1.本发明属于多索茶碱制剂领域，特别是一种多索茶碱注射制剂及其制备方法。
背景技术：
2.多索茶碱是一种常见的黄嘌呤类的抗哮喘药，常用上市剂型有小容量注射液、片和糖浆，其中小容量注射液应用广泛，一般为稀释后静脉滴注的方式进行注射。常见的多索茶碱的注射制剂类型除了液态制剂以外，还有冻干制剂。
3.例如，中国专利申请cn111840235a提供了一种多索茶碱注射剂及其制备方法，该制剂使用多索茶碱、甘露醇和注射用水配制而成，装到10ml注射剂瓶中包装销售。又例如中国专利申请cn110613682a提供了一种多索茶碱注射液，其原料包括多索茶碱、海藻糖、泊洛沙姆、枸橼酸。上述这两种多索茶碱注射剂在36个月内均具有良好的稳定性。又例如中国专利申请cn109966246a提供了一种多索茶碱注射剂型组合物，其原料包括晶体状晶体状粉末的多索茶碱、葡萄糖、无机酸、注射用水，还包括褪黑素、环状糊精和聚乙二醇。又例如中国专利申请cn112618519a提供了一种吸入用复方多索茶碱溶液及其制备方法，包括原料药多索茶碱和异丙托溴铵，还包括等渗调节剂、抗氧剂、ph调节剂和注射用水，制备的吸入剂稳定安全，不会引起支气管收缩。
4.然而，上述这几种药物由于参与全身循环，对于肺部的靶向作用效果有限。
技术实现要素：
5.针对以上现有技术的不足，本发明提供了一种纳米脂质体类型的多索茶碱注射制剂，利用纳米载体自身特性，以及对多索茶碱的包覆性，显著提升了多索茶碱药物在肺部的靶向沉积，显著提升了对哮喘肺呼吸道疾病的疗效。具体通过以下技术实现。
6.一种多索茶碱注射制剂，其原料包括多索茶碱脂质体1.5-3.8wt％、表面活性剂0.5-1.5wt％、引导剂1-3wt％，剩余为去离子水；
7.所述多索茶碱脂质体的制备方法是将粒径为10-15nm的多索茶碱微粉溶解于水中进行超声处理，超声处理参数为40-80w处理0.5-1min；加入磷脂、胆固醇类脂质再次进行超声处理，超声处理参数为60-100w处理1-2.5min，真空冷冻干燥，得到多索茶碱脂质体。
8.上述多索茶碱脂质体中所用的磷脂为卵磷脂、豆磷脂、氢化大豆卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、合成磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、蛋磷脂酰胆碱、二鲸蜡磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、甲氧基聚乙二醇化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的一种或两种及以上的混合物；胆固醇类脂质为胆固醇、胆固醇乙酰酯、胆甾醇半琥珀酸酯、β-谷甾醇、胆固醇硬脂酸酯、胆固醇棕榈酸酯、单甲基聚乙二醇-胆固醇、叶酸配体修饰的聚乙二醇-胆固醇中的一种或两种及以上的混合物。
9.上述多索茶碱注射制剂，是一种水包油包水结构的纳米注射制剂，多索茶碱脂质体的粒径小，不超过30nm；通过将多索茶碱制备成脂质体的形式，并且结合引导剂的作用，使其能够在肺部快速靶向沉积，更容易被支气管细胞和肺泡细胞的细胞壁吸收，使其不仅
在存放时具有非常好的稳定性，还具有见效更快，疗效更好效果。
10.优选地，其原料包括多索茶碱脂质体3wt％、表面活性剂1.2wt％、引导剂2.5wt％，剩余为去离子水。
11.优选地，所述多索茶碱脂质体的制备方法中，多索茶碱微粉、磷脂和胆固醇类脂质的重量比为1:(3-6.5):(1.8-2.5)。
12.更优选地，所述多索茶碱脂质体的制备方法中，多索茶碱微粉、磷脂和胆固醇类脂质的重量比为1:6:2。
13.优选地，所述引导剂为甘露醇和/或葡萄糖。
14.更优选地，所述引导剂由重量比为2:(0.5-1)的甘露醇和葡萄糖组成。
15.优选地，所述表面活性剂为吐温系列、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯单油酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯烷基醚中的至少一种。
16.本发明还提供了上述的多索茶碱注射制剂的制备方法，将表面活性剂、引导剂、去离子水搅拌混合均匀，然后加入纳多洛尔脂质体搅拌均匀制成注射剂成品。
