迁移型松香烷二萜类化合物在制备肾脏保护方面的药物的用途的制作方法

1.本发明涉及生物医药领域，具体涉及迁移型松香烷型二萜类化合物在制备肾脏保护方面的药物的用途。


背景技术：

2.肾脏作为人体重要脏器，肩负维持体内水盐代谢平衡及内环境稳定[nat rev nephrol,2011,7(12):684-96.]。肾脏对缺氧、梗阻、外来感染、代谢异常等刺激非常敏感，受到不同程度的各种损伤刺激后，会发生急、慢性肾功能下降，肾组织病理损伤[kidney international,2010,78:s22-s26.]。急性肾损伤(acute kidney injury,aki)是指短时间内肾功能的迅速下降，可由肾前性、肾性和肾后性因素导致。aki是临床重症常见的合并症，特别是在icu患者和心血管疾病患者中更为常见，缺乏有效的临床治疗手段，死亡率居高不下。即使aki后肾功能得以恢复，患者慢性肾脏病发病率也显著高于正常人群[j am soc nephrol,2006,17(6):1503-20.]。慢性肾脏病(chronic kidney disease,ckd)是临床常见病，我国成人ckd患病率在10％以上，严重危害人类健康。ckd包括肾小球滤过率(glomerular filtration rate，gfr)正常或gfr不正常的肾组织病理损伤，血尿指标异常和影像学检测异常，或不明原因gfr低于60ml/min/1.73m2超过3个月[lancet,2012,379(9818):815-22]。急、慢性肾损伤给社会医疗资源造成极大的负担，且无特效药，但急性肾损伤的治疗目前多采用血液净化等透析治疗手段，患者遭受极大痛苦，在轻度肾损伤阶段则多用免疫抑制剂(地塞米松，环孢素和吗替麦考酚酸酯等)治疗，或效果一般或容易反复。因此，预防或治疗急、慢性肾损伤的活性成分发现及药物开发具有重要价值。
[0003]
香青兰(dracocephalum moldavica l.)为唇形科青兰属植物，又名巴迪然吉布亚，其味辛，苦，性凉。具有清肺解表，凉肝止血，通路开窍，止痛解毒的作用。本发明所述的迁移型松香烷二萜类化合物是具有式i所示化学结构：是本技术人从香青兰中提取分离得到，化学名为caryopterisoid c，在下文中名代号为sipi-10。目前关于该化合物的用途报道比较少，至今未见sipi-10用于肾脏保护的用途，以及用于制备预防或/和治疗不同病因引起的急性、慢性肾损伤的药物或保健食品的相关报道。


技术实现要素：

[0004]
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中缺乏有效治疗肾损伤的药物的缺陷，提供一种迁移型松香烷型二萜类化合物sipi-10在制备肾脏保护方面的药物的用途，尤
其是制备治疗急性、慢性肾损伤药物方面的用途。本发明将所述药物sipi-10用于急性、慢性肾损伤的治疗，其在肾缺血诱发的肾损伤、病菌感染诱发的肾损伤以及药物诱导的肾损伤等方面的效果优于环孢素、丹参酮iia、地塞米松和氨磷汀，这表明通过sipi-10的处理对于肾损伤具有明显的保护作用。
[0005]
本发明是通过以下方法来解决上述技术问题的。
[0006]
本发明提供一种如式i所示的化合物、其溶剂合物、其药学上可接受的盐、其药学上可接受的盐的溶剂合物、其互变异构体、其立体异构体和其前体化合物的至少一种在制备肾脏保护的药物或保健品的用途；
[0007][0008]
所述如式ⅰ所示的化合物，为迁移型松香烷型二萜类化合物，又名sipi-10。
[0009]
所述的药物或保健品中，活性成分包括所述的如式i所示的化合物、其溶剂合物、其药学上可接受的盐、其药学上可接受的盐的溶剂合物、其互变异构体、其立体异构体和其前体化合物的至少一种。
[0010]
在本发明的某一实施方案中，所述的用途中，所述的药物或保健品以如式i所示的化合物、其溶剂合物、其药学上可接受的盐、其药学上可接受的盐的溶剂合物、其互变异构体、其立体异构体和其前体化合物的至少一种作为唯一活性成分。
[0011]
在本发明的某一实施方案中，所述的用途为如式i所示的化合物、其溶剂合物、其药学上可接受的盐、其药学上可接受的盐的溶剂合物、其互变异构体、其立体异构体和其前体化合物的至少一种在制备预防和/或治疗肾损伤的药物和保健品的用途。
