证标准：脾气虚证：包括气虚和脾虚两部分。
[0231]
气虚主证：(1)神疲懒言；(2)体倦乏力；(3)自汗；(4)舌质淡、 舌体胖或有齿印、苔薄白；(5)脉细弱；脾虚主证：(1)胃纳减少或食欲差； (2)面色萎黄或少华；(3)形体消瘦；(4)大便失调(溏、烂、先硬后溏、 时溏时硬)；(5)舌质淡，苔薄白；(6)脉细弱；次症：口淡不渴，喜热饮， 口泛清涎，腹痛绵绵，消瘦或虚胖；浮肿，短气，排便乏力，小便清长。气虚 主证2个加脾虚主证2个，或气虚主证舌象加脾虚主证2个，气虚主证舌象加 脾虚主证1个与次症2个，即可诊断脾气虚证。
[0232]
肾虚证：主证：(1)颈软乏力；(2)枕秃；(3)足软迟缓；(4)舌质 淡胖有齿痕，苔白；(5)脉沉迟。次症：面色苍白，畏寒肢冷，下利清谷，或 五更泄泻，夜尿增多。主证2个以上或主证1个加2个即可诊断。
[0233]
2、西医诊断标准：维生素d缺乏性佝偻病。
[0234]
(二)纳入标准：1、符合上述中医诊断辩证标准、西医诊断标准者。2、 年龄在3个月
‑
7岁以内。
[0235]
(三)排除标准
[0236]
1、不符合上述中医、西医诊断标准的患儿；
[0237]
2、近一个月来服用维生素d及其他钙制剂治疗者；
[0238]
3、合并有心血管、肝、肾、造血系统等严重原发性疾病患者。
[0239]
4、呆小病、软骨营养不良、脑积水、抗维生素d佝偻病等患儿；
[0240]
5、不能配合服药者。
[0241]
(二)、临床实施方案
[0242]
(一)本次临床观察是在第一次临床观察基础上补做的，故在一间本研究 采用简单随机化方法，将合格受试者随机分为治疗组与对照组。
[0243]
(二)对照药物的选择：选取“活性钙”冲剂(光华药业)为对照药物。
[0244]
(三)双盲法的实施：选择外观、形态、大小与本发明相近的“活性钙
”ꢀ
冲剂作为对照药。
[0245]
(四)服法与剂量：服法：治疗组与对照组从就诊开始服药，连服三周。 剂量：两组均口服，治疗组每次1包(实施例4的冲剂，每包8g)，每日两次； 对照组每次2包，每日三次。
[0246]
(五)病情分级：根据维生素缺乏性佝偻病病情轻重分：
[0247]
(1)轻度：出现精神症状(如多汗、枕秃、烦躁不安、夜惊、夜啼等)， 或伴有轻度骨胳改变(如方颅、颅骨软化、肋串球等)。血生化检查，血钙稍 低或正常(不低于2.2mmol/l)，血磷稍低(3.7
‑
4.0mg/dl)，x线检查胫骨干骺 端临时钙化带模糊。
[0248]
(2)中度：中度骨胳改变(颅骨软化、肋串球、手镯、肋膈沟、鸡胸、漏 斗胸、方颅、下肢轻度畸形；囟门闭合及出牙延迟)。血钙、血磷均低 (1.5
‑
2.2mmol/l、3.0
‑
3.7mg/dl)，x线检查表现：胫骨干端到骨骼中心之间的 透明区增宽，骨干骨膜似乎与骨皮质分离。
[0249]
(3)重度：严重鸡胸、下肢重度畸形或有活动功能障碍，全身营养低下， 精神发育延缓、贫血。血钙、血磷降低(1.7mmol/l、3.0mg/dl以下)，x线检 查尚可见严重畸形或骨折。
[0250]
(六)观察项目
[0251]
1、一般项目：性格，年龄，病程，病史等。
[0252]
2、一般症状：面色萎黄或白，神疲，自汗，夜啼，夜惊，烦躁不安，纳呆， 大便失调，小便清长等。
[0253]
3、舌象与脉象：(1)舌象。舌质：淡、淡红、红、胖、边有齿印；舌苔： 薄、白、黄、厚。(2)脉象：平脉、沉、缓、细、软、弱、濡。
[0254]
4、安全性观测：(1)一般体格检查；(2)血、尿、便常规化验；(3) 心电图、肝、肾功能检查。
[0255]
5、疗效性观测：(1)详细问病史、观察患儿体征；(2)血钙、血磷生化 指标；(3)长骨(胫骨)x线。
[0256]
6、观察方法
[0257]
对本发明组合物适应症进行认真观察，每周登记观察结果一次，连续观察 三周。
[0258]
(三)、疗效评定标准
[0259]
1、显效：精神症状消失，血钙、血磷值正常或接近正常，血钙值在2.2mmol/l 以上，血磷值在3.7mg/dl以上，x线检查胫骨干骺端临时钙化带重新出现。
[0260]
2、有效：大部分精神症状消失，血钙值1.7
‑
2.2mmol/l，血磷值为 3.4
‑
3.7mg/dl，x线检查胫骨干骺端临时钙化带模糊。
[0261]
3、无效：上述精神症状、理化指标、x线等于观察前同。
[0262]
(四)、统计方法与资料总结
[0263]
分类资料用x2检验，等级资料用ridit分析，两样本均数比较用t检验。
[0264]
1、一般资料
[0265]
本研究选择合格受试对象80例，其中治疗组50例，对照组30例。
