新冠病毒活性抑制剂的制作方法

1.本发明涉及生物医药技术及医药制剂，特别涉及用于新冠病毒的制剂，具体的，其展示一种新冠病毒活性抑制剂。


背景技术：

2.新冠病毒危害之大危害之广是众所周知的，新冠病毒含有血管紧张素转换酶2(ace2)，黏膜细胞同样含有血管紧张素转换酶2，新冠病毒凭借着这种病毒受体与黏膜细胞相结合，侵入细胞内部。通过血管紧张素转换酶2，可以迷惑黏膜细胞中含有的识别蛋白，使病毒被当做营养物质进入了细胞内部。当病毒进入到细胞之后，就将自己的遗传物质rna留在细胞内部，这种rna可以骗过细胞内的核糖体，合成出rna复制酶。复制酶会根据病毒rna生成出rna副链，于是会产生出更多不同的病毒蛋白质结构。通过高尔基体分泌到细胞外，开始感染新的细胞。蔓延到肺泡最后引发肺炎。
3.冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,nsp3)中有一个g4结合域，即sars特有的宏观结构域(sud)，在基因组复制/转录中起着关键作用。g4结构是由dna或rna中富含鸟嘌呤的区域形成的四螺旋结构，可调节基因组稳定性、基因表达和蛋白质质量控制，以进行调节病毒的复制周期；且sars-cov-2 rna基因组中也发现了g4结构，并在病毒蛋白nsp3中预测了一个sud样基序，同样可证明g4结构与结合蛋白的相互作用是抗击新冠病毒的潜在抗病毒靶点之一。
4.因此，有必要提供一种新冠病毒活性抑制剂来实现上述目的。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种新冠病毒活性抑制剂。
6.技术方案一如下：
7.一种新冠病毒活性抑制剂，以百分比计，包括：15％-25％的5-ala、3％-7％的用于提供亚铁离子的添加物、抑菌剂、以及溶剂；其中，本制剂制成液体口服制剂。
8.进一步的，用于提供亚铁离子的添加物由枸橼酸亚铁构成。
9.进一步的，用于提供亚铁离子的添加物由硫酸亚铁构成。
10.进一步的，用于提供亚铁离子的添加物由柠檬酸铁铵+维生素c构成。
11.进一步的，溶剂选用水、甘油、二甲亚砜、乙醇、丙二醇、聚乙二醇之一，也可选用其中之若干物质通过1：1比重配置而成。
12.进一步的，抑菌剂选用苯酚、甲酚、麝香草酚、羟苯酯类、苯甲酸及其盐、山梨酸及其盐、硼酸及其盐类、戊二醛、苯甲醇、苯乙醇、三氯叔丁醇、氯已定、聚维酮碘、挥发油、硫柳汞、醋酸苯汞、硝酸苯汞、氯化苯甲烃铵、溴化十六烷铵、度米芬其中之一。
13.进一步的，抑菌剂为苯甲酸0.03％～0.1％与尼泊金0.05％～0.1％，混合后使用。
14.进一步的，还包括甜味剂，甜味剂选用甜菊苷、糖精钠、阿司帕坦、甘油、山梨醇、甘露醇。
15.进一步的，甜味剂由甜菊苷0.025％～0.05％与糖精钠0.03％构成，混合后使用。
16.进一步的，制剂制成后，进行包装上的避光处理。
17.与现有技术相比，本发明通过外源添加5-ala及亚铁离子，可增加宿主细胞内ppix和血红素的生成，干扰宿主或病毒基因组中g4结构与病毒蛋白nsp3或宿主g4结合蛋白的相互作用，从而抑制sars-cov-2感染。
附图说明
18.图1是本发明的实施例2的抑制剂处理后细胞新冠活性曲线示意图。
19.图2是本发明的实施例4的新冠病毒浓度对照表。
20.图3是本发明的实施例6的死亡记录表。
21.图4是本发明的实施例6的大剂量使用体重记录表。
具体实施方式
22.实施例1：
