治疗多发性硬化症的方法与流程

1.本发明涉及治疗多发性硬化症(ms)的方法。


背景技术：

2.自身免疫病是由针对个体自身组织的病理性免疫反应引起的病症。自身免疫疾病例如免疫系统攻击其他的健康组织，包括多发性硬化症(ms)等。
3.多发性硬化症(ms)是中枢神经系统(cns)的一种使人衰弱的疾病，其中身体自身的免疫系统攻击大脑和脊髓的白质。这会引发炎症引起的对中枢神经系统保护髓鞘层的损伤，导致脱髓鞘。髓鞘的丧失使神经元暴露于进一步攻击，导致形成多发性硬化病变。这种损伤会破坏部分神经系统的交流能力，导致各种问题，包括疲劳、视力模糊、认知障碍和痉挛。
4.ms有多种形式，包括独立发作的新症状(复发形式)或随时间累积的症状(进展形式)。
5.目前没有已知的治疗多发性硬化症的方法。当前的治疗只是尝试在发作后改善功能和/或防止后续发作。
6.用于治疗ms的药物效果一般，还可能具有副作用并且耐受性差。
7.现行研究正在寻找更有效、更方便和可耐受的治疗复发缓解型ms的方法。
8.发明概述
9.现在已经发现bcl-2抑制剂可有效治疗多发性硬化症。在具体的实施方案中，bcl-2抑制剂是由以下式i-iv中任一个表示的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物，例如水合物，在本文中统称为“本发明化合物”。
10.一方面，本发明提供一种治疗多发性硬化症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的本发明化合物。
11.另一方面，本发明提供一种减轻炎症的方法，包括向有需要的受试者施用有效量的本发明化合物。
12.另一方面，本发明提供了一种降低受试者pbmc(外周血单核细胞)中白细胞、t淋巴细胞和b淋巴细胞水平的方法，包括向受试者施用有效量的本发明化合物，其中受试者患有多发性硬化症。
13.另一方面，本发明提供了一种诱导抗凋亡细胞经历凋亡的方法，该细胞与多发性硬化有关，该方法包括：通过使细胞与至少一种本发明化合物反应来使抗细胞凋亡的细胞对细胞凋亡刺激敏感，从而使细胞在多发性硬化的部位经历细胞凋亡。
14.在一个实施方案中，本发明提供了一种在抗凋亡细胞中诱导细胞凋亡的方法，该细胞与多发性硬化有关，该方法包括：通过用至少一种本发明公开的化合物，使得细胞在多发性硬化的部位经历细胞凋亡。
15.另一方面，本发明提供了一种用于多发性硬化症的治疗剂，其包含本发明的化合物。
16.另一方面，本发明提供一种用于治疗多发性硬化症的药物组合物，其中该药物组合物包含本发明化合物和一种或多种药学上可接受的载体。
17.另一方面，本发明提供了本发明公开化合物作为多发性硬化症药物的用途。
18.另一方面，本发明提供了用于治疗受试者多发性硬化症的本发明化合物。
19.另一方面，本发明提供了本发明公开的化合物在制备用于治疗多发性硬化的药物中的用途。
20.另一方面，本发明提供一种用于治疗多发性硬化症的试剂盒，其中该试剂盒包含本发明公开的化合物。
21.本发明另外的实施例和优势将部分地在随后的描述中阐述，并且将从描述中得出结论，或者可以通过本公开的实践而获悉。本发明的实施例和优势将通过所附权利要求中特别指出的要素和组合来实现和获得。
附图说明
22.图1显示了化合物4降低mog35-55诱导的eae c57bl/6小鼠模型的临床评分。
23.图2显示了化合物4降低mog35-55诱导的eae c57bl/6小鼠模型中的lfb染色评分。
24.图3显示化合物4降低了mog35-55诱导的eae c57bl/6小鼠模型中的h&e染色评分。
25.图4至图9显示化合物4减少了mog35-55诱导的eae c57bl/6小鼠模型中白细胞、t淋巴细胞、b淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、cd8+t淋巴细胞和cd4-cd8-t淋巴细胞的数量。
26.图10至图13显示化合物4降低了脊髓中淋巴细胞的浸润和炎性细胞因子il-6的表达水平。


技术实现要素：

27.本发明公开的化合物降低受试者的pbmc中的白细胞、t淋巴细胞和b淋巴细胞的水平。鉴于此特性，本发明公开的化合物可用于治疗受试者的疾病，例如ms。
28.在一个实施方案中，本发明提供了一种治疗多发性硬化症的方法，包括向有需要的受试者施用由下式i表示的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0029][0030]
其中：
[0031]
a是
[0032]
x1、x2和x3各自独立地选自-cr8＝和-n＝；
[0033]
r8选自氢和卤素；
[0034]
r2选自-no2、-so2ch3和-so2cf3；
[0035]r2a
选自氢和卤素；
[0036]
r3选自氢、-cn、-c≡ch和-n(r
4a
)(r
4b
)；
[0037]r4a
选自任选取代的c
1-6
烷基、任选取代的c
3-6
环烷基、杂环基、杂烷基、(环烷基)烷基和(杂环)烷基；
[0038]r4b
选自氢和c
1-4
烷基；和
[0039]
y选自-ch
2-和-o-。
[0040]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式ii的化合物：
[0041][0042]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中y选自-ch
2-和-o-，且r2和r
4a
如式i所定义。
[0043]
在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式iii的化合物：
[0044][0045]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中y选自-ch
2-和-o-，x1,x2,x3,r2和r
4a
如式i所定义。
[0046]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中x1，x2和x3各自是-ch＝。
[0047]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中x1是-cf＝，x2和x3各自是-ch＝。
[0048]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中x1和x3各自是-ch＝，x2是-cf＝。
[0049]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中x1和x2各自是-ch＝，x3是-cf＝。
