发明领域本发明涉及用于治疗包括自身免疫性疾病和过敏变态反应在内的疾病的组合物、制剂和试剂。本发明还公开了治疗自身免疫性疾病和变态反应的方法。治疗自身免疫性疾病和变态反应的组合物涉及疾病相关抗原和免疫抑制剂在缓释制剂中的组合。治疗过敏的方法、组合物、制剂和试剂还涉及将持续释放制剂中的过敏原和免疫活性增强剂的组合施用于有需要的受试者。背景资料免疫反应对于防止潜在致病微生物是必要的。然而，不希望的免疫激活会引起有害过程，从而导致自身组织的损伤或破坏。发生在例如自身免疫性疾病中的不希望的免疫激活，其中抗体和/或t淋巴细胞与自身抗原反应从而损害身体组织。过敏反应的情况也是如此，其特征是对某些环境物质的免疫反应过度，可能导致炎症反应，从而导致组织破坏。这也是移植器官排斥反应的情况，这种排斥反应是由存在于宿主中的识别供体同种异体抗原或异种抗原的同种异体反应性t细胞介导的。免疫耐受是对通常会发生免疫反应的抗原的特异性免疫反应的获得性缺乏。通常为了诱导耐受，必须暴露于耐受抗原，这会导致某些淋巴细胞死亡或功能失活。这个过程通常解释了对自身抗原的耐受性或自我耐受性。免疫抑制剂可用于预防或减少不希望的免疫反应，例如治疗患有自身免疫性疾病或接受同种异体移植的患者。产生与不良免疫反应相关的免疫抑制的常规策略是基于广效免疫抑制药物。不幸的是，使用广效免疫抑制剂会带来严重副作用的风险，例如肿瘤、感染、肾毒性和代谢紊乱。因此，新的免疫抑制疗法将是有益的。
背景技术：
技术实现思路
1、本发明人在先的美国申请号15/723,173、16/380,951、16/029,594、16/566,716、16/819,168、17/344,932和17/385,908公开了治疗自身免疫性疾病和过敏的方法、药剂、装置和组合物，防止抗原特异性抗体的产生，包括抗药物抗体的产生。先前美国申请中的药剂包括抗原-药物偶联物，例如抗原-免疫抑制分子偶联物。试剂和组合物可以是抗原和免疫抑制分子或其缀合物的混合物。它们可以是线性聚合物、微粒、纳米粒子、脂质体、植入物或透皮给药系统如透皮贴剂的形式。抗原的实例包括b细胞抗原、mhc-肽复合物形式的t细胞抗原或可与mhc结合的抗原肽(或其衍生物)。载体系统可用于先前和当前应用以构建偶联物。例如，脂质体或微粒或纳米颗粒可用作载体。抗原可以固定在脂质体或颗粒的表面，效应分子(例如α-gal、鼠李糖、免疫抑制细胞因子、tregitope肽、毒素、sirna或mirna等、免疫抑制剂、反义分子)可以是封装在脂质体或颗粒的内部或共同固定在脂质体或颗粒的表面上。载体还可以是直链或支链聚合物，例如葡聚糖、透明质酸、肝素、硫酸软骨素和多肽。抗原和效应分子(如免疫抑制剂)都可以与聚合物结合。它们可以通过向受试者施用所述缀合物(例如皮下或淋巴内注射或应用于皮肤如上臂皮肤)而给予需要治疗自身免疫性疾病和过敏或抑制抗药物抗体产生或诱导抗原特异性免疫耐受的受试者。更多细节可以在之前的披露中找到。
2、一方面，本发明公开了组合物和制剂，其包含一种或多种引起疾病的抗原和一种或多种免疫抑制剂，处于持续(延长)释放(缓释)系统中，例如原位胶凝系统或植入物，以治疗选自自身免疫性疾病，过敏和抗药物抗体的所述疾病。本发明还公开了一种通过将上述组合物和制剂作为注射剂施用于受试者来治疗自身免疫性疾病或变态反应或抑制抗药物抗体产生或诱导抗原特异性免疫耐受的方法。
3、一方面，本发明公开了组合物和制剂，其包含一种或多种引起疾病的抗原和疫苗佐剂(如tlr受体激动剂，sting受体激动剂)，处于持续(延长的)释放系统例如原位胶凝系统或植入物中，以治疗选自自身免疫性疾病、变态反应和抗药物抗体的所述疾病状况。本发明还公开了一种通过将上述组合物和制剂作为注射剂施用于受试者来治疗自身免疫性疾病或变态反应或抑制抗药物抗体产生或诱导抗原特异性免疫耐受的方法。
4、一方面，本发明公开了组合物和制剂，其在持续(延长)释放系统(例如原位胶凝系统或植入物)中包含一种或多种引起疾病的抗原，以治疗选自自身免疫性疾病、过敏和抗-药物抗体的症状。所述组合物和制剂不含疫苗佐剂型试剂和免疫抑制剂。本发明还公开了一种通过将上述组合物和制剂作为注射剂施用于受试者来治疗自身免疫性疾病或变态反应或抑制抗药物抗体产生或诱导抗原特异性免疫耐受的方法。
5、本发明的组合物和制剂可以是凝胶形式或高粘度液体或固体形式或植入物形式。此处使用的凝胶是指固体、果冻状材料，其可以具有范围从软而弱到硬而韧的特性。如本领域所熟知的，凝胶是非流体胶体网络或聚合物网络，其通过流体在其整个体积中膨胀。水凝胶是一种凝胶，它包含亲水性聚合物链网络，有时以水为分散介质的胶体凝胶形式存在。水凝胶具有高吸收性并且可以包含高程度的水，例如大于90％的水。在一些实施例中，本文所述的凝胶包含天然或合成的聚合物网络。在一些实施例中，凝胶包含亲水性聚合物基质。在其他实施例中，凝胶包含疏水性聚合物基质。在一些实施例中，凝胶具有与天然组织非常相似的柔韧性。在某些实施例中，凝胶是生物相容的和可吸收的。在某些实施方案中，凝胶在施用于患者后形成。
6、组合物和制剂可以包含增粘剂以增加其粘度，其用作缓释制剂。在某些实施方案中，制剂是粘性液体。在某些实施方案中，注射制剂在室温下具有大于5,000cps的粘度。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有大于50,000cps的粘度。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有大于500,000cps的粘度。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有5,000,000cps的粘度。粘度增强剂的实例可以很容易地从已知的药学上可接受的辅料中找到，例如透明质酸(线性或交联形式)、hpmc、mc、cmc、淀粉和卡波姆。在一些实施例中，粘度增强剂是可生物降解的。
7、在一些优选的实施方式中，本发明的组合物处于缓释系统中以在延长的时间内释放活性药物，例如50％的药物(例如抗原、免疫抑制剂、tlr激动剂)在数天至数周内释放。该制剂是延长(持续)释放制剂。在一些优选的实施方案中，本发明的组合物在原位胶凝系统内并且制剂是所述载药原位胶凝制剂。原位胶凝系统通常是聚合物制剂，在进入体内之前呈液态形式，但在生理条件下会转变为凝胶形式。溶胶-凝胶转变取决于一种或多种不同刺激的组合，如ph变化、温度调节、溶剂交换、紫外线照射和特定离子或分子的存在。具有此类特性的药物递送系统可广泛用于生物活性分子的持续递送载体制备。这些智能系统的一些重要优点是易于应用和减少给药频率，以及保护药物免受环境条件变化的影响。多种天然和合成聚合物会经历原位凝胶形成而可能被使用。果胶、木葡聚糖、结冷胶、壳聚糖和海藻酸是一些这样的天然聚合物。果胶凝胶化发生在钙离子存在的情况下。木葡聚糖表现出与体温的热可逆胶凝作用。藻酸盐的水溶液在添加二价和三价金属离子(例如体液中的ca2+)后形成牢固的凝胶。可以使用的藻酸盐的实例包括藻酸钠、藻酸钾、藻酸铵和藻酸的其他药学上可接受的胺盐。例如，海藻酸钠和羟丙基甲基纤维素可用于原位凝胶制剂。结冷胶的原位凝胶形成是由于温度调节或诱导的阳离子而发生的。体液中的温度和离子条件(ca2+)导致结冷胶水溶液转变为凝胶状态。carbopol(聚丙烯酸，卡波姆)是一种众所周知的ph依赖性聚合物，它在酸性ph值下保持溶液形式，但在碱性ph值下形成低粘度凝胶。可以使用卡波姆和羟丙基甲基纤维素(hpmc)配制原位凝胶。后者用于赋予卡波普(又名卡波姆)溶液粘度，同时降低其酸度。carbopol-hpmc体系的水溶液也是一种原位胶凝体系。pluronic f-127是一种具有非离子性质的三嵌段共聚物，可通过温度变化进行原位凝胶化。可与carbopol934、hpmc配合使用制备原位凝胶。壳聚糖水溶液在ph超过6.2时形成水凝胶状沉淀。向壳聚糖水溶液中加入带有单一阴离子头的多元醇盐，如葡萄糖磷酸盐，可以将阳离子多糖溶液转化为热敏ph依赖性凝胶。这种制剂的液体形式(在室温下)在体内注射时会变成凝胶植入物。它们的示例可以在pmid：25237648中找到，并且可以很容易地用于本发明。在一些实施例中，凝胶由透明质凝胶与可选的钙盐或铁盐制成，例如钙离子和透明质凝胶材料的特征在于：包括透明质酸、cacl2或fecl3，以及按重量比的去离子水0.01～10：0.01～10：100。原位胶凝系统中使用的原位胶凝聚合物的实例包括壳聚糖、海藻酸、木葡聚糖、结冷胶、透明质酸钠、果胶、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、甲基纤维素(mc)、羧甲基纤维素、醋酸邻苯二甲酸纤维素(cap)、pga、prolifeprospan、carbopol、pluronics、聚(丙交酯-共-乙交酯)(plga)、聚(d,l-丙交酯-共-羟甲基乙交酯)(plhmga)。
8、载药原位胶凝系统可以使用ph触发原位胶凝聚合物：ph触发原位胶凝系统是溶液，当暴露于体液的ph值时，它会转化为凝胶相，例如羧甲基纤维素、透明质酸盐、醋酸邻苯二甲酸纤维素和卡波姆。醋酸纤维素邻苯二甲酸酯乳胶在酸性ph值(如约ph4)下保持自由流动的溶液，并在中性ph值(约ph7)下转化为凝胶。商业上称为carbopol的聚丙烯酸是一种广泛使用的聚合物，当ph值升高到其约5.5的pka以上时，它会在水溶液中发生溶胶到凝胶的转变。这些类型的系统的配方可以具有低ph值(4-5)以保持溶液状态，并且由于进入体内ph值的变化就会变成凝胶。聚丙烯酸(例如934)可用作胶凝剂，hpmc(如methocelk4m)可用作增粘剂。聚丙烯酸(carbopol)可与壳聚糖(作为增粘剂)结合用作胶凝剂。基于0.4％w/v carbopol/0.5％w/v壳聚糖的原位胶凝系统在室温和制剂ph值如ph6.0下呈液态，并在体内ph7.4下快速转变为粘性凝胶相.
9、载药原位胶凝系统可以使用温度触发的原位胶凝聚合物：温度触发的原位胶凝聚合物在低温(低于20℃)下保持液态，并在生理温度(35-37℃)下发生胶凝。以下是温度触发的原位胶凝聚合物系统的一些例子：泊洛沙姆：泊洛沙姆，商业上称为是通常用于形成热敏原位胶凝系统的热可逆聚合物。当从4℃加热到23℃或更高时，浓度≥15％的pluronic f127或poloxamer 407水溶液从低粘度溶液转变为半固体凝胶。例如，系统可以包含20％w/w泊洛沙姆407和10％w/w泊洛沙姆p188。泊洛沙姆407(p407)的低粘度水溶液，浓度≥18％w/w(peo和ppo的比例为7:3)，在环境温度和添加透明质酸(泊洛沙姆混合物中的ha)可以将凝胶化温度延迟几摄氏度，并且在泊洛沙姆/ha的特定浓度下，可以获得凝胶化温度接近体温的热可逆凝胶。粘度增强剂(hpmc、mc和cmcna)可以添加到15％w/w pf-127中以形成水凝胶，例如含有3％甲基纤维素的15％ pf-127制剂可以用作温度触发的原位胶凝体系加载药物。
10、泊洛沙胺是另一种温度引发的原位胶凝系统，通常称为tetronics(环氧乙烷和环氧丙烷的四官能嵌段共聚物)，例如四聚低聚丙交酯共聚物(由1307和纯l-丙交酯制成)。另一种引发原位胶凝系统的温度是纤维素衍生物：乙基(羟乙基)纤维素、甲基纤维素和hpmc是一些用作原位胶凝聚合物的纤维素衍生物。乙基(羟乙基)纤维素(ehec)的水溶液表现出热敏凝胶化。添加十二烷基硫酸钠或鲸蜡基溴化三铵，ehec(1％-4％w/w)溶液在加热到30-40℃时会发生溶胶到凝胶的相变，并形成坚硬而透明的凝胶。一些纤维素衍生物在低温下保持液态，加热时变成凝胶，例如甲基纤维素和hpmc的水溶液分别在40-50℃和75-90℃之间发生相变变成凝胶。然而，甲基纤维素和hpmc的相变温度高于生理温度，但可以通过在聚合物中进行化学或物理变化来降低。例如，在甲基纤维素中加入nacl或降低hpmc的羟丙基摩尔取代度，这些聚合物的相变温度可分别降低至32-34℃和40℃。
11、通过加入不同比例的果糖和柠檬酸三钠二水合物(sc)，可将1％甲基纤维素溶液的凝胶化温度降低至生理温度即37℃。甲基纤维素(1％)和果糖(10％)中可加入1-5％ sc，成为温度触发原位胶凝体系。
12、木葡聚糖，一种从罗望子种子中提取的多糖，已获准用作食品添加剂。β-半乳糖苷酶将木葡聚糖部分降解至>35％的半乳糖去除率，在稀水溶液中表现出热可逆凝胶化。木葡聚糖的溶胶-凝胶转变温度随半乳糖消除程度和聚合物浓度而变化，并且呈负相关，例如，当半乳糖去除率从35％增加到58％时，观察到木葡聚糖的溶胶-凝胶转变温度从40℃降低至5℃。木葡聚糖通过杆状链的横向堆叠形成凝胶。基于1.5％w/w木葡聚糖的原位胶凝制剂显示出与25％w/w pluronic f127凝胶类似的反应。
13、众所周知的热敏聚合物聚(n-异丙基丙烯酰胺)(pnipaam)的热可逆相变温度为32℃。由于其相变温度更接近人体表面温度，这种原位凝胶形成聚合物已被利用。
14、可以使用将甲基纤维素、hpmc、cmc、甘露醇和山梨糖醇作为粘度增强剂添加到原位胶凝聚合物中。基于壳聚糖/多元醇盐组合的热敏中性溶液(doi:10.1016/s0142-9612(00)00116-2)也是一种可以使用的温度触发原位胶凝系统。
15、载药原位胶凝系统可以使用离子触发的原位胶凝聚合物。这些包括其溶液粘度在暴露于体液如泪液的离子浓度时增加的聚合物。它也被称为渗透诱导凝胶化。离子敏感聚合物可以与眼表泪液中存在的阳离子(一价、二价)交联，提高药物的滞留时间。离子触发的原位胶凝聚合物系统包括结冷胶，其在商业上被称为和海藻酸/海藻酸钠：海藻酸钠是一种天然亲水多糖，经fda批准可用作人类伤口敷料材料和食品添加剂，由(1→4)连接的β-d-甘露糖醛酸(m)和α-l古洛糖醛酸(g)不同组成和序列的单位组成。海藻酸盐在暴露于体内二价阳离子(例如ca2+)时会转变成稳定的凝胶。聚合物主链中古洛糖醛酸的百分比在海藻酸盐胶凝和药物释放中起主要作用。古洛糖醛酸含量>65％的藻酸盐瞬间胶凝，而古洛糖醛酸含量低的藻酸盐胶凝缓慢并形成弱凝胶。可以使用海藻酸钠的离子激活原位胶凝与其他粘度增强剂如hpmc的组合。注射前可在制剂中预装低浓度钙盐，在体外不会引起胶凝，但有助于体内胶凝，如0.1％～0.6％葡萄糖酸钙溶液。要添加以帮助体内胶凝但不引起体外胶凝的钙盐的量取决于制剂中藻酸盐的浓度。较高浓度的海藻酸盐需要较低浓度的钙盐，低浓度的海藻酸盐可以耐受较高浓度的钙盐，同时在体外保持非凝胶状态。通过向含有藻酸盐的制剂中添加不同量的钙盐并选择在体外不产生不可注射凝胶的最高量的钙盐，可以通过实验容易地确定预加载到制剂中的钙盐的合适量。在一些实例中，原位胶凝系统基质在本发明的最终含药制剂中为1％w/v海藻酸钠(例如vlvg，novamatrix，fmcbiopolymers，drammen，norway)和0.3％w/v d-葡萄糖酸钙。
16、也可以使用包括具有不同胶凝机制的聚合物的胶凝增强剂的组合。为了减少胶凝所需的聚合物的量并获得具有改进的胶凝性能的更好的凝胶，可以使用具有不同胶凝机制的两种或更多种聚合物的组合来开发原位药物递送系统。例如可以使用热敏聚合物、甲基纤维素或hpmc和ph触发聚合物carbopol的组合。前者聚合物表现出热胶凝，而后者表现出ph依赖性胶凝。最终的配方形成了一种易流动的配方，它在25℃和37℃之间溶胶-凝胶转变以及ph从4.0增加到7.4时可逆地胶凝。在一些示例中，使用了25％(w/v)pluronics和30％(w/v)cap。在一个例子中，可以使用基于泊洛沙姆+壳聚糖的原位胶凝系统。泊洛沙姆-壳聚糖(16:1)系统的最佳凝胶化温度为32℃。在一个例子中，可以通过混合三种不同的聚合物如carbopol940、海藻酸钠和瓜尔胶来制备基于原位胶凝系统的ph值和离子触发聚合物的组合。在一个例子中，一种制剂可以由15％ pluronic f127和0.1％低分子量壳聚糖组成。0.3％和14％(w/w)浓度的carbopol和pluronic可用于制备原位凝胶制剂。在另一个例子中，泊洛沙姆407和188用作热敏聚合物，carbopol 1342p nf用作ph敏感聚合物，合并的溶液在生理条件下形成凝胶。在一个示例中，约15％ pluronic f127与作为粘度增加剂的hpmc等聚合物组合，或与carbopol940、黄原胶和海藻酸钠(高葡萄糖醛酸含量)等聚合物组合用于ph和阳离子触发的溶胶-凝胶转变基质来使用。在一些实例中，甲基纤维素或hpmc与carbopol组合。在一个示例中，用于原位胶凝的海藻酸钠溶液浓度为2％w/w，而对于pluronic f127，其浓度为14％(w/w)。在一些实例中，三嵌段(tb)聚己内酯-聚乙二醇-聚己内酯[(pcl-peg-pcl)、bab]和五嵌段共聚物(pbc)聚乳酸(pla)[(pla-pcl-peg-pcl-pla)、cbabc]和[(peg-pcl-pla-pcl-peg),abcba]可以被使用。在一个例子中，原位胶凝系统是海藻酸钠作为离子敏感聚合物和甲基纤维素作为增粘剂。在一些实例中，聚丙烯酸(carbopol940)或透明质酸、pluronicf127和结冷胶分别用于ph触发的原位凝胶化、热可逆凝胶化和离子激活系统。hpmc与carbopol或透明质酸一起添加作为粘度增强剂，并与pluronic f127结合使用以降低pluronic f127的浓度。(0.6％)可用于阳离子诱导凝胶化。在一些实施例中，可以使用通过使用具有随温度变化的溶胶-凝胶转变的ipdi试剂偶联mpeg-pcl共聚物来合成pece嵌段聚合物的载药热敏peg-pcl-peg(pece)水凝胶。含有pece(30％w/v)水溶液的制剂在35℃时表现出溶胶-凝胶转变。
17、此外，载药的脂质体、纳米乳剂、混悬剂、环糊精、胶束、纳米颗粒或微粒也可以置于原位凝胶内。载药原位胶凝体系也可以采用反应性原位凝胶，将两种反应性组分混合在一起，通过交联形成水凝胶。在一些实施例中，水凝胶通过乙二醇壳聚糖和氧化藻酸盐水溶液的简单混合制备，由于完全交联反应需要时间，故在混合在一起后短时间内仍可注射。聚合物(例如透明质酸)和交联剂(例如h2o2、三聚磷酸五钠)也可以共同注射(例如使用双注射器型装置)到身体以允许在体内发生交联。在一些实施例中，peg水凝胶是通过使用4臂peg-mal和4臂peg-sh的硫醇-马来酰亚胺反应制备的。在一些实施方案中，原位胶凝药物递送系统是硫醇化聚天冬氨酸(thiopasp)。在一些实施例中，水凝胶由马来酰亚胺修饰的c-聚谷氨酸(c-pga-ma)和硫醇末端官能化的4臂聚乙二醇(4臂peg-sh)组成，例如actabiomaterialia 86(2019)280–290描述中的那些。
18、另一种类型的反应性原位胶凝系统基质是可注射药物洗脱弹性聚合物(ideep)，例如doi:10.1016/j.gie.2011.12.009中描述的那些。例如，将聚乙二醇马来酸酯柠檬酸酯(pegmc)溶解在去离子水(20％)中，并与聚乙二醇二丙烯酸酯(12％)和四甲基乙二胺(0.5％)合并为ideep a部分,ideep a中也加入了适量的药物。ideep b组分(ideep-b)是通过将过硫酸铵氧化还原引发剂(0.25wt％)溶解在去离子水中制备的。分别以2:1的比例混合a部分和b部分溶液，即可生成ideep凝胶。
19、光交联剂也可用于形成原位凝胶，它也是一种反应性基质，通过光照射引发胶凝反应。可光交联的实例包括聚乙二醇二丙烯酸酯(pegda)和可光交联的壳聚糖水凝胶，例如(doi):10.1055/s-0028-1103483中描述的那些。pegda在光引发剂和光例如紫外光)在的情况下在室温下迅速凝胶化。
20、在一些实施例中，可以使用载有药物的原位胶凝植入物/插入物。例如，羧甲基纤维素钠(cmc)和海藻酸钠(alg)的组合可以用作基质。在一些实施例中，原位胶凝加载的药物在基于壳聚糖/hpmc的聚合物基质中。在一些实施例中，载药的可注射凝胶或纳米/微粒子处于基于biochronomer聚合物(三(乙二醇)聚(原酸酯)，teg-poe)的聚合物的基质中。例如，可注射凝胶是80％ teg-poe(mw6kda)、约9％甲氧基聚(乙二醇)(mw550da)和按重量计0.1-1％的药物。
