一种望春花花提取物及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及植物成分的提取技术领域，特别是涉及一种望春花花提取物及其制备方法和应用，尤其是涉及一种高木兰脂素含量的望春花花提取物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.望春花的花又名辛夷，为木兰科植物望春花magnolia biondii pamp.的干燥花。具有散风寒，通鼻窍的作用。用于风寒头痛，鼻塞流涕，鼻鼽，鼻渊。木兰脂素为其主要成分，属于木脂素类化合物，具有抗过敏，抗炎，降压，抑菌的作用。在护肤领域具有舒缓皮肤等作用。
3.望春花的花苞片内表面和花被片表面存在大量棕色至黑色的色素，内部花蕊部分存在大量气味浓烈的挥发油，在提取加工过程中，色素和挥发油一直伴随整个过程，且与目标成分木兰脂素理化性质接近，较难有效分离。而且色素和挥发油还会导致最终产品颜色深、气味重的问题。高纯度木兰脂素，现有技术多采用吸附材料活性炭、氧化铝吸附去除色素，结合有机溶剂进行制备。如专利文献cn201811078087.9中记载了一种木兰脂素的制备方法，其采用的是以活性炭脱色，再以乙酸乙酯溶解重结晶进行精制。专利文献cn201010263092.4中记载了一种木兰脂素的制备方法，其采用甲醇提取，石油醚-乙酸乙酯萃取，结合氧化铝柱分离，乙酸乙酯结晶物低温真空干燥，得木兰脂素(其最优实施例的木兰脂素富集率也仅为30％，望春花的花中木兰脂素含量按照通常含量2.4％-3.5％下限评估)。但这些方法都要用到有机溶剂乙酸乙酯和石油醚，有溶剂残留风险，且直接用活性炭吸附色素，木兰脂素也会损失很多。
4.再有就是采用新型提取分离技术，如专利文献cn201210115360.7中记载了一种从辛夷中制备木兰脂素的方法，采用的是超临界萃取和大孔树脂梯度吸附解吸富集到的木兰脂素，随后在采用逆流色谱分离精制(其最优实施例的木兰脂素富集率仅为7％，望春花药材木兰脂素含量按照通常含量2.4％-3.5％下限评估)。专利文献cn201210131000.6中记载了一种辛夷中木脂素类化合物、制备方法及应用，采用的是硅胶柱色谱和液相色谱分离方法。然而这些方法工艺复杂，设备要求较高，成本高得率低。
5.此外，康新宇等在“辛夷中三种木脂素的分离与富集工艺研究”中公开了采用大孔树脂方法分离与富集辛夷三种木脂素素类化合物(包含木兰脂素)的方法。专利文献cn200810014451.5中记载了辛夷不同提取部位制剂制备方法及用途，具体记载了制备辛夷不同提取部位包括挥发油部分、水溶性部分和醇溶性部分，用于滴鼻剂、洗剂、搽剂、喷剂、膜剂、凝胶剂、巴布剂等。但这些望春花花提取物方法没有单独以木兰脂素为主要富集成分，更多应用于生物医药领域，且没有在富集木兰脂素的同时去除色素、挥发油的步骤要求。
6.因此提供一种简便有效的制备工艺，兼顾木兰脂素含量，以及色素、挥发油杂质的去除、更适合于化妆品配方应用的望春花花提取物及其制备方法具有重要意义。
7.目前市面上望春花花提取物更多的是其它行业领域应用，仅有少量望春花花提取
物被借鉴应用于化妆品领域，但这些提取物存在含量低、颜色杂质多、气味浓等质量问题，限制了其在化妆品领域更好的应用。


技术实现要素：

8.针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种望春花花提取物及其制备方法和应用，其提取得到的望春花花提取物中木兰脂素富集效率高、含量高、颜色杂质少、气味淡、无有机溶剂残留，更适合用于化妆品中，具有广阔的应用前景。
9.本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
10.本发明提供了一种望春花花提取物，木兰脂素含量大于等于70％。本发明中所述的含量指的是通过hplc峰面积归一化法计算得到的木兰脂素含量。