[0012]
在本发明的某一实施方案中，所述肾损伤为多种病因引起的急性、慢性肾损伤。
[0013]
在本发明的一实施方案中，所述的急性、慢性肾损伤包括但不限于：缺血性致急性和慢性肾损伤、药物毒性致急性和慢性肾损伤、病菌感染致急性和慢性肾损伤、免疫应激引起的急性和慢性肾损伤，优选为缺血性致急性和慢性肾损伤、药物毒性致急性和慢性肾损伤、病菌感染致急性和慢性肾损伤。
[0014]
在本发明的一实施方案中，所述的药物毒性致急性和慢性肾损伤较佳地为顺铂导致的急性和慢性肾损伤。
[0015]
在本发明的一实施方案中，所述的病菌感染致急性和慢性肾损伤较佳地为病菌的内毒素脂多糖导致的急性和慢性肾损伤。
[0016]
本发明所述的药物中，所述的如式i所示的化合物、其溶剂合物、其药学上可接受的盐、其药学上可接受的盐的溶剂合物、其互变异构体、其立体异构体和其前体化合物的至少一种的含量为治疗有效量。
[0017]
本发明所述的保健品中，所述的如式i所示的化合物、其溶剂合物、其药学上可接受的盐、其药学上可接受的盐的溶剂合物、其互变异构体、其立体异构体和其前体化合物的至少一种的含量为满足保健品基本的调节功能即可。
[0018]
本发明所述的药物能以各种途径给予患者包括但不限于口服、透皮、肌肉、皮下和静脉注射。
[0019]
本发明所述的药物的剂型不限，只要是使所述的活性成分有效地到达体内的剂型都可以，包括但不限于：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂等；优选口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。
[0020]
本发明所述药物中，除了含有所述的活性成分之外，还可含有少量的且不影响活性成分的次要成分和/或药学上可接受的载体以及各种制剂所必要的辅料等。例如，所述药物为口服剂型时，可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。适宜的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂；适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠；适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁；适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
[0021]
本发明中所述术语的定义如下：
[0022]
术语“药学上可接受的盐”指所述化合物与药学上可接受的无机酸或有机酸所形成的盐，所述的无机酸包括但不限于：盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸；所述的有机酸包括但不限于：甲酸、乙酸、丙酸、丁二酸、1,5-萘二磺酸、亚细亚酸、草酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、庚二酸、己二酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯丙酸、葡糖酸、抗坏血酸、烟酸、异烟酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸，以及氨基酸；所述“药学上可接受的”是指适用于人而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。
[0023]
术语“互变异构体”指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体，例如：烯醇与相应的酮。
[0024]
术语“立体异构体”指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，例如：顺反异构体、对映异构体、构象异构体等。
[0025]