21、在一些实施例中，载药原位胶凝是基于壳聚糖-海藻酸钙凝胶微球的聚合物基质，例如专利号cn1628861a中描述的那些。例如，基质可以是壳聚糖-海藻酸钙凝胶微球型材料，其由海藻酸钙凝胶微球任选地覆盖有壳聚糖于0.5-4.0％海藻酸钠溶液中组成。海藻酸钙凝胶微球粒径在1-200μm之间；壳聚糖-海藻酸钙凝胶微球与海藻酸钠溶液的体积比为10:1-10:30。药物可以包封在微球或藻酸盐溶液相或两者中。
22、可以在所述制剂中使用的另一种原位胶凝材料是可生物降解的水不溶性聚合物，例如聚(d，l-丙交酯-共-羟甲基乙交酯)(plhmga)、pla、plga、pcl、pga、prolifeprospan例如prolifeprospan20或phb。可溶于生物相容性水溶性有机溶剂如n-甲基吡咯烷酮或dmso作为基质载药，药物可溶解/分散在pga或plga溶液中(如10％-50％ plga在n-甲基吡咯烷酮中)或两种成分在注射前立即混合。在一些实施例中，可使用50:50丙交酯/乙交酯plga或具有较低丙交酯含量的plga，例如10:90丙交酯/乙交酯plga。当将该制剂注射到体内时，水混溶性有机溶剂消散并且水渗透到有机相中。这导致聚合物的相分离和沉淀，在注射部位形成贮库作为缓释植入型材料。虽然它不是经典的水凝胶胶凝体系，但为了说明起见，在本发明中仍将其称为胶凝。可以在atrigel tm递送系统和doi10.1016/j.jconrel.2014.05.057中找到示例。
23、其他可用于本发明的凝胶或高粘度材料包括：rad16肽、胶原蛋白、pnipaam-g-mc、专利号cn102344559a中的聚合物、专利号cn104086788b中的改性透明质酸钠凝胶、专利号cn106519072a的注射用透明质酸/聚乙二醇水凝胶、专利号cn107189119a的透明质酸钠胶原蛋白水凝胶，f127和f68，pnipaam、聚(乳酸-乙醇酸共聚物)-聚(乙二醇)-聚(乳酸-乙醇酸共聚物)酸)plga-peg-plga)水凝胶(例如国际药剂学杂志490(2015)375-383中的描述那些)、热敏三嵌段聚合物聚-(dl-乳酸-乙醇酸)(plga)-聚乙二醇peg–plga(例如doi10.3109/03639041003680826所描述)、包含泊洛沙姆188/泊洛沙姆407/carbopol 934/hpmc的系统(例如dx.doi.org/10.1155/2014/280928中所描述)、可注射生物响应凝胶储库(例如那些在doi：10.1002/adma.201801527中所描述)、pva-tspba水凝胶(例如sci.transl.med.10，eaan3682，2018中所描述)、纤维蛋白水凝胶(如专利号cn110393699a中所描述)、热凝胶聚氨酯/peg嵌段共聚物(如胺功能化aba嵌段共聚物，由疏水嵌段(b)：聚(丝氨醇六亚甲基氨基甲酸酯)和亲水嵌段(a)：聚(乙二醇)构成的聚乙二醇-聚丝氨醇六亚甲基氨基甲酸酯(如doi:10.1016/j.biomaterials.2010.09.044中公开的那些)、可注射自愈聚合物-纳米颗粒(pnp)水凝胶十二烷基改性羟丙基甲基纤维素(hpmc-c12)结合聚乙二醇-b-聚乳酸(peg-pla)纳米颗粒(nps)、2wt％hpmc–c12+10wt％np(如doi.org/10.1021/acscentsci.0c00732中的那些)、由(rada)4合成寡肽制成的疫苗自组装免疫基质(例如doi:10.1128/cvi.00714-14中描述的那些)、用n-[(2-hydroxy-3-trimethylammonium)propyl]壳聚糖氯化物(htcc)和α,β-甘油磷酸盐(α,β-gp)配制的热敏水凝胶(例如doi.org/10.1016/j.biomaterials.2011.11.068中所描述)、聚(d，l-丙交酯)-聚(乙二醇)-聚(d，l-丙交酯)(pdlla-peg-pdlla，plel)(例如doi.org/10.1016/j.apmt.2020.100608中所描述)、专利申请号wo2014006215a1中的凝胶体系、可注射peg-b-聚(l-丙氨酸)水凝胶(例如doi:10.7150/thno.30577中所描述)、doi10.1002/mabi.201800242中描述的可注射壳聚糖-藻酸盐多孔凝胶、以及在高剪切速率下具有低粘度(例如注射过程为100s–1)和在低剪切速率下)(例如注射后的条件)具有高粘度(优选>10倍以上)的试剂。
24、在高剪切速率下具有低粘度和在低剪切速率下具有高粘度的其他试剂也可以单独或与其他原位胶凝基质一起用作本发明制剂中的基质。它们的例子包括具有假塑性粘度的材料，例如wo2013077357a1中公开的那些多糖，例如黄原胶、角叉菜胶、结冷胶、瓜尔胶、刺槐豆胶、sacran或其盐。这些多糖浓度的合适浓度为0.5至5w/v％并且制剂的ph值在3-8之间。在一个实例中，1-2％的黄原胶(keltrol，cgt，cp kelco公司)单独用作假塑性增粘剂或与2％的海藻酸钠组合用作制剂中的原位胶凝基质。
25、可以从以下来源找到制作这些原位胶凝基质的其他示例和程序：doi：10.15406/japlr.2016.02.00022、dx.doi.org/10.1016/j.drudis.2013.10.001、doi.org/10.1016/s0920-4105(00)00034-6。这些文献和它们的相关引用，以及本发明中列出的其它参考文献，可以很容易地用于本发明。
26、本文所用的液体溶液是指本领域熟知的溶液、悬浮液、乳液、滴剂、软膏剂、洗液、喷雾剂、脂质体。在一些实施例中，液体溶液包含水性ph缓冲剂，其在添加少量酸或碱时抵抗ph变化。在一些实施方案中，液体溶液具有接近生理渗透压值的渗透压，这可以通过向制剂中添加适量的药学上可接受的辅料来实现。
27、在某些方面，本发明和本发明人的先前申请公开了通过应用抗原和免疫抑制剂的组合来治疗自身免疫性疾病和变态反应或抑制抗药物抗体产生或诱导抗原特异性免疫耐受的方法、组合物和试剂/药物作为物理混合物或作为合成缀合物或作为纳米/微米或更大颗粒或植入物或脂质体在持续(延长)释放系统(例如原位胶凝系统或高粘度制剂)中给与需要的受试者/患者。术语纳米/微米颗粒是指颗粒的尺寸(直径)在纳米或微米范围内。例如，纳米/微米颗粒可以在50nm～100μm的尺寸范围内。大颗粒可以在100μm-10mm的尺寸范围内。颗粒可以由可生物降解的材料制成，例如plga或多糖(例如藻酸盐)。物理混合物是指抗原和免疫抑制剂的混合物以其原始形式(例如液体或固体形式，如粉末或颗粒，没有被封装在其他纳米或微粒中)简单地机械混合(例如通过搅拌或混合)在一起，而没有任何额外的过程，例如将它们以其原始形式混合在一起，或者在机械混合之前或之后应用进一步的尺寸减小过程(例如破碎，研磨，研磨或均化)，或者分别分散或溶解在相同或不同类型的液体，然后混合，或共分散在液体中，或共溶解在溶剂(例如水)中，并且任选的干燥过程(例如喷雾干燥或冻干)可以与任选的进一步尺寸减小过程一起应用。物理混合物是指抗原和免疫抑制剂没有被包封或缀合在一起或包封在纳米或微粒中。示例性免疫抑制药物列表可以在维基百科的“免疫抑制药物”文章页面找到。适用于当前应用的免疫抑制剂/药物(immunosuppressants)包括但不限于他汀类药物；mtor抑制剂，例如雷帕霉素或雷帕霉素类似物(例如依维莫司、ridaforolimus/deforolimus和temsirolimus)或称为atp竞争性mtor激酶抑制剂的第二代mtor抑制剂；抗炎皮质类固醇；tgf-β信号剂；tgf-β受体激动剂；tlr(toll样受体)抑制剂；模式识别受体抑制剂；nod样受体(nlr)抑制剂；
28、rig-i样受体抑制剂；nod2抑制剂；组蛋白脱乙酰酶抑制剂，如曲古抑菌素a；皮质类固醇；线粒体功能抑制剂，如鱼藤酮；p38抑制剂；nf-κβ抑制剂，如6bio、地塞米松、tcpa-1、ikk vii；腺苷受体激动剂；前列腺素e2激动剂(pge2)，例如米索前列醇；磷酸二酯酶抑制剂，包括磷酸二酯酶4抑制剂(pde4)，如咯利普兰；蛋白酶体抑制剂；激酶抑制剂；g蛋白偶联受体激动剂；g蛋白偶联受体拮抗剂；糖皮质激素；维甲酸；细胞因子抑制剂；细胞因子受体抑制剂；细胞因子受体激活剂；过氧化物酶体增殖物激活受体拮抗剂；过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂；组蛋白脱乙酰酶抑制剂；钙调磷酸酶抑制剂；磷酸酶抑制剂；
29、pi3 kb抑制剂，如tgx-221；自噬抑制剂，如3-甲基腺嘌呤；芳烃受体抑制剂；蛋白酶体抑制剂i(psi)；氧化atp；p2x受体阻滞剂。免疫抑制剂还包括ido、维生素d3、环孢菌素如环孢菌素a、芳烃受体抑制剂、白藜芦醇、硫唑嘌呤(aza)、6-巯基嘌呤(6-mp)、6-硫鸟嘌呤(6-tg)、fk506、sanglifehrin a、沙美特罗，霉酚酸酯(mmf)，阿司匹林和其他cox抑制剂，尼氟酸，雌三醇和雷公藤甲素，siglec配体如唾液酸及其衍生物包括聚唾液酸唾液酸-脂质结合物。在实施例中，免疫抑制剂可包括本文提供的任何药剂。免疫抑制剂可以是直接提供对apc的免疫抑制(例如，致耐受性)作用的化合物，或者它可以是间接提供免疫抑制(例如，致耐受性)作用的化合物(即，在给药后被以某种方式加工之后)。因此，免疫抑制剂包括本文提供的任何化合物的前药形式。在一些优选的实施方案中，使用的免疫抑制剂是mtor抑制剂(例如雷帕霉素或雷帕霉素类似物)或甲氨蝶呤。
30、免疫抑制剂还包括血红素加氧酶-1(ho-1)诱导剂，如钴原卟啉(copp)、含有三价铁离子的原卟啉ix(血红素b)和氯配体(血红素)、血红素、铁原卟啉或血红素降解产物如以及pct/ep2015/074819中描述的那些。siglecs(唾液酸结合免疫球蛋白型凝集素)配体如唾液酸或其衍生物也是可用于本发明的另一类免疫抑制剂。pd-l1也是可用于本发明的另一类免疫抑制剂。pd-l1可有效抑制细胞毒性t细胞。也可以使用能与pd-1结合的pd-l1的片段或模拟物或衍生物代替。其他可与抑制性检查点受体结合的抑制性配体(如a2ar、btla、ctla-4、cd47、kir、lag3、tim-3、vista等)如b7-h3、b7-h4也可替代pd-l1。可促进t/b reg扩增的分子(例如可刺激t/b reg扩增的细胞因子如il-2和tgf-β)也是另一类免疫抑制剂。不同的免疫抑制剂可以作为混合物使用，并在本发明中组合使用。
31、免疫抑制剂还包括编码本文提供的导致免疫抑制(例如致耐受性)免疫反应的肽、多肽或蛋白质的核酸。因此，在一些实施方案中，免疫抑制剂是编码导致免疫抑制(例如致耐受性)免疫反应的肽、多肽或蛋白质的核酸。核酸可以与合成纳米载体偶联。核酸可以是dna或rna，例如mrna。在实施方案中，本发明的组合物包含本文提供的任何核酸的互补物，例如全长互补物或简并(由于遗传密码的简并)。在一些实施方案中，核酸是表达载体，其在转染到细胞系中时可以被转录。在实施例中，表达载体可包含质粒、逆转录病毒或腺病毒等。可以使用标准分子生物学方法分离或合成核酸，例如通过使用聚合酶链式反应产生核酸片段，然后将其纯化并克隆到表达载体中。
32、在一些实施方案中，本文提供的免疫抑制剂与亲和配体缀合或融合。当免疫抑制剂和亲和配体都是肽/蛋白质时，它们可以通过基因工程和表达构建为融合蛋白，一个可以通过可选的接头序列连接到另一个的n或c末端。亲和配体可以靶向或结合引起自身免疫性疾病或受自身免疫性疾病影响的器官或组织或细胞或蛋白质或抗原。亲和配体可以是全抗体、抗体片段、抗体模拟物或它们的衍生物，也可以是非蛋白质分子如适配体，实例公开于本发明人在先的美国专利申请中。本技术中术语抗体包括全长抗体、抗体片段、纳米抗体及其衍生物。所得偶联物或融合蛋白可通过将其以治疗有效量给予有需要的受试者(例如通过注射)来用于治疗相关的自身免疫性疾病或变态反应。所得的器官/组织/细胞/蛋白质/抗原靶向配体-免疫抑制剂偶联物或融合物可以保护患病细胞并诱导耐受性。例如，胶原蛋白ii在软骨中含量丰富，抗胶原蛋白ii的scfv-pd-l1融合蛋白或其他抗胶原蛋白ii的fab-pd-1激动剂融合物或偶联物可用于治疗类风湿性关节炎，它会使相连的pd-l1包裹软骨和软骨细胞等保护它们免受t细胞攻击并诱导耐受。在一些实施方案中，亲和配体是抗体。在一些实施方案中，抗体是igg4或其fc是经改造以降低其adcc和cdc效应。在一些实施方案中，抗体被工程化以具有增强的adcp效应，例如在本发明人的在先美国专利申请中所描述的那些。在一些实施方案中，mtor抑制剂(例如雷帕霉素、依维莫司、ridaforolimus/deforolimus和temsirolimus)缀合至抗体。制备mtor抑制剂-抗体偶联物的方案可以在专利申请wo2018227018a1中找到，并且很容易被本发明采用。可用于本发明的其他免疫抑制剂也可在专利申请wo2018227018a1中找到。在一些实施方案中，钙调神经磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素或他克莫司)与抗体缀合。在一些实施方案中，抗炎皮质类固醇(例如地塞米松或倍他米松)与抗体缀合。在一些实施方案中，pd-l1与抗体融合。在一些实施方案中，抗炎细胞因子或其衍生物(例如il-2、il-2-抗il-2抗体复合物、il-10、tgf-β)与抗体融合。在一些实施方案中，其抗体可以与细胞表达的自身抗原结合，例如本技术后面部分描述的那些(例如胰岛素、胰岛细胞自身抗原-2、gad、igrp，用于糖尿病治疗)。在一些实施方案中，其抗体可以通过结合这些器官/组织/细胞的非自身抗原的表面标志物来与受疾病影响的组织或细胞或器官结合。
33、当抗体要与ige结合时，优选它只有一个抗原结合部分，例如抗体片段具有一个fab，例如omalizumab的fab)，单链可变片段(scfv)，scfv-fc融合以避免ige聚集在肥大细胞。它可以与免疫抑制剂或细胞毒性药物结合，例如那些用于治疗癌症的adc。所得缀合物可用于治疗过敏。
34、在一些实施方案中，本文提供的免疫抑制剂与合成纳米载体或微载体偶联。在优选的实施方案中，免疫抑制剂是除了构成合成纳米载体或微载体结构的材料之外的元素。例如，在一个实施方案中，当合成纳米载体或微载体由一种或多种聚合物组成时，免疫抑制剂是另外与一种或多种聚合物偶联的化合物。作为另一个例子，在一个实施方案中，当合成纳米载体或微载体由一种或多种脂质组成时，免疫抑制剂再次附加并偶联至一种或多种脂质。在实施例中，例如在合成纳米载体或微载体的材料也导致免疫抑制(例如，致耐受性)作用的情况下，免疫抑制剂是除了合成纳米载体或微载体的材料之外存在的导致免疫抑制(例如，致耐受性)的元素,致耐受性)作用。
35、其他示例性免疫抑制剂包括但不限于小分子药物、天然产物、抗体(例如，针对cd20、cd3、cd4的抗体)、基于生物制剂的药物、基于碳水化合物的药物、纳米颗粒、脂质体、rnai、反义核酸，适体、甲氨蝶呤、非甾体抗炎药；芬戈莫德；那他珠单抗；阿仑单抗；抗cd16、抗cd3；他克莫司(fk506)等其他免疫抑制剂为本领域技术人员所熟知，并且本发明不限于这些。其他免疫抑制剂可以在相关专利和专利申请中找到，如us13/880,778,us14/934,135,ca2910579,us13/084,662,us14/269,048,us8652487,wo2012054920a2,wo2016073799a1,wo2012149393 a3,wo2014179771a1,pct/us2012/035405,us20110262491,us8652487和其它的selecta biosciences提交的专利申请。
36、selecta bio的出版物公开了合成纳米载体方法和相关组合物，包括b细胞和/或mhc ii类限制性表位和免疫抑制剂，以产生致耐受性免疫反应。在他们的公开中，抗原/表位与纳米载体偶联并且免疫抑制剂与纳米载体偶联。另一种方法和组合物是使用具有非共价吸附到其表面的抗原/表位和封装在原位胶凝系统或高粘度制剂中的免疫抑制剂的纳米颗粒/微颗粒。纳米颗粒/微颗粒可以由可生物降解的材料制成，例如plga。这些纳米/微粒子(例如直径为10nm-10μm)可以作为注射剂或吸入剂给予有需要的患者，以诱导免疫耐受。免疫抑制剂的包封是本领域技术人员所熟知的并且可以容易地从相关出版物中采用。纳米颗粒/微颗粒表面可带有氨基或羧基等带电基团，以增加抗原/表位与其表面的结合；它还可以具有疏水表面，以允许通过疏水相互作用结合抗原/表位；或它们的组合。将带电基团引入表面可以通过使用表面改性或使用含有胺或羧基的分子来制备纳米颗粒/微颗粒。抗原/表位也可以与亲脂性部分如脂肪酸或胆固醇等脂质分子缀合，以增加其与纳米颗粒/微颗粒的结合。抗原/表位吸附到纳米颗粒/微颗粒表面可以通过将抗原/表位与纳米颗粒/微颗粒孵育(例如在水溶液缓冲液如1xpbs中4℃过夜)然后去除未结合的抗原/表位(例如，用水缓冲液洗涤微粒数次，类似于elisa板包被程序)。在一实施例中，根据文献制备了50nm～200nm尺寸的plga纳米颗粒包封有10重量％的雷帕霉素。接下来，将plga纳米颗粒与ova(10mg/ml)在4℃下混合过夜，以生成ova(卵白蛋白)包被颗粒。用pbs洗涤颗粒3次以去除未结合的ova。在另一个例子中，雷帕霉素以50mg/ml溶解在dmso中。将总共50μl雷帕霉素添加到溶解在二氯甲烷中的1ml plga溶液(5mg/ml)中。接下来，使用超声波将混合物与0.4ml5％ ova溶液均化10分钟。将该o/w乳液添加到2.1ml的5％w/v pva溶液中，以在室温下蒸发有机溶剂4小时。以3,500g离心20分钟后，获得含有雷帕霉素的ova包被纳米颗粒。可以进行额外的洗涤步骤以获得无未结合ova的颗粒。使用出版物(例如来自selecta bio的那些)中描述的类似方案，可以将这种在2-6％海藻酸钠或0.5-2％交联透明质酸中的ova包被颗粒给予需要诱导ova免疫耐受的目标。例如，可以将5mg～50mg溶于3％海藻酸钠或1％交联透明质酸的颗粒每周注射3次至ova不耐受患者，以皮下或肌内注射或淋巴内注射或靠近淋巴结注射方式诱导ova耐受。ova可以被其他抗原/表位分子替代以诱导相应的免疫耐受。在另一样品中，可在plga中加入亲脂性羧酸或亲脂性胺或阴离子去污剂或阳离子去污剂(如辛酸、月桂酸等脂肪酸；或dotma、dotap、胆固醇胺等阳离子脂质)制备有表面电荷的plga颗粒。在一个实例中，将雷帕霉素以50mg/ml溶解在含有10mg/ml月桂酸的dmso中。将总共50μl雷帕霉素/月桂酸添加到溶解在二氯甲烷中的1ml plga(5mg/ml plga)中。接下来，使用超声波将混合物与0.1ml 2％辛酸溶液均化10分钟。将该o/w乳液在室温下蒸发4小时以除去有机溶剂。所得plga颗粒用pbs洗涤3次，然后与ova一起孵育以制备ova结合颗粒。在一个实例中，10mg～100mg的2％海藻酸钠和1％hpmc中的颗粒可以每月注射3次至ova不耐受患者，以皮下或肌内注射或淋巴内注射的方式诱导ova耐受。另一方面，使用plga聚合物(plga，50:50或65:35，分子量为10,000-85,000da)，使用单乳液法合成plga雷帕霉素微粒。简而言之，将100mg plga溶解在含有10mg雷帕霉素的2ml二氯甲烷(dcm)中，并以2000rpm在1％聚乙烯醇(10ml，87-89％水解，mw 13,000-23,000kda，sigma#363170)中均化。将该溶液加入到1％ pva 100ml中，并连续搅拌3-4小时以完全蒸发dcm。然后将溶液以11,000g离心并使用去离子水洗涤两次以洗去多余的pva。然后将微粒重新悬浮在去离子水中，并在-80℃下快速冷冻，然后冻干。封装效率可达到30-50％。注射10mg/ml微粒与适量疾病相关抗原(例如1mg/ml ova作为终浓度)混合于1x pbs ph7或3％海藻酸钠或15-25％ pluronic f127或poloxamer 407中的无菌悬浮液可用于治疗相关的抗原不耐受疾病。