23.本实施例展示一种新冠病毒活性抑制剂，以百分比计，包括：15％-25％的5-ala、3％-7％的用于提供亚铁离子的添加物、抑菌剂、以及溶剂；其中，由于ppix在肠内的吸收效率低，而且会与其他物质结合，因此考虑制成液体口服制剂，更有利于在胃内吸收,本制剂制成液体口服制剂。
24.本实施例可选用确定添加比：
25.15％的5-ala、3％的用于提供亚铁离子的添加物；
26.20％的5-ala、5％的用于提供亚铁离子的添加物；
27.25％的5-ala、7％的用于提供亚铁离子的添加物；
28.其中，5-ala用于提供外源性的5-ala，外源性的5-ala进入体内后，正常的代谢平衡被打破，5-ala被代谢旺盛的细胞或其他恶性细胞选择性吸收，在细胞内转化为原卟啉ix(ppix)，ppix在体内进一步与亚铁离子反应，生成血红素，血红素已知是g4结构的配体，外源添加5-ala增加宿主细胞内ppix和血红素的生成，干扰宿主或新冠病毒基因组中g4结构与病毒蛋白nsp3、宿主g4结合蛋白的相互作用；
29.同样，g4结构也作为本制剂进行抗新冠病毒的潜在靶点，新冠病毒中，g4结构具有调节病毒复制周期的功能，而血红素正是g4结构的配体，因此利用本制剂可以使新冠病毒的复制受到破坏，从而达到抑制新冠病毒活性的效果。
30.提供亚铁离子的添加物用于提供生产血红素的亚铁离子，可选用如下方式：
31.1)用于提供亚铁离子的添加物由枸橼酸亚铁构成；
32.2)用于提供亚铁离子的添加物由硫酸亚铁构成；
33.3)用于提供亚铁离子的添加物由柠檬酸铁铵+维生素c构成。
34.制剂制成后，进行包装上的避光处理，5-ala以及其他添加物的稳定性不足，进行避光处理可有效保证制剂活性。
35.溶剂选用水、甘油、二甲亚砜、乙醇、丙二醇、聚乙二醇之一，也可选用其中之若干物质通过1：1比重配置而成。
36.抑菌剂选用苯酚、甲酚、麝香草酚、羟苯酯类、苯甲酸及其盐、山梨酸及其盐、硼酸
及其盐类、戊二醛、苯甲醇、苯乙醇、三氯叔丁醇、氯已定、聚维酮碘、挥发油、硫柳汞、醋酸苯汞、硝酸苯汞、氯化苯甲烃铵、溴化十六烷铵、度米芬其中之一。
37.抑菌剂为苯甲酸0.03％～0.1％与尼泊金0.05％～0.1％，混合后使用。
38.还包括甜味剂，甜味剂选用甜菊苷、糖精钠、阿司帕坦、甘油、山梨醇、甘露醇。
39.甜味剂由甜菊苷0.025％～0.05％与糖精钠0.03％构成，混合后使用。
40.实施例2：
41.制备样品细胞a：选用caco-2细胞，并使用5-ala进行细胞处理，半抑制浓度ic
50
＝39mmol/l，也可选用浓度为ic
50
＝35mmol/l-ic
50
＝45mmol/l区间内任一浓度；
42.制备样品细胞b：选用caco-2细胞，并使用实施例1的新冠病毒活性抑制剂进行细胞处理，半抑制浓度ic
50
＝63mmol/l，也可选用浓度为ic
50
＝55mmol/l-ic
50
＝70mmol/l区间内任一浓度；
43.分别利用新冠病毒样本进行两个样品细胞的处理，并实施检测新冠病毒活性，参阅图1，图1中a为样品细胞a的新冠病毒活性曲线，图1中b为样品细胞b的新冠病毒活性曲线，从曲线数据中可得出，通过5-ala以及亚铁离子的添加物，可于72小时内极大程度的抑制新冠病毒活性。
44.实施例3：
45.制备样品细胞c：选用veroe6细胞，并使用5-ala进行细胞处理，半抑制浓度ic
50
＝570mmol/l，也可选用浓度为ic
50
＝550mmol/l-ic