术语“前体化合物”指在体外无活性，但能够在生物体内进行代谢或化学反应转化为本发明的活性成分，从而发挥其药理作用的化合物。
[0026]
术语“治疗有效量”是指给予患者的、足以有效治疗疾病的化合物的量。治疗有效量将根据化合物、疾病种类、疾病的严重度、患者的年龄等变化，但可由本领域技术人员视情况调整。
[0027]
术语“溶剂合物”是指本发明化合物与化学计量或非化学计量的溶剂结合形成的物质。溶剂合物中的溶剂分子可以有序或非有序排列的形式存在。所述的溶剂包括但不限于：水、甲醇、乙醇等，较佳地为水。
[0028]
术语“治疗”指治疗性疗法。涉及具体病症时，治疗指：(1)缓解疾病或者病症的一种或多种生物学表现，(2)干扰(a)导致或引起病症的生物级联中的一个或多个点或(b)病症的一种或多种生物学表现，(3)改善与病症相关的一种或多种症状、影响或副作用，或者与病症或其治疗相关的一种或多种症状、影响或副作用，或(4)减缓病症或者病症的一种或多种生物学表现发展。
[0029]
术语“预防”是指获得或发生疾病或障碍的风险降低(即导致可能暴露于导致疾病试剂或疾病发作前易感疾病的受试者中未发生疾病的临床症状的至少一种)。
[0030]
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0031]
本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0032]
本发明的积极进步效果在于：
[0033]
1、sipi-10可通过降低血清肌酐和尿素氮水平，从而显著改善肾缺血引起的肾损伤小鼠的生存率。
[0034]
2、sipi-10与地塞米松等剂量下比较它们对感染性肾损伤的保护作用，sipi-10表现出对血清肾脏指数更好的改善作用，同时对肾脏组织损伤也表现出更好的保护作用。
[0035]
3、sipi-10在由药物毒性引起的肾脏损伤方面有显著作用，sipi-10在与远低于氨磷汀有效剂量下给药，表现出对血清肾脏指标更好的改善作用，同时对肾脏组织损伤也表现出更好的保护作用。
附图说明
[0036]
图1为sipi-10对肾缺血再灌注小鼠存活率的影响(n＝8)。
[0037]
图2为sipi-10对肾缺血再灌注小鼠血清生化指标的影响10对肾缺血再灌注小鼠血清生化指标的影响其中a中的生化指标为血清尿素氮，b中的生化指标为血清肌酐。
[0038]
图3为sipi-10对肾缺血再灌注小鼠的肾脏组织的影响。
[0039]
图4为sipi-10对lps诱导的急性肾损伤小鼠血清生化指标的影响10对lps诱导的急性肾损伤小鼠血清生化指标的影响其中a中的生化指标为血清尿素氮，b中的生化指标为血清肌酐。
[0040]
图5为sipi-10对lps诱导的肾损伤小鼠的肾脏组织的影响。
[0041]
图6为sipi-10对顺铂诱导的肾损伤小鼠体重的影响
[0042]
图7为sipi-10对顺铂诱导的肾损伤小鼠血清生化指标的影响10对顺铂诱导的肾损伤小鼠血清生化指标的影响其中a中的生化指标为血清尿素氮，b中的生化指标为血清肌酐。
[0043]
图8为sipi-10对顺铂诱导的肾损伤小鼠的肾脏组织的影响。
具体实施方式
[0044]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0045]
实施例1：sipi-10的制备和结构鉴定
[0046]
1.1sipi-10的制备
[0047]
1)提取：取香青兰药材加70％乙醇回流提取，70％乙醇用量为药材量的10(v/m)倍，提取2次，每次1小时，将提取液过滤后合并，干燥，得香青兰干浸膏。浸膏混悬于2倍量水中，以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，得到乙酸乙酯萃取物。
[0048]
2)柱层析：将得到的乙酸乙酯萃取物，进行硅胶柱层析，分别用石油醚:丙酮溶液
(100:1
→
50:1
→
20:1
→
10:1
→
5:1
→
2:1
→
1:1)梯度洗脱，每个梯度所用混合溶剂量为3倍柱体积(v/v)(即溶剂使用体积为硅胶装柱体积的3倍)，按每个柱体积依次收集，共得到21个组份。
[0049]