37、此外，抗原/表位除了缀合或吸附到其表面外，还可以被封装在纳米颗粒/微颗粒内。抗原/表位包封的制备是本领域技术人员众所周知的并且可以容易地从相关出版物中采用，例如使用双重乳液水/油/水系统。在一个实例中，将10g dl-plga(80:20，mw 50,000)溶解在50g由35wt％丙酮和65wt％氯仿组成的混合溶剂中。加入200～500mg雷帕霉素或雷帕霉素类似物和10～50mg肽抗原，剧烈搅拌30分钟。然后将该有机相缓慢加入到500g5wt％含水聚(乙烯醇)中。在添加有机相期间，以800rpm的速度搅拌pva溶液以形成稳定的水包油乳液。乳液搅拌10分钟后，施加真空并将搅拌速率降低至600rpm，持续20小时以除去挥发性溶剂。离心后，用去离子水彻底洗涤所得微胶囊沉淀，湿筛微胶囊以收集直径为30-80μm的颗粒。然后在真空室中干燥。保持在室温下。微胶囊的大小可以通过使用不同目数的筛子来调节。注射于ph＝71x pbs或3％海藻酸钠或15-25％ pluronic f127或泊洛沙姆407中的50mg/ml微粒无菌悬浮液，以治疗相关的肽抗原不耐受疾病。较大尺寸的颗粒具有较长的体内药物释放时间。
38、含雷帕霉素的微粒和可选的抗炎类固醇也可合用于本发明。这些组合物/制剂也可以在缓释系统中，例如本发明公开的原位胶凝系统。
39、美国专利申请号us20130287729公开了抗原特异性、诱导耐受性的微粒及其用途。它公开了一种微粒(大小为0.5μm-10.0μm)，用于靶向感兴趣的抗原呈递免疫细胞并用于诱导抗原特异性免疫耐受，其中微粒包含抗原和治疗剂，其中治疗剂是免疫调节剂、免疫抑制致耐受剂、或募集感兴趣的抗原呈递免疫细胞的试剂，其中微粒的表面包含靶向感兴趣的抗原呈递免疫细胞的配体，并且微粒由可生物降解的材料制成。该方法和组合物的进一步改进是使用优选由生物可降解材料制成的尺寸为50nm-5μm的纳米颗粒/微颗粒或在申请us20130287729中公开的那些，处于缓释剂中如原位胶凝系统或高粘度配方。在一些实施例中，纳米颗粒/微颗粒的表面包被有抗体的fc部分或fc部分朝外的全抗体。这将与fcr结合以促进apc摄取。在其他实施方案中，纳米颗粒/微颗粒的表面不需要具有靶向抗原呈递免疫细胞的配体。在一些实施例中，它可以具有包被在其表面上的抗原/表位。纳米颗粒/微颗粒的内部包含本技术中所列的免疫抑制剂和任选的抗原/表位，例如通过封装。该制备方法是本领域技术人员所熟知的，可以很容易地从相关出版物中采用。例如，0.5mg-50mg的上述含有麸质和雷帕霉素的颗粒(占制剂的5-25％)在3％海藻酸钠和可选的0.5-2％ hpmc中，或在15-25％ pluronic f127或15-25％泊洛沙姆407中，可每月注射3次给麸质不耐受患者，以皮下或淋巴内注射方式诱导麸质耐受。
40、美国专利申请20160338953公开了一种基于脂质体的免疫疗法。它提供了一种包封自身抗原的脂质体，其中脂质体的大小为500至15000nm并且脂质体膜包含磷酸二丝氨酸(ps)，其量相对于总膜脂质体组合物按重量计为10％至40％。还提供了包含治疗有效量的所述脂质体的药物或兽医组合物。此外，它提供了用作药物的如上所定义的脂质体和药物或兽药组合物，特别是用于治疗自身免疫性疾病。最后，它提供了如上定义的脂质体和药物或兽药组合物，用于在患有自身免疫性疾病的患者中恢复对自身的耐受性。本发明还公开了抗原特异性、诱导耐受的脂质体及其用途。脂质体内部包裹有本技术所列的免疫抑制剂(以及任选的抗原/表位分子)。任选地，脂质体的表面也可以包被有抗原/表位。可作为注射剂给予有需要的患者，诱导免疫耐受。用于脂质体的脂质可包括但不限于占膜重量10％至40％的磷脂酰二丝氨酸。也可用非磷脂酰二丝氨酸脂质制备膜。抗原/表位也可以与脂质型分子如脂肪酸或磷脂或胆固醇衍生物缀合以允许其插入脂质体膜。合适的脂质体可以具有50nm-20μm之间的尺寸。其制备方法及其使用方案为本领域技术人员所熟知，并且可以容易地从相关出版物如us20160338953中的那些中采用。适用于本发明制备脂质体的脂质分子的实例包括但不限于磷脂、甘油脂、甘油磷脂、鞘脂、神经酰胺、甘油磷酸乙醇胺、甾醇或类固醇。这些脂质分子也可用于制备抗原/表位-脂质缀合物。也可以使用膜锚定肽-抗原/表位偶联物代替抗原/表位-脂质偶联物。此外，其他可以促进t/b reg扩增的分子(例如il-2和/或tgf-β和pd-l1)也可以包被/偶联和/或封装在脂质体和纳米颗粒/微颗粒内。这些脂质体以及专利申请us20160338953中的脂质体可以制成缓释制剂，例如原位胶凝系统或高粘度制剂。例如，本发明所述含卵类粘蛋白等卵清抗原和雷帕霉素的脂质体0.5mg-50mg(制剂的5-25％)在3％海藻酸钠中，任选0.5-2％hpmc，或在15-25％普朗尼克f127或15-25％泊洛沙姆407中，可每月注射3次至蛋清不耐受患者，以皮下或肌内注射或腹股沟淋巴结淋巴内注射方式诱导蛋清耐受。
41、本发明公开了新型试剂和组合物，其包含在缓释制剂如原位胶凝系统或高粘度制剂中的抗原和免疫抑制剂。那些新的试剂和制剂可以以药学有效量作为皮下注射或肌内注射或皮内注射给予以治疗自身免疫性疾病或变态反应或抑制抗药物抗体产生或诱导受试者的抗原特异性免疫耐受。此外，这些试剂和组合物也可以是注入淋巴结(如腹股沟淋巴结)达到相同目的。淋巴内过敏原给药是已知的，对于本发明可以容易地采用相同的程序。本发明人在所述在先申请中公开的试剂和制剂也可以用作淋巴内注射剂。可促进t/b reg扩增和/或抑制有害自身反应性t/b细胞的分子(例如il-2、tgf-β、pd-l1、il-15、il-10、il-21、il-27、il-2/抗il-2抗体复合物或其模拟物或衍生物例如聚乙二醇化il-2nktr-358)也可以共注射或包含在待淋巴管内注射的制剂中。本发明人在上述申请和本发明中的试剂和制剂含有疾病特异性抗原，例如b细胞抗原、mhc-肽复合物形式的t细胞抗原或t细胞的抗原表位、模拟表位、肽(或其衍生物)可与mhc结合形成mhc-肽复合物的细胞抗原。除了在所述试剂、组合物或制剂中直接使用抗原外，也可以使用编码这些抗原/表位的核酸来代替，例如编码它们的mrna。mrna可以在递送系统中，如脂质体或脂质载体，也可以使用众所周知的方法和方案进行修饰以提高目标表达。在一些实施方案中，注入淋巴结的试剂或组合物的量为0.01mg至50mg药物，每个淋巴结注射体积为0.1ml至1ml，例如每月1mg或每两周1mg，持续3个月以诱导抗原特异性免疫耐受。
42、免疫抑制剂可以是活性剂形式、前药形式、微粒或纳米粒子形式或脂质体形式。抗原可以是b细胞抗原/表位或t细胞抗原/表位(例如mhc-肽复合物或缀合物；或可与mhc结合的肽抗原)或其组合。该组合可以是b细胞抗原/表位与t细胞抗原/表位；或针对相同疾病或不同疾病的几种不同b细胞抗原/表位和/或几种不同t细胞抗原/表位的组合。使用可以与mhc结合在体内形成mhc-肽复合物(t细胞抗原)的肽抗原(t细胞表位)代替肽-mhc复合物以减小尺寸和分子量，这可以提高透皮递送。它们的例子可以在在先和当前的申请以及相关出版物中找到。
43、人类mhc i类和ii类也称为人类白细胞抗原(hla)。研究最多的hla基因是九种经典的mhc基因：hla-a、hla-b、hla-c、hla-dpa1、hla-dpb1、hla-dqa1、hla-dqb1、hla-dra和hla-drb1。在人类中，mhc基因簇分为三个区域：i、ii和iii类。a、b和c基因属于mhci类，而六个d基因属于ii类。人类也有非经典的mhc。适用于本发明的肽或肽mhc复合物(peptide-mhc,简称pmhc)可以很容易地从现有技术和出版物中找到。肽mhc复合物中的肽和mhc可以共价缀合(或表达)在一起或结合在一起形成非共价复合物。人类或动物体内有许多与自身免疫性疾病相关的肽mhc复合体正在被鉴定。例如，专利申请us20170095544、us20180127481、us20090155292和us20150125536公开了疾病特异性肽mhc复合物，可以被本技术采用。mhc i类组分可包含全部或部分hla-a、hla-b、hla-c、hla-e、hla-f、hla-g分子，特别是全部或部分hla-a分子，例如hla-a*0201mhc i类分子。非经典mhc i类成分可包含cd1样分子。mhc ii类成分可包含全部或部分hla-dr、hla-dq或hla-dp。在治疗自身免疫性疾病和变态反应的某些方面，抗原/mhc复合物共价或非共价偶联或附着于底物(抗原/mhc/颗粒复合物或抗原/mhc/线性聚合物)。如本文所用，除非特别指出，术语mhc在pmhc复合物的上下文中意指经典或非经典mhc i类蛋白和/或经典或非经典mhc ii类蛋白，hla dr的任何基因座，hla dq、hla dp、hla-a、hla-b、hla-c、hla-e、cd1d或其片段或生物等效物、双链或单链构建体、二聚体(fc融合体)。在某些实施方案中，mhc 1类组分可包含hla-a、hla-b、hla-c、hla-e、hla-f、hla-g或cd-1分子。在其中mhc组分是mhc ii类组分的实施方案中，mhc ii类组分可包含hla-dr、hla-dq或hla-dp的全部或部分，基本上由其组成，或可选地进一步由其组成。在某些实施方案中，mhc可包含hla drb1、hla drb3、hla drb4、hladrb5、hla dqb1、hla dqa1、iag7、i-ab、i-ad、hla-dq、hla-dp、hla-a、hla-b、hla-c、hla-e或cd1d。还可将非经典mhc分子用于本公开内容的mhc复合物中。在一些实施方案中，非经典mhc分子是非多态性的，在物种间是保守的，并且具有窄的、深的、疏水的配体结合口袋。这些结合口袋能够将糖脂和磷脂呈递给自然杀伤t(nkt)细胞。nkt细胞代表一种独特的淋巴细胞群，它共表达nk细胞标记物和半不变t细胞受体(tcr)。它们涉及与多种疾病相关的免疫反应的调节。
44、t细胞通过其tcr受体识别t细胞抗原。t细胞抗原通常以mhc表位结合复合物的形式存在。表位通常是由apc加工的肽(有时是其他分子，如碳水化合物)。在本发明中，t细胞的抗原可以是形成的mhc-表位复合物或其片段/衍生物/模拟物，其对tcr比单独的表位具有更高的特异性亲和力。它可以是单体形式，也可以是寡聚体(二聚体、三聚体、四聚体、五聚体甚至更高的多聚体)形式，例如目前研究中用于标记免疫细胞的mhc四聚体。例如，hla-a2insb10-18四聚体(例如doi：10.1073/pnas.0508621102中的描述的那些)可以与具有任选接头的细胞灭活剂缀合，以通过灭活自身免疫性t细胞来治疗人类的1型糖尿病。表位(例如肽)可以与mhc共价缀合以通过众所周知的出版物中公开的众所周知的方式增加其稳定性。类似地，本发明中用于b细胞的抗原也可以是寡聚体或多聚体形式。然而，有时用于b细胞灭活的抗原不需要mhc成分。
45、在一些实施方案中，自身免疫性疾病相关抗原是：
46、一种或多种糖尿病相关抗原，并衍生自选自以下组中的一种或多种抗原：前胰岛素原(ppi)、胰岛特异性葡萄糖6-磷酸酶(igrp)、谷氨酸脱羧酶(gad)、胰岛细胞自身抗原2(ica2)、胰岛素、胰岛素原或其片段或等价物，以及它们的组合；
47、一种或多种多发性硬化症相关抗原，并且衍生自选自以下组中的一种或多种的抗原：髓鞘碱性蛋白、髓鞘相关糖蛋白、髓鞘少突胶质细胞蛋白、蛋白脂质蛋白、少突胶质细胞髓鞘寡聚蛋白、髓鞘相关少突胶质细胞碱性蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、热休克蛋白、少突胶质细胞特异性蛋白、nogo a、糖蛋白po、外周髓鞘蛋白22、2'3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶，
48、或其各自的片段或等同物，及其组合；
49、一种或多种乳糜泻相关抗原并衍生自麦醇溶蛋白或其片段或等同物，以及它们的组合，以及它们的组合；
50、一种或多种原发性胆汁性肝硬化相关抗原并且源自pdc-e2或其片段或等同物，以及它们的组合；
51、一种或多种滤泡型天疱疮相关抗原和/或寻常型天疱疮相关抗原，并且衍生自选自以下组中的一个或多个的抗原：dg1、dg3或其各自的片段或等同物，以及它们的组合；
52、一种或多种视神经脊髓炎谱系障碍相关抗原并衍生自aqp4或其片段或等同物，以及它们的组合；
53、一种或多种关节炎相关抗原并且衍生自选自以下组中的一种或多种的抗原：热休克蛋白、免疫球蛋白结合蛋白、异质核rnp、膜联蛋白v、钙蛋白酶抑制蛋白、ii型胶原蛋白、葡萄糖-6-磷酸异构酶，伸长因子人软骨gp39、甘露糖结合凝集素、瓜氨酸波形蛋白、ii型胶原蛋白、纤维蛋白原、α烯醇化酶、抗氨甲酰化蛋白(抗carp)、4型肽基精氨酸脱亚胺酶(pad4)、braf、纤维蛋白原伽马链、间α-胰蛋白酶抑制剂重链h1、α-1-抗胰蛋白酶、血浆蛋白酶c1抑制剂、凝溶胶蛋白、α1-b糖蛋白、血浆铜蓝蛋白、间α-胰蛋白酶抑制剂重链h4、补体因子h、α2巨球蛋白、血清淀粉样蛋白、c-反应蛋白、血清白蛋白、纤维蛋白原β链、血清转铁蛋白、α2hs糖蛋白、波形蛋白、补体c3或其各自的片段或等同物，以及它们的组合；
54、一种或多种过敏性哮喘相关抗原，并且衍生自选自以下组中的一个或多个的抗原：derp1、derp2或其各自的片段或等同物，以及它们的组合；
55、一种或多种炎症性肠病相关抗原并且衍生自选自以下组中的一个或多个的抗原：鞭毛蛋白、fla-2、fla-x、yidx、拟杆菌整合酶或其各自的片段或等同物，和他们的组合；
56、一种或多种系统性红斑狼疮相关抗原，并衍生自选自以下组中的一种或多种抗原：双链(ds)dna、核糖核蛋白(rnp)、smith(sm)、干燥综合征相关抗原a(ss-a)/ro、舍格伦综合征相关抗原b(ss-b)/la、ro60、ro52、组蛋白或其各自的片段或等同物，以及它们的组合；一种或多种动脉粥样硬化相关抗原并且源自选自以下组中的一个或多个的抗原：apob、apoe或其各自的片段或等同物，以及它们的组合；
57、一种或多种copd相关抗原和/或肺气肿相关抗原并且源自弹性蛋白或其片段或等同物，以及它们的组合；
58、一种或多种银屑病相关抗原，并且衍生自选自以下组中的一个或多个的抗原：cap18、admtsl5、atl5或其各自的片段或等同物，以及它们的组合；
59、一种或多种自身免疫性肝炎相关抗原，并且源自选自以下组中的一个或多个的抗原：cyp2d6、sla，或其各自的片段或等同物；及其组合；
60、一种或多种干燥综合征相关抗原，并且衍生自选自以下组中的一个或多个的抗原：(ss-a)/ro、(ss-b)/la、mr3、ro60、ro52，或片段或每一项的等值；及其组合；
61、一种或多种硬皮病相关抗原并且源自选自以下组中的一个或多个的抗原：cenp-c、top 1、rna聚合酶iii，或其各自的片段或等同物，以及它们的组合；
62、一种或多种抗磷脂综合征相关抗原，来源于apoh或其片段或等同物，以及它们的组合；
63、一种或多种anca相关血管炎相关抗原，并衍生自选自以下一组或多组的抗原：mpo、prtn3或其各自的片段或等同物，以及它们的组合；
64、一种或多种僵硬人综合征相关抗原，并衍生自gad或其片段或等同物。
65、这些抗原肽序列的例子可以很容易地在专利申请us20170095544、us20090155292和其他现有技术中找到。例如，糖尿病相关抗原包括但不限于衍生自ppi、igrp、gad、胰岛细胞自身抗原-2(ica2)和/或胰岛素的抗原。除了美国专利us10124045b2中公开的肽和蛋白质，以及它们各自的等同物和/或组合之外，自身反应性糖尿病相关抗原肽包括但不限于包括以下所列的那些。例如，它们可以是美国专利us10124045b2中公开的如下抗原：gad65114-123、gad65536-545、gfap143-151、gfap214-222、ia-2172-180、ia-2482-490、ia-2805-813、ppiapps5i3、ppiapp9-17、igrp152-160、igrp211-215、igrp215 223、igrp222-230、igrp228-236、igrp265-273、igrp293-301、胰岛素原l2-10、胰岛素原l3-11、胰岛素原l6-14、胰岛素原b5-14、胰岛素原b10-18、胰岛素原b14-22、胰岛素原b15-24、胰岛素原b17-25、胰岛素原b18-27、胰岛素原b20-27、胰岛素原b21-29、胰岛素原b25-c1、胰岛素原b27-c5、胰岛素原c20-28、胰岛素原c25-33、胰岛素原c29-a5、胰岛素原a1-10、胰岛素原a2-10、胰岛素原a12-20、hinsb10-18、higrp228-236、higrp265-273、igrp206-214、higrp206-214、nrp-a7、nrp-i4、nrp-v7、yai/db、ins b15-23、ppi76-90(k88s)、igrp13-25、gad555-567、gad555-567(557i)、igrp23-35、b24-c36、ppi76-90、ins-i9、tum、g6pase。
66、在某些方面，用于治疗的人类疾病和疾病相关的pmhc复合体可以是：
67、i型糖尿病和pmhc复合体选自：insb10-18-hla-a2、ppi76-90(k88s)-hla-drb1*0401/dra、igrp13-25-hla-drb1*0301/dra、gad555 -567-hla-drb1*0401/dra,gad555-567(557i)-hla-drb1*0401/dra,igrp23-35-hla-drb1*0401/dra,b24-c36-hla-drb1*0301/dra,或ppi76-90-hla-drb1*0401/dra；
68、多发性硬化和pmhc复合体选自：mbp86-98-hla-drb1*1501/dra、mbp89-101-hla-drb5*0101/dra、mog38-52-hla-drb4*0101/dra、mog97 -109(e107s)-hla-drb1*0401/dra,mog203-217-hla-drb3*0101/dra,plp54-68-hla-drb3*0101/dra,plp94-108-hla-drb1*0301/dra,plp250-264-hla-drb4*0101/dra,mpb13-32-hla-drb5*0101/dra,mpb83-99-hla-drb5*0101/dra,mpb111-129-hla-drb5*0101/dra,mpb146-170-hla-drb5*0101/dra、mog223-237-hla-drb3*0202/dra、mog6-20-hla-drb5*0101/dra、plp88-102-hla-drb3*0202/dra或plp139-154-hla-drb5*0101/dra；
69、乳糜泻和pmhc复合体选自：aglia57-68-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、aglia62-72-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0201、aglia217-229-hla-dqa1*0501/hla-dqb1*0302，或aglia217-229-hla-dqa1*03/hla-dqb1*0302；
70、原发性胆汁性肝硬化和pmhc复合体选自：pdc-e2122-135-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-262-hla-drb4*0101/dra、pdc-e2249-263-hla-drb1*0801/dra,pdc-e2629-643-hla-drb1*0801/dra,pdc-e272-86-hla-drb3*0202/dra,pdc-e2353-367-hla-drb3*0202/dra,pdc-e2422-436-hla-drb3*0202/dra,pdc-e2629-643-hla-drb4*0101/dra,pdc-e280-94-hla-drb5*0101/dra,pdc-e2353-367-hla-drb5*0101/dra，或pdc-e2535-549-hla-drb5*0101/dra，mpdc-e2166-181-i-ag7，或mpdc-e282-96-i-ag7；