[0050]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中x1是-n＝，x2和x3是-ch＝。
[0051]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中x1和x3是-ch＝，x2是-n＝。
[0052]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中x1和x2是-ch＝，x3是-n＝。
[0053]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i，ii或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中y是-o-。
[0054]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i，ii或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中y是-ch
2-。
[0055]
在另一个实施方案中，本发明化合物是具有式i，ii或iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r2是-no2。
[0056]
在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式ii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r
4a
选自：
[0057][0058]
在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式i或式iii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r
4a
选自
[0059][0060]
在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式iv的化合物；
[0061][0062]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r
2a
是氢或氟，且r
4a
如式i所定义。
[0063]
在另一个实施方案中，本发明公开化合物是具有式iv的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r
4a
选自：
[0064][0065][0066]
在另一个实施方案中，本公开化合物是选自表1化合物的一种或多种的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0067]
[0068]
[0069]
[0070]
[0071]
[0072]
[0073]
[0074]
[0075]
[0076][0077]
在另一个实施方案中，本公开的化合物选自：
[0078][0079]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0080]
在另一个实施方案中，本公开的化合物选自：
[0081]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0082]
在另一个实施方案中，本公开的化合物是化合物4：
[0083][0084]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0085]
在另一个实施方案中，本公开的化合物是：
[0086][0087]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0088]
在一个实施方案中，多发性硬化是复发缓解型多发性硬化、原发性进行性多发性硬化或继发性进行性多发性硬化。
[0089]
在一个实施方案中，受试者是哺乳动物。
[0090]
在另一个实施方案中，受试者是小鼠或人。
[0091]
在一个实施方案中，本公开的化合物以0.0025mg/kg至约1.5g/kg，例如约0.0025mg/kg至约1g/kg、约0.0025mg/kg至约500mg/kg、约0.0025mg/kg至约250mg/kg、约0.0025mg/kg至约200mg/kg、约0.0025mg/kg至约100mg/kg、约0.0025mg/kg至约50mg/kg，约0.0025mg/kg至约10mg/kg的量施用给予有需要的受试者。
[0092]
单位剂量可包含0.01mg至约1.5g的本公开化合物，例如约0.01mg至约1g、约0.01mg至约500mg、约0.01mg至约250mg、约0.01mg至约200mg、约0.01mg至约100mg、约0.01mg至约50mg、约0.01mg至约10mg。单位剂量可以每天给药一次或多次，例如作为一种或多种片剂或胶囊剂，每个片剂或胶囊剂含有约0.01mg至约1.5g的化合物，或其等量的药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0093]
在某些实施方案中，本公开的化合物连续给药至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天，至少15天，至少16天，至少17天，至少18天，至少19天，至少20天，至少21天，至少22天，至少23天，至少24天，至少25天，至少30天，至少35天，至少40天，至少45天，至少50天，至少1周，至少2周，至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周、至少11周或至少12周。
[0094]
在一个实施方案中，本公开的化合物口服给药。
[0095]
本公开还涉及一种减轻有需要的受试者的炎症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的至少一种本公开的化合物。
[0096]
在一个实施例中，受试者周围的炎症减少。
[0097]
在一个实施方案中，受试者的中枢神经系统中的炎症减少。
[0098]
在一个实施例中，炎症是神经炎症。
[0099]
在一个实施方案中，神经炎症由多发性硬化引起，例如复发缓解型多发性硬化、原发性进行性多发性硬化、继发性进行性多发性硬化。
[0100]
在一个实施方案中，本公开提供一种降低受试者的pbmc中白细胞、t淋巴细胞和b
淋巴细胞水平的方法，包括向受试者施用本公开的化合物，其中受试者患有多发性硬化。
[0101]
在一个实施方案中，本公开提供了一种诱导抗凋亡细胞经历凋亡的方法，该细胞与多发性硬化有关，该方法包括：通过使细胞与至少一种本公开的化合物接触，使其在多发性硬化的部位经历细胞凋亡。