收集组份18(即洗脱剂的用量为第18倍柱体积时收集到的洗脱液，也即混合溶剂(石油醚：丙酮溶液＝2:1)的量为3倍柱体积时收集到的洗脱液)，经硅胶薄层层析检测展开剂为二氯甲烷:甲醇＝50:1时rf值＝0.55；减压浓缩后经凝胶柱(羟丙基葡聚糖凝胶lh-20(sephadex lh-20)，ge healthcare bio-sciences ab,uppsala,sweden)层析，采用二氯甲烷：甲醇＝1:1进行洗脱，得到7个组分，收集rf＝0.55(硅胶薄层层析检测，展开剂二氯甲烷:甲醇＝50:1)的组分18-5；浓缩干燥后经反相硅胶ods-c
18
(ods-a-hg,ymc co.,ltd.,japan)层析，分别用甲醇:水(60％
→
100％)梯度洗脱，得到2个组份。收集rf＝0.55(硅胶薄层层析检测，展开剂二氯甲烷:甲醇＝50:1)组分18-5-1，减压浓缩得洗脱组分i。
[0050]
3)hplc制备：将上述组分i经hplc制备(色谱柱型号：xbridge beh c
18
，5μm，10
×
250mm；进样量：200μl；柱温：25℃；固定相为c18键合硅胶；流动相为30％乙腈水溶液，检测波长210nm，流速15ml/min；制备液相为lc3050n型高效液相色谱仪)，得到松香烷型二萜类化合物2：12,16
–
环氧
–
3,11,14
–
三羟基
–
17(15
→
16),18(4
→
3)
–
移
–
4(19),5,8,11,13
–
松香烷戊烯
–7–
酮(tr＝29.4min)。
[0051]
1.2经测试分析得到：分子式为c
20h22
o5；
[0052]
sipi-10的1h-nmr和
13
c-nmr的核磁数据(600mhz,cdcl3，δ，j in hz)：
[0053]
由1h-nmr(cdcl3，600mhz)谱中显示3个甲基氢原子的吸收峰：δh 1.53(3h,d,j＝6.0hz,h-17)，δh 1.52(3h,s,h-18)，δh 1.50(3h,s,h-20)；3个亚甲基上的氢原子：δh 1.93(1h,m,h-1α)，δh 3.08(1h,m,h-1β)，δh 1.87(2h,m,h-2)，δh 3.40(1h,dd,j＝9.0,15.6hz,h-15α)，δh 2.89(1h,dd,j＝7.2,15.2hz,h-15β)；1个连氧次甲基上的氢原子：δh 5.14(1h,m,h-16)；一个双键氢原子：δh 6.22(1h,s,h-6)；2个末端双键上氢原子：δh 5.28(1h,s,h-19α)；δh 5.20(1h,s,h-19β)。
[0054]
13
c-nmr谱(cdcl3，150mhz)显示分子中含有20个碳原子，与文献[1]中的数据进行对比，归属如下：δc 29.15(c-1)；δc 35.04(c-2)；δc 72.53(c-3)；δc 151.55(c-4)；δc 167.52(c-5)；δc 123.39(c-6)；δc 189.63(c-7)；δc 109.31(c-8)；δc 136.13(c-9)；δc 42.38(c-10)；δc 131.09(c-11)；δc 154.45(c-12)；δc 111.24(c-13)；δc 154.11(c-14)；δc 34.41(c-15)；δc 83.15(c-16)；δc 21.97(c-17)；δc 26.74(c-18)；δc 112.21(c-19)；δc 21.40(c-20)。并确定该化合物的平面结构。
[0055]
由松香烷型二萜类化合物的生源途径分析，c-10与c-16的构型均为s。与文献[1]中化合物15的cd数据和核磁数据进行比较，确定该迁移型松香烷型二萜类化合物sipi-10的立体结构如下：
[0056]
[0057]
[1]引用文献“iridoid glucosides and diterpenoids from caryopteris glutinosa,j.nat.prod.2016,79,886-893”表3中化合物15的数据结果。
[0058]
实施例2：检测血清生化指标及观察肾脏组织坏死和小鼠生存率情况，分析sipi-10对肾缺血再灌注小鼠的影响。
[0059]