71、视神经脊髓炎谱系障碍和pmhc复合体选自：aqp4284-298-hla-drb1*0301/dra、aqp463-76-hla-drb1*0301/dra、aqp4129-143-hla-drb1*0401/dra,或aqp439-53-hla-drb1*1501/dra；
72、过敏性哮喘和pmhc复合体选自：derp-116-30-hla-drb1*0101/dra、derp-116-30-hla-drb1*1501/dra、derp1171-185-hla-drb 1*1501/dra，derp-1110-124-hla-dpb1*0401/dra，derp-226-40-hla-drb1*0101/dra；derp-226-40-hla-drb1*1501/dra，或derp-2107-121-hla-drb1*0301/dra。
73、本发明中的液体和溶液，如无特殊说明，均为水溶液。液体制剂中的药物(例如tlr激动剂、抗原、免疫抑制剂)可以是溶解药物的形式或不溶性形式例如聚集体、包括晶体和沉淀的颗粒。在一些实施方案中，液体形式的药物作为悬浮液存在。一些药物如咪喹莫特、雷帕霉素具有低水溶性，它们可以以细颗粒悬浮液形式存在于液体中。可在制剂中加入额外的水溶性增强辅料以提高水溶性差的药物的溶解度，如适量的表面活性剂(如0.05％-0.5％的tween-20、tween-60、tween-80、卵磷脂、spans，甘油的脂肪酸酯，烷基聚葡糖苷)，聚合物(例如0.2-2％ pva，1％-10％ peg)，作为助溶剂的有机溶剂(例如2-20％乙醇、dmso、丙二醇)。
74、包封抗原和免疫抑制剂的生物可降解植入物，或包封抗原和疫苗佐剂类药物(如tlr激动剂)的生物可降解植入物，或仅包封抗原的生物可降解植入物，也可用于诱导对抗原的耐受性，以治疗过敏等抗原相关疾病。如果植入物是大颗粒，则植入物的尺寸可以直径大于10μm，优选＞100μm。例如，用plga制成的2mm(长度)x 0.3mm(直径)棒含有0.5μg–0.5mg醇溶蛋白和可选的1-3mg雷帕霉素(或tlr激动剂，例如0.1-1mg咪喹莫特或0.5-5mg聚ic或0.5 -5mg cpg odn)，可用作皮下植入物以治疗麸质不耐受症。也可以使用其他植入形式，例如来自nanoprecision medical的nanoportalcapsule tm和来自intarcia的medici drugdelivery system tm，只要它们能够作为持续递送系统随着时间的推移同时且连续地递送抗原和任选的免疫抑制剂或任选的佐剂类型试剂。也可以使用介孔二氧化硅微棒支架等宏观药物输送系统作为缓释系统。其他治疗安全有效量的过敏原如花粉提取物、尘螨提取物、其他食物过敏原也可以用来代替醇溶蛋白以治疗相应疾病。
75、https://patents.google.com/patent/wo2022098467a1/en？oq＝pctus2021％2f053823#
76、在一个例子中，在ph＝7的2-5％海藻酸钠液体制剂中的组合物含有0.5ug–0.5mg麸质/ml(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)，用于麸质(又称麸质蛋白)不耐受治疗。在一个例子中，组合物和液体制剂含有0.5ug–0.5mg麸质/ml(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.05mg至5mg/ml雷帕霉素或0.1mg-10mg/ml甲氨蝶呤，在2-5％海藻酸钠中，用于麸质不耐受治疗，可选的溶解度增强辅料，如0.1％吐温20或5％丙二醇也可以加入制剂中。它还可以包含200-2000iu/ml il-2/抗il-2抗体复合物或其模拟物或衍生物，例如聚乙二醇化il-2nktr-358。初始注射剂量可以是最大耐受剂量，例如0.5ml制剂中含有10μg/ml麸质可注射给与可以耐受5μg麸质的人。也就是说，治疗涉及一系列剂量或制剂，第一个剂量或制剂含有最低量的过敏原，并且随着时间的推移在后面的剂量或制剂中逐渐增加，而其他药物(例如免疫抑制剂或免疫增强剂)的量可以保持不变。第一制剂中的过敏原量可以是患者可以耐受而不引起严重过敏原反应的最高过敏原量。当耐受性增强时，可以增加注射量和/或抗原浓度，类似于标准的过敏原脱敏治疗方法。原位胶凝制剂中的抗原(如麸质)和免疫抑制剂(如雷帕霉素和/或甲氨蝶呤)可以是干燥形式，如冻干粉/带有可选填充剂或冻干保护剂(例如2-5％蔗糖)的冻干饼，而不是液体，这些成分可以简单地物理混合在一起，它们也可以共溶解，然后干燥，然后放入小瓶中。在一个示例中，将1-1000μg麸质和1.7-2g泊洛沙姆407在10ml水中剧烈混合10分钟，然后冻干，然后可以在注射前用水重构干燥混合物。在另一个例子中，将1-1000μg麸质和1mg雷帕霉素、1.7-2g泊洛沙姆407在10ml水中剧烈混合10分钟，然后冻干，然后干混合物可以在注射前用10ml水复溶。本制剂中1mg雷帕霉素可以1mg polyic或0.25mg咪喹莫特来代替以治疗过敏。在另一个例子中，液体制剂含有5mg/ml甲氨蝶呤或2mg/ml雷帕霉素、5-50μg/ml麸质例如来自小麦的g5004麸质，sigma)或plga溶液(例如30％-50％ plga的n-甲基吡咯烷酮或dmso)。这可以被注射给患者以诱导麸质耐受性和治疗麸质不耐受。麸质可以用醇溶蛋白代替。
77、为治疗鸡蛋过敏，上述例子中的麸质可用蛋清蛋白代替，如终浓度为0.1μg-0.5mg/ml卵类粘蛋白(gald1)或0.1μg-0.5mg/ml卵清蛋白(gal d2)或其与可选的0.1ug-0.5mg/ml卵转铁蛋白(gal d3)和5ug-5mg/ml溶菌酶(gal d4)的组合，用于治疗蛋清过敏。在一个实例中，抗原是在ph7的2-5％海藻酸钠或ph7的17-20％泊洛沙姆407溶液中的2μg/ml的花生抗原ara h2，以作为注射剂治疗花生过敏。在另一个例子中，抗原是2μg/ml的花生抗原ara h2，还有0.2-1mg/ml的雷帕霉素，在2-5％藻酸盐或17-20％泊洛沙姆407溶液中作为注射剂治疗花生过敏。在一个实施例中，花生抗原ara h2 0.1ug-10ug，0.1-2mg雷帕霉素或0.1-1mg咪喹莫特或0.1-1mg poly ic，于1ml 50％ plga n-甲基吡咯烷酮或dmso溶液中作为注射剂用于治疗花生过敏。花生抗原ara h2也可以用含有蛋白质混合物的花生蛋白提取物如脱脂花生粉代替。又如，治疗狼疮的注射剂含有dna抗原，如美国专利申请16/029,594图3所示，为双链dna(1mg-10mg/ml)和0.3-3mg/ml的雷帕霉素或富士霉素或替西罗莫司，处于含1％hpmc的2-3.5％海藻酸钠或25％ pluronic f127或20％泊洛沙姆407中，或45％50:50丙交酯/乙交酯的n-甲基吡咯烷酮或dmso溶液中。
78、制剂中还可以使用其他药学上可接受量的抗原和免疫抑制剂(或疫苗佐剂如tlr激动剂)，只要能产生令人满意的生物学和治疗(例如免疫耐受)效果，这可以根据众所周知的协议和方法通过筛选和测试在实验上确定。如果抗原是过敏原，如花粉提取物、尘螨提取物、动物毛发提取物或坚果蛋白，则可以使用过敏性皮肤试验通过实验确定所需制剂中抗原的含量，制剂中可耐受的在皮试中最高过敏原含量就可使用在配方中。
79、抗原和免疫抑制药物的持续递送将被apc摄取，诱导/激活致耐受性树突状细胞和treg/breg，抑制b细胞活化/抗体产生、生发中心形成和抗原特异性超敏反应，导致长期抗原特异性免疫耐受。
80、本发明公开了治疗自身免疫性疾病和变态反应或抑制抗药抗体产生或诱导抗原特异性免疫耐受的方法和试剂，通过将所述抗原和所述免疫抑制剂/药物的混合物以持续释放制剂的形式作为注射剂或植入剂施用至有需要的对象/患者。本发明还公开了通过将所述抗原和疫苗佐剂类试剂的混合物以缓释制剂形式作为注射剂或植入物施用给有需要的对象/患者来治疗过敏症的方法和试剂，此时所述方法和所述混合物不旨在治疗自身免疫性病和不旨在抑制抗药抗体。注射剂可以通过皮下注射或肌内注射或皮内注射或淋巴内注射的形式给予。注射剂可含有增粘剂以增加其粘度或注射后变成凝胶，作为抗原和免疫抑制剂的缓释制剂。也可以在注射液中加入可促进t/breg扩增的分子(如il-2和/或tgf-β和/或pd-l1)与其他免疫抑制剂联合使用。抗原和免疫抑制剂可以是游离分子形式，也可以是纳米颗粒/微颗粒，包括脂质体形式。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有大于10,000cps的粘度。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有大于100,000cps的粘度。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有大于1,000,000cps的粘度。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有10,000,000cps的粘度。粘度增强剂的实例可以容易地从已知的药学上可接受的辅料例如透明质酸、淀粉和卡波姆中找到。在一些实施例中，粘度增强剂是可生物降解的。在一个例子中，粘性注射剂含有0.1-100μg/ml麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.2-2mg/ml雷帕霉素或0.5-5mg/ml甲氨蝶呤和适量的透明质酸(例如20-50mg/ml)以达到300,000cps的粘度，可选用的含有1mg/ml il-2。透明质酸可以交联以延长其体内半衰期。注射制剂也可以是热相变制剂。热相变制剂是指当温度升高到体温(37℃)时，其相态从低温或室温(25℃)下的液体变为半固体/凝胶的制剂，它可以使用温度触发的原位胶凝系统如泊洛沙姆作为辅料。包含抗原和免疫抑制剂的热相变注射制剂可以皮下注射或肌内注射或皮内注射的形式给药，以诱导抗原特异性免疫耐受并治疗相应的自身免疫性疾病或过敏。它在低温或室温下具有低粘度，但在体温下具有高粘度。此类热相变注射剂的制备可由本领域技术人员容易地从相关出版物中采用。例如，热相变注射制剂的组成是15μg/ml麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和3mg/ml的ph7的25％(w/w)poloxamer-407溶液，可以给麸质不耐受患者注射0.5-1ml，每两周一次，共3次，以皮下或淋巴内注射的方式诱导麸质耐受。
81、如美国专利申请15/723,173、16/380,951和16/029,594中所述，免疫抑制剂还可以缀合至碳水化合物聚合物或其他生物相容性聚合物(例如葡聚糖或肝素或透明质酸或多肽)以形成前药。新型前药可以是碳水化合物(或其他聚合物)药物偶联物的形式，其中药物通过可裂解键与碳水化合物(或其他聚合物)偶联。不止一种药物可以与聚合物主链结合。合适的碳水化合物包括含唾液酸的聚合物、透明质酸、硫酸软骨素、葡聚糖、羧基葡聚糖、纤维素、羧基纤维素及其衍生物。它也可以是线性聚合物主链(例如葡聚糖或合成聚合物如pva、paa)。此外，免疫抑制药物还可以直接偶联抗原或通过接头或载体偶联抗原用于制剂中。载体可以是聚合物。例如，美国专利申请15/723,173图8中的聚唾液酸-雷帕霉素可用于与蛋白质赖氨酸(例如谷蛋白或抗体药物或醇溶蛋白或花生抗原蛋白ara h2)通过edc偶联而缀合并用于在制剂中例如100μg-15mg)以代替抗原和药物的混合物。
82、本发明人当前和所述先前申请的制剂或植入物可以包含抗原+药物或抗原-药物偶联物或包封的抗原/药物(例如在微球或纳米颗粒或脂质体中)或它们的组合。抗原可以是粗抗原(如花生提取物、麸质、蛋清粉、花粉提取物、尘螨提取物)或纯化抗原(如花生抗原蛋白ara h2、醇溶蛋白)或抗原-药物偶联物或包封抗原的形式(例如在微球或脂质体中)或其混合物。
83、当使用脂质体时，药物或抗原和免疫抑制药物都可以被包裹在脂质体中。皮肤中有丰富的树突状细胞(dc)，在制剂中加入具有抗原/过敏原的dc调节药物可有效诱导耐受。当使用同时表达抗原和siglec配体的脂质体时(例如，本发明中描述的那些，j clininvest.2013jul；123(7):3074-83，j immunol.2013aug 15；191(4):1724-31和美国专利us9552183中描述的那些)，该脂质体还可以包封雷帕霉素等免疫抑制药物。例如，每个脂质体颗粒可以含有药物有效量的雷帕霉素(例如1％～50％脂质体重量的雷帕霉素)。这将进一步提高诱导免疫耐受和治疗自身免疫性疾病/过敏的功效。
84、另一种适合当前应用的形式是使用微球(又称微颗粒，microparticle)。术语微球包括从纳米尺寸到微米尺寸(例如直径为50nm-50μm)的颗粒。优选地，微球是可生物降解的(例如由可生物降解的聚合物如plga制成)。例如，微球由可生物降解的合成聚合物如plga制成，并包封免疫抑制药物如雷帕霉素(例如占微球重量的1％～80％)。微球的大小为3μm或300nm。抗原也可以直接或通过接头与微球表面结合。或者，抗原被封装在微球中。或者，药物(免疫抑制剂)可以结合到微球表面而不是被包封。适用于当前应用的微球或抗原-免疫抑制剂偶联物的例子可以很容易地从出版物中的公开内容中采用，例如专利申请us13/880,778、us14/934,135、ca2910579、us13/084,662和美国专利us8652487中的那些以及selecta biosciences提交的其他专利申请。它可用于治疗自身免疫性疾病或过敏或诱导免疫耐受，可以注射或植入(封装在植入物内)或局部应用于患者。可以使用药学上可接受的缓释制剂如原位胶凝基质中的药学上可接受量的微球或缀合物，只要它能够产生令人满意的治疗(例如免疫耐受)效果，这可以通过众所周知的实验步骤来筛选和测试以确定。
85、包含抗原和免疫抑制剂组合的持续递送制剂用于过敏、自身免疫性疾病和抗药物抗体治疗。当本技术实施例和方法中的免疫抑制剂被免疫增强剂(如tlr激动剂或sting激动剂等疫苗佐剂)替代且抗原为病原体抗原或肿瘤抗原时，透皮给药系统变为相关病原体或肿瘤的疫苗或加强疫苗。例如，持续递送制剂是含有复方配制的免疫增强剂和病原体抗原的原位胶凝制剂。它也可以是如前所述的植入物形式。疫苗佐剂型分子如tlr激动剂可用于本发明，如mpla、cpg odn、咪喹莫特、聚ic、雷西莫特、加地喹莫特、r848和3m-052。病原体抗原的实例可以是合成的或纯化的或病原体抗原的混合物。例如，它可以是hiv gp-120，它可以是流感神经氨酸酶，它可以是流感病毒裂解物，它可以是hbv表面抗原，它可以是肿瘤细胞裂解物。使用这些抗原将作为疫苗或加强剂产生针对病原体或肿瘤的免疫反应。在一些实施方案中，缓释疫苗制剂是液体注射液，每剂或每毫升注射液中含有10μg-1mg抗原如病原体抗原或肿瘤抗原、50μg-5mg tlr激动剂，在如所述缓释基质中，例如先前描述的原位胶凝系统。例如，原位胶凝系统可以是2-9％海藻酸钠和可选的胶凝增强剂如1％ hpmc和可选的溶解度增强辅料如0.1％tween-20或5-15％ dmso也可以加入配方；或采用温度触发原位胶凝聚合物，例如17-25％ pluronic f127或poloxamer 407；或40-50％ plga的dmso或n-甲基吡咯烷酮溶液。在一个实例中，该制剂包含100μg-1mg/ml流感病毒裂解物、0.2-2mg/ml咪喹莫特或0.2-2mg/ml聚ic和1mg/ml西替利嗪，含3.5％海藻酸钠和可选的1-2％ hpmc。在另一个例子中，疫苗制剂在20％泊洛沙姆407中含有20-100μg/ml hbv表面抗原、0.5-10mg/ml cpgodn1018佐剂。它可以通过皮下注射或肌内注射或皮内注射或注射产生针对hbv的免疫力，也可淋巴内注射。在另一个例子中，疫苗制剂含有100μg/ml病原体抗原、2-10mg/ml聚ic、1-5mg/ml咪喹莫特、任选的1-5mg/ml西替利嗪和45％含7–17kda 50:50丙交酯/乙交酯的plga的n-甲基吡咯烷酮或dmso溶液中。病原体或肿瘤抗原也可以是能与mhc结合形成mhc-肽复合物的抗原肽。
86、一方面，本发明公开了治疗变态反应的组合物和制剂，其在缓释制剂或植入物中包含引起所述病症的抗原和免疫活性增强剂。抗原可以是过敏原、过敏原或其片段形式的b细胞抗原、mhc-肽复合物形式的t细胞抗原或t细胞抗原的抗原肽(或其衍生物)，其可与mhc结合形成mhc-肽复合体。免疫活性(或称为免疫功能)增强剂的实例可以选自tlr激动剂例如咪喹莫特、聚ic和cpgodn。本发明还公开了一种通过在受试者中诱导抗原特异性免疫耐受和/或诱导针对抗原的竞争性igg的产生来治疗过敏或抑制ige诱导的反应的方法，该方法通过将所述组合物/制剂作为皮下注射施用给受试者，也可肌肉注射或皮内注射或淋巴内注射或作为植入物给药。
87、本发明进一步公开了通过将引起过敏的抗原和免疫活性增强剂/药物的组合/组合物作为物理混合物或作为合成缀合物或作为纳米颗粒/微颗粒或脂质体以治疗有效量应用于对象/患者来治疗过敏的方法和试剂。组合/组合物可以在持续(延长)释放系统中，例如原位胶凝系统或植入物。
88、合适的免疫活性(功能)增强剂的例子包括模式识别受体(prr)配体、rig-i样受体(rlr)配体、nod样受体(nlr)配体、c型凝集素受体(clr)配体、sting toll样受体配体，例如tlr3配体、tlr4配体、tlr5配体、tlr7/8配体、tlr9配体或其组合。免疫功能增强剂可以是疫苗佐剂。合适的疫苗佐剂的例子可以是皂苷，例如matrix-m佐剂(皂树皂苷与胆固醇和磷脂配制成纳米颗粒)，角鲨烯，例如mf59(角鲨烯油的水包油乳液)和as03佐剂(维生素e和角鲨烯水包油乳液)，mpl，如as01b，qs-21，从皂树树皮中提纯saponaria,as04是氢氧化铝和单磷酰脂a(mpl)的组合，铝盐如氢氧化铝、磷酸铝、明矾(硫酸铝钾)或混合铝盐。这些疫苗佐剂的浓度可以与目前使用的浓度相同或高至20倍。优选地，toll样受体配体是toll样受体(tlr)激动剂。实例包括tlr7/8配体的咪唑喹啉家族(例如咪喹莫特(r837)、加地喹莫特、瑞喹莫德(r848)、3m-052、3m-852、3m-s-34240、莫托莫德/vtx-2337、nktr-262；cpg odn，例如如sd-101、odn 1826和odn 2216、tlr激动剂，包括在专利申请wo2018055060a1、wo2013120073a1、wo2016146143a1和us20180133295a1及其引用中公开的tlr肽激动剂，dsrna的合成类似物，例如poly ic(例如poly iclc、polyic-kanamycin、polyi:polyc12u)、tlr4/5配体，例如细菌脂多糖(lps，例如单磷酰脂质a)、细菌鞭毛蛋白(例如创伤弧菌鞭毛蛋白b)、吡喃葡萄糖脂质a(gla)、tlr7激动剂洛索立宾或其衍生物/类似物，或其它们可以是活性药物、前药、脂质体、乳剂、胶束、不溶性沉淀物(例如与沉淀剂复合)的形式，与聚合物药物载体(例如葡聚糖)结合或封装在可生物降解的微粒/纳米粒子中。含聚丙烯酸聚合物如卡波姆也是可以使用的免疫功能增强剂。除了tlr激动剂和sting激动剂，其他可以激活/增强免疫系统和免疫细胞功能的分子，如apc、b细胞和t细胞，也可以纳入制剂中。在本发明人提交的美国专利申请us15945741、us16271877和us16924184中可以找到合适的免疫功能激活/增强分子和其他合适的免疫功能增强剂的例子。它们可以以治疗有效量添加到本文所述的制剂中。