[0102]
在一个实施方案中，抗凋亡细胞是t细胞或b细胞。
[0103]
在一个实施方案中，t-细胞是cd45+cd3+t-细胞、cd45+cd3+cd4+t-细胞、cd45+cd3+cd8+t-细胞或cd45+cd3+cd4-cd8-t-细胞。
[0104]
在一个实施方案中，b-细胞是cd45+cd3-b220+b-细胞。
[0105]
在一个实施方案中，多发性硬化的部位是脑、髓鞘、肠粘膜、皮肤或滑膜。
[0106]
在一个实施例中，多发性硬化的部位是脑或髓鞘。
[0107]
在一个实施方案中，本公开提供了一种在抗凋亡细胞中诱导细胞凋亡的方法，该细胞与多发性硬化有关，该方法包括：通过细胞与至少一种本公开的化合物接触，使得细胞在多发性硬化的部位经历细胞凋亡。
[0108]
在一个实施例中，本公开提供了一种用于多发性硬化症的治疗剂，其包含本公开的化合物。
[0109]
在另一方面，本公开提供用于治疗多发性硬化症的药物组合物，其中所述药物组合物包含本公开的化合物和一种或多种药学上可接受的载体。
[0110]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开化合物作为多发性硬化症药物的用途。
[0111]
在另一个实施方案中，本公开提供了用于治疗受试者的多发性硬化症的化合物。
[0112]
在另一个实施方案中，本发明提供了本公开的化合物在制备用于治疗多发性硬化的药物中的用途。
[0113]
在另一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗多发性硬化症的试剂盒，其中该试剂盒包含本公开的化合物。
[0114]
定义
[0115]
术语“一个(a)”和“一个(an)”是指一个或一个以上(即，至少一个)冠词的语法对象。例如，“一个元素”是指一个元素或一个以上的元素。
[0116]
如本文所用，术语“约”包括所述数
±
20％、10％、5％或1％。在某些实施例中，术语“约”用于修饰高于和低于所述值的10％方差的数值。因此，“约10”表示9到11。在某些实施例中，术语“约”用于将数值修改为高于和低于所述值5％的方差。在某些实施例中，术语“约”用于将数值修改为高于和低于所述值1％的方差。
[0117]
将进一步理解，术语“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“包括(includes)”和/或“包括(including)”在本文中使用时指定所述特征、整数、步骤、操作、元素和/或组件的存在，但不排除存在或添加一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、元素、组件和/或它们的组。
[0118]
在一个实施方案中，多发性硬化是例如复发缓解型多发性硬化、原发性进行性多发性硬化或继发性进行性多发性硬化。
[0119]
术语“受试者”是哺乳动物，包括人。非人类动物受试者包括例如灵长类动物、小鼠、大鼠、牛、绵羊、山羊、马、犬科动物、猫科动物等。
[0120]
术语“卤素”是指-cl、-f、-br或-i。
[0121]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“烷基”是指指定的碳原子数，例如，c1烷基如甲基、c2烷基如乙基、c3烷基如丙基或异丙基，甲基、乙基、丙基或异丙基等c
1-3
烷基等。在一个实施例中，烷基是直链c
1-6
烷基。在另一个实施方案中，烷基是支链c
3-6
烷基。在另一个实施方案中，烷基是直链c
1-4
烷基。在另一个实施方案中，烷基是支链c
3-4
烷基。在另一个实施方案中，烷基是直链或支链c
3-4
烷基。在另一实施方案中，烷基部分或完全被氘代，即烷基的一个或多个氢原子被氘原子取代。非限制性示例性c
1-4
烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基和异丁基。非限制性示例性c
1-4
基团包括甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基。
[0122]
单独使用或作为另一组的一部分使用的术语“任选取代的烷基”是指未被取代或被一个、两个或三个独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基和任选取代的芳基所取代。在一个实施例中，任选取代的烷基被两个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的烷基被一个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的烷基是未取代的。非限制性示例性任选取代的烷基包括-ch2ph,-ch2ch2no2,-ch2ch2oh,-ch2ch2och3和-ch2ch2f。
[0123]
单独使用或作为另一组的一部分使用的术语“卤素”是指-cl、-f、-br或-i。
[0124]
单独使用或作为另一个基团的一部分使用的术语“硝基”是指-no2。
[0125]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“氰基”是指-cn。
[0126]
单独使用或作为另一个基团的一部分使用的术语“羟基”是指-oh。
[0127]
单独使用或作为另一个基团的一部分使用的术语“氨基”是指-nh2。
[0128]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“卤代烷基”是指被一个或多个氟、氯、溴和/或碘原子取代的烷基。在一个实施例中，烷基被一个、两个或三个氟和/或氯原子取代。在另一个实施方案中，卤代烷基是c
1-4
卤代烷基。非限制性示例性卤代烷基包括氟甲基、2-氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟丙基、4,4,4-三氟丁基和三氯甲基。
[0129]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“烷氧基”是指连接至末端氧原子的任选取代的烷基。在一个实施方案中，烷氧基是连接到末端氧原子的c
1-6
烷基。在另一个实施方案中，烷氧基是连接到末端氧原子的c
1-4
烷基。非限制性示例性烷氧基包括甲氧基、乙氧基和叔丁氧基。
[0130]
术语“芳基”本身或作为另一个基团的一部分使用是指具有六至十四个碳原子的未取代的单环或双环芳环系统，即c
6-14