双侧肾蒂夹闭法是目前国内外常用造模方法。通过突然暂时性地阻断肾脏血液供应，使细胞线粒体功能障碍，能量生成下降；当血液恢复再灌注时，大量活性氧释放致膜地脂质过氧化，引起肾脏组织地快速损伤。
[0060]
2.1实验方法
[0061]
spf级icr健康雄性小鼠56只，体重25
±
2g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。室温22-25℃、湿度60％-70％、昼夜循环12h自由进食。动物随机分为7组，每组8只，分别为假手术组、模型组、环孢素(10mg/kg)组、丹参酮iia磺酸钠(10mg/kg)组、sipi-10高剂量(10mg/kg)组、sipi-10中剂量(5mg/kg)组和sipi-10低剂量(2.5mg/kg)组。各给药组均为栓塞后15min静脉注射给药，其余各组均给予等体积空白溶媒。
[0062]
2.1.1模型构建
[0063]
小鼠术前禁食12h，自由饮水。实验前异氟烷麻醉，保留自主呼吸，仰卧位固定于鼠板，腹部正中去毛，用75％的酒精消毒，取大鼠腹部正中手术切口，逐层分离皮肤、腹膜，进入腹腔，将肠道推向一侧，暴露肾蒂后结扎左右肾蒂，可见肾脏由鲜红变紫黑色，表示结扎成功。30min后解开结扎线，恢复血流灌注，可见肾脏迅速由紫黑色变为鲜红。术后分层缝合关闭腹腔。术后小鼠保温至苏醒，补充水与饲料。假手术组同法打开腹腔但不做结扎。
[0064]
2.1.2指标考察
[0065]
2.1.2.1血清生化指标检测：肾脏再灌注24h后，经眼底静脉丛取血0.2ml，4500r/min转速离心10min后吸取血清，检测肌酐和尿素氮。
[0066]
2.1.2.2肾脏病理组织学检测：肾脏再灌注24h后，过量co2处死小鼠，取出肾脏，行纵轴冠状面切开，至于体积分数为10％中性甲醛固定，石蜡包埋制作4μm切片，常规苏木精-伊红染色，光学显微镜下观察肾脏组织坏死情况。
[0067]
2.1.2.3生存率观察：肾脏再灌注24h后，统计动物死亡数。
[0068]
2.2实验结果
[0069]
2.2.1 sipi-10对肾缺血再灌注小鼠的存活率的影响
[0070]
结果如图1和表1所示，假手术组动物存活率为100％，模型组小鼠的动物存活率为40％，阳性药环孢素和丹参酮iia组的存活率均为40％，sipi-10低剂量组存活率为40％，但高，中剂量组的存活率分别提升至80％和60％。
[0071]
表1 sipi-10对肾缺血再灌注小鼠存活率的影响(n＝8)
[0072][0073]
2.2.2 sipi-10对肾缺血再灌注小鼠的血清生化指标的影响
[0074]
结果如表2和图2所示，与假手术组比较，模型组小鼠的血清尿素氮和肌酐水平分别为28.10
±
0.20mmol/l和149.73
±
4.93μmol/l，并表现出统计学差异。分别给予阳性药，与模型组比较，环孢素组和丹参酮iia组小鼠的血清尿素氮水平分别下降至25.22
±
5.13mmol/l和24.80
±
4.92mmol/l，血清肌酐水平分别下降至131.61
±
32.37μmol/l和138.22
±
24.40μmol/l，但未表现出统计学差异。分别给予不同剂量的sipi-10(10，5和2.5mg/kg)，sipi-10低，中和高剂量组小鼠的血清尿素氮分别下降至19.53
±
5.81mmol/l，21.20
±
6.41mmol/l和23.02
±
6.95mmol/l，其中高和中剂量组与模型组比较表现出统计学差异；血清肌酐分别下降至97.69
±
32.93μmol/l，112.29
±
46.50μmol/l和111.54
±
52.84μmol/l，表现出良好的剂量依赖性。其中，高剂量组与模型组比较表现出统计学差异。
[0075]
表2 sipi-10对肾缺血再灌注小鼠血清生化指标的影响
[0076][0077][0078]
与假手术组比较，
##
p《0.01
[0079]
与模型组比较，
*
p《0.05,
**
p《0.01
[0080]
2.2.3 sipi-10对肾缺血再灌注小鼠的肾脏组织切片的影响
[0081]
