弹性蛋白酶底物肽连接子免疫缀合物及其用途的制作方法

发明领域本发明总体上涉及一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过弹性蛋白酶底物肽连接子共价附接至一个或多个免疫刺激部分的抗体。

背景技术：

0、发明背景

1、需要用于递送抗体和免疫刺激佐剂的新组合物和方法，以到达难以接近的肿瘤和/或扩展用于癌症患者和其它受试者的治疗选项。

2、人类嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(hne)是具有破坏性的蛋白水解活性的丝氨酸蛋白酶。弹性蛋白酶储存于嗜中性粒细胞的嗜天青颗粒中并且在感染或炎症刺激后释放至细胞外间隙中。弹性蛋白酶也在髓系细胞中产生，包括髓源性抑制细胞(mdsc)，一组来自起源于骨髓干细胞并且处于肿瘤微环境内的髓系的异质免疫细胞。高水平的弹性蛋白酶在原发性肿瘤和转移中已有报道，其中所述弹性蛋白酶促进致癌信号传导并且抑制肿瘤抑制因子(starcher,j.invest.derm.(1996),107:159-163)。循环和浸润性嗜中性粒细胞和粒细胞性mdsc与肿瘤进展和患者存活相关联(lerman,i.(2018)steroids 133:96-101)。因此，升高的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶水平与不同类型的实体肿瘤中的不良预后相关联。弹性蛋白酶结合并裂解的肽基序包括x-ala-ala-pro-val(seq id no:637)或x-ala-ala-pro-nva，其中x是肽氨基封端基团并且nva是正缬氨酸(seq id no:638)(us 2002/019331 1；us6855689；wo 2000/069472)。

3、肿瘤靶向肽模拟物整合素配体环(dkp-rgd)经由asn-pro-val(npv)三肽连接子缀合至抗癌药物太平洋紫杉醇(paclitaxel)。asn-pro-val(npv)三肽连接子是嗜中性粒细胞分泌的弹性蛋白酶的底物。体外连接子裂解测定和细胞抗增殖实验证明了这种肿瘤靶向缀合物的功效(dias,a.r.m等(2019)chem.eur.j.25:1696-1700)。免疫系统的促炎环境和浸润细胞的存在是充分确立的癌症标志(hanahan d.等(2011)cell 144:646-674)。因此可设想的是，弹性蛋白酶可活化前药可以对多种肿瘤类型具有治疗活性。

4、抗体-药物缀合物(adc)在循环中的稳定性由许多因素决定，其中一个因素是连接子对循环酯酶和蛋白酶引起的过早裂解的易感性。实际上，据推测诸如嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的蛋白酶在已经临床上评价的若干adc的药物动力学(pk)暴露和毒性两方面起显著作用(flygare,j.a.等(2013)chem biol drug des.,81:113-121)。

5、将102种非天然氨基酸库合并到人类嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的s1-s4结合袋中作为组合文库方法中的四肽以优化底物催化裂解效率(kasperkiewicz,p.等(2014)proc.nat.acad.sci.111:2518-2523)。最佳底物展示出比通常使用的弹性蛋白酶底物高三个数量级的催化效率和选择性并且揭示了在嗜中性粒细胞细胞外诱捕网形成过程中活性弹性蛋白酶的特定存在。非天然氨基酸显示出与天然氨基酸相比在特异性和选择性方面是好得多的底物(zervoudi e等(2011)b iochem j 435(2):411-420；poreba m等(2012)plosone 7(2):e319 38)。

技术实现思路

1、本发明的一个方面是一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过弹性蛋白酶底物肽连接子共价附接至一个或多个免疫刺激部分的细胞结合剂。

2、本发明的另一个方面是一种免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，所述化合物能够与细胞结合剂缀合。

3、本发明的另一个方面是一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的免疫缀合物。

4、本发明的另一个方面是一种治疗方法，所述方法包括向患有癌症或免疫相关病症的患者施用治疗有效剂量的免疫缀合物。

5、本发明的另一个方面是免疫缀合物在疗法中的用途。

技术特征：

1.一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过包含弹性蛋白酶底物肽连接子单元的连接子共价附接至一个或多个免疫刺激部分的细胞结合剂。