芳基。非限制性示例性芳基包括苯基(缩写为“ph”)、萘基、菲基、蒽基、茚基、甘菊烯基(azulenyl)、联苯基、联苯烯基和芴基。在一个实施例中，芳基是苯基或萘基。
[0131]
本文单独使用或作为另一组的一部分使用的术语“任选取代的芳基”是指未被取代或被一到五个独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、芳基、烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基和杂环的取代基取代。在一个实施例中，任选取代的芳基是任选取代的苯基。在另一个实施方案中，任选取代的苯基具有一个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的苯基是未取代的。非限制性示例性取代芳基包括2-甲基苯基、2-甲氧基苯基、2-氟苯基和4-氯苯基。
[0132]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“环烷基”是指未取代的饱和或部分不饱和的，例如含有一个或两个双键、含有一至三个具有三至十二个碳原子的环的环状脂肪烃，即c3-12环烷基，或指定的碳数。在一个实施例中，环烷基有两个环。在一个实施例中，环烷基有一个环。在另一个实施方案中，环烷基是c3-8环烷基。在另一个实施方案中，环烷基是c3-6环烷基。在另一个实施方案中，环烷基是c3-5环烷基。术语“环烷基”意在包括其中环ch2-被-c(＝o)-取代的基团。非限制性示例性环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片基、萘烷、金刚烷基、环己烯基、环戊烯基、环戊酮、螺[3.3]庚烷和双环[3.3.1]壬烷。
[0133]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“任选取代的环烷基”是指未被取代或被一个、两个或三个独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基和杂环取代的环烷基。在一个实施方案中，任选取代的环烷基被两个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的环烷基被一个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的环烷基是未取代的。
[0134]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“杂环”是指未取代的饱和的和部分不饱和的，例如，含有一个或两个双键，含有一个、两个或三个具有三至十四个环成员的环的环状基团，即，3-至14-元杂环，其中环之一的至少一个碳原子被杂原子取代。术语“杂环”意在包括环状脲基如咪唑烷基-2-酮，环状酰胺基如β-内酰胺、γ-内酰胺、δ-内酰胺和ε-内酰胺，以及环状氨基甲酸酯基如恶唑烷基-2-酮。在一个实施方案中，杂环基团是含有一个环和一个或两个氧和/或氮原子的4-、5-、6-、7-或8-元环状基团。在一个实施方案中，杂环基团是含有一个环和一个或两个氮原子的5-或6-元环状基团。在一个实施方案中，杂环基团是含有两个环和一个或两个氮原子的8、9、10、11或12元环状基团。在一个实施方案中，杂环基团是含有一个环和一个氧原子的4或5元环状基团。杂环可以任选地通过碳或氮原子连接到分子的其余部分。非限制性示例性杂环基团包括1,4-二恶烷、2-氧代吡咯烷-3-基、2-咪唑烷酮、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基、8氮杂双环[3.2.1]辛烷(去甲托烷)、6-氮杂螺[2.5]辛烷、6-氮杂螺[3.4]辛烷、吲哚基、吲哚-2-酮和1,3-二氢-2h-苯并[d]咪唑-2-酮。
[0135]
如本文中单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“任选取代的杂环”是指未被取代或被一个、两个或三个独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基和杂环的取代基取代。非限制性示例性任选取代的杂环基团包括：
[0136][0137]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“(环烷基)烷基”是指被一个任选取代的环烷基取代的烷基。在一个实施方案中，(环烷基)烷基是被一个任选取代的c
3-6
环烷基取代的c
1-4
烷基。在一个实施方案中，任选取代的环烷基被杂环基取代。非限制性示例性(环烷基)烷基包括：
[0138][0139]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“烷基氨基”是指-nhr
10
，其中r
10
为c
1-6
烷基。在一个实施例中，r
10
是c
1-4
烷基。非限制性示例性烷基氨基包括-n(h)ch3和-n(h)ch2ch3。
[0140]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“二烷基氨基”是指-nr
11ar11b
，其中r
11a
和r
11b
各自独立地为c
1-6
烷基。在一个实施方案中，r
11a
和r
11b
各自独立地为c
1-4
烷基。非限制性示例性二烷基氨基包括-n(ch3)2和-n(ch3)ch2ch(ch3)2。
[0141]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“(杂环)烷基”是指被一个任选取代的杂环基团取代的烷基。在一个实施方案中，(杂环)烷基是被一个任选取代的4-至6-元杂环基团取代的c
1-4
烷基。杂环可以通过碳原子或氮原子与烷基连接。非限制性示例性(杂环)烷基包括：
[0142][0143]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“杂烷基”是指未取代的直链或支链脂肪烃，包含六至十二个链原子，例如6至12元杂烷基，或指定数目的链原子，其中至少两个-ch
2-基团独立地被-o-、-n(h)-或-s-取代。-o-、-n(h)-或-s-可以独立地位于脂族烃链的任何内部位置，只要每个-o-、(h)-或-s-基团由以下位置隔开至少两个-ch
2-基团。在一个实施例中，两个-ch
2-基团被两个-o-基团取代。在另一个实施例中，三个-ch
2-基团被三个-o-基团替代。非限制性示例性杂烷基包括-ch2ch2och2ch2och3，ch2ch2och2ch2n(h)ch3,以及ch2ch2och2ch2och2ch2och3.