结果如图3所示，假手术组小鼠肾脏皮质和髓质结构正常，模型组肾脏皮质和髓质出现明显的病理变化，包括肾小管上皮细胞局灶性坏死、空泡变性、炎细胞浸润和管腔形成。环孢素组，丹参酮iia组和sipi-10低剂量组小鼠肾脏皮质和髓质损伤轻度减轻，表现为中度炎症细胞浸润和局灶性坏死，sipi-10组高，中剂量组小鼠皮质和髓质损伤减轻明显，表现为空泡变性和管腔形成减少，轻度炎症细胞浸润和局灶性坏死。
[0082]
实施例3：检测血清生化指标和观察肾脏病理组织，分析sipi-10对lps诱导的急性肾损伤的保护作用
[0083]
严重感染和感染性休克是诱发急性肾损伤最常见病因之一，流行病学研究显示以脓毒症所致的全身性炎症感染是临床感染性aki的最主要诱因。内毒素是革兰阴性细菌细胞壁中的结构组分，可激活体内多种炎症因子的释放，进而引起机体的免疫验证反应。
[0084]
3.1实验方法
[0085]
spf级icr健康雄性小鼠20只，体重25
±
2g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。室温22-25℃、湿度60％-70％、昼夜循环12h自由进食。动物随机分为4组，每组5只，分别为对照组、模型组、地塞米松(10mg/kg)组、sipi-10(10mg/kg)组。各给药组均为腹腔造模后15min静脉注射给药，其余各组均给予等体积空白溶媒。
[0086]
3.1.1模型构建
[0087]
小鼠术前禁食12h，自由饮水。除对照组外，其余各组腹腔单次注射剂量为15mg/kg的lps溶液，对照组注射等体积的生理盐水。15min后分别按分组给予地塞米松和sipi-10。
[0088]
3.1.2指标考察
[0089]
3.1.2.1血清生化指标检测：lps诱导急性肾损伤24h后，经眼底静脉丛取血0.2ml，4500r/min转速离心10min后吸取血清，检测肌酐和尿素氮。
[0090]
3.1.2.2肾脏病理组织学检测：lps诱导急性肾损伤24h后，过量co2处死小鼠，取出肾脏，行纵轴冠状面切开，至于体积分数为10％中性甲醛固定，石蜡包埋制作4μm切片，常规苏木精-伊红染色，光学显微镜下观察肾脏组织坏死情况。
[0091]
3.2实验结果
[0092]
3.2.1sipi-10对lps诱导的肾损伤小鼠的血清生化指标的影响
[0093]
结果如表3和图4所示，与对照比较，模型组小鼠的血清尿素氮和肌酐水平分别为11.22
±
4.51mmol/l和138.06
±
21.90μmol/l，并表现出统计学差异。分别给予10mg/kg剂量的阳性药地塞米松和受试物sipi-10，阳性药组小鼠的血清尿素氮和肌酐水平分别为8.95
±
2.27mmol/l和135.59
±
30.44μmol/l，其中血清尿素氮指标与模型组比较表现出显著性差异；sipi-10组小鼠的血清尿素氮和肌酐水平分别下降至9.32
±
1.98mmol/l为和99.17
±
28.78μmol/l，血清尿素氮和肌酐均表现出统计学差异。
[0094]
表3 sipi-10对lps诱导的急性肾损伤小鼠的血清生化指标的影响10对lps诱导的急性肾损伤小鼠的血清生化指标的影响
[0095]
[0096][0097]
与对照组比较，
##
p《0.01
[0098]
与模型组比较，
*
p《0.05,
**
p《0.01
[0099]
3.2.2 sipi-10对lps诱导的肾损伤小鼠的肾脏组织的影响
[0100]
结果如图5所示，假手术组小鼠肾脏皮质和髓质结构正常，嵴结构清晰，无肾小管上皮细胞损伤和炎性浸润，模型组肾脏皮质和髓质出现明显的病理变化，包括肾小管上皮细胞局灶性坏死、中度空泡变性和中度炎细胞浸润。地塞米松组小鼠肾脏皮质和髓质损伤轻度减轻，表现为中度炎症细胞浸润和局灶性坏死，sipi-10组小鼠皮质和髓质损伤减轻明显，表现为管腔形成减少，轻度空泡变性，炎症细胞浸润和局灶性坏死。
[0101]
实施例4：考察小鼠体重和检测血清生化指标及观察肾脏病理组织，分析sipi-10对顺铂诱导的肾损伤的保护作用
[0102]
药物诱导的肾损伤主要以自身毒性物质与肾脏反应所致。顺铂(cisplatin，cp)为抗癌类代表药，超剂量或反复应用该药可使20％-30％患者产生肾毒性。
[0103]
4.1实验方法
[0104]
spf级icr健康雄性小鼠20只，体重25