89、在一些实施例中，免疫活性增强剂可包含本文提供的任何药剂。免疫活性增强剂可以是直接提供对apc的免疫增强(例如，激活)作用的化合物，或者它可以是间接提供免疫增强作用的化合物(即，在给药后以某种方式加工后)。因此，免疫活性增强剂包括本文提供的任何化合物的前药形式。不同的免疫活性增强剂可以作为混合物使用，并在本发明中组合使用。免疫活性增强剂还包括编码本文提供的导致免疫增强(例如激活)免疫应答的肽、多肽或蛋白质的核酸。因此，在实施方案中，免疫活性增强剂是编码导致免疫增强(例如激活)免疫反应的肽、多肽或蛋白质的核酸。核酸可以与合成纳米载体偶联。核酸可以是dna或rna，例如mrna。在实施方案中，本发明的组合物包含本文提供的任何核酸的互补物，例如全长互补物或简并(由于遗传密码的简并)。在实施方案中，核酸是表达载体，其在转染到细胞系中时可以被转录。在实施例中，表达载体可包含质粒、逆转录病毒或腺病毒等。可以使用标准分子生物学方法分离或合成核酸，例如通过使用聚合酶链式反应产生核酸片段，然后将其纯化并克隆到表达载体中。
90、selecta之前列出的出版物公开了合成纳米载体方法和相关组合物，包括b细胞和/或mhc ii类限制性表位和免疫活性抑制剂，以产生免疫反应。在他们的公开中，抗原/表位与纳米载体偶联并且免疫抑制剂与纳米载体偶联。另一种方法和组合物是使用纳米微粒/微颗粒，其具有封装在或非共价吸附到其表面的引起过敏的抗原/表位和封装在其中的免疫活性增强剂。纳米/微粒可以由可生物降解的材料制成，例如plga。这些纳米微粒/微颗粒子(例如直径10nm-10μm)可以注射或吸入或口服或外用给有需要的病人，以达到抗过敏的效果。免疫活性增强剂和抗原的包封是本领域技术人员熟知的并且可以容易地从相关出版物中获得而采用。纳米微粒/微颗粒表面可带有氨基或羧基等带电基团，以增加引起过敏的抗原/表位的结合于其表面；它还可以具有疏水表面，以允许通过疏水相互作用结合抗原/表位；或它们的组合。将带电基团引入表面可以通过使用表面改性或使用含有胺或羧基的分子来制备纳米微粒/微颗粒。引起变态反应的抗原/表位也可以与亲脂部分例如脂质分子如脂肪酸或胆固醇缀合以增加其与纳米微粒/微颗粒的结合。引起过敏的抗原/表位吸附到纳米微粒/微颗粒表面可以通过将抗原/表位与纳米微粒/微颗粒孵育(例如在水溶液缓冲液如1xpbs中4℃过夜)然后去除未结合的抗原/表位(例如，用水性缓冲液洗涤纳米微粒/微颗粒数次，类似于elisa板包被程序)。在一实施例中，制备了50nm～200nm尺寸的plga纳米颗粒包裹有10重量％的咪喹莫特。接下来，将plga纳米颗粒与过敏原ova(10mg/ml)在4℃下混合过夜，以生成ova(卵清蛋白)包被颗粒。用pbs洗涤颗粒3次以去除未结合的ova。在另一个例子中，咪喹莫特以50mg/ml浓度溶解在dmso中。将总共50μl咪喹莫特添加到溶解在二氯甲烷中的1ml plga(5mg/ml)中。接下来，使用超声波将混合物与0.4ml 5％ova溶液均化10分钟。将产生的o/w乳液添加到2.1ml的5％w/v pva溶液中，在室温下蒸发有机溶剂4小时。以3,500g离心20分钟后，获得含有咪喹莫特的ova包被纳米颗粒。可以进行额外的洗涤步骤以获得无未结合ova的颗粒。这种ova包被的颗粒处于原位胶凝系统如ph7 2-5％海藻酸盐或ph717-20％泊洛沙姆407溶液中，可以给予需要诱导ova免疫耐受治疗由于ige引起过敏的目标，皮下注射或肌内注射或皮内注射或淋巴内注射以治疗对ova的过敏。ova可以替换为其他过敏原/表位分子来治疗相应的过敏。在另一样品中，可以在plga中加入亲脂性羧酸或亲脂性胺或阴离子去污剂或阳离子去污剂(例如辛酸、月桂酸等脂肪酸；或dotma、dotap、胆固醇胺等阳离子脂质)制备plga颗粒，该plga颗粒具有表面电荷。在一个例子中，咪喹莫特以50毫克/毫升的浓度溶解在含有10毫克/毫升的月桂酸的dmso中。将总共50μl咪喹莫特/月桂酸添加到溶解在二氯甲烷中的1ml plga(5mg/ml plga)中。接下来，使用超声波将混合物与0.1ml 2％辛酸溶液均化10分钟。将o/w乳液在室温下蒸发4小时以除去有机溶剂。所得plga颗粒用pbs洗涤3次，然后与ova一起孵育以制备ova结合颗粒。它可以添加到原位胶凝基质中，然后用于治疗对ova的过敏。在一个例子中，1mg～10mg的在3.5％海藻酸钠和1％hpmc中的颗粒可以每月注射3次给ova不耐受患者，以皮下注射或淋巴内注射的方式诱导ova耐受。
91、此外，引起过敏的过敏原(抗原)/表位除了缀合或吸附到其表面外，还可以被封装在纳米微粒/微颗粒内。抗原/表位包封的制备是本领域技术人员众所周知的并且可以容易地从相关出版物中得到而采用，例如使用双重乳液水/油/水系统。
92、专利申请us20130287729公开了抗原特异性、耐受性诱导微粒及其用途。它公开了一种微粒(大小为0.5μm-10.0μm)，用于靶向感兴趣的抗原呈递免疫细胞并用于诱导抗原特异性免疫耐受，其中微粒包含抗原和治疗剂，其中治疗剂是免疫调节剂、免疫抑制致耐受剂、或募集感兴趣的抗原呈递免疫细胞的试剂，其中微粒的表面包含靶向感兴趣的抗原呈递免疫细胞的配体，并且微粒由可生物降解的材料制成。这种治疗过敏的方法和组合物的进一步改进是使用尺寸为50nm-5μm的微粒或纳米颗粒，优选由可生物降解的材料制成，并使用免疫活性增强剂代替免疫抑制剂，优选在缓释制剂中，例如原位胶凝系统或高粘度配方。该颗粒包含通过包囊或包被或包囊+包被引起过敏的抗原。在一些实施例中，纳米微粒/微颗粒的表面包被有抗体的fc部分或fc部分朝外的全抗体。这将与fcr结合以促进apc摄取。在其他实施方案中，纳米微粒/微颗粒的表面不需要具有靶向抗原呈递免疫细胞的配体。在一些实施例中，它可以具有包被在其表面上的引起过敏的抗原/表位。纳米微粒/微颗粒的内部包含本技术中列出的免疫活性增强剂和任选的引起过敏的抗原/表位，例如通过封装而包含。该制备方法是本领域技术人员所熟知的，可以很容易地从相关出版物中取得采用。例如，可以将5mg-50mg的上述含麸质和聚ic的颗粒，在3％海藻酸钠和可选的0.5-2％hpmc中，或在15-25％ pluronic f127或15-25％ poloxamer 407中，注射到麸质不耐受患者，通过皮下或肌肉内或淋巴内注射诱导麸质耐受。
93、美国专利申请us20160338953 a1公开了一种基于脂质体的免疫疗法。它提供了一种包封自身抗原的脂质体，其中脂质体的大小为500至15000nm并且脂质体膜包含磷酸二丝氨酸(ps)，其量相对于总膜脂质体组合物按重量计为10％至40％。还提供了包含治疗有效量的所述脂质体的药物或兽医组合物。此外，它提供了用作药物的如上所定义的脂质体和药物或兽药组合物，特别是用于治疗自身免疫性疾病。本发明还公开了用于治疗过敏的抗原特异性脂质体及其用途。脂质体内部包裹有本技术所列的免疫活性增强剂(以及可选的引起过敏的抗原/表位分子)。任选地，脂质体的表面也可以具有引起过敏的抗原/表位包被的。可作为注射剂给予有需要的患者，诱导对过敏原的免疫耐受，治疗过敏。引起变态反应的抗原/表位也可以与脂类分子如脂肪酸或磷脂或胆固醇衍生物偶联以允许其插入脂质体膜。合适的脂质体可以具有50nm～20μm之间的尺寸。其制备方法及其使用方案为本领域技术人员所熟知，并且可以容易地从相关出版物如us20160338953中的那些中获得采用。适用于本发明制备脂质体的脂质分子的实例包括但不限于磷脂甘油脂、甘油磷脂、鞘脂、神经酰胺、甘油磷酸乙醇胺、甾醇或类固醇。这些脂质分子也可用于制备引起过敏的抗原/表位-脂质缀合物。也可以使用膜锚定肽-抗原/表位缀合物代替抗原/表位-脂质缀合物。这些脂质体可以在持续释放制剂中，例如原位胶凝系统或高粘度制剂。例如，5mg-50mg这些脂质体(制剂的5-25％)，含有蛋清抗原如卵类粘蛋白，和雷帕霉素，在3％海藻酸钠和可选的0.5-2％ hpmc中，或在15-25％pluronic f127或15-25％泊洛沙姆407中，可每月注射3次至蛋清不耐受患者，以皮下或肌内注射或腹股沟淋巴结淋巴内注射方式诱导蛋清耐受。
94、本发明公开了治疗过敏的方法、试剂、组合物和制剂，其通过将引起过敏的抗原和免疫活性增强剂的混合物注射到有需要的对象/患者的缓释制剂中，例如原位胶凝系统或植入物。它还可以含有抗过敏药物，如抗组胺药、皮质类固醇、肥大细胞稳定剂和白三烯抑制剂。添加这些抗过敏药物可以防止患者因将过敏原给予患者而引起的过敏反应。该方法和所述组合物/制剂可用于诱导产生抗过敏原igg抗体以竞争产生过敏反应的内源性ige；因此，它会诱导对过敏原的免疫耐受。免疫活性增强剂可以是活性剂、前药形式、微粒或纳米粒子形式或脂质体形式。引起过敏的抗原可以是b细胞抗原/表位或t细胞抗原/表位(例如mhc-肽复合物或偶联物；或抗原片段，例如可与mhc结合的肽)或其组合。该组合可以是b细胞抗原/表位与t细胞抗原/表位；或针对相同疾病或不同疾病的几种不同b细胞抗原/表位和/或几种不同t细胞抗原/表位的组合。使用可与mhc结合在体内形成mhc-肽复合物(t细胞抗原)的肽抗原(t细胞表位)代替肽-mhc复合物减小尺寸和分子量，可以替代使用。使用具有单一表位结构域的肽抗原可以通过不与细胞表面的ige交联来降低激活肥大细胞的风险，因此提供更好的安全性并且仍然能够诱导免疫耐受。在本发明中使用的引起过敏的抗原(过敏原)可以是完整的过敏原或其片段如其表位，或它们的组合。它们的例子可以在本技术和相关出版物和专利申请中找到。
95、引起过敏的抗原和免疫活性增强剂的混合物可以是物理混合物。物理混合物是指抗原和免疫活性增强剂的混合物以其原始形式(例如液体或固体形式，如粉末或颗粒)简单地机械混合(例如通过搅拌或混合)在一起，而无需任何额外的过程(例如通过混合它们以其原始形式在一起)，或在机械混合(例如粉碎、研磨、研磨或均化)之前或之后应用进一步的尺寸减小过程，或分别分散或溶解在相同或不同类型的液体中，然后混合，或共同-分散在液体中，或共溶解在溶剂(例如水)中，并且可选的干燥工艺(例如喷雾干燥或冻干)可以与可选的进一步尺寸减小工艺一起应用。
96、在一些实施例中，该方法是使用含有过敏原或其片段和免疫增强药物(上面列出的药物如咪喹莫特或poly ic)的原位凝胶化液体。它还可以含有抗过敏药物，如抗组胺药、皮质类固醇、肥大细胞稳定剂和白三烯抑制剂。过敏原的例子可以是花粉提取物、尘螨提取物、动物毛发提取物或食物过敏原如坚果/花生/牛奶/鸡蛋蛋白。或者，封装有引起过敏的抗原和免疫活性增强剂的可生物降解植入物可用于治疗和预防过敏。如果植入物是大颗粒，则植入物的尺寸可以直径大于10μm，优选＞100μm。大颗粒可以在100μm-10mm的尺寸范围内。颗粒可以由可生物降解的材料制成，例如plga。植入物也可以是非球体形状。例如，可以使用由含有3mg咪喹莫特和0.5mg醇溶蛋白的plga制成的2mm(长度)x 0.3mm(直径)棒或由含有1mg咪喹莫特和5mg醇溶蛋白的plga制成的5mm(长度)x 2mm(直径)棒作为皮下植入物来治疗麸质不耐症。也可以使用其他植入形式，包括不可降解的设备，例如nanoprecision medical的nanoportal capsule tm和intarcia的medici drug deliverysystem tm，只要能同时传递抗原和免疫活性增强剂即可。在一些实施例中，缓释植入物例如nanoportal capsule tm和medici drug delivery system tm只含过敏原，无需免疫增强剂。目前治疗过敏的过敏原注射需要非常频繁地注射，使用植入物提供过敏原的持续释放将减少植入(例如每月或每3个月一次植入物)的频率并且对患者更友好。首次植入的过敏原剂量较低，后期逐渐增加，以确保安全。植入物还可以包含治疗有效量(例如临床上使用的剂量)的抗过敏药物，例如抗组胺药、皮质类固醇、肥大细胞稳定剂和白三烯抑制剂。在一些实施方案中，植入物可以释放与当前用于过敏预防/治疗的抗原注射剂量相同的每日剂量的抗原，并且释放可以持续数周至数月。优选地，释放的日剂量能够诱导对过敏原的耐受性但不会引起严重的过敏反应，例如严重的速发型超敏反应。例如，植入物含有0.3-3mg过敏原，允许每天释放0.1ug-0.1mg过敏原，持续30天，过敏原可以是花生蛋白或蛋清蛋白或花粉提取物。如果观察到严重的过敏反应，植入物可以由允许其从患者身上移除以增加其安全性的材料和配置制成。例如，它可以是可以从患者身上取出的小药筒，它在持续释放系统中包含过敏原和可选的tlr激动剂或免疫抑制剂。
97、在一个实例中，组合物和液体制剂含有0.5ug-100μg/ml麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.2mg-2/mg/ml咪喹莫特或0.2-2mg/ml聚ic或其组合，在2-5％海藻酸钠ph＝7和可选的0.1％ tween-60或可选的5％丙二醇中，以提高药物溶解度，作为注射剂治疗麸质不耐受。它可以与可选的填充剂一起冻干，并在使用前重新配制。其他过敏原如花粉提取物、尘螨提取物、动物毛发提取物或坚果蛋白也可以替代使用，制剂中的浓度可以是通过实验确定的最大耐受浓度，例如通过皮下注射过敏原实验。
98、在另一个实例中，组合物和液体制剂在2-5％ph＝7海藻酸钠中含有0.5-25μg/ml麸质和0.5-5mg/ml聚ic，以及任选的2mg/ml西替利嗪。在另一个例子中，组合物和液体制剂为在20％泊洛沙姆407中含有5-50微克/毫升麸质、0.5-2毫克/毫升sting激动剂mk-1454或0.5-5毫克/毫升cpg odn 1826。在另一个例子中，将1-100μg/ml麸质和0.1-1mg/ml咪喹莫特与1ml 50％ plga n-甲基吡咯烷酮或dmso溶液混合，作为原位胶凝制剂。在另一个实例中，组合物和液体制剂在ph＝7 3.5％海藻酸钠和1％ hpmc中，含有0.1mg/ml麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.5mg/ml咪喹莫特或20μg/ml 3m-052。在另一个实例中，组合物和液体制剂在19％泊洛沙姆407和0.5％透明质酸中，含有5-500μg/ml麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和1-5mg/ml聚ic。这些制剂可用于诱导麸质耐受和治疗麸质不耐受，如皮下注射或肌内注射或皮内注射或淋巴内注射。麸质可以用醇溶蛋白替代，例如脱酰胺醇溶蛋白。在一些实施方案中，可以将含有谷蛋白或脱酰胺醇溶蛋白肽的制剂以患者的最大耐受剂量注射给患者。上述例子中的麸质可以用蛋清蛋白代替，例如2-100μg/ml卵类粘蛋白(gal d 1)或5-100μg/ml卵清蛋白(gal d 2)或它们的组合与可选的2-100μg/ml卵转铁蛋白(gal d 3)和2-100μg/ml溶菌酶(gal d 4)治疗蛋清过敏。在另一个例子中，一种组合物和液体制剂含有花生抗原ara h2 0.01-1μg/ml和1mg/ml的3.5％海藻酸钠ph7以治疗花生过敏。在一个实例中，组合物和液体制剂包含花生抗原ara h2 0.5μg/ml、0.5mg/ml咪喹莫特，在20％泊洛沙姆407中，作为注射剂以治疗花生过敏。在一个实例中，一种组合物和液体制剂为在n-甲基吡咯烷酮或dmso中含有45％50:50丙交酯/乙交酯中，还含有0.2μg/ml花生抗原ara h2、0.2mg/ml咪喹莫特，以治疗花生过敏。免疫活性增强剂药物或免疫活性增强剂药物和过敏原可以是粉末或凝胶或半液体的形式，也可以是脂质体(例如100nm-5μm直径)的形式，也可以是纳米颗粒/微粒(如100nm-1μm)或与树枝状聚合物或线性聚合物偶联(如通过酯键偶联聚丙烯酸或聚唾液酸以形成mw＝5k-500k道尔顿的基于聚合物的前药)，然后配制成原位胶凝系统或高粘度液体。也可以使用其他药学上可接受量的引起过敏的抗原和免疫活性增强剂，只要它可以产生令人满意的生物学和治疗(例如免疫耐受)效果，这可以通过众所周知的方法方案筛选和测试来实验确定。
99、其他过敏原如花粉提取物、尘螨提取物、动物毛发提取物和食物过敏原如坚果/花生/牛奶/鸡蛋提取物也可替代用于上述制剂中以治疗相关过敏。这些过敏原的浓度的例子可以在0.1μg/ml到1mg/ml之间，只要它们是有需要的受试者可以忍受的。在治疗过程中，当患者的耐受性增加时，制剂中过敏原的浓度会增加，这是过敏免疫治疗的标准做法。
100、对应于给定效力水平的过敏原的量根据过敏原种类而有很大差异。在本发明的另一个实施方案中，单剂量中主要过敏原的浓度可以是0.05至500μg，例如在注射剂中为0.1μg至100μg。在过敏提取物领域，目前还没有国际公认的标准化方法。存在许多不同的提取强度单位，即生物效能。使用的方法和使用的单位通常测量过敏原含量和生物活性。例如是sq-units标准化质量单位)、bau生物过敏原单位)、bu生物单位)、um质量单位)、iu国际单位)和ir反应性指数)。因此，如果使用不同于本文公开的来源的提取物，它们需要针对本文公开的提取物进行标准化，以确定它们在sq单位或任何上述单位中的效力。给定提取物的生物效力，即体内过敏原活性，取决于许多因素，最重要的是提取物中主要过敏原的含量，它随生物源材料的组成而变化。用于获得所需生物效能的过敏原提取物的量(以克为单位)因所讨论的提取物类型而异，对于给定类型的提取物，过敏原提取物的量因实际生物效能而异。的提取物。对于给定批次的提取物，可使用美国专利号us9248097b2中描述的程序确定用于获得所需生物效能的过敏原提取物的克数。
101、sq-unit是根据sq物效能标准化方法确定的，其中100,000sq单位等于标准皮下维持剂量。通常1毫克的提取物含有100,000到1,000,000sq单位，具体取决于它们的过敏原来源和使用的制造工艺。精确的过敏原量可以通过免疫测定法即主要过敏原总含量和过敏原总活性来确定。bau是根据fda对过敏原产品的要求确定的生物效力单位。根据上述方法，含有草提取物的100,000sq单位的剂量等于2600-4700bau的含量。同样，其他提取物可以根据上述方法进行评估。
102、本发明还公开了通过将过敏原与所述免疫活性增强剂/药物的混合物注射给有需要的对象/患者来治疗或预防过敏的方法和试剂。注射剂可以皮下注射或肌内注射或皮内注射的形式给予。注射剂可以包含粘度增强剂以在注射时增加其粘度，作为抗原和免疫活性增强剂的缓释制剂。引起过敏的抗原和免疫活性增强剂可以是游离分子形式或来自包括脂质体形式的纳米微粒/微颗粒。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有大于5,000cps的粘度。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有大于50,000cps的粘度。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有大于500,000cps的粘度。在某些实施方案中，注射剂在室温下具有1,000,000cps的粘度。粘度增强剂的实例可以很容易地从已知的药学上可接受的辅料中找到，例如透明质酸(线性或交联的)、淀粉和卡波姆。在一些实施例中，粘度增强剂是可生物降解的。在一个例子中，粘性注射剂含有0.1-500ug/ml麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.1-0.5mg/ml咪喹莫特或100ug-0.5mg/ml聚ic和适量的透明质酸(例如10-50mg/ml线性或交联透明质酸)以达到300,000cps的粘度。在一个实例中，粘性注射剂含有0.1-10微克/毫升麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和50微克毫克/毫升咪喹莫特或100微克/毫升聚ic和适量的透明质酸(例如20-50毫克/毫升交联透明质酸)以达到500,000cps的粘度，以及可选的2mg/ml西替利嗪。