[0144]
术语“药学上可接受的”是指受试者从药理学/毒理学角度可接受的那些特性和/或物质，并且从关于组合物的物理/化学角度来看，对于生产药物化学家来说是可接受的组合物、制剂、稳定性、患者接受度和生物利用度
[0145]
如本文所用，术语“减轻炎症”是指与疼痛、发红、肿胀、发热相比减轻和/或消除受试者的疼痛、发红、肿胀、发热。减少的炎症可能是减少的神经炎症。用于评估患有ms的受试者炎症减轻的方法是本领域已知的，包括例如扩展残疾状态量表(edss)，或通过磁共振成像(mri)追踪钆增强的脑损伤。
[0146]
本发明包括化合物的盐的制备和用途，包括无毒的药学上可接受的盐。药学上可接受的加成盐的例子包括无机和有机酸加成盐和碱性盐。药学上可接受的盐包括但不限于
钠盐、钾盐、铯盐等金属盐；碱土金属，如钙盐、镁盐等；有机胺盐如三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己胺盐、n,n
’‑
二苄基乙二胺盐等；盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等无机酸盐；柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐、乙酸盐、二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、甲酸盐等有机酸盐；甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等磺酸盐；和氨基酸盐，例如精氨酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指任何的盐，例如，在目标患者(如哺乳动物，例如一个人)中通过与酸或碱反应获得的生理耐受的本公开化合物的任何盐。
[0147]
酸加成盐可以通过将本公开的特定化合物的溶液与药学上可接受的无毒酸例如盐酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸、草酸、二氯乙酸等酸的溶液混合来形成。碱性盐可以通过将本公开的化合物的溶液与药学上可接受的无毒碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化胆碱、碳酸钠等的溶液混合来形成。
[0148]
本发明包括本公开化合物的溶剂化物的制备和使用。溶剂化物通常不会显著改变化合物的生理活性或毒性，因此可以起到药理学等效物的作用。如本文所用，术语“溶剂化物”是本公开的化合物与溶剂分子例如二溶剂化物、单溶剂化物或半溶剂化物的组合、物理缔合和/或溶剂化，其中溶剂分子与化合物的比率为分别为约2:1、约1:1或约1:2。这种物理结合涉及不同程度的离子键和共价键，包括氢键。在某些情况下，可以分离溶剂化物，例如当一种或多种溶剂分子被结合到结晶固体的晶格中时。因此，“溶剂化物”包括溶液相和可分离的溶剂化物。本公开的化合物可以与药学上可接受的溶剂例如水、甲醇、乙醇等的溶剂化形式存在，并且本公开旨在包括本公开的化合物的溶剂化和非溶剂化形式。
[0149]
在一个实施方案中，溶剂化物是水合物。“水合物”涉及溶剂分子为水的特定溶剂合物亚组。溶剂化物通常可以起到药理学等价物的作用。溶剂化物的制备是本领域已知的。制备溶剂化物的典型的非限制性方法将包括在高20℃至约25℃的温度下将本公开的化合物溶解在所需溶剂(有机溶剂、水或它们的混合物)中，然后冷却该溶液以足以形成晶体的速率，并通过已知方法例如过滤分离晶体。分析技术如红外光谱可用于确认溶剂化物晶体中溶剂的存在。
[0150]
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”等是指消除、减轻或改善疾病或病症和/或与其相关的症状。尽管不排除，治疗疾病或病症并不需要完全消除疾病、病症或与之相关的症状。术语“治疗”和同义词涵盖向需要此类治疗的受试者施用治疗有效量的本公开化合物。治疗可以是针对症状的，例如，以抑制症状。它可以在短期内实现，针对中期，或者可以是长期治疗，例如在维持治疗的背景下。
[0151]
如本文所用，术语“治疗有量”或“有效量”是指当通过本公开的方法施用时足以有效递送活性成分的量，用于治疗有需要的个体相关的病症或疾病。对于癌症或其他增殖障碍疾病，治疗有效量的药剂可以减少(即，在一定程度上延缓，优选停止)不需要的细胞增殖；减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制(即在一定程度上阻止并优选阻止)癌细胞浸润到外周器官；抑制(即在一定程度上延缓并优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；调节靶细胞中的蛋白质甲基化；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。就施用的化合物或组合物防止生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。
[0152]
术语“插入”是指药物产品随附的信息，它提供了如何管理产品的描述，以及允许
医生、药剂师和患者就产品的使用做出明智决定所需的安全性和有效性数据。包装说明书通常被视为药品的“标签”。
[0153]
本公开的化合物或药物组合物或包含本公开的化合物的组合物可以通过实现其预期目的的任何方式给药。例如，给药可以通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、经皮、鼻内、经粘膜、直肠、阴道内或口腔内途径，或通过吸入给药。施用的剂量和施用途径将根据特定受试者的情况并考虑诸如年龄、性别、健康和接受者的体重、待治疗的病症或障碍、如果有的话同时治疗的种类，治疗的频率，以及所需效果的性质。