50
＝600mmol/l区间内任一浓度；
46.制备样品细胞d：选用veroe6细胞，并使用实施例1的新冠病毒活性抑制剂进行细胞处理，半抑制浓度ic
50
＝695mmol/l，也可选用浓度为ic
50
＝690mmol/l-ic
50
＝700mmol/l区间内任一浓度；
47.实验所得数据与具体实施例2相近，也可得出结论，通过5-ala以及亚铁离子的添加物，可于72小时内极大程度的抑制新冠病毒活性。
48.实施例4：
49.实施例4为对实施例2、3的进一步的补充，选用实施例1的新冠活性抑制剂、以及常规使用的α-干扰素进行实验对比，具体为：
50.1)制备3份实验样品细胞，样品细胞可选用实施例2或实施例3所选用的caco-2细胞或veroe6细胞，并分样品1、样品2、样品3置入实验器皿；
51.2)测试：
52.2-1)样品1不进行处理，直接进行新冠病毒感染实验；
53.2-2)对样品2进行新冠病毒感染，感染后使用实施例1的新冠活性抑制剂处理；
54.2-3)对样品3进行新冠病毒感染，感染后使用α-干扰素处理；
55.3)数据记录：通过基于crispr的新冠病毒检测方法每12小时进行3组样品的新冠病毒浓度检测剂记录。
56.参阅图2，从图2记录可得知，最开始感染时，3组样品的新冠病毒浓度一致，随着时间的，样品1的新冠病毒浓度急速增长至36小时回落，36小时内增长率可达185％，最终于72小时回落至初感染的140％水平；样品2，即使用实施例1的新冠病毒活性抑制剂处理，新冠病毒浓度增长率放缓，36小时内增长率最巅峰值为140％水平，最终于72小时回落至初感染的50％水平；样品3，即为使用α-干扰素处理，新冠病毒浓度增长率相对样品1稍微下降，36
小时内增长率最巅峰值为180％水平，最终于72小时回落至初感的110％水平。
57.从图2的对照可得出，使用实施例1的新冠病毒活性抑制剂，能够有效的对新冠病毒的增长进行抑制。
58.实施例5：
59.对实施例1所提供的新冠病毒活性抑制剂进行毒性实验，根据gb1593.3-2014“食品安全国家标准-急性经口毒性试验”，选择5只禁食的雌性大鼠，以250mg/kg体重的剂量进行测试，观察2小时后大鼠的中毒情况。结果，5只大鼠均无明显中毒迹象。
60.实施例6：
61.对实施例1所提供的新冠病毒活性抑制剂进行高剂量致死率测试：
62.选择10只禁食的雌性大鼠，分为两组，一组给予300mg/kg体重剂量的药物，另一组给予2500mg/kg体重剂量的药物，给药后持续观察两周。
63.参阅图3及图4的死亡记录表格和大鼠体重记录表格，所有大鼠均未死亡，也没有明显的中毒迹象，且所有的大鼠体重均有增加。
64.综合实施例5、实施6所展示，实施例1所提供的新冠病毒活性抑制剂，在达到250mg/kg的大剂量使，不会产生中毒现象，在达到2500mg/kg的超大剂量使用时，不会造成死亡，且大鼠体重均持续增长，可证明超大剂量使用实施例1的新冠病毒活性抑制剂，对大鼠体生长不会造成较大影响，实施例1所展示的新冠活性抑制剂的使用持有较高的安全系数。
65.与现有技术相比，本发明通过外源添加5-ala及亚铁离子，可增加宿主细胞内ppix和血红素的生成，干扰宿主或病毒基因组中g4结构与病毒蛋白nsp3或宿主g4结合蛋白的相互作用，从而抑制sars-cov-2感染。
66.以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。