一种膀胱灌注药物复方制剂及其制备方法和应用与流程

本发明涉及医药，尤其涉及蒽环类化药和免疫佐剂的复方制剂，以及制备方法和在制备膀胱灌注药物中的应用。

背景技术：

1、膀胱癌是泌尿系统最常见恶性肿瘤，发病率位列全球恶性肿瘤的第九位；2020年全球膀胱癌新发病患者约54.9万人，死亡人数近20万人。全球膀胱癌市场规模2019年增长至39亿美元，预计于2024年达到71亿美元，在美国膀胱癌是治疗费用最贵的肿瘤之一。昂贵的治疗费用主要来自膀胱癌的高复发率以及高转移率，二线治疗方案缺乏，膀胱癌的临床需求远未满足。

2、临床上常见的膀胱癌主要有两种，非肌层浸润性膀胱癌以及肌层浸润性膀胱癌。目前临床上对于非肌层浸润性膀胱癌主要采用化疗/卡介苗灌注加经尿道膀胱肿瘤切除术(turbt)。研究表明，该疗法对于低危患者：一年复发率15％，五年复发率30％；对于中危患者：一年复发率38％，五年复发率62％；对于高危患者：一年复发率61％，五年复发率78％，卡介苗灌注虽然可以一定程度的解决肿瘤复发问题，但是卡介苗灌注会引起全身性的反应，例如长时间发热，且膀胱灌注卡介苗会出现尿频、尿急、血尿等症状，免疫缺陷的患者使用卡介苗会有患全身性卡介苗疾病的风险。

3、膀胱灌注是通过将具有直接杀伤肿瘤细胞的化疗药物或肿瘤治疗制剂注入膀胱内部，直接杀伤肿瘤细胞或诱导体内非特异性免疫反应，达到抑制膀胱癌转移复发的效果。经膀胱灌注辅助治疗的患者，其复发概率有所降低，但是绝对缓解率低、肿瘤复发率较高，并且毒副作用大，病人预后差。

4、蒽环类药物对多种移行上皮细胞癌具有较高的易感性，目前，以表柔比星、吡柔比星为代表的蒽环类化疗药物是膀胱癌灌注治疗的一线治疗药物。但是，单独施用这类药物进行膀胱灌注治疗后，肿瘤依然具有很高的一年内复发率(超过50％)。

5、toll样受体(tlr)是先天免疫的组成部分，近年来在免疫治疗领域占有一席之地，该受体在免疫细胞中广泛表达，受到相应的刺激后会促进针对肿瘤的t细胞应答，在抗肿瘤免疫治疗方面，越来越多的人开始关注并研究tlr通路，开发肿瘤免疫治疗类药物。例如咪唑喹啉类免疫调节剂，其中代表性的免疫调节剂有咪喹莫特及其衍生物，是一种tlr-7刺激剂，现已被用于浅表肿瘤的免疫治疗。

技术实现思路

1、申请人尝试将蒽环类化药与咪喹莫特联合使用，并应用于膀胱癌的灌注治疗，将两类药物直接混合后进行膀胱灌注，验证疗效。结果发现，以化疗药物表柔比星与咪喹莫特为例，当化疗药物表柔比星与咪喹莫特的比例在一个合适的范围之间时，可以获得与单独化疗药物灌注相比显著提高的治疗效果，且不增加毒副作用，有望成为一种具有显著临床价值的膀胱灌注新型药物制剂。进一步研究表明，这一新型制剂抗肿瘤机理，主要是通过表柔比星等化疗药物诱导肿瘤细胞的免疫原性死亡暴露肿瘤相关抗原，同时咪喹莫特作为tlr7激动剂可以激活免疫系统，招募抗原呈递细胞到肿瘤内来识别肿瘤抗原，进而激活针对肿瘤的t细胞免疫反应。基于该原理，我们又尝试了不同蒽环类化药与咪喹莫特(r837)或瑞喹莫德(r848)联用治疗肿瘤的效果，均取得了理想的疗效。