[0154]
在一个实施方案中，本公开的化合物、药物组合物或包含本公开的化合物的组合物可以口服给药。在另一个实施方案中，本公开的药物组合物可以口服给药并配制成片剂、糖衣丸、胶囊或口服液体制剂。在一个实施方案中，口服制剂包含含有本公开化合物的挤出多颗粒。
[0155]
本公开的药物组合物或组合物可含有约0.01至99重量％，例如约0.25至75重量％的本公开化合物，例如约1％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％，或按本公开化合物的重量计约75％。
[0156]
本公开的药物组合物或组合物以根据本公开本身已知的方式制造，例如，通过常规混合、制粒、糖衣丸制造、溶解、挤出或冻干过程。因此，药物组合物或口服组合物可通过将活性化合物与固体赋形剂混合，任选地研磨所得混合物并加工颗粒混合物而获得，如果需要或必要，在加入合适的助剂后获得片剂或糖衣丸芯。
[0157]
合适的赋形剂包括填充剂例如糖类(例如，乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇)、纤维素制剂、磷酸钙(例如磷酸三钙或磷酸氢钙)，以及粘合剂例如淀粉糊(使用例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉或马铃薯淀粉)、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以加入一种或多种崩解剂，例如上述淀粉以及羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。
[0158]
助剂通常是流量调节剂和润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐(例如硬脂酸镁或硬脂酸钙)和聚乙二醇。糖衣丸芯具有耐胃液的合适涂层。为此，可以使用浓缩的糖溶液，其可以任选地包含阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了生产抗胃液的包衣，可以使用合适的纤维素制剂的溶液，例如邻苯二甲酸乙酰纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素。染料或颜料可以添加到片剂或糖衣丸包衣中，例如，用于识别或表征活性化合物剂量的组合。
[0159]
可以口服使用的其他药物制剂的实例包括由明胶制成的推入式胶囊，或由明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇制成的软密封胶囊。推入式胶囊可包含颗粒形式的化合物，其可与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁和任选的稳定剂混合，或以挤出的多颗粒。在软胶囊中，活性化合物优选溶解或悬浮在合适的液体中，例如脂肪油或液体石蜡。此外，可以添加稳定剂。
[0160]
用于直肠给药的可能药物制剂包括例如栓剂，其由一种或多种活性化合物与栓剂基质的组合组成。合适的栓剂基质包括天然和合成的甘油三酯和石蜡烃等。还可以使用由活性化合物与基质材料例如液体甘油三酯、聚乙二醇或石蜡烃的组合组成的明胶直肠胶囊。
[0161]
适合肠胃外给药的制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液，例如水溶性盐、碱性溶液或酸性溶液。或者，可以将活性化合物的悬浮液制备成油性悬浮液。用于诸如悬浮液的合适的亲脂性溶剂或赋形剂可包括脂肪油(例如，芝麻油)、合成脂肪酸酯(例如，油酸乙酯)、甘油三酯或聚乙二醇例如聚乙二醇-400(peg-400)。水性悬浮液可包含一种或多种物质以增加悬浮液的粘度，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。悬浮液可以任选地包含稳定剂。
[0162]
在另一个实施方案中，本公开提供了包含本公开化合物(或药物组合物或包含本公开化合物的组合物)的试剂盒，所述试剂盒以有利于它们用于实践本公开的方法的方式包装。在一个实施方案中，试剂盒包括包装在容器例如密封瓶或器皿中的本公开化合物(或药物组合物或包含本公开化合物的组合物)，带有贴在容器上或包含在试剂盒中的标签，描述了化合物或组合物用于实施本公开的方法的用途。在一个实施方案中，化合物或组合物被包装在单位剂型中。该试剂盒还可包括适合于根据预期给药途径给药组合物的装置。
[0163]
如本文所用，po是指口服给药。
[0164]
如本文所用，qd是指一天一个。
[0165]
实施例1.一种治疗多发性硬化症的方法，包括：向有需要的受试者施用有效量的由下式i表示的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0166][0167]
其中:
[0168]
a是
[0169]
x1、x2和x3各自独立地选自cr8＝和-n＝；
[0170]
r8选自氢和卤素；
[0171]
r2选自-no2、-so2ch3和-so2cf3；
[0172]r2a
选自氢和卤素；
[0173]
r3选自氢、-cn、-c≡ch和-n(r
4a
)(r
4b
)；
[0174]r4a
选自任选取代的c
1-6
烷基、任选取代的c
3-6
环烷基、杂环基、杂烷基、(环烷基)烷基和(杂环)烷基；
[0175]
和r
4b
选自氢和c
1-4
烷基；
[0176]
y选自-ch
2-和-o-。
[0177]
实施例2.实施例1的方法，其中的化合物或其药学上可接受的盐或者溶剂合物，其中x1，x2和x3各自是-ch＝；
[0178]