11.本发明制得的望春花花提取物的色度浅(10mg/ml的望春花花提取物-醇溶液的lab色度，pt-co值小于100)、气味浅(1％添加量下无明显特征性气味)，适合于化妆品应用。
12.本发明还提供了一种望春花花提取物的制备方法，包括以下步骤：
13.s1、将望春花的花粉碎后用溶剂进行提取，所得提取液过滤后加水稀释，静置，然后离心收集沉淀a；
14.s2、将沉淀a分散于碱性醇溶液中，然后进行碱解，调整醇浓度后，再添加表面活性剂后搅拌，然后离心收集沉淀b；
15.s3、将沉淀b用第二醇溶液复溶，然后调酸，再加入吸附材料进行吸附，然后过滤、回收溶剂，即得望春花花提取物。
16.优选地，步骤s1中，所述溶剂为醇，具体选自乙醇、丙二醇(如1,3-丙二醇)、丁二醇(如1,3-丁二醇)中的至少一种；更优选溶剂为乙醇；
17.所述溶剂的体积百分含量为40％-100％；
18.所述望春花的花与溶剂的料液比为1:6-1:10；
19.所述提取的条件为：在70-90℃下提取2-3h；
20.所述加水稀释的方法为：向滤液中加水至醇的体积百分含量小于10％。
21.优选地，步骤s1中，所述提取方法还包括将提取后的望春花的花进行第二次提取的步骤，两次提取液合并后进行后续的静置；
22.所述第二次提取采用的溶剂与第一次提取采用的溶剂相同，望春花的花与溶剂的料液比为1:4-1:6，提取的条件为在70-90℃下提取1-2h。
23.优选地，所述溶剂为乙醇时，采用体积百分含量为40％-100％的乙醇，具体可以是40％、50％、60％、70％、80％或100％的乙醇；采用的提取温度为70℃。
24.所述溶剂为丙二醇和/或丁二醇时，采用体积百分含量为40％-60％的丙二醇和/或丁二醇，具体可以是40％、50％、60％的丙二醇和/或丁二醇；采用的提取温度为90℃。
25.更优选地，加水稀释后还包括加盐盐析的步骤；
26.所述加盐盐析的步骤，采用的盐为nacl，其添加量为液体质量的5％-10％；通过加盐盐析作用可分离并去除滤液中一部分的挥发油。
27.优选地，步骤s1中，所述静置的条件为在2-8℃下静置3-5小时。
28.本发明的步骤s1通过简单易行的醇提水沉操作可高效率富集到木兰脂素成分(该步骤木兰脂素的富集率可达85％以上，富集率＝实际得到成分量/植物中成分量*100％)。
发明人在前期的实验中发现，木兰脂素在高浓度醇溶剂中溶解度高(如40％乙醇的木兰脂素溶解浓度大于5mg/ml)，而在低浓度醇或水中溶解性极小(纯水中木兰脂素的溶解浓度仅约0.065mg/ml)。
29.优选地，步骤s2中，所述碱性醇溶液中，采用的醇溶液为体积百分含量25％-40％的乙醇溶液，碱性醇溶液的ph值为8-10。若醇的体积百分含量过高将使后续调整醇体积百分含量时用的水更多，从而导致木兰脂素得率降低。
30.调节醇溶液为碱性采用的碱选自精氨酸，三乙醇胺，氢氧化钠，氢氧化钾中的至少一种；
31.所述碱性醇溶液的体积为沉淀a重量的4-5倍。
32.优选地，步骤s2中，所述碱解的具体步骤为：将沉淀a分散于碱性醇溶液后的混合液在55-65℃下水浴加热0.5-1.5h；通过碱解后的望春花粗提物中的色素杂质的溶解性会改善，从而加大了色素和木兰脂素的溶解性差异，更利于其被洗涤去除；同时在同等条件下去除色素过程中还可以减少表面活性剂的用量，以及其溶液环境可以降低醇浓度。
33.所述的调整醇浓度至体积百分含量20％以下，更优选调整醇浓度至体积百分含量10％以下。由于色素杂质去除程度和目标成分(木兰脂素)的得率受醇比例影响较大，发明人在前期的实验中发现，调整至醇浓度为体积百分含量20％以下时，可使在后续洗涤色素杂质的过程中木兰脂素损失率较小。而在更优选的醇浓度范围在体积百分含量10％以下时，可获得更多的望春花花提取物，使木兰脂素的富集率显著提高。