103、注射制剂也可以是如前所述的热相变制剂。包含抗原和免疫活性增强剂的热相变注射制剂可以皮下注射或肌内注射或皮内注射的形式给药，以诱导抗原特异性免疫耐受并治疗相应的自身免疫性疾病或过敏。例如，热相变注射剂的组成为0.01-0.1mg/ml麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.2-1mg/ml咪喹莫特，溶于25％(w/w)poloxamer-407ph＝7溶液，以及可选的2mg/ml西替利嗪，可以注射0.1-1ml到麸质不耐受患者治疗麸质过敏，皮下注射或淋巴内注射。上述例子中的麸质可以用蛋清蛋白代替，例如5-100μg/ml卵类粘蛋白(gal d 1)或5-100μg/ml卵清蛋白(gal d 2)或它们的组合与可选的5-100μg/ml卵转铁蛋白(gal d 3)和5-100μg/ml溶菌酶(gal d 4)治疗鸡蛋过敏。
104、本发明的包含治疗过敏的植入物的制剂还可以包含如前所述的抗过敏药物。添加的抗过敏药物的量可以与目前抗过敏治疗中使用的相同。添加这些抗过敏药物可以防止患者因将过敏原给予患者而引起的过敏反应。此外，这些试剂和制剂也可以注射到淋巴结中以进行过敏治疗。淋巴内过敏原给药是已知的，并且可以容易地为本发明而采用相同的程序。在一些实施方案中，注射到淋巴结中的试剂或制剂的量在0.1ug～0.1mg过敏原之间，每个淋巴结的注射体积在0.1ml～1ml之间，持续3个月。
105、免疫活性增强剂还可以与碳水化合物聚合物或其他生物相容性聚合物(例如葡聚糖或肝素或透明质酸或多肽)缀合以形成前药，如美国专利申请15/723,173；16/380,951和16/029,594中所述。前药可以是碳水化合物(或其他聚合物)药物偶联物的形式，其中药物可以通过可裂解键与碳水化合物(或其他聚合物)偶联。不止一种药物可以与聚合物主链结合。合适的碳水化合物包括含唾液酸的聚合物、透明质酸、硫酸软骨素、葡聚糖、羧基葡聚糖、纤维素、羧基纤维素及其衍生物。它也可以是线性聚合物主链(例如葡聚糖或合成聚合物如pva、paa)。此外，免疫增强药物还可以直接与抗原偶联或通过接头或载体与抗原偶联。载体可以是聚合物。可将引起过敏的抗原缀合至载体以形成多聚体。过敏原抗原和免疫增强药物也可以缀合在一起。它们可以是线性聚合物、微粒、纳米粒子、脂质体或植入物的形式。载体系统可用于先前和当前应用以构建偶联物。例如，脂质体或微粒或纳米颗粒可用作载体。抗原可以固定在脂质体或颗粒的表面上，免疫增强剂可以包封在脂质体或颗粒的内部或共同固定在脂质体或颗粒的表面上。载体还可以是直链或支链聚合物，例如葡聚糖、透明质酸、肝素、硫酸软骨素和多肽。过敏原抗原和免疫增强剂都可以与聚合物结合。可以通过向受试者施用所述缀合物(例如皮下注射)将它们给予需要治疗过敏的受试者。更多细节可以在之前的披露中找到。
106、当使用脂质体时，可以将免疫增强药物或抗原+药物两者都包裹在脂质体中。可注射制剂或植入物可包含抗原+药物或抗原-药物偶联物或封装的抗原/药物(例如在微球或脂质体中)或它们的组合。抗原可以是粗制抗原(例如花生提取物、麸质、花粉提取物、尘螨提取物)或纯化抗原(例如花生抗原蛋白ara h2、醇溶蛋白)或抗原-药物偶联物或包封抗原(例如在微球中或脂质体)或其混合物。
107、在原位胶凝系统等缓释制剂中使用微球。术语微球包括从纳米尺寸到微米尺寸(例如直径为50nm-50μm)的颗粒。优选地，微球是可生物降解的(例如由可生物降解的聚合物制成，例如聚(丙交酯)，plga)，微球还可以包封免疫抑制药物例如咪喹莫特(例如占微球重量的1％～80％)。例如，微球可以是可生物降解的合成聚合物，例如plga。包封咪喹莫特等免疫增强药物(如占微球重量的1％～80％)。微球的大小为3μm或300nm。抗原也可以直接或通过接头与微球表面结合。抗原也可以封装在微球体中。或者，药物(免疫活性增强剂)可以缀合到微球表面而不是被包封。适用于当前应用的微球的例子可以很容易地从出版物中的公开内容中采用，例如专利申请号us 13/880,778、us 14/934,135、ca 2910579、us 13/084,662和美国专利us8652487和那些由selecta biosciences提交的其他专利申请。它可以配制成用于治疗过敏的原位凝胶制剂或高粘度液体，可以注射或植入(制剂被封装在植入物内)给患者。
108、另一种适用于当前应用的形式是在持续释放制剂中使用与过敏原和免疫活性增强剂缀合的聚合物载体，例如所述原位胶凝基质。该聚合物与多个抗原(例如1-100)和多个拷贝的免疫活性增强剂(例如5-500分子)结合。
109、本发明的制剂/组合物可以在治疗后期包含增加剂量的过敏原，类似于当前使用过敏原的治疗方案(口服或局部或注射)所使用的给药方案。也就是说，治疗涉及一系列制剂，第一种制剂含有可耐受的最低量的过敏原，并且随着时间的推移在后面的制剂中逐渐增加，而如果存在其他药物(例如免疫增强剂或免疫抑制剂)该药物的量可以保持不变。第一制剂中的过敏原量可以是患者可以耐受而不引起严重过敏原反应的最高过敏原量。在一个例子中，患者开始使用含有0.1ug蛋清蛋白的第一个单剂量可注射制剂，在pbs中，在初始剂量后，受试者每30分钟接受大约两倍剂量的蛋清蛋白提取物，直到达到最高耐受单剂量而确定。基于最高耐受单次剂量，受试者开始每周使用含有最高耐受剂量蛋清蛋白和0.2mg咪喹莫特的0.5ml 3.5％海藻酸钠制剂，每周1剂，持续2周。只要受试者耐受当前剂量，配方中含有0.2mg咪喹莫特的0.5ml 3.5％海藻酸钠中的蛋清每2周增加一次，直至达到200ug。一旦受试者达到200ug的剂量，他们将被指示每6个月使用一次该剂量，持续2年。同样，可用0.1-0.5mg雷帕霉素或甲氨蝶呤代替咪喹莫特。或者，在含有抗原的缓释制剂中可以不含有tlr激动剂和免疫抑制剂。其他过敏原如花粉提取物、尘螨提取物、动物毛发提取物和食物过敏原如坚果/花生/牛奶/鸡蛋提取物也可替代用于上述制剂中以治疗相关过敏。这些过敏原的浓度的例子可以在0.1μg/ml到1mg/ml之间，这取决于物种和患者的耐受性，只要它们是有需要的受试者可以耐受的。在治疗过程中，当患者的耐受性增加时，制剂中过敏原的浓度会增加，这是过敏免疫治疗的标准做法。
110、这些含有过敏原和佐剂型药物(例如tlr激动剂或sting激动剂)的制剂和组合物主要用于通过产生引起过敏反应的过敏原特异性igg竞争性内源性ige来治疗过敏。它们不用于治疗针对自身抗原的自身免疫性疾病，也不用于预防抗药抗体。优选地，佐剂型试剂是thl偏向性免疫刺激剂，包括sting激动剂、作用于toll样受体(tlr)的天然或合成激动剂(例如tlr-1、tlr-2、tlr-3、tlr-4、tlr-5、tlr-6、tlr-7、tlr-8,tlr-9、tlr-10and tlr-11激动剂)，还包括咪唑并喹啉胺，例如2-桥联咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、环烷基咪唑并吡啶胺，cpg,免疫刺激性rna,脂多糖,vsv-g或hmgb-1如咪喹莫特、r848、3m-052和polyic。在一些优选实施例中，所使用的tlr激动剂选自咪喹莫特和聚ic。
111、一方面，本发明公开了组合物和制剂，其包含一种或多种引起过敏的抗原和任选的疫苗佐剂类型试剂(例如tlr激动剂、sting激动剂)，处于缓释(延长)释放系统(例如原位胶凝系统或植入物)中或高粘度液体中来治疗过敏。本发明还公开了一种通过将这些组合物和制剂作为注射剂或植入物给予受试者来治疗受试者过敏症的方法。在一些实施方案中，所述制剂通过将用于使患者脱敏的即用型含有过敏原的产品(例如那些临床使用的过敏原提取物产品，例如来自alk abello as的那些皮下过敏免疫疗法(scit)注射剂)与持续释放系统基质混合在使用前现场制备，然后将混合物作为最终制剂注射给患者。所述缓释系统基质是含有适量缓释系统材料的组合物/制剂，例如原位胶凝材料或高粘度液体以及可选的辅助型试剂(例如tlr激动剂、sting激动剂)。所述缓释系统基质中的原位胶凝材料的浓度需要足够高以在与过敏原提取物产品混合后可提供所需的胶凝效果，其可以根据添加过敏原提取物产品引起的稀释倍数来确定。优选混合在一起后最终注射用制剂的ph值在6-8之间并且渗透压接近生理渗透压，这可以通过调节基于混合比的缓释系统基质的缓冲容量、ph值、渗透压来控制。在一些实施例中，所述组合物/制剂是含有任选的佐剂型试剂和适量的本发明公开的自胶凝聚合物的液体或其冻干形式，在冻干前加入任选的填充剂/冻干保护剂，所述聚合物的量需要与用于使患者脱敏的含有过敏原的产品混合后，足以在体内形成凝胶。在一些实施方案中，组合物/制剂是在水或盐水中的2～50％藻酸钠并且通过添加碱或酸例如naoh或hcl使ph为5-8。在一些实施方案中，组合物和制剂是在水或盐水中的2～20％海藻酸钠，并且添加了2m naoh或2m hcl，使ph为7-8。在一些实施方案中，制剂的重量克分子渗透压浓度通过生理上可接受的辅料调节以具有类似于生理条件的重量克分子渗透压浓度。在一些实施方案中，制剂具有低重量克分子渗透压浓度和低ph缓冲能力，因此在混合在一起后不会影响含过敏原制剂的重量克分子渗透压浓度和ph值，特别是对于那些固体类型(例如冻干形式)预配制的含过敏原的药物产品；例如，该制剂的渗透压和ph缓冲能力低于0.5xpbs。钙盐或其他二价阳离子盐可以以不会导致体外胶凝的低浓度掺入制剂中。例如，每1克藻酸盐可以使用2-20毫克的低浓度ca2+盐而有利于体内胶凝，如在制剂中加入0.05％～0.5％的葡萄糖酸钙。该制剂还可包含如前所述的胶凝增强聚合物，例如0.1～1％的ha、cmc、hpmc、卡波姆、mc、壳聚糖；10-30％泊洛沙姆或其组合。混合后，最终溶液最好含有2-6％的藻酸盐。在一些实施例中，治疗有效量的tlr激动剂(例如聚ic或咪喹莫特或r848或3m-052或cpg odn例如cpg odn 1018或它们的组合)或sting激动剂或它们的组合可进一步并入所述含藻酸盐的基质配方中。在一个实例中，基质制剂是5％海藻酸钠、可选的1％ hpmc和可选的0.2-2mg/ml聚ic和可选的0.2-2mg/ml cpg odn 1018在1x pbs中，ph值为7；将其1ml与1ml alutard sq尘螨提取物(1-10过敏单位/ml稀释)混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗尘螨过敏。其他过敏原提取物如猫毛过敏原提取物、花粉过敏原提取物、混合胡蜂毒液蛋白也可代替尘螨提取物用于治疗相关过敏。例如，基质制剂是含有6％海藻酸钠和可选的0.2-2mg/ml咪喹莫特和可选的5mg/ml盐酸苯海拉明作为抗组胺剂的0.5％nacl盐水溶液，ph值为7，混合与合适浓度的百慕大草花粉提取物以1:1的比例产生最终制剂，以0.2-0.5毫升的体积皮下或肌肉注射或淋巴内注射或靠近淋巴结注射给患者。在一些实施例中，藻酸盐可以用3-6％的透明质酸代替以形成粘性溶液。在一个实例中，基质制剂是在具有ph值7的5％透明质酸水溶液和可选的5mg/ml聚ic；1ml该制剂与0.5ml alutardsq尘螨提取物(1-10过敏单位/ml)稀释混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗尘螨过敏。在一些实施方案中，藻酸盐可以在基质制剂中用30-50％ pluronic f127或泊洛沙姆407代替，并且混合后pluronic f127或泊洛沙姆407的最终浓度应大于其原位胶凝浓度(例如>17％).在一个实例中，基质制剂是30％泊洛沙姆407和可选的0.2-2mg/ml聚ic水溶液，ph值为7；1ml该液与0.5ml alutard sq尘螨提取物(1-10过敏单位/ml)混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗尘螨过敏。在一些实施例中，plga有机溶剂溶液可用作基质制剂中的原位胶凝剂，混合后最终制剂不应在体外引起胶凝但仍可在体内形成凝胶，这可通过调节过敏原提取物产品和plga溶液的比例以及plga的浓度来控制。在一个实例中，基质制剂是在n-甲基吡咯烷酮或dmso中的60％50:50丙交酯/乙交酯plga和可选的0.1-1mg/ml咪喹莫特和可选的5mg/ml苯海拉明；1ml该液与0.1ml alutard sq尘螨提取物(10-50过敏单位/ml稀释)混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗尘螨过敏。或者，可以用治疗有效量的先前描述的免疫抑制剂例如mtor抑制剂(例如0.1-2mg/ml雷帕霉素或其类似物或甲氨蝶呤)替代上述基质制剂中的佐剂样剂来治疗过敏。在一个实例中，基质制剂是5％海藻酸钠、可选的1％ hpmc和0.2mg/ml雷帕霉素和可选的0.1％吐温-20作为溶解增强剂，在ph值为7的1xpbs中；将其1ml与1ml alutard sq尘螨提取物(1-10过敏单位/ml)混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗尘螨过敏。其他过敏原提取物如猫毛过敏原提取物、花粉过敏原提取物、混合胡蜂毒液蛋白也可代替尘螨提取物用于治疗相关过敏。例如，基质制剂是含有6％海藻酸钠和可选的0.1-1mg/ml雷帕霉素和可选的5mg/ml盐酸苯海拉明作为抗组胺剂的水溶液，在0.5％nacl中，ph值为7；与合适浓度的百慕大草花粉提取物以1:1的比例进行混合产生最终制剂，以0.2-0.5毫升的体积皮下或肌肉注射或淋巴内注射或靠近淋巴结注射给患者。在一个实例中，基质制剂是3％交联透明质酸钠和可选的1mg/ml雷帕霉素水溶液，ph值为7；将其1ml与0.5ml alutard sq尘螨提取物(1-10过敏单位/ml)混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗尘螨过敏。在一些实施方案中，在基质制剂中藻酸盐可以用30-50％ pluronic f127或泊洛沙姆407代替，并且混合后pluronic f127或泊洛沙姆407的最终浓度应大于其原位胶凝浓度(例如>17％)。在一个实例中，基质制剂是30％泊洛沙姆407和可选的0.3mg/ml雷帕霉素或0.3mg/ml甲氨蝶呤水溶液，ph值为7；1ml该液与0.5ml alutard sq尘螨提取物(1-10过敏单位/ml)混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗尘螨过敏。在一些实施例中，plga有机溶剂溶液可用作基质制剂中的原位胶凝剂，混合后最终制剂不应在体外引起胶凝但仍可在体内形成凝胶，这可通过调节plga溶液和过敏原提取物产品的比例和plga的浓度来控制。在一个实例中，基质制剂是为n-甲基吡咯烷酮或dmso中的60％50:50丙交酯/乙交酯plga并含有0.1-1mg/ml雷帕霉素和任选的5mg/ml苯海拉明，1ml该液与0.1ml alutard sq尘螨提取物(10-50过敏单位/ml)混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗尘螨过敏。因此，一方面，本发明公开了组合物和制剂，其包含一种或多种引起过敏的抗原和在持续(延长)释放系统(例如原位胶凝系统或植入物)中的免疫抑制剂以治疗过敏。本发明还公开了一种通过向受试者施用所述组合物和制剂作为注射剂来治疗受试者过敏的方法。所述制剂是通过在使用前将用于使患者脱敏的即用型含有过敏原的产品(例如那些临床上使用的过敏原提取物产品)与含有免疫抑制剂的缓释系统基质在现场混合制备，然后作为最终制剂注射给患者。所述缓释系统基质是含有适量缓释系统材料和免疫抑制剂的组合物/制剂，其为原位胶凝材料或高粘度液体。
112、另两种用于过敏免疫疗法(ait)治疗的即用型产品是舌下滴剂或片剂。舌下过敏免疫治疗(slit)液滴在舌下给药。患者自己在家使用滴剂，无需定期去看医生。药片由患者在家服用，通常是舌下含服药片。许多市场上已经有针对屋尘螨、草、豚草和日本柳杉过敏的药片。上述缓释系统基质也可以与舌下滴剂或片剂联合使用，将缓释系统基质和滴剂或片剂同时置于舌下。如上所述，所述缓释系统基质可以含有免疫抑制剂如雷帕霉素或甲氨蝶呤，或佐剂类药物如咪喹莫特或polyic，或根本不含活性药物。其可以是前述原位胶凝制剂，也可以是前述高粘度液体。例如，基质制剂是含有2％海藻酸钠和可选的1mg/ml雷帕霉素和可选的5mg/ml盐酸苯海拉明作为抗组胺剂的盐水溶液，在0.5％ nacl中，ph值为7，患者可以加1或2滴这种基质和商业slit滴剂或片剂同时在舌下治疗过敏；或将它们混合在一起，然后将混合物放在舌下。在另一个例子中，2％的海藻酸钠被1％的hpmc代替，因此基质是一种高粘度溶液。在另一种情况下，基质制剂是含有2％海藻酸钠和可选的1mg/ml聚ic或0.5mg/ml咪喹莫特和可选的5mg/ml苯海拉明盐酸盐作为抗组胺剂的盐水溶液，在0.5％nacl中，ph值为7，患者可以每天或每周在舌下同时添加1或2滴这种基质和商业slit滴剂或片剂一起，来治疗过敏。在一些实施例中，基质不是持续递送系统，因此不需要基质中的粘度增强剂或胶凝剂。基质只是含有有效量的免疫抑制剂如雷帕霉素或甲氨蝶呤，或佐剂类药物如咪喹莫特或聚ic的溶液。在一些实施方案中，雷帕霉素或甲氨蝶呤或咪喹莫特或聚ic的浓度在0.1-10mg/ml之间。溶液中还可以掺入任选的透皮增强剂和溶解增强剂，例如tween-80、dmso、transcutol。在一个示例中，该溶液是1毫克/毫升雷帕霉素的1x pbs溶液和0.1％吐温80。患者可以在舌下加入1或2滴这种溶液和市售的slit滴剂或片剂同时使用来治疗过敏。在另一个示例中，该解决方案是1x pbs中的1mg/ml polyic。患者可以每天或每周在舌下添加一滴或两滴这种溶液和商业化的slit滴剂或片剂同时使用，以治疗相关的过敏症。
113、在一些实施方案中，使用含有有效量的免疫抑制剂如雷帕霉素或甲氨蝶呤，或疫苗佐剂型药物如咪喹莫特或聚ic的片剂或膜代替上述液体基质。通过将所述片剂/膜和slit滴剂或slit片剂一起置于舌下或口中，所述片剂或膜可与slit滴剂或slit片剂组合使用以治疗相关过敏。在一些实施方案中，雷帕霉素或甲氨蝶呤或咪喹莫特或聚ic的浓度在每片/膜0.05-0.5mg之间。这些片剂/膜本质上是舌下可溶解的片剂/膜。也可以将任选的透皮促进剂如吐温80、dmso、transcutol掺入片剂或膜中。在一个实例中，5mm直径的片剂包含0.25mg雷帕霉素或1mg聚ic或0.2mg咪喹莫特或0.5mg甲氨蝶呤、40％甘露醇、40％乳糖、1％甜蜜素、1％pvp k30和1％硬脂酸镁。患者可以同时使用一种这样的片剂和商业化的slit滴剂/片剂，将其置于舌下彼此靠近，每天至每周使用以治疗过敏。在一个例子中，一颗直径为3毫米的药片含有0.1毫克雷帕霉素或0.5毫克聚ic、2毫克抗组胺药、20％蔗糖、50％乳糖、25％聚乙二醇6000和1％ pvp k30。患者可以每天至每周在在舌下彼此靠近的位置同时使用一种这样的药片和商业slit滴剂/药片，来治疗过敏。该片剂还可与其他口服过敏免疫治疗药物如专利号us9271899b2和cn103025303a中描述的药物一起使用。或者，也可以将过敏原和免疫抑制剂，或过敏原和疫苗佐剂类药物组合在一个片剂中，用于slit治疗。这些片剂可以与目前使用的slit片剂基本相同，并在片剂中掺入额外的免疫抑制剂或额外的佐剂型药物。例如，一种本发明的slit片剂与oralair片剂(stallergenes)具有相同或相似的成分，并每片含有额外的0.1-0.2mg雷帕霉素或0.1-0.2mg甲氨蝶呤以治疗草花粉过敏症状。在另一个例子中，除了含有额外的每片0.1-0.2mg雷帕霉素或0.1-0.2mg甲氨蝶呤和1mg西替利嗪或1mg皮质类固醇如氟替卡松或布地奈德，本发明的slit片剂与acarizax/odactra片剂具有相同或相似的成分，以治疗过敏症状尘螨。在另一个实例中，本发明的slit片剂具有与acarizax/odactra片剂相同或相似的成分，除了含有额外的0.1-0.2mg咪喹莫特或0.1-0.2poly ic和1mg苯海拉明盐酸盐，以治疗对尘螨的过敏症状。当含有过敏原的药物是口服进入消化系统而不是舌下含服时，例如来自aimmune therapeutics的palforzia花生过敏原粉末，可以在片剂或胶囊中加入额外的免疫抑制剂或额外的佐剂类型的药剂。例如，含1-100mg脱脂花生粉和0.1-1mg雷帕霉素或0.1-1mg甲氨蝶呤或100-500mg唾液酸或聚唾液酸的肠溶胶囊或片剂可口服治疗花生过敏。