2.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述细胞结合剂是抗体。

3.如权利要求2所述的免疫缀合物，其中所述抗体是具有结合pd-l1的抗原结合结构域的抗体构建体。

4.如权利要求3所述的免疫缀合物，其中所述抗体选自由阿特珠单抗、得瓦鲁单抗和阿维鲁单抗或其生物类似药或生物改良药组成的组。

5.如权利要求2所述的免疫缀合物，其中所述抗体是具有结合her2的抗原结合结构域的抗体构建体。

6.如权利要求5所述的免疫缀合物，其中所述抗体选自由曲妥珠单抗和帕妥珠单抗或其生物类似药或生物改良药组成的组。

7.如权利要求2所述的免疫缀合物，其中所述抗体是具有结合cea的抗原结合结构域的抗体构建体。

8.如权利要求7所述的免疫缀合物，其中所述抗体是拉贝妥珠单抗或其生物类似药或生物改良药。

9.如权利要求2所述的免疫缀合物，其中所述抗体是具有结合trop2的抗原结合结构域的抗体构建体。

10.如权利要求7所述的免疫缀合物，其中所述抗体是沙西妥珠单抗或其生物类似药或生物改良药。

11.如权利要求1-10中任一项所述的免疫缀合物，其中所述一个或多个免疫刺激部分是模式识别受体。

12.如权利要求1-11中任一项所述的免疫缀合物，其中所述一个或多个免疫刺激部分与选自由tlr、sting、nod2、rig-1和nlrp3组成的组的受体相互作用或调节所述受体。

13.如权利要求2-12中任一项所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物具有式i：

14.如权利要求13所述的免疫缀合物，其中ims是toll样受体(tlr)激动剂。

15.如权利要求13所述的免疫缀合物，其中ims选自式ia-f：

16.如权利要求15所述的免疫缀合物，其中r1、r2、r3、r4和r5中的一者选自下式：

17.如权利要求13所述的免疫缀合物，其中ims是sting激动剂。

18.如权利要求13所述的免疫缀合物，其中ims具有式ig：

19.如权利要求18所述的免疫缀合物，其中xa和xb独立地选自由咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、噁二唑基和噻二唑基组成的组。

20.如权利要求19所述的免疫缀合物，其中xa和xb各自是吡唑基，经一个或多个c1-c12烷基取代。

21.如权利要求18所述的免疫缀合物，其中r1选自由-och3、-och2ch3、-och2ch2och3、-och2ch2oh和-och2ch2n(ch3)2组成的组。

22.如权利要求21所述的免疫缀合物，其中r1是-och3。

23.如权利要求18所述的免疫缀合物，其中r1是f。

24.如权利要求18所述的免疫缀合物，其中r2a和r2b各自是-c(＝o)nh2。

25.如权利要求18所述的免疫缀合物，其中r3选自-ch2ch2-、-ch＝ch-和-c≡c-。

26.如权利要求18所述的免疫缀合物，其中r3是c2-c4烯二基，经一个或多个选自f、-oh和-och3的基团取代。

27.如权利要求18所述的免疫缀合物，其中r4是-o-(c1-c12烷二基)-(c2-c20杂环二基)-*。

28.如权利要求27所述的免疫缀合物，其中c1-c12烷二基是丙二基并且c2-c20杂环二基是哌啶二基。

29.如权利要求13所述的免疫缀合物，其中l选自由以下组成的组：

30.如权利要求29所述的免疫缀合物，其中espep包含一个或多个非天然氨基酸残基。

31.如权利要求29所述的免疫缀合物，其中espep包含选自由以下组成的组的氨基酸的氨基酸残基：

32.如权利要求29所述的免疫缀合物，其中espep选自由ala-pro-val、asn-pro-val、ala-ala-val、ala-ala-pro-ala(seq id no:639)、ala-ala-pro-val(seq id no:640)和ala-ala-pro-nva(seq id no:641)组成的组。

