技术特征：
600ml/分钟、600-1200ml/分钟、1200-2400ml/分钟、2400-3600ml/分钟、3600-4800ml/分钟或4800-6000ml/分钟的范围内的流速下混合所述柠檬酸盐缓冲液。20.根据权利要求16至19中任一项所述的方法，其中在约220ml/分钟、约600ml/分钟、约1200ml/分钟、约2400ml/分钟、约3600ml/分钟、约4800ml/分钟或约6000ml/分钟的流速下混合所述柠檬酸盐缓冲液。21.根据权利要求16至20中任一项所述的方法，其中在介于约10-30ml/分钟、约30-60ml/分钟、约60-120ml/分钟、约120-240ml/分钟、约240-360ml/分钟、约360-480ml/分钟或约480-600ml/分钟的范围内的流速下混合所述mrna储备溶液。22.根据权利要求16至21中任一项所述的方法，其中在约20ml/分钟、约40ml/分钟、约60ml/分钟、约80ml/分钟、约100ml/分钟、约200ml/分钟、约300ml/分钟、约400ml/分钟、约500ml/分钟或约600ml/分钟的流速下混合所述mrna储备溶液。23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脂质溶液在乙醇中包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种辅助脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质和peg脂质。24.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述mrna溶液和所述脂质溶液混合于20％乙醇中，得到脂质纳米颗粒的悬浮液。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述脂质纳米颗粒通过切向流过滤进一步纯化。26.根据权利要求25所述的方法，其中大于约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的所述纯化纳米颗粒具有小于100nm的大小。27.根据权利要求26所述的方法，其中大体上所有的所述纯化纳米颗粒具有小于100nm的大小。28.根据权利要求25至27中任一项所述的方法，其中大于约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％的所述纯化纳米颗粒具有介于50-80nm范围内的大小。29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中大体上所有的所述纯化纳米颗粒具有介于50-80nm范围内的大小。30.根据权利要求25至29中任一项所述的方法，其中所述纯化纳米颗粒具有大于约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的包封率。31.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法产生大于约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的mrna回收率。32.一种将信使rna(mrna)包封在脂质纳米颗粒中的方法，其包括：a.将mrna溶液和/或脂质溶液分别加热至大于环境温度的预定温度；b.将加热的mrna溶液和/或加热的脂质溶液混合以产生脂质纳米颗粒的悬浮液；以及c.使所述脂质纳米颗粒纯化。33.一种脂质纳米颗粒的组合物，所述组合物由根据前述权利要求中任一项所述的方法产生。34.一种包含纯化脂质纳米颗粒的组合物，其中大于约90％的所述纯化脂质纳米颗粒具有小于约100nm的单个粒度且大于约70％的所述纯化脂质纳米颗粒将mrna包封在每个单独颗粒内。35.根据权利要求34所述的组合物，其中大于约95％、96％、97％、98％或99％的所述纯化脂质纳米颗粒具有小于约100nm的单个粒度。
36.根据权利要求34或35中任一项所述的组合物，其中大体上所有的所述纯化脂质纳米颗粒具有小于约100nm的单个粒度。37.根据权利要求34至36中任一项所述的组合物，其中大于约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的所述纯化脂质纳米颗粒将mrna包封在每个单独颗粒内。38.根据权利要求34至37中任一项所述的组合物，其中大体上所有的所述纯化脂质纳米颗粒将mrna包封在每个单独颗粒内。39.根据权利要求34至38中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少1mg、5mg、10mg、100mg、500mg或1000mg包封的mrna。40.根据权利要求34至39中任一项所述的组合物，其中每个单独的脂质纳米颗粒包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种辅助脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质和peg脂质。41.根据权利要求24所述的方法或根据权利要求40所述的组合物，其中所述一种或多种阳离子脂质选自由以下所组成的组：c12-200、mc3、dlindma、dlinkc2dma、ckk-e12、ice(基于咪唑)、hgt5000、hgt5001、dodac、ddab、dmrie、dospa、dogs、dodap、dodma和dmdma、dodac、dlendma、dmrie、clindma、cplindma、dmoba、docarbdap、dlindap、dlincarbdap、dlincdap、klin-k-dma、dlin-k-xtc2-dma、hgt4003及其组合。42.根据权利要求24所述的方法或根据权利要求40所述的组合物，其中所述一种或多种非阳离子脂质选自dspc(1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)、dppc(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)、dope(1,2-二油基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、dopc(1,2-二油基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱)、dppe(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、dmpe(1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、dopg(,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸(1'-外消旋-甘油))。43.根据权利要求24所述的方法或根据权利要求40所述的组合物，其中所述一种或多种基于胆固醇的脂质是胆固醇或聚乙二醇化胆固醇。44.根据权利要求24所述的方法或根据权利要求40所述的组合物，其中所述一种或多种经peg修饰的脂质包含共价连接至具有c
6-c
20
长度的烷基链的脂质的长度最高达5kda的聚乙二醇链。45.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中所述mrna含有一个或多个修饰的核苷酸。46.根据前述权利要求中任一项所述的方法或组合物，其中所述mrna是未修饰的。
技术总结
本发明提供了一种用于脂质纳米颗粒配制和mRNA包封的改良方法。在一些实施方案中，本发明提供了一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，其包括混合mRNA溶液和脂质溶液的步骤，其中所述mRNA溶液和/或所述脂质溶液处于大于环境温度的预定温度下。液处于大于环境温度的预定温度下。
技术研发人员：F
受保护的技术使用者：川斯勒佰尔公司
技术研发日：2015.07.02
技术公布日：2022/3/7