114、一方面，本发明公开了组合物和制剂，其包含在缓释(延长)释放系统(例如原位胶凝系统或植入物)或高粘度液体(例如所描述的那些)中可以产生抗药物抗体的药物和免疫抑制剂，以治疗抗药物抗体。本发明还公开了通过将所述组合物和制剂作为注射剂施用于受试者来治疗或抑制受试者中抗药物抗体产生的方法。在一些实施例中，所述制剂是通过在使用前将会产生ada(抗药物抗体)的药物，例如那些临床上使用的包括抗体的蛋白质药物，与缓释系统基质在现场混合，然后将混合物用作最终的制剂来制备。然后终制剂作为注射给予患者。所述持续释放系统基质是含有适量持续释放系统材料作为原位胶凝材料或高粘度液体和治疗有效量的先前描述的免疫抑制剂例如mtor抑制剂(例如0.1-5mg/ml雷帕霉素)的组合物/制剂或甲氨蝶呤)。
115、所述缓释系统基质中的原位胶凝材料的浓度需要足够高以在与产生ada的药物产品混合后提供所需的胶凝效果，这可以根据添加产生ada的药物引起的稀释倍数来确定。优选混合后最终注射用制剂的ph值在6-8之间且渗透压接近生理渗透压，这可以通过基于混合比例调节缓释系统基质的ph缓冲容量、ph值、渗透压。在一些实施例中，组合物/制剂是含有免疫抑制剂和适量的本发明公开的自胶凝聚合物的液体或其冻干形式，在冻干前添加可选的填充剂/冻干保护剂，所述聚合物的量需要足以与产生ada的药物混合后在体内形成凝胶。在一些实施方案中，组合物/制剂是在水或盐水中的2～20％藻酸钠和0.1-2mg/ml雷帕霉素，并且通过添加碱或酸例如naoh或hcl使ph为5-8。在一些实施方案中，组合物和制剂是在水或盐水中的2～20％藻酸钠和1-5mg/ml雷帕霉素，并且添加2m naoh或2m hcl，ph为7-8。在一些实施方案中，制剂的重量克分子渗透压浓度用生理上可接受的辅料调节以具有类似于生理条件的重量克分子渗透压浓度。在一些实施方案中，该制剂具有低重量克分子渗透压浓度和低ph缓冲能力，因此在混合在一起后不会影响会产生ada的药物制剂的重量克分子渗透压浓度和ph值，特别是对于那些可以产生ada的固体预配制药物如冻干产品，例如该制剂的渗透压和ph缓冲能力低于0.5xpbs。钙盐或其他二价阳离子盐可以以不会导致体外胶凝的低浓度掺入制剂中。例如，每1克藻酸盐可以使用2-20毫克的ca2+以有利于体内胶凝，如在制剂中加入0.05％～0.5％的葡萄糖酸钙。该制剂还可包含如前所述的胶凝增强聚合物，例如0.1～1％的ha、cmc、hpmc、卡波姆、mc、壳聚糖；10-30％泊洛沙姆或其组合。混合后，最终溶液最好含有2-6％的藻酸盐。在一些实施方案中，治疗有效量的除mtor抑制剂以外的免疫抑制剂，例如il-2、tgf-β、pd-l1、il-15、ifn-γ、il-10、il-21、il-27、il-2抗il-2抗体复合物或它们的模拟物或衍生物例如聚乙二醇化il-2nktr-358或它们的组合，可以进一步加入所述含藻酸盐的基质制剂中。在一个实例中，基质制剂是5％藻酸钠、可选的1％hpmc和0.2mg/ml雷帕霉素以及可选的200-2000iu/ml il-2/抗il-2抗体复合物，在1x pbs中，ph值为7；将其1ml与1ml humira(20mg/0.4ml的药物产品)混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗针对humira的ada或预防产生针对humira的ada。其他药物如抗体或生长激素等其他重组蛋白或病毒载体可替代humira来治疗或预防相关ada。例如，基质制剂是含有6％海藻酸钠和0.2mg/ml雷帕霉素和可选的0.1％ tween-20的ph值为7的0.5％ nacl盐水溶液，与含有适量aav病毒的药物产品(例如10^10拷贝/ml)以1:1的比例混合生成最终制剂，作为皮下或肌肉注射或淋巴内注射或以0.2-0.5ml体积注射到淋巴结附近以预防针对aav的t细胞和b细胞免疫。在一些实施方案中，在基质制剂中藻酸盐可以用30-50％ pluronicf127或泊洛沙姆407代替，并且混合后pluronic f127或泊洛沙姆407的最终浓度应大于其原位胶凝浓度(例如>17％)。在一个实例中，基质制剂是在ph值为7的水中的30％泊洛沙姆407和0.5mg/ml雷帕霉素；将其1ml与0.5ml humira混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗或预防humira ada。在一些实施例中，plga有机溶剂溶液可用作基质制剂中的原位胶凝剂，混合后最终制剂不应在体外引起胶凝但仍可在体内形成凝胶，这可通过调节plga溶液和过敏原提取物产品的比例以及plga的浓度来控制。在一个实例中，基质制剂是0.5mg/ml雷帕霉素在60％50:50丙交酯/乙交酯plga的n-甲基吡咯烷酮或dmso溶液中的。将该基质制剂1ml与0.1ml humira(40mg/0.4ml药物产品)混合，所得最终制剂可注射给患者以治疗或预防humira ada。
116、在本发明的一些实施方案中，如前所述的原位胶凝基质如果胶、藻酸盐、透明质酸和结冷胶依赖于二价或三价阳离子或聚阳离子分子存在下的胶凝形成。在一些实施方案中，低水溶性二价/三价/聚阳离子化合物(例如低水溶性二价阳离子盐，例如碳酸钙、磷酸钙、磷酸二钙、硅酸钙、caso4、znco3、baco3、baso4或它们的组合)，可在注射前加入这些类型的原位胶凝制剂中，待其仍处于低粘度状态时即可注射体内慢慢地形成凝胶。在一些实施方案中，待注射的最终载药制剂中的低水溶性钙或盐锌盐或钡盐的最终浓度在0.3-10％之间。可以缓慢释放这些阳离子如钙离子或锌离子或它们的组合的缓释制剂也被认为是低水溶性阳离子化合物，例如与水接触时可以在15分钟至1小时内释放其包封的钙离子纳米颗粒或微颗粒。因此，本发明还提供了一种治疗过敏、ada或自身免疫性疾病的试剂盒，该试剂盒包含装在不同容器中的两种独立组分，在注射前混合在一起。如果这两种组分都是固体形式(例如，两者都是干燥的，例如冻干的)，也可以将它们放在一个容器中。一种组分含有固体剂型或液体形式的低水溶性二/三价/聚阳离子化合物，可以增强第二组分的胶凝作用。第二种组分是一种可选的载药原位胶凝制剂，如前所述，或具有更高浓度原位胶凝剂和可选药物的类似制剂，这将在混合时补偿稀释因子并在它与第一组分混合后提供与先前描述的配方中的那些相同浓度的药物/胶凝剂。在一个例子中，试剂盒包含两种组分，一种是6％的碳酸钙或caso4或znco3或磷酸钙或磷酸氢钙的水悬浮液，另一种是先前可选的载药制剂，例如含有4％海藻酸钠的盐水溶液，可选的免疫抑制剂(如0.5-1mg/ml雷帕霉素或甲氨蝶呤)和可选的抗原。例如，也可以将这两种成分与抗原溶液如市售的过敏原注射剂或具有会产生ada的蛋白药物溶液以1∶1∶0.5的比例混合在一起，然后注射以治疗所述抗原相关疾病。还可以将附加的增粘聚合物如淀粉、纤维素、甲基纤维素、hpmc以合适的浓度如0.1～5％w/w并入第一组分中。或者，其中一种组分可以含有目标抗原和可选的免疫抑制剂，例如过敏原或具有会产生ada的蛋白质药物，因此仅将组分一和组分二混合用于注射。如果制剂用于过敏治疗，可以使用佐剂型试剂如1-2mg/ml poly ic或0.5-1mg/ml咪喹莫特代替免疫抑制剂。在一些实施方案中，免疫抑制剂或疾病相关抗原或两者可在组分1中，而组分2仅含有胶凝聚合物。免疫抑制剂可以在组分1或2中。抗原也可以在组分1或2中，或在市售产品中而需与含有抗原的市售产品混合。
117、在一些实施方案中，水溶性(例如在室温下溶解度>0.5％)二价/三价/多阳离子化合物(例如cacl2、葡萄糖酸钙、ca-edta、氯化锌或葡萄糖酸、氯化亚铁fecl2、葡萄糖酸亚铁、fecl3、葡萄糖酸铁、bacl2、葡萄糖酸钡、鸟氨酸或其衍生物、赖氨酸或其衍生物如赖氨酸乙酯、精氨酸或其衍生物如精氨酸乙酯、壳聚糖、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚鸟氨酸或其组合)可以在注射抗原/免疫抑制剂的原位胶凝制剂之前或之后注射到同一注射部位，以提高胶凝效果。它们也可以使用双注射器系统进行共注射。在一些实施方案中，溶液中水溶性二价/三价/聚阳离子化合物的浓度在0.2-10％之间。在一些实施方案中，溶液中水溶性钙盐的浓度在0.2-6％之间。当在注射含有原位胶凝剂的制剂之前注射时，它将以比生理钙离子浓度更高的钙离子浓度灌注注射部位，以提供更好的原位胶凝效果。因此，本发明还提供了一种治疗过敏、ada或自身免疫性疾病的试剂盒，该试剂盒包含装在不同容器中的两种独立组分，可使用双注射器系统依次注射到一个部位或共同注射到一个部位。一种组分含有水溶性二价/三价/聚阳离子化合物，可以增强第二种组分的胶凝作用，无论是固体剂型还是液体形式。第二种组分是原位胶凝制剂，如先前描述的那些，或具有更高浓度原位胶凝剂和药物的类似制剂，这将在体内与第一组分混合后补偿稀释因子并提供与先前描述制剂中相同浓度的药物/胶凝剂。在一个实例中，试剂盒包含两种组分，第一种是0.5-5％的cacl2或葡萄糖酸钙或壳聚糖或赖氨酸或精氨酸在ph值在5-8之间的水中，第二种是原位胶凝制剂，含4％海藻酸钠的盐水溶液，可选的免疫抑制剂(如0.5-1mg/ml雷帕霉素或甲氨蝶呤)和可选的抗原。还可以将附加的增粘聚合物如淀粉、纤维素、甲基纤维素、hpmc以合适的浓度如0.1～5％w/w并入第一组分中。在一个实施例中，组分1是含有0.5％hpmc、1％cacl2或2％葡萄糖酸钙或1.5％赖氨酸或1％壳聚糖的ph 7溶液，用nacl调节渗透压至接近生理值，注射到目标地点。接下来，将含有装载有抗原和免疫抑制剂的藻酸盐的溶液组分2注射到同一部位以治疗有需要的受试者。组分1也可以在注射组分2之后注射。或者，免疫抑制剂或疾病相关抗原或两者可以在组分1中并且组分2仅含有胶凝聚合物。免疫抑制剂可以在组分1或2中。抗原也可以在组分1或2中，或在市售产品中需要与含有抗原的市售产品混合。如果制剂用于过敏治疗，可以使用佐剂型试剂如1-2mg/ml poly ic或0.5-1mg/ml咪喹莫特代替免疫抑制剂。
118、组分1和2也可以放在一个注射器中注射，用生物学和药学上可接受的液体溶液作为缓冲层隔开，以防止它们在注射器内混合在一起。在一些实施例中，缓冲层液体可以是具有高粘度的液体(例如>500cps，或在其他实施例中>2000)以减少组分1和2之间的渗透和污染。例如，它可以是甘油，或ph值7含有增粘聚合物如淀粉、纤维素、甲基纤维素、hpmc、ha的溶液，浓度为0.3-3％w/w，渗透压用nacl调节至250-350mosm/kg。在一个例子中，注射器含有0.5ml的组分1和0.5ml的组分2，中间有0.3ml的缓冲液用于注射。因此，治疗过敏、ada或自身免疫性疾病的试剂盒还可以包括第三组分，即如上所述的缓冲层液体。在一些实施方案中，水溶性(例如在室温下溶解度＞0.5％)二价/三价/聚阳离子化合物的溶液也可以首先与含藻酸盐的制剂混合，然后被注射。粘度增强聚合物如淀粉、纤维素、甲基纤维素、hpmc也可以以合适的浓度如0.1-5％w/w掺入任一组分中以防止注射前胶凝。另一种减缓和控制凝胶化的方法是使用含有磷酸盐(例如，六偏磷酸钠)的缓冲液，因为缓冲液中的磷酸盐基团在与钙离子的反应中与海藻酸盐的羧酸盐基团竞争，并作为多价螯合剂延缓凝胶化。可以使用的典型多价螯合剂包括多种无机磷酸盐，例如六偏磷酸钠、焦磷酸四钠、正磷酸二钠和三聚磷酸钠。也可以使用柠檬酸钠。
119、在一些实施方案中，在将制剂施用于有需要的受试者之前，低水溶性二价阳离子盐(例如碳酸钙、磷酸钙、磷酸二钙、硅酸钙、caso 4、znco 3、baco 3、baso 4或它们的组合)或含有ca-edta的制剂可以进一步与可以从低溶解度盐或ca-edta复合物中缓慢释放这些阳离子的试剂混合，这将导致体内缓慢胶凝。这些试剂的实例可以选自d-葡糖酸-δ-内酯(gdl)、l-葡糖酸-δ-内酯、d-赤藓酸内酯、l-赤藓酸内酯、d-葡糖醛酸内酯、l-葡糖醛酸内酯、d-半乳糖酸-γ-内酯，l-半乳糖酸-γ-内酯，d-木糖酸-γ-内酯，l-木糖酸-γ-内酯，d-古洛糖酸-γ-内酯，l-古洛糖酸-γ-内酯3，d-葡糖酸-γ-内酯和l-葡萄糖酸-γ-内酯。这些内酯在水中缓慢水解释放酸，这些酸将游离的二价阳离子释放到水中引起胶凝。较高的ph值会增加水解速度，较低的ph值会降低水解速度，进而影响胶凝时间。可以相应地调节制剂的ph值(例如ph5-8)以获得所需的胶凝时间。这些试剂与二价阳离子盐的比例可以在1:5至5:1的摩尔比之间。例如，当配方中使用gdl和caco3或caco3与caso4的混合物时，它们的摩尔比(gdl：钙盐)可以为1:2或1:1或2:1。在一个例子中，将含有2％海藻酸钠的5ml载药制剂与0.1g caco3粉末混合，然后与0.05g gdl粉末混合。搅拌后，注射最终制剂以在体内形成凝胶。
120、在一个实例中，第一组方制剂是原位胶凝制剂，为含有4％海藻酸钠盐水溶液，并可选的含有免疫抑制剂(例如0.5-1mg/ml雷帕霉素或甲氨蝶呤)和适量的疾病相关抗原(例如过敏原或引起自身免疫性疾病的自身抗原或产生ada的药物)；还可以将额外的增粘聚合物如淀粉、纤维素、甲基纤维素、hpmc以合适的浓度如0.1-5％w/w并入第一组分制剂中。将5ml含有2％海藻酸钠的第一制剂与0.1g caco3粉末和0.05g gdl粉末混合。搅拌后，将最终制剂以皮下注射或肌内注射或淋巴内注射的方式注射至有需要的对象体内形成凝胶。
121、在另一个实例中，第一制剂(组分)是第一个制剂是2.5ml盐水溶液，含有4％海藻酸钠和可任选的2mg/ml poly ic或0.mg/ml雷帕霉素，第二个制剂(组分)是0.05g caco3(或znco3)、0.05g caso4和0.05g gdl(或l-古洛糖酸-γ-内酯)的干粉混合物。附加的粘度增强剂可以掺入第一或第二或两种制剂中，这将降低胶凝速度。将合适浓度的0.5mlalutard sq尘螨提取物(例如10过敏单位/ml稀释液)与第一和第二制剂混合以产生混合物，并且可以将所得最终制剂注射给患者以治疗尘螨过敏。第一种制剂也可以是干燥形式，例如冻干形式以及合适的填充剂/冻干保护剂，并且将干燥的制剂1与制剂2粉末一起放置在同一小瓶中。用户只需将alutard sq尘螨提取物溶液添加到小瓶中即可形成最终的注射剂型。在另一个例子中，第一个制剂是2.5ml盐水溶液，含有4％海藻酸钠、5mg/ml阿达木单抗和1mg/ml雷帕霉素，第二个制剂是0.05g caco3(或znco3)、0.05g caso4和0.05g gdl(或l-gulono-γ-内酯)。附加的粘度增强剂可以掺入第一或第二或两种制剂中，这将降低胶凝速度。将第一和第二制剂混合以产生混合物并且可以将所得最终制剂注射给患者以预防或治疗针对阿达木单抗的ada。第一种制剂也可以是干燥形式，例如冻干形式以及合适的填充剂/冻干保护剂，并且将干燥的制剂1与制剂2粉末一起放置在同一小瓶中。用户只需将稀释剂(例如pbs或水)添加到小瓶中即可形成最终的注射剂型。
122、本发明中的抗原/药物负载缓释制剂可以是原位胶凝制剂或基于纳米微粒/微颗粒的制剂或它们的组合。药物(例如免疫抑制剂或佐剂类药物)和抗原可以封装在纳米颗粒或微粒中作为待注射的缓释形式。在一些实施方案中，药物/抗原包封的纳米颗粒或微粒是多糖如藻酸盐基颗粒，其使用多糖如藻酸盐形成颗粒基质。例如，可以是壳聚糖-海藻酸钙凝胶纳米/微球如专利号cn1628861a中所述，或壳聚糖-海藻酸钙纳米/微球，或海藻酸钙纳米/微球如专利申请号cn107057085a中所述，或海藻酸钠-碳酸钙杂化微粒，例如专利申请号cn102286155a中描述的那些，或磷酸钙/海藻酸钙杂化微球，例如专利申请号cn101081911a中描述的那些。通过采用或修改先前出版物中描述的方案，可以使用含有抗原/药物的藻酸盐溶液轻松制备这些抗原/药物负载颗粒。
123、例如，将100mg海藻酸钠溶于10ml蒸馏水中，40℃水浴加热，加入300mg磷酸钠溶液，水浴搅拌30分钟，加入5mg雷帕霉素，50mg阿达木单抗，然后缓慢加入5ml 1％氯化钙溶液，搅拌1小时，离心，得到抗原/载药海藻酸-磷酸钙微粒，可用来抑制对阿达木单抗ada。在另一个实例中，载药藻酸盐-ca颗粒通过添加含有含药的2.0％(w/v)藻酸钠溶液(例如5mg/ml poly ic或1mg/ml咪喹莫特或1mg/ml雷帕霉素和10mg/ml的麸质或蛋清蛋白)制备，在海藻酸盐溶液中采用静电滴加法，以1％cacl2溶液为凝胶浴，剧烈搅拌得到海藻酸钙凝胶微球，然后将载有抗原/药物的海藻酸钙凝胶微球包被0.7％(w/v)壳聚糖溶液，将两者以1:10v/v的比例混合。然后离心以获得抗原/药物加载的海藻酸钙壳聚糖微粒。
124、含有过敏原的皮肤贴片，例如由dbv technologies开发的贴片，用于通过诱导对抗原(过敏原)的耐受性来治疗过敏。这类贴片可以很容易地为当前应用采用。例如，美国专利us6676961、us8932596b2和us8202533b2中描述的局部应用制剂以及那些市售贴剂(例如viaskinr milk和viaskinr peanut)可以通过在其中添加额外的免疫抑制药物(例如0.05mg-5mg的雷帕霉素或富士霉素或0.1mg-10mg甲氨蝶呤或其衍生物或前药)用于当前应用。给药方法可以与现有技术基本相同，只是贴剂含有免疫抑制剂。在美国申请号15/723,173、16/380,951、16/029,594、17/344,932、16/566,716、16/819,168和17/385,908中也描述了类似的贴片。额外的透皮增强剂(例如dmso、氮酮、脂肪酸、透明质酸等，它们以及它们的合适的量可以很容易地在出版物中找到)可以添加到贴剂中或在应用贴剂之前施加到皮肤上。可加入透皮促进剂的实例包括dmso(例如10-300mg/贴剂)、氮酮(例如总药物重量的1％-10％)、表面活性剂、脂肪酸(例如1％-10％油酸)。皮肤角质层也可以通过剥离或其他方式去除，以增强透皮递送。在一个例子中，贴剂含有500μg–10mg麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.1mg-2mg雷帕霉素或0.1mg-5mg甲氨蝶呤。例如，抗原如谷蛋白和免疫抑制剂如雷帕霉素和/或甲氨蝶呤可以是粉末形式，它们可以简单地物理混合在一起，它们也可以共溶解然后干燥然后放置在贴剂中。在另一个例子中，贴片含有5毫克麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.5毫克雷帕霉素或0.5毫克甲氨蝶呤和任选地额外的30毫克氮酮。在另一个例子中，贴片含有5毫克麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和100毫克唾液酸或唾液酸-胆固醇结合物或2毫克甲氨蝶呤。这可用于诱导麸质耐受性和治疗麸质不耐受。麸质可以用脱酰胺醇溶蛋白代替。在实施例中，贴片可以每天使用持续1-5周。在另一个例子中，抗原是花生抗原ara h2 200μg，贴片中还有0.2mg的雷帕霉素以治疗花生过敏。在一个例子中，将花生抗原ara h2 200μg、0.2mg雷帕霉素和50mg蔗糖溶解在水中，然后冻干，然后放入贴剂中。在一个例子中，将花生抗原ara h2200μg、0.5mg雷帕霉素、50mgsds和50mg蔗糖溶解在水中，然后冻干，然后放入贴剂中。在一个例子中，将花生抗原ara h2200g、0.2mg雷帕霉素、100mg dmso和50mg蔗糖溶解在水中，然后冻干，然后放入贴剂中。又如，抗原为以前申请图中治疗狼疮的双链dna(1mg～10mg)，药物为1mg的雷帕霉素或富士霉素或替西罗莫司。在另一个实例中，鼻腔喷雾剂含有适合喷雾剂形式的每次喷雾剂量为1mg谷蛋白(例如来自sigma的g5004，来自小麦的谷蛋白)和0.5mg的雷帕霉素或1mg甲氨蝶呤。在另一个例子中，舌下含片含有50毫克麸质(例如来自sigma的g5004，来自小麦的麸质)和0.1-0.5毫克雷帕霉素或0.1-0.5毫克甲氨蝶呤。在另一个例子中，凝胶剂在每1ml凝胶中含有50mg麸质例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.2mg雷帕霉素或1mg甲氨蝶呤。免疫抑制药物或免疫抑制药物和抗原可以是粉末或凝胶或半液体形式，也可以是脂质体形式(例如直径100nm-5μm)或纳米微粒/微颗粒(例如100nm-1μm)或与树枝状聚合物或线性聚合物缀合(例如通过酯键与聚丙烯酸或聚唾液酸偶联以形成基于聚合物的前药，mw＝5kd-500kd)。其他药学上可接受量的抗原和免疫抑制剂也可以用于贴片中，只要它能产生令人满意的生物学和治疗(例如免疫耐受)效果，这可以通过使用众所周知的方案和方法筛选和测试来实验确定。其他过敏原如花粉提取物、尘螨提取物、动物毛发提取物和食物过敏原如坚果/花生/牛奶/鸡蛋提取物也可替代用于上述制剂中以治疗相关过敏。这些过敏原的浓度的例子可以在0.1毫克到1毫克/贴片之间，只要有需要的受试者可以耐受。在治疗过程中，当患者的耐受性增加时，制剂中过敏原的浓度会增加，这是过敏免疫治疗的标准做法。