或者，x1是-cf＝,x2和x3分别为-ch＝；
[0179]
或者，x1和x3分别为-ch＝,x2为-cf＝；
[0180]
或者，x1和x2分别为-ch＝,x3为-cf＝；
[0181]
或者，x1是-n＝,x2和x3分别为-ch＝；
[0182]
或者，x1和x3分别为-ch＝,x2是-n＝；
[0183]
或者，x1和x2分别为-ch＝,x3是-n＝；
[0184]
或者，y是-o-；
[0185]
或者，y是-ch
2-；
[0186]
或者，y是-no2；
[0187]
或者，r
4a
选自：
[0188][0189]
实施例3.实施例1或2的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有式ii：
[0190][0191]
其中y选自由-ch
2-和-o-组成的组，r2和r
4a
如实施例1或2中所定义。
[0192]
实施例4.实施例3的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r
4a
选自：
[0193][0194]
实施例5.实施例1或2的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有式iii：
[0195][0196]
其中y选自由-ch
2-和-o-组成的组，并且x1,x2,x3,r2和r
4a
如实施例1或2中所定义。
[0197]
实施例6.实施例1或2的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物如式iv所示：
[0198][0199]
其中r
2a
为氢或氟且r
4a
如实施例1或2中所定义。
[0200]
实施例7：实施例1的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物选自表1的一种或多种化合物。
[0201]
实施例8.实施例7的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物选自以下的一种或多种：
[0202][0203]
实施例9.实施例8的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物是：
[0204][0205]
实施例10.根据实施例1至9中任一项所述的方法，其中所述多发性硬化症是复发缓解型多发性硬化症、原发性进行性多发性硬化症或继发性进行性多发性硬化症。
[0206]
实施例11.根据实施例1至9中任一项所述的方法，其中所述化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物经口服施用。
[0207]
实施例12.一种减轻炎症的方法，包括向有需要的受试者施用有效量的如实施例1至9中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0208]
实施例13.实施例12的方法，受试者外周或中枢神经系统炎症的减少；或者
[0209]
炎症是神经炎症。
[0210]
实施例14.实施例13的方法，神经炎症是由多发性硬化引起的。
[0211]
实施例15.一种降低受试者pbmc中白细胞、t淋巴细胞和b淋巴细胞水平的方法，包括向受试者施用有效量的如实施例1至9中任一项所定义的化合物或药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中受试者患有多发性硬化症。
[0212]
实施例16.实施例15的方法，多发性硬化症是复发缓解型多发性硬化症、原发性进行性多发性硬化症或继发性进行性多发性硬化症。
[0213]
实施例17.一种用于多发性硬化的治疗剂，其包含如实施例1至9中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0214]
实施例18.一种用于治疗多发性硬化症的药物组合物，其中所述药物组合物包含
如实施例1至9中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物以及一种或多种药学上可接受的载体。
[0215]
实施例19.实施例18的药物组合物，所述多发性硬化症为复发缓解型多发性硬化症、原发性进行性多发性硬化症或继发性进行性多发性硬化症。
[0216]
实施例20.一种用于治疗多发性硬化症的试剂盒，其中所述试剂盒包含如实施例1至9中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0217]
实施例21.实施例20的试剂盒，多发性硬化症是复发缓解型多发性硬化症、原发性进行性多发性硬化症或继发性进行性多发性硬化症。
实施例
[0218]
以下实施例旨在说明性，并不意味着以任何方式限制本公开的范围。
[0219]
实施例1
[0220]
mog35-55在c57bl/6小鼠中诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)模型的实验方案
[0221]
雌性c57bl/6小鼠(6-7周龄)购自上海灵畅实验动物有限公司。
[0222]
动物在12小时光照/12小时黑暗循环这种温度控制的环境中被圈养和处理。通过基于体重的随机化将总共50只小鼠分配到5组。
[0223]
小鼠用异氟醚麻醉，并用300μg mog 35-55肽在弗氏不完全佐剂和600μg结核分枝杆菌中乳化(1:1)进行免疫。每只小鼠在四个部位(后肩和尾根)接受0.05ml乳液(s.c.)。在免疫后0小时和48小时，小鼠进一步腹腔注射250μl百日咳毒素(1μg/ml)。注射mog 35-55肽的那天设置为第1天。
[0224]