2、但是，在进一步地制剂研究中发现，蒽环类化疗药物如表柔比星与免疫佐剂咪喹莫特的简单混合制剂中，咪喹莫特分子的存在会导致表柔比星等蒽环类化疗药物分子结构的不稳定，不论是以注射液的溶液形态保存、还是以混合后冻干粉的形态保存，该制剂中杂质的含量都会明显增加，并在5天时间内突破药典规定的药物的杂质限度，无法成为可以稳定保存的便于临床应用的药物制剂，二者的简单混合不利于药物分子的化学稳定性。因此，如何提高蒽环类化药与咪唑喹啉类免疫调节剂的复方制剂的化学稳定性，是设计制备二者联合用药的复方制剂的关键问题。为了解决上述衍生问题，我们进一步对蒽环类化药与咪唑喹啉类免疫调节剂复方制剂的稳定性进行了系统研究。

3、首先，我们发现表柔比星与咪喹莫特在溶液中低ph值(如ph 3.0)条件下更为稳定，但蒽环类化药仍然会逐渐降解，该条件下的混合制剂无法长期储存，因此注射液剂型对于本制剂不可行。对于冻干制剂而言，我们意外的发现在常见的冻干保护剂中，乳糖对该制剂的稳定性具有显著的保护效果，同时乳糖的含量增加会有利于制剂稳定性的提升。尽管如此，在ph 3.0的条件下制的冻干制剂依然无法长期保存，无法通过稳定性加速实验的考察。我们发现这一蒽环类化药免疫佐剂的复方冻干制剂有一个稳定性的“ph值黄金区间”，在这个ph范围内制备得到的表柔比星/咪喹莫特复合制剂具有非常好的稳定性！该现象与本领域技术人员对表柔比星单一制剂的常规理解(常规情况下，ph越低越稳定)以及我们对该复方制剂溶液状态稳定性趋势(ph越低越稳定)的预测结果相反。

4、进一步地，我们考察了其他蒽环类药物如米托蒽醌、多柔比星和咪唑喹啉类免疫调节剂(r837或r848)复方冻干粉制剂的稳定性，基于表柔比星和r837的详细考察结果，尝试了类似的ph条件下不同化合物的稳定性。结果发现，这些化合物化学结构相似或相同，验证了复方制剂最佳的配方，使得两类物质之间任意组合均具有较好的稳定性。

5、本发明提出了一种膀胱灌注药物复方制剂，包括蒽环类化药，免疫调节剂和ph调节剂，其中，所述免疫调节剂包括咪唑喹啉类免疫调节剂及其可溶性盐。

6、进一步地，蒽环类化药包括表柔比星或其可溶性盐、吡柔比星或其可溶性盐、米托蒽醌或其可溶性盐、多柔比星或其可溶性盐、阿柔比星或其可溶性盐、伊达比星或其可溶性盐。

7、进一步可选地，所述可溶性盐为盐酸盐。

8、进一步地，所述膀胱灌注药物冻干粉制剂还包括冻干保护剂。

9、进一步地，所述冻干保护剂包括蔗糖、乳糖、甘露醇、环糊精。

10、进一步可选地，冻干保护剂为乳糖。

11、进一步地，所述冻干保护剂在冻干粉制剂中的质量分数为65％～96％。

12、优选地，冻干保护剂在冻干粉制剂中的含量为80％～94％。

13、进一步地，所述ph调节剂为弱碱，碱性缓冲液，氢氧化钠，盐酸。

14、进一步可选地，所述ph调节剂为碳酸氢钠，盐酸。

15、进一步地，所述膀胱灌注药物复方制剂在复溶后，当蒽环类化药浓度为1～5mg/ml时，溶液的ph为3.8～5.5。需要说明的是，这里定义复溶浓度的目的是为了定义复溶后的ph值的范围，并不是对复溶浓度的限定。

16、进一步可选地，所述膀胱灌注药物冻干粉制剂在复溶后，当蒽环类化药浓度为1～5mg/ml时，溶液的ph为4.0～5.0。需要说明的是，这里定义复溶浓度的目的是为了定义复溶后的ph值的范围，并不是对复溶浓度的限定。