17.与现有技术相比，本发明的有益之处在于：上述多索茶碱注射制剂中，多索茶碱脂质体的粒径小，注射后能够在肺部快速靶向沉积，更容易被支气管细胞和肺泡细胞的细胞壁吸收，使其具有更好的稳定性和疗效。
具体实施方式
18.下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动条件下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
19.以下实施例和对比例用使用的磷脂为卵磷脂，胆固醇类脂质为胆固醇。表面活性剂选用吐温-80，引导剂根据不同的实施例选用甘露醇和/或d-葡萄糖。
20.实施例1
21.本实施例制备的多索茶碱注射制剂，其原料为多索茶碱脂质体3wt％、表面活性剂1.2wt％、引导剂2.5wt％，剩余为去离子水。引导剂由重量比为2:1的甘露醇和葡萄糖组成。
22.多索茶碱脂质体的制备方法是将粒径为10-15nm的多索茶碱微粉溶解于水中进行超声处理，超声处理参数为80w左右处理1min；加入磷脂、胆固醇类脂质再次进行超声处理，超声处理参数为80w处理2.5min，真空冷冻干燥，得到多索茶碱脂质体。多索茶碱微粉、磷脂和胆固醇类脂质的重量比为1:6:2。
23.多索茶碱注射制剂的制备方法是将表面活性剂、引导剂、去离子水搅拌混合均匀，然后加入纳多洛尔脂质体搅拌均匀制成注射剂成品。
24.实施例2
25.本实施例制备的多索茶碱注射制剂，其原料为多索茶碱脂质体1.5wt％、表面活性剂0.5wt％、引导剂1wt％，剩余为去离子水。
26.实施例3
27.本实施例制备的多索茶碱注射制剂，其原料为多索茶碱脂质体、表面活性剂、引导剂和去离子水，且用量与实施例1相同。
28.多索茶碱脂质体的原料中，多索茶碱微粉、磷脂和胆固醇类脂质的重量比为1:3:
2.5。
29.实施例4
30.本实施例制备的多索茶碱注射制剂，其原料为多索茶碱脂质体、表面活性剂、引导剂和去离子水，且用量与实施例1相同。
31.多索茶碱脂质体的原料中，多索茶碱微粉、磷脂和胆固醇类脂质的重量比为1:6.5:1.8。
32.实施例5
33.本实施例制备的多索茶碱注射制剂，其原料为多索茶碱脂质体、表面活性剂、引导剂和去离子水，且用量与实施例1相同，但所用的引导剂为甘露醇。多索茶碱脂质体的原料和制备方法与实施例1相同。
34.实施例6
35.本实施例制备的多索茶碱注射制剂，其原料为多索茶碱脂质体、表面活性剂、引导剂和去离子水，且用量与实施例1相同，但所用的引导剂为d-葡萄糖。多索茶碱脂质体的原料和制备方法与实施例1相同。
36.实施例7
37.本实施例制备的多索茶碱注射制剂，其原料为多索茶碱脂质体、表面活性剂、引导剂和去离子水，且用量与实施例1相同，但所用的引导剂由重量比为2:0.5的甘露醇和葡萄糖组成。多索茶碱脂质体的原料和制备方法与实施例1相同。
38.对比例1
39.本对比例制备的多索茶碱注射制剂，其原料包括多索茶碱脂质体1.5wt％、表面活性剂1.5wt％、引导剂3wt％，剩余为去离子水。多索茶碱脂质体的原料和制备方法与实施例1相同。
40.对比例2
41.本对比例制备的多索茶碱注射制剂，其原料包括多索茶碱脂质体3.2wt％、表面活性剂0.5wt％、引导剂1wt％，剩余为去离子水。多索茶碱脂质体的原料和制备方法与实施例1相同。
42.对比例3
43.本对比例制备的多索茶碱注射制剂，其原料与实施例1相同，但是多索茶碱脂质体的原料只含有多索茶碱微粉和磷脂，多索茶碱微粉与磷脂的重量比为1:8；制备方法是将粒径为10-15nm的多索茶碱微粉溶解于水中进行超声处理，超声处理参数为8w处理1min；加入磷脂再次进行超声处理，超声处理参数为80w处理2.5min，真空冷冻干燥，得到多索茶碱脂质体。
44.对比例4
45.本对比例制备的多索茶碱注射制剂，其原料与实施例1相同，但是多索茶碱脂质体的原料只含有多索茶碱微粉和胆固醇类脂质，多索茶碱微粉与胆固醇类脂质的重量比为1:8；制备方法是将粒径为10-15nm的多索茶碱微粉溶解于水中进行超声处理，超声处理参数为8w处理1min；加入胆固醇类脂质再次进行超声处理，超声处理参数为80w处理2.5min，真空冷冻干燥，得到多索茶碱脂质体。应用例1：多索茶碱注射制剂的稳定性评价(参考中国授权专利cn101474155说明书中提到的方法)