[0266]
2、两组可比性检验
[0267]
(一)性别，80例患儿中男性34，女性49，男：女＝1.：1.35，两组患者性 别构成比如表31所示：
[0268]
表31两组患者性别构成比
[0269]
组别例数男％女％治疗组502142.002958.00对照组301343.331757.67
[0270]
x2＝0.017p＞0.05。两组患者性别比较经统计学处理p＞0.05，差别无显著 性意义。
[0271]
(二)年龄：两组患者年龄最小为6个月，最大为3.5岁，两组患者年龄分 布如表32：
[0272]
表32两组患者年龄分布比较
[0273][0274]
两组患者年龄比较经t检验p＞0.05，差别无显著性意义，说明组间年龄相 似。
[0275]
(三)病情：两组患者治疗前病情分级(轻、中、重)比较如表33所示。
[0276]
表33两组患者病情分级比较
[0277]
组别例数轻％中％重％治疗组501836.002754.00510.00对照组301033.331653.33413.33
[0278]
x2＝0.143p＞0.05，差别无显著性意义。
[0279]
(四)两组患者诊治比较见表34。
[0280]
表34两组患者治疗前症状比较
[0281][0282]
治疗前两组患儿症状比较，经统计学处理，除苔白、舌淡体胖(p＜0.05) 之外，差
别无显著性意义。
[0283]
(五)治疗前两组病人血钙、血磷低于正常及x线异常比较，见表35。
[0284]
表35两组治疗前血钙、血磷异常及x线异常比较
[0285][0286]
(六)治疗前本发明的组合物脾气虚、肾虚比较，见表36。
[0287]
表36治疗组脾气虚、肾虚比较
[0288][0289][0290]
3、疗效比较 (一)两组总疗效比较，如表37所示。
[0291]
表37两组总疗效比较
[0292]
组别例数显效％有效％无效％总有效率％治疗组501632.02856.0612.088.0对照组301033.31550.0516.783.3
[0293]
x2＝0.344p＞0.05，两组差别无显著性意义。
[0294]
(二)两组患者病情轻、中、重分层疗效比较，见表38。
[0295]
表38病情与疗效的关系
[0296][0297]
x2＝0.344p＞0.05，两组差别无显著性意义。
[0298]
(三)两组患者治疗前后症状改善有效率比较，见表39。
[0299]
表39两组症状疗效比较
[0300][0301][0302]
表39说明，本发明的组合物与活性钙冲剂对主要症状改善疗效相近(p＞ 0.05)，但对纳差、便溏、脉沉细症状的改善本发明的组合物明显优于活性钙冲 剂
[0303]
(四)两组患者治疗前后血钙、血磷值及x线比较，见表40。
[0304]
表40两组患者治疗前后血钙、血磷值及x线比较
[0305][0306]
治疗后两组血钙检验x2＝0.162p＞0.05，血磷检验x2＝0.137p＞0.05，x 线检验x2＝0.017p＞0.05。
[0307]
表40说明，本发明的组合物对血钙、血磷、x线异常疗效与活性钙相似。
[0308]
(五)年龄与疗效的关系，如表41。
[0309]
表41年龄与疗效的关系
[0310][0311][0312]
表41说明，治疗组与对照组有效病例的平均年龄比较经统计学处理，差别 无显著性意义(p＞0.05)，说明本发明的组合物与活性钙冲剂对年龄均无选择 性。
[0313]
(六)治疗前后，本发明的组合物对脾气虚、肾虚患儿疗效比较，见表42。
[0314]
表42治疗组前后脾气虚、肾虚患儿治疗比较
[0315][0316]
说明本发明的组合物对维生素d缺乏性佝偻病患儿证属脾虚、肾虚者疗效 相近。
[0317]
本研究共有合格受试者80例，其中治疗组50例，对照组30例，治疗组总 有效率为88％，对照组总有效率83.3％，两组总疗效经统计学处理，p＞0.05， 表面本发明的组合物与活性钙冲剂疗效差别无显著性意义。治疗组与对照组主 要症状改善疗效相似，但本发明的组合物对伴有纳差、便溏症状明显优于活性 钙组，两组对血钙、血磷、x线等检查指标异常的疗效也相近(p＞0.05)本发明 的组合物对心、脏、肾未发现有损害作用。
[0318]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对 上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技 术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。