第1组的小鼠用载体(vehicle)治疗20天(po，qd，从第1-20天)。第2组、第3组和第4组的小鼠用100mg/kg化合物4治疗20天(口服，每日一次，第1-20天)、14天(口服，每日一次，第7-20天)和7天(po，qd，从第14-20天)。fty720用作阳性对照，将其口服施用于第5组的小鼠20天(qd，从第1-20天)。涉及动物护理和使用的协议和程序由bioduro(中国上海)的机构动物护理和使用委员会(iacuc)批准。各组信息如下。
[0225]
表2
[0226]
[0227][0228]
临床评分
[0229]
每天使用基于淋巴结直径的评分系统从0到5评估eae的临床症状(0，正常小鼠，无明显疾病特征；1，尾部无力或轻微的后肢无力；2，尾部无力和后肢无力；3，局部后肢无力；4，完全后肢无力；5，濒临死亡，死亡或因动物福利而死亡。)
[0230]
如图1所示，第1组(对照组)的小鼠在免疫后第13天出现多发性硬化症状，并且在接下来的一周内症状变得更加严重，在第20天和第21天达到3.60
±
0.34的最大临床评分。fty720治疗显示出优越的疗效，在整个实验过程中没有小鼠出现多发性硬化症的症状。需要注意的是，fty720的剂量远高于其临床相关剂量，加上在其临床应用中观察到明显的心血管毒性。当以三种方案中的任何一种给药时，通过显著降低eae的临床评分，化合物4在这种多发性硬化症小鼠模型中显示出功效。值得注意的是，就临床评分而言，化合物4给药14天(第3组)似乎是最有效的方案，这导致研究结束时(第21天)的最低临床评分为2.00
±
0.58。
[0231]
组织病理学评估
[0232]
在研究结束时(第21天)，所有动物都被co2处死，收集脊髓并固定在10％福尔马林中进行病理分析(h&e和lfb染色)。盲法在显微镜下评估组织病理学评分。
[0233]
脊髓的结构和形态通过lfb染色评估，使用评分系统从0到4：0代表无脱髓鞘；1、1次小范围的脱髓鞘；2、2-3次小范围的脱髓鞘；3、1-2次大范围脱髓鞘；4、大规模脱髓鞘涉及20％以上的白质区域。
[0234]
如图2所示，对照组(g1)中的小鼠评分为3.20
±
0.42，表明脱髓鞘的范围很大，而化合物4治疗20天、14天和7天后，分别将评分显著降低至1.80
±
0.29(p《0.05，与对照组相比)、1.33
±
0.44(p《0.01,与对照组相比)、1.30
±
0.37(p《0.001,与对照组相比)，这与临床症状的缓解一致。fty720将lpb染色评分降至0。
[0235]
脊髓炎症用h&e染色评价，评分系统0-4：0，无炎症细胞浸润；1、炎症细胞浸润仅限于血管周围和眶周；2、脊髓内有少量炎性细胞浸润；3、脊髓内有中等数量的炎性细胞浸润；4、脊髓内有大量炎性细胞浸润。
[0236]
如图3所示，对照组(g1)中的小鼠得分为2.50
±
0.34，表明脊髓中的炎症细胞浸润为中小水平。化合物4治疗分别在治疗20天、14天和7天后将评分降低至2.00
±
0.39、1.11
±
0.33、2.10
±
0.41。应该注意的是，化合物4治疗14天最显著地降低了h&e染色评分(p《0.05，与对照组相比)，这与该方案中临床评分的最显著降低一致。fty720将h&e染色评分降至0。
[0237]
流式细胞术
[0238]
在研究结束时(第21天)，裂解全血中的红细胞后获得外周血单个核细胞(pbmc)。细胞用以下荧光标记的抗体染色：apc-cy7偶联的抗小鼠cd45、bb700偶联的抗小鼠cd3e、fitc偶联的抗小鼠cd8a、horizon v500偶联的抗小鼠cd4和pe偶联的抗-鼠标b220。所有细胞主要基于前向散射(fcs)和侧向散射(ssc)对活淋巴细胞进行门控。在流式细胞仪(bd facscalibur，美国)上分析样品以计算每种亚型淋巴细胞的数量。
[0239]
如图4至图9所示，用100mg/kg化合物4处理后，白细胞(cd45+)、t淋巴细胞(t细胞，cd45+cd3+)、b淋巴细胞(b细胞，cd45+cd3-b220+)的数量、cd4+t淋巴细胞(cd4+t细胞、cd45+cd3+cd4+)、cd8+t淋巴细胞(cd8+t细胞、cd45+cd3+cd8+)和双阴性t淋巴细胞(双阴性t细胞、cd45+cd3+cd4-cd8-)的数量显著降低，这可能解释了观察到的疗效，因为病理性t和b细胞参与了多发性硬化症的疾病进展(n.s.,不显著；*,p《0.05；**,p《0.01；***,p《0.001；****,p《0.0001vs g1vehicle)。
[0240]
免疫组织化学(ihc)分析
[0241]
在研究结束时(第21天)，用co2处死所有动物，收集脊髓并在10％福尔马林中固定48小时，然后通过一系列浓度升高的乙醇溶液脱水。载体组(g1)和化合物4组(g3，d7-d20处理)的组织最终包埋在石蜡中。对脊髓的cd4+t细胞、cd8+t细胞、b细胞和il-6进行ihc分析，并对阳性细胞数进行计数并归一化为载体组。
[0242]
由图10至图13可见，与载体组(g1)相比，化合物4组(g3，d7-d20处理)的cd4+t细胞、cd8+t细胞、b细胞数量明显减少，表达化合物4中il-6的浓度也显著降低。减少的cd4+t细胞、cd8+t细胞和b细胞以及促炎细胞因子il-6可以提供进一步的证据来解释观察到的疗效，因为病理性t细胞和b细胞参与了多发性硬化症的疾病进展(*，p《0.05；**,p《0.01；***,p《0.001；****,p《0.0001vs g1载体组)。
[0243]
应当理解，以上两个优选实施例的描述旨在纯粹说明本发明的原理，而不是穷尽本发明的原理，并且变化和改变对于本领域技术人员来说是显而易见的，并且本发明除了在以下权利要求中明确阐述之外，本发明不旨在受到限制。