125、药学上可接受量的引起过敏的抗原和免疫活性增强剂可用于贴片中，而不是在贴片中使用抗原和免疫抑制剂。在一些实施例中，该方法是使用包含过敏原或其片段和先前描述的免疫增强剂(例如咪喹莫特或聚ic)的混合物的贴剂。它还可以含有抗过敏药物，如抗组胺药、皮质类固醇、肥大细胞稳定剂和白三烯抑制剂。引起过敏的抗原和免疫活性增强剂的混合物可以是物理混合物。物理混合物是指抗原和免疫活性增强剂的混合物以其原始形式(例如液体或固体形式，如粉末或颗粒)简单地机械混合(例如通过搅拌或混合)在一起，而无需任何额外的过程(例如通过混合它们以其原始形式在一起)，或在机械混合(例如粉碎、研磨、研磨或均质化)后应用进一步的尺寸减小过程，或分别分散或溶解在相同或不同类型的液体中，然后混合，或共分散在液体中，或共溶解在溶剂(例如水)中，并且可选的干燥过程(例如喷雾干燥或冻干)可以与可选的进一步尺寸减小过程一起应用。
126、例如，美国专利us6676961、us8932596b2和us8202533b2中描述的局部应用制剂或市售贴片(例如viaskinr milk和viaskinr peanut，通过在其中添加额外的免疫增强药物(例如0.1mg-20mg的咪喹莫特或poly ic或其衍生物或前体药物)可用于当前应用。给药方法可以与现有技术基本相同，只是贴剂含有免疫活性增强剂。额外的透皮增强剂，如前面描述的那些，可以添加到贴剂中或在应用贴剂之前应用到皮肤上。可加入透皮促进剂的实例包括dmso(例如10-300mg/贴剂)、氮酮(例如总药物重量的1％-10％)、表面活性剂、脂肪酸(例如1％-10％油酸)。在一个例子中，贴片包含500μg-10mg麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.05mg-5mg-咪喹莫特或0.05mg-5mg r848。例如，引起过敏的抗原如麸质和免疫活性增强剂如咪喹莫特和/或poly ic可以是粉末形式，可以将它们简单地物理混合在一起，也可以将它们共溶解，然后干燥，然后放入贴剂。例如，将10mg麸质粉和0.25mg咪喹莫特粉混合，然后用研磨机搅匀，然后涂在5×5cm2皮肤贴剂的皮肤接触面表面。在另一个例子中，将10mg麸质和10mg聚ic在含有30mg蔗糖的10ml水中剧烈混合10分钟，然后冻干，然后将干燥的混合物涂在5x5cm2皮肤接触面的贴剂表面。又如，将10mg麸质、5mg sting激动剂mk-1454和5mg cpg odn溶解于5ml 25％ etoh水溶液中，然后真空干燥，然后将干燥混合物置于皮肤接触面3x3cm2皮肤贴片的一侧。在另一个例子中，将10mg麸质和0.5mg咪喹莫特溶解在5ml1％sds水溶液中，然后真空干燥，然后将干燥的混合物放置到3x2cm2皮肤贴剂的皮肤接触面的表面。在另一个例子中，10x10cm2贴片含有5毫克麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.5毫克咪喹莫特或0.1毫克3m-052和任选地额外的30毫克氮酮。在另一个例子中，贴剂含有5毫克麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和100克唾液酸或唾液酸-胆固醇结合物和1毫克聚ic。这可用于诱导麸质耐受性和治疗麸质不耐受。麸质可以用醇溶蛋白代替。在实施例中，可将含有谷蛋白或麦醇溶蛋白的贴剂每天施用至前臂，每天8小时，持续1-5周。上述例子中的麸质可以用蛋清蛋白代替，例如5-10mg卵类粘蛋白(gal d 1)或5-10mg卵清蛋白(gal d 2)或它们与可选的5-10mg卵转铁蛋白(gal d 3)以及和5-10毫克溶菌酶(gal d 4)的组合来治疗蛋清过敏。在另一个例子中，抗原是花生抗原ara h2 200μg，贴片中含有0.5mg咪喹莫特以治疗花生过敏。在一个例子中，将花生抗原ara h2 200μg、0.2mg咪喹莫特和50mg蔗糖溶解在水中，然后冻干，然后放入贴剂中。在一个例子中，将花生抗原ara h2 200μg、0.2mg咪喹莫特、50mg sds和50mg蔗糖溶解在水中，然后冻干，然后放置在5x5cm2的贴剂中。在一个例子中，将花生抗原ara h2 200μg、0.2mg咪喹莫特、100mg dmso和50mg蔗糖溶解在水中，然后冻干，然后放入贴剂中。在另一个实例中，鼻腔喷雾剂或滴鼻剂每次喷雾或每3滴含有1mg麸质(例如来自sigma的g5004，来自小麦的麸质)和0.05mg咪喹莫特或0.5mg polyic为合适的形式，粘度增强剂可以添加，例如透明质酸或卡波姆。在另一个例子中，舌下含片含有50毫克麸质(例如来自sigma的g5004，来自小麦的麸质)和0.1毫克咪喹莫特或2毫克聚ic。在另一个例子中，凝胶剂在每1ml凝胶中含有50mg麸质(例如来自小麦的g5004麸质，sigma)和0.2mg咪喹莫特或2mg聚ic。免疫活性增强剂药物或免疫活性增强剂药物和过敏原可以是粉末或凝胶或半液体的形式，也可以是脂质体(例如100nm～5μm直径)的形式，也可以是纳米颗粒/微粒(如100nm-1μm)或与树枝状聚合物或线性聚合物偶联(如通过酯键偶联聚丙烯酸或聚唾液酸以形成mw＝5kd-500kd的基于聚合物的前药)。
127、在一些实施方案中，局部制剂每个贴片或每毫升凝胶或乳液或液体中含有0.1-10mg过敏原、0.01-5mg tlr7/8配体(例如咪喹莫特或加地喹莫特或resiquimod)、0.1-5mgtlr3/rlr配体(例如dsrna，例如polyic或polyiclc)、0.1-5mg的tlr9配体(例如cpg odn，例如odn 1826或odn 2216)。也可加入透皮促进剂，如dmso、氮酮(如1％～10％)、表面活性剂、脂肪酸(如1％～10％油酸)。在一个例子中，制剂包含5mg/ml麸质、0.5mg/ml咪喹莫特、1mg/ml聚ic、1mg/ml a类cpg odn 2216、20mg/ml sds和5％蔗糖于1x pbs溶液中，然后被冻干.冻干粉末可用于制备皮肤贴剂，并以10-500mg粉末/贴剂贴在皮肤上。在另一个实例中，将10-100mg蛋清粉、0.1-0.5mg咪喹莫特、1-5mg聚ic和5-50mg氮酮混合在一起并添加到viaskin类皮肤贴剂中。可以每周2次涂在皮肤上，连续2周，每次2天，1个月和3个月后再涂2天作为加强剂，以产生蛋清耐受性。在另一个例子中，将10mg花生蛋白、0.5mg咪喹莫特、2mg聚ic和100mg dmso混合在一起并添加到viaskin类贴剂中。可每周涂于皮肤2次，连续2周，每次1次，1个月、3个月后连续涂2天，以产生花生耐受性。在一些实施方案中，局部制剂在每ml凝胶或洗剂或液体中含有0.1-100mg抗原、0.05-5mg tlr激动剂；也可加入透皮促进剂，如dmso、氮酮(如1％-10％)、表面活性剂、脂肪酸(如1％-10％油酸)。
128、该制剂还可以是口服制剂，例如含有过敏原和免疫增强剂的混合物的片剂或胶囊。它可以与aimmune的口服制剂(例如其用于花生过敏的ar101)所使用的相同，只是额外添加了所述免疫增强剂。也可以类似于上述那些掺入粘度增强剂。它还可以包含治疗有效量(例如临床上使用的剂量)的抗过敏药物，例如上述抗组胺药、皮质类固醇、肥大细胞稳定剂和白三烯抑制剂。添加这些抗过敏药物可以防止患者因将过敏原给予患者而引起的过敏反应。在一个实施方案中，制剂是含有1mg-100mg花生蛋白、1-10mg咪喹莫特、10mg卡波姆940和10mg西替利嗪的肠溶胶囊。在后期处理中，花生蛋白用量与ar101相同。在一些实施方案中，免疫增强剂可以用硅酸或聚唾液酸或唾液酸聚合物或siglec配体或其衍生物(例如50～500mg/胶囊)替代。
129、在一些实施例中，将制剂施用于口腔粘膜。它可以是栓剂、锭剂、片剂、膜剂，用于舌下给药和口腔粘膜给药。目前用于过敏原(例如花粉提取物、尘螨提取物)的舌下递送和口腔粘膜递送的制剂可以与添加到制剂中的额外免疫活性增强剂一起使用。也可以如上所述掺入粘度增强剂和/或粘膜附着剂。它还可以包含治疗有效量(例如临床上使用的剂量)的抗过敏药物，例如上述抗组胺药、皮质类固醇、肥大细胞稳定剂和白三烯抑制剂。它也可以是一种不可生物降解的容器(例如用塑料或金属制成的片剂)，带有小孔，一旦放入口中，封闭的过敏原/药物就会释放到口腔粘膜，而不是口服可溶片剂/锭剂形式。可以将可以防止制剂被吞咽的装置结合到递送系统中，例如绳子、带子、棍子或牙齿固定器。当显示出严重的过敏反应时，这将允许制剂很容易地从口中去除。例如，它可以是棒棒糖的形式，锭剂中含有过敏原和其他药物。在一个实施方案中，制剂是粘膜粘附片剂，其含有1mg-100mg花生蛋白、0.1-1mg咪喹莫特或聚ic和3mg西替利嗪，其具有以棒棒糖形式附着的木柄。
130、对于透皮/透粘膜递送或植入型制剂或口服制剂或持续释放制剂，引起过敏的抗原的初始量和免疫活性增强剂的量可以在0.1-100mg之间。当使用注射剂或非缓释口服剂型时，过敏原的起始量可在50μg-5mg之间，免疫活性增强剂的量可在0.05-5mg之间。
131、制剂/组合物可以在后期包含增加剂量的过敏原，类似于当前使用过敏原的治疗方案(口服或局部或注射)所使用的给药方案。也就是说，治疗涉及一系列的制剂，第一个制剂含有最低量的过敏原，并且在后面的制剂中随着时间的推移逐渐增加剂量，而其他药物(例如免疫增强剂)的量可以不变。第一制剂中的过敏原量可以是患者可以耐受而不引起严重过敏原反应的最高过敏原量。在一个例子中，患者开始服用含有0.1mg蛋清粉和0.2-2mg咪喹莫特的第一单剂量口腔粘膜片剂，在初始剂量后，每30分钟受试者接受大约两倍剂量的蛋清，但咪喹莫特的量相同，直到确定最高耐受单次剂量如以前申请中表1所示。基于最高耐受单次剂量，受试者开始每天使用含有该剂量蛋清粉和0.2-2毫克咪喹莫特的制剂，每天1剂，持续2周。只要受试者耐受当前剂量，配方中含有5mg咪喹莫特的蛋清粉量每2周增加25mg，直至达到150mg，然后每2增加50mg，直至达到300mg。一旦受试者达到300毫克的日剂量，他们将被指示服用不含咪喹莫特的日剂量2年。
132、本发明还公开了一种自体免疫细胞治疗方法，用于治疗自身免疫性疾病、过敏、抑制抗药抗体产生或诱导抗原特异性免疫耐受。它包括以下步骤：从有需要的受试者中收集和分离自体免疫细胞，用疾病相关抗原和免疫抑制剂刺激以在体外扩增抗原特异性调节性免疫细胞和/或抑制性免疫细胞，包括致耐受性dc细胞，以达到所需数量靶细胞，然后将扩增的自体免疫细胞回输给受试者以获得所需的治疗效果。从受试者收集和分离的自体免疫细胞的来源可以是来自所述受试者的骨髓或淋巴结提取物或血液或血液级分或其组合。在一些实施例中，可以用血细胞分离器和/或白细胞分离术将淋巴细胞从有需要的受试者的血液中分离出来。例如，从患者身上抽取200ml血液，在这200ml血液上使用血细胞分离器收集淋巴细胞。从血液中收集淋巴细胞的程序是本领域技术人员众所周知的。它可以使用商业血细胞分离器进行。产生的淋巴细胞包含b细胞和t细胞，可能还有其他白细胞。任选地，可以进一步去除b细胞，例如使用细胞分选仪，例如facs或涂有b细胞表面标记特异性抗体的磁性颗粒，有许多商业试剂盒和仪器可用于此目的，并且该过程是本领域技术人员熟知的艺术。然而，在其他实施例中，希望b细胞留下来以将它们转化为breg细胞。在本发明中，可以抑制免疫功能的抑制性免疫细胞被认为是调节性免疫细胞，因此调节性免疫细胞包括抗原特异性调节性免疫细胞和非抗原特异性抑制性免疫细胞。
133、在一些实施例中，收集的免疫细胞包含dc细胞、t细胞和b细胞。在一些实施方案中，收集的免疫细胞包含dc细胞和t细胞但不含b细胞。在一些实施方案中，收集的免疫细胞包含dc细胞并且不含t细胞/b细胞。
134、培养基含有疾病相关抗原和免疫抑制剂(例如雷帕霉素、il-10、il-2/抗il-2mab、pd-l1，其可在本发明人的美国申请16/566,716中找到)。优选地，抗原是天然形式的抗原或其肽片段而不是mhc结合复合物形式。例如，它可以是尘螨提取物或花粉提取物或食物过敏原(如花生蛋白、谷蛋白)来治疗相关过敏。也可是作为治疗相关ada的蛋白药物。它也可以是治疗狼疮的双链dna。也可以是自身免疫性疾病(如ppi、igrp、gad、胰岛细胞自身抗原2、胰岛素、胰岛素受体治疗糖尿病；胶原蛋白治疗类风湿性关节炎)抗原蛋白以治疗相关的疾病。细胞培养方案可以很容易地从先前的美国申请16/566,716和众所周知的出版物中采用。例如，dc细胞体外培养治疗癌症的程序已经很成熟，可以采用与疾病相关的自身抗原代替肿瘤抗原，并在培养基中加入耐受性免疫细胞诱导免疫抑制剂的类似程序和方案。也可在培养基中加入tlr激动剂刺激24小时以上，诱导dc细胞衰竭。
135、例如，培养基中抗原(例如花生蛋白或ii型胶原蛋白)的浓度可以在0.1μg/ml至10mg/ml之间。在一个例子中，从受试者收集的dc细胞在完全培养基中培养，该培养基由10％热灭活胎牛血清(biosource international)、非必需氨基酸、0.5mm丙酮酸钠、5mmhepes、1mm glutamax i组成(全部来自invitrogen)，在dmem基质中以50μg/ml的麸质作为抗原。每天监测培养物，并通过用完全培养基稀释8-12天或直到获得所需数量的靶细胞来维持在0.7-1×106/ml。培养基中包含200-2000iu/ml il-2/抗il-2mab(例如doi：10.4049/jimmunol.1402540中描述的那些)。培养基中还包含2-20ng/ml雷帕霉素。或者，可以使用同种异体细胞代替。来自健康供体的dc细胞以相同的方式培养，然后转移到有需要的受试者身上。
136、本文所述的化合物和组合物(例如本发明中公开的组合物、缀合物、聚合物和纳米微粒/微颗粒)可以与作为药学上可接受的辅料、载体一起配制的药物或药剂来施用。本发明的药物组合物可以配制成用于肠胃外给药的溶液或冻干粉。粉末可以通过在使用前加入合适的稀释剂或其他药学上可接受的载体来重构。液体制剂可以是缓冲的、等渗的水溶液。粉末也可以干燥形式喷洒。合适的稀释剂的例子是等渗生理盐水、标准的5％葡萄糖水溶液或缓冲的醋酸钠或醋酸铵溶液。如本文所用，术语“药学上可接受的辅料、载体”是指药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊材料，涉及携带或运输任何补充剂或组合物或组分其从身体的一部分到身体的另一部分，或将药剂递送到所需组织或与所需组织相邻的组织。可以使用本领域普通技术人员已知的药学上可接受的载体，包括水或盐水。如本领域已知的，组分以及它们的相对量由预期用途和递送方法决定。可以选择组合物中使用的稀释剂或载体，使得它们不会降低组合物的预期效果。合适的组合物的例子包括水溶液，例如盐水溶液、5％葡萄糖。可以使用其他众所周知的药学上可接受的液体载体，例如醇类、乙二醇类、酯类和酰胺类。在某些实施方案中，该组合物还包含一种或多种辅料，例如但不限于离子强度调节剂、溶解增强剂、糖类例如甘露醇或山梨糖醇、ph缓冲剂、表面活性剂、稳定聚合物、防腐剂和/或助溶剂。在某些实施方案中，聚合材料用作药学上可接受的载体。本文所述的聚合材料可包括天然或非天然聚合物，例如糖、肽、蛋白质、层粘连蛋白、胶原蛋白、透明质酸、离子和非离子水溶性聚合物；丙烯酸聚合物；聚环氧乙烷、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、聚乙烯醇等亲水性聚合物；羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素、醚化纤维素等纤维素系高分子及纤维素系高分子衍生物。聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、乳酸和乙醇酸的共聚物，或其他天然和合成的聚合试剂。在某些实施例中，本文提供的组合物可配制成薄膜、凝胶、泡沫或其他剂型。合适的离子强度调节剂包括例如甘油、丙二醇、甘露醇、葡萄糖、右旋糖、山梨糖醇、氯化钠、氯化钾和其他电解质。适用于本文组合物的ph缓冲剂包括例如乙酸盐、硼酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐缓冲剂，以及盐酸、氢氧化钠、氧化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢盐、氨、碳酸、盐酸酸、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸、磷酸氢二钠、硼砂、硼酸、氢氧化钠、二乙基巴比妥酸和蛋白质，以及各种生物缓冲剂，例如，taps、bicine、tris、tricine、hepes，tes、mops、pipes、二甲胂酸盐或mes。在某些实施方案中，添加ph调节剂(例如hcl、hepo4、naoh)和/或ph缓冲系统(例如磷酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠、硼酸钠或硼酸)以维持ph在以下范围内：从约ph 4至约ph 8，或约ph 5至约ph 8，或约ph 6至约ph 8，或约ph 7至约ph8。
137、如本文所用，短语“有效量”是指足以提供足够高的浓度以赋予其接受者有益效果的剂量。任何特定受试者的具体治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症、病症的严重程度、特定化合物的活性、给药途径、化合物的清除率、治疗持续时间、与化合物联合使用或同时使用的药物、受试者的年龄、体重、性别、饮食和一般健康状况，以及医学和科学中众所周知的类似因素。在确定“治疗有效量”时考虑的各种一般考虑是本领域技术人员已知的并且被描述。确切的制剂、给药途径和剂量可由个体医师根据患者的情况来选择。
138、在本技术中，“/”表示“和”和/或“或”和/或其组合。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。本说明书中提及的所有专利和出版物均代表了本发明所属领域技术人员的水平。所有专利和出版物均以引用方式并入本文，其程度如同每个单独的出版物都被具体且单独地指明以引用方式并入。上述发明涉及许多众所周知的化学、仪器、方法和技能。技术人员可以容易地从诸如化学教科书、科学期刊论文和其他众所周知的参考资源的教科书中找到相应知识。