33.如权利要求29所述的免疫缀合物，其中espep具有下式：

34.如权利要求33所述的免疫缀合物，其中y选自2、3和4。

35.如权利要求29所述的免疫缀合物，其中espep是具有下式的三肽：

36.如权利要求35所述的免疫缀合物，其中aa1是甲基，aa2形成脯氨酸，并且aa3是异丙基。

37.如权利要求35所述的免疫缀合物，其中espep具有下式：

38.如权利要求37所述的免疫缀合物，其中espep选自下式：

39.如权利要求29所述的免疫缀合物，其中l是：

40.如权利要求39所述的免疫缀合物，其中peg是：

41.如权利要求40所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物选自下式：

42.如权利要求41所述的免疫缀合物，其中ims具有以下结构：

43.如权利要求29所述的免疫缀合物，其中espep是具有下式的四肽：

44.如权利要求43所述的免疫缀合物，其中

45.如权利要求44所述的免疫缀合物，其中espep具有下式：

46.如权利要求45所述的免疫缀合物，其中espep具有下式：

47.如权利要求29所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含选自iie-h的结构：

48.如权利要求29所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含选自iii-l的结构：

49.如权利要求48所述的免疫缀合物，其中r2和r3各自是c1-c8烷基。

50.如权利要求49所述的免疫缀合物，其中r2和r3各自是-ch2ch2ch3。

51.如权利要求48所述的免疫缀合物，其中x2和x3各自是一键，并且r2或r3是-o-(c1-c12烷基)。

52.如权利要求51所述的免疫缀合物，其中r2或r3是-och2ch3。

53.如权利要求2-12中任一项所述的免疫缀合物，其中所述弹性蛋白酶底物肽连接子由弹性蛋白酶裂解。

54.一种免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，所述化合物选自式iia-f：

55.如权利要求54所述的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，其中peg具有下式：-(ch2ch2o)25-(ch2)2-或-(ch2ch2o)10-(ch2)2-。

56.如权利要求54所述的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，其中r2和r3各自是c1-c8烷基。

57.如权利要求56所述的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，其中r2和r3各自是-ch2ch2ch3。

58.如权利要求54所述的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，其中x2和x3各自是一键，并且r2或r3是-o-(c1-c12烷基)。

59.如权利要求58所述的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，其中r2或r3是-och2ch3。

60.如权利要求54所述的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，选自下式：

61.如权利要求54所述的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，所述化合物包含选自iie-h的结构：

62.如权利要求54所述的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物，所述化合物包含选自iii-l的结构：

63.一种免疫缀合物，所述免疫缀合物是通过使细胞结合剂与权利要求54所述的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物缀合来制备。

64.一种免疫缀合物，所述免疫缀合物是通过使细胞结合剂与具有以下结构的免疫刺激剂-弹性蛋白酶底物肽连接子化合物缀合来制备：

65.如权利要求63或64所述的免疫缀合物，其中所述细胞结合剂是抗体。

66.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的根据权利要求1-53中任一项所述的免疫缀合物和一种或多种药学上可接受的稀释剂、媒剂、载体或赋形剂。

67.如权利要求66所述的药物组合物，所述药物组合物用于疗法中。

68.一种治疗方法，所述方法包括向患有免疫相关病症的患者施用治疗有效剂量的权利要求66所述的药物组合物。

69.如权利要求68所述的方法，其中所述免疫缀合物的所述弹性蛋白酶底物肽连接子由弹性蛋白酶裂解。

70.如权利要求1至53中任一项所述的免疫缀合物，所述免疫缀合物用于疗法中。

71.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据权利要求66所述的药物组合物。

72.如权利要求71所述的方法，其中所述癌症容易发生由tlr7和/或tlr8促效作用诱导的促炎反应。

73.如权利要求71所述的方法，其中所述癌症容易发生由sting促效作用诱导的促炎反应。

74.如权利要求71所述的方法，其中所述癌症是表达pd-l1的癌症。

75.如权利要求71所述的方法，其中所述癌症是表达her2的癌症。

76.如权利要求71所述的方法，其中所述癌症是表达cea的癌症。

77.如权利要求71所述的方法，其中所述癌症是表达trop2的癌症。

78.如权利要求72-77中任一项所述的方法，其中所述癌症选自选自膀胱癌、尿道癌、尿路上皮癌、肺癌、非小细胞肺癌、梅克尔细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、胃癌和乳癌。

79.如权利要求78所述的方法，其中所述乳癌是三阴性乳癌。

80.如权利要求78所述的方法，其中所述梅克尔细胞癌是转移性梅克尔细胞癌。

81.如权利要求78所述的方法，其中所述胃癌是过表达her2的胃癌。

82.如权利要求78所述的方法，其中所述癌症是胃食管连接部腺癌。

83.一种根据权利要求1-53中任一项所述的免疫缀合物的用途，所述用途是用于治疗癌症。

技术总结
本发明提供了式I的免疫缀合物，所述免疫缀合物包含通过缀合至一个或多个免疫刺激部分而连接的细胞结合剂，其中连接子是弹性蛋白酶的底物。本发明还提供了包含反应性官能团的免疫刺激剂中间体组合物。此类中间体组合物是适合用于经由连接子或连接部分形成所述免疫缀合物的底物。本发明进一步提供了用所述免疫缀合物治疗癌症的方法。

技术研发人员：D·多尔南,R·顾迪尔卡,B·萨菲纳,M·周
受保护的技术使用者：博尔特生物治疗药物有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11