17、进一步地，咪唑喹啉类免疫调节剂包括咪喹莫特及其衍生物，或瑞喹莫德及其衍生物，或咪喹莫特及其衍生物的可溶性盐，或瑞喹莫德及其衍生物的可溶性盐。

18、进一步地，蒽环类化药与咪唑喹啉类免疫调节剂的质量比为1:0.1～1:10。

19、进一步可选地，蒽环类化药与咪喹莫特的质量比为1:1～1:10。进一步可选地，蒽环类化药与咪喹莫特的质量比为1:2～1:4。

20、进一步可选地，蒽环类化药与瑞喹莫德的质量比为1:0.1～1:5。

21、进一步地，所述冻干粉制剂还包括粘膜促渗剂。

22、进一步地，所述粘膜促渗剂包括氮酮、透明质酸酶、月桂醇、油酸中的至少一种。

23、进一步地，所述粘膜促渗剂可以在制备过程中加入，也可以在使用前混合。

24、本发明所述蒽环类化药和免疫佐剂的复方制剂在使用前，与粘膜促渗剂混合后灌注，所述粘膜促渗剂可以是市面上已有的药用粘膜促渗剂或临床试验阶段批准使用的粘膜促渗剂。

25、本发明还提出了一种膀胱灌注药物冻干粉制剂的制备方法。

26、包括如下步骤：

27、s1：用稀酸溶解免疫调节剂，得到免疫调节剂的盐溶液；

28、s2：用s1获得的所述稀酸盐溶液溶解蒽环类药物，得到混合溶液；

29、s3：用酸性或碱性缓冲液或溶液调节所述混合溶液的ph至3.8～5.5得到最终溶液，此时药物的终浓度为1～5mg/ml。

30、进一步地：所述步骤s3还包括：

31、s31：向所述混合溶液中加入冻干保护剂；

32、进一步地：所述步骤s3还包括：

33、s32：。向所述混合溶液中加入粘膜促渗剂

34、进一步地，s1中所述稀酸为盐酸、乳酸或醋酸。

35、进一步可选地，s3中调节ph的进一步可选范围是4.0～5.0。

36、进一步地，还包括步骤s4：对s3中得到的最终溶液进行冻干处理得到冻干粉制剂。

37、本发明还提供所述冻干粉混合制剂在制备膀胱灌注药物中的应用。采用本发明的技术方案，具有如下的有益效果：

38、本发明提供一种膀胱灌注药物复方制剂，蒽环类药物和咪唑喹啉类免疫调节剂混合冻干粉制剂。在大量实验分析中发现，冻干粉剂型相较于传统的注射剂型，更有助于保护蒽环类药物在混合制剂中的长期化学稳定性，同时，混合制剂在膀胱灌注肿瘤治疗中，具有较好的肿瘤抑制效果，能够引起更强烈的抗肿瘤免疫反应，并且相较于单独的蒽环类化药，本发明所述复方制剂能够降低毒副作用。

39、本发明所述蒽环类化药和免疫调节剂混合制剂能够通过简单的复溶操作实现临床应用，可以直接灌注治疗，也可以加入粘膜促渗剂混合后灌注来有效抑制肿瘤生长和复发。蒽环类化药在引起肿瘤免疫原性死亡后，免疫调节剂能够进一步刺激抗原呈递细胞对抗原的摄取、处理以及呈递给t细胞，进一步放大抗肿瘤免疫反应。

40、可降低蒽环类化药或免疫调节剂的系统性毒副作用。

41、实现了蒽环类化药和免疫调节剂混合制剂的长期化学稳定性，显著降低了免疫调节剂存在的情况下蒽环类化药杂质的产生速率，提高了制剂长期储存稳定性，增加了制剂使用的便利性和安全性。未来的临床使用，较长的货架期有利于药物的生产、储存和运输，有助于实现真正的临床应用。

42、在本制剂中加入粘膜促渗剂，可以增强药物溶液灌注治疗后在膀胱壁上滞留时间，有助于进一步提升本类制剂的疗效。