46.1、感官评价：对上述实施例1-7和对比例1-4制备的多索茶碱注射制剂，连续取3个批次的样品，观察其颜色均为无色澄清透明液体；
47.2、粒径分布：按照临床使用要求，用5％(重质量分数)葡萄糖水溶液稀释100倍后，采用激光粒度测定仪测定脂质体粒径，测得实施例1-7的多索茶碱注射制剂中，脂质体的平均粒径为25
±
5nm，对比例1-4的多索茶碱注射制剂中，脂质体的平均粒径为20-50nm不等。
48.3、稳定性评价
49.(1)影响因素试验：将上述实施例1-7和对比例1-4制备的多索茶碱注射制剂，将上述实施例和对比例的待测样品各3批在高温(60℃)、强光(4500
±
500lx)、高湿(rh＝75
±
5％)条件下考察5d和10d，对其多索茶碱药物的含量进行考察，各项指标均符合规定。
50.(2)加速试验：模拟上市包装，在高温25℃，rh＝75％
±
5％条件下考查6个月，质量稳定。
51.(3)长期试验：模拟上市包装，计划在4-8℃真空条件下考查12个月，目前已考察7个月余，质量尚稳定。
52.应用例2：多索茶碱注射制剂中，药物在肺中的生物分布评价(参考中国授权专利cn101474155说明书中提到的方法)
53.1、动物
54.本研究所用动物为110只健康大白兔(雌性各半)，体重为2.00kg
±
0.05kg，检测前动物可以自由进食和饮水。试验结束后，兔子均采用注射至死。
55.2、试验过程
56.(1)将30只兔子随机分成6组，每组5只，分别为第1-6组。
57.第1-5组，以每公斤体重1mg多索茶碱的剂量从兔耳缘静脉给与实施例1的多索茶碱注射制剂；给药6组不给药，作为空白血浆和组织。第1-4组给药后0.25、1.5、4、8h处死；给药5组给药后，0.083、0.5、0.5、1、2、4、6、8、12、24h从耳缘静脉采血，采血完后立即处死；
58.采集的血样经5000rpm离心5min，分离血浆；处死的兔子取出心、肝、脾、肺、肾、胃和脑组织，将组织表面水分吸干后准确称重，然后以每1g加2ml生理盐水匀浆处理。
59.(2)针对实施例5-7和对比例3、4制备的多索茶碱注射制剂，分别按照上述步骤(1)的方式进行试验处理。
60.(3)分别取空白血浆及心、肝、脾、肺、肾、胃、脑匀浆样品，精密加入不同量多索茶碱储备液，配制成最终浓度在0.05ug/ml-102.4ug/ml范围，制备标准曲线。取1ml血浆或组织，加50ul(50ug/ml)的多索茶碱内标甲醇溶液，再加2.5ml混合液涡旋6min，并在40℃水浴超声处理10min，然后10000rpm离心8min，将溶液转移到试管中，用水稀释约4倍，然后缓慢加入到c18柱(预先用2ml甲醇和2ml 0.01m醋酸铵缓冲液进行活化)中，依次用2ml 0.01m醋酸铵缓冲液，2ml体积比1:9的甲醇和0.01m醋酸铵缓冲液，2ml体积比2:8的甲醇和0.01m醋酸铵缓冲液冲洗，真空干燥；最后用2ml体积比1:1的乙腈-甲醇混合液将多索茶碱洗脱出来，40℃下氮气挥干去除有机溶剂，用0.2ml流动相复溶，10000rpm离心8min，取上清液25ul进hplc测定。
61.3、结果
62.经测定后发现，实施例1、5-7和对比例3、4对应的小组，多索茶碱注射液在给药后0.25h后体内药物浓度分布最高均为肺部，再然后依次为肾、肝，最后是脾、胃、心、脑顺序不
等，其中实施例1在第0.25h的肺部药物浓度为348.23μg/g，并在最初4h内浓度不断升高，直至最高的579.95μg/g；随后直至第24h，肺部的药物浓度逐渐下降，脾脏、肾脏和肝脏的药物浓度逐步增大，这说明在最初的4h内，多索茶碱主要在肺部达到快速沉积。
63.然而，实施例5-7在第0.25h的肺部药物浓度在脏器中同样最高，但均不超过280μg/g，并且与第二高浓度脏器的浓度值相差不大；而对比例3、4的肺部药物浓度在脏器中同样最高，但浓度较低，分别为117.39μg/g和142.63μg/g。这说明改变引导剂的组成和用量，可能会影响多索茶碱在肺部的靶向沉积，改变磷脂和胆固醇的组成，可能会影响多索茶碱在各个脏器的吸收。