±
2g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。室温22-25℃、湿度60％-70％、昼夜循环12h自由进食。动物随机分为4组，每组5只，分别为对照组、模型组、氨磷汀(300mg/kg)组、sipi-10(10mg/kg)组。各给药组均为腹腔造模后15min静脉注射给药，其余各组均给予等体积空白溶媒。
[0105]
4.1.1模型构建
[0106]
小鼠术前禁食12h，自由饮水。除对照组外，其余各组腹腔单次注射剂量为10mg/kg的顺铂溶液，对照组注射等体积的生理盐水。15min后按剂量单次给予氨磷汀。sipi-10造模后15min为第一次给药，并分别于造模后第3和第5天再次按剂量给药sipi-10。
[0107]
4.1.2指标考察
[0108]
4.1.2.1体重考察：分别于造模给药后第1，3和5天称重，并绘制体重-时间动态曲线。
[0109]
4.1.2.2血清生化指标检测：造模5天后，经眼底静脉丛取血0.2ml，4500r/min转速离心10min后吸取血清，检测肌酐和尿素氮。
[0110]
4.1.2.3肾脏病理组织学检测：造模5天后，过量co2处死小鼠，取出肾脏，行纵轴冠状面切开，至于体积分数为10％中性甲醛固定，石蜡包埋制作4μm切片，常规苏木精-伊红染色，光学显微镜下观察肾脏组织坏死情况。
[0111]
4.2实验结果
[0112]
4.2.1sipi-10对顺铂诱导的肾损伤小鼠体重的影响
[0113]
结果如表4和图6所示，对照组小鼠随时间推移体重稳步增加；模型组和氨磷汀组
小鼠造模后体重在第3天体重减轻并于第5天开始恢复；而sipi-10组小鼠造模后第3和第5天体重均增加。
[0114]
表4 sipi-10对顺铂诱导的肾损伤小鼠体重的影响
[0115][0116]
4.2.2 sipi-10对顺铂诱导的肾损伤小鼠血清生化指标的影响
[0117]
结果如表5-6和图7所示，对照组血清尿素氮和肌酐第1，3和5天均趋于平稳，模型组血清尿素氮和肌酐于第3天开始升高并在第5天开始回落，与模型组比较，第3和5天的血清尿素氮和肌酐表现出统计学差异。阳性药氨磷汀300mg/kg组给药后第5天，血清尿素氮和肌酐分别下降至7.36
±
1.03mmol/l和33.99
±
10.11μmol/l。sipi-10 10mg/kg组给药后第3天血清尿素氮和肌酐分别下降至8.99
±
0.95mmol/l和37.63
±
6.10μmol/l，给药后第5天血清尿素氮和肌酐分别下降至7.13
±
0.88mmol/l和41.52
±
22.72μmol/l，与模型组比较，表现出统计学差异。
[0118]
表5 sipi-10对顺铂诱导的肾损伤小鼠血清尿素氮的影响
[0119][0120]
与对照组比较，
##
p《0.01
[0121]
与模型组比较，
*
p《0.05,
**
p《0.01
[0122]
表6 sipi-10对顺铂诱导的肾损伤小鼠血清肌酐的影响
[0123][0124]
与对照组比较，
##
p《0.01
[0125]
与模型组比较，
*
p《0.05,
**
p《0.01
[0126]
4.2.3 sipi-10对顺铂诱导的肾损伤小鼠的肾脏组织的影响
[0127]
结果如图8所示，假手术组小鼠肾脏皮质和髓质结构正常，嵴结构清晰，无肾小管上皮细胞损伤和炎性浸润，模型组肾脏皮质和髓质出现明显的病理变化，包括肾小管上皮细胞局灶性坏死、中度空泡变性和中度炎细胞浸润。氨磷汀组小鼠肾脏皮质和髓质损伤轻度减轻，表现为中度炎症细胞浸润和局灶性坏死，sipi-10组小鼠皮质和髓质损伤减轻明显，表现为管腔形成减少，轻度空泡变性，炎症细胞浸润和局灶性坏死。
[0128]
综上所述，实验分别复制了缺血性、感染性和药物性三种致病因素导致的肾损伤小鼠模型，并考察了sipi-10对三种肾损伤的保护作用，结果表明sipi-10对肾损伤有明确和显著的保护作用，且同等剂量优于阳性药。
[0129]
最后需要在此指出的是：以上仅是本发明的部分优选实施例，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。