34.优选地，步骤s2中，所述表面活性剂为非离子表面活性剂，表面活性剂的添加比例为沉淀a质量的1.0％-5.0％；
35.所述非离子表面活性剂选自吐温-20、吐温-40、泊洛沙姆中的至少一种。
36.望春花的花色素杂质组成比较复杂，第一步醇提水沉过程仅少量的水溶性色素可以被水洗掉，而其余大部分色素需要高浓度的醇才可以洗涤去除；但是提高洗涤醇的浓度，却会导致木兰脂素成分损失严重，无法实现色素和目标成分的有效分离。
37.本发明通过大量的实验研究后发现，在步骤s2中特定采用将沉淀a(望春花花粗提物)进行碱解处理并调节其醇浓度为体积百分含量10％以下，在低浓度醇溶液和非离子表面活性剂增溶的作用下，可使沉淀a中大部分棕色至黑色色素杂质可以被洗涤去除，由此在木兰脂素的损失相对较少的情况下，大大改善了提取物的脱色效果，从而实现了色素和目标成分的有效分离。
38.优选地，步骤s3中，所述醇溶液为体积百分含量50％-70％的乙醇溶液。如果醇的体积百分含量过小，后续进行活性炭吸附处理时会导致木兰脂素的损失过多；如果醇的体积百分含量过高，则聚酰胺吸附除杂的效果会降低。
39.所述调酸采用的酸选自柠檬酸、苹果酸、盐酸、硫酸、磷酸中的至少一种，调节至溶液的ph值为4.5-6.5。
40.优选地，步骤s3中，所述吸附材料选自活性炭、聚酰胺中的至少一种。
41.更优选地，所述吸附材料为聚酰胺和活性炭；吸附的具体步骤为：先加入聚酰胺进行搅拌后过滤，所得滤液再加入活性炭搅拌后过滤。本发明在前期的实验中发现，若仅采用聚酰胺进行吸附，会使望春花花提取物的颜色偏深；若仅采用活性炭进行吸附，会导致望春花花提取物酚类杂质含量较高，产品的稳定性较差。
42.更优选地，所述聚酰胺的加入量为溶液质量的2％-5％，活性炭的加入量为滤液质量的0.05％-0.2％。
43.本发明的步骤s3中，通过采用吸附材料进一步进行脱色精制，可除去剩余的酚类色素物质和其他剩余色素杂质；且经过步骤s2的处理后，本步骤中采用的活性炭用量可以极大的降低，从而使木兰脂素的损失率很低。
44.本发明还提供了一种望春花花提取物在化妆品中的应用，所述望春花花提取物的添加量为0.01-1％。
45.与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
46.1、本发明采用醇提水沉的方法，简便快捷地提取富集到望春花中木兰脂素成分，再进一步通过碱降解处理，根据降解后的色素性质，调节溶剂环境，实现色素杂质和木兰脂素的分离，结合吸附材料进一步脱色精制，到达分离纯化的目的。
47.2、本发明的提取工艺简单、提取得率较高，有效成分木兰脂素的富集效率高，成本低。
48.3、与现有技术比，本发明制备的高含量木兰脂素的望春花花提取物，木兰脂素得率高(含量70％以上、富集率50％以上)，颜色浅，特征性气味浅，且无有机溶剂残留问题，本方法所制备望春花花提取物可更好地满足化妆品配方应用，具有非常好的应用前景。
具体实施方式
49.下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
50.本发明对实验中所使用的中药原料为本公司提供和/或市面采购产品。以下实施例中采用的不同百分含量的醇均指醇的体积百分含量。
51.实施例1
52.本实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，包括以下步骤：
53.步骤(一)：1kg望春花的花粉碎，加8倍重量的40％乙醇，70℃提取1.5小时，过滤，收集滤液，提取后的望春花的花再加5倍量40％乙醇，70℃提取1小时，过滤，合并两次提取滤液。向滤液中加水至醇的浓度为7％；加液体质量5％的nacl，搅拌使其溶解，4℃静置4小时，离心，收集沉淀a。
54.步骤(二)：将上述沉淀a，分散于4倍重量的用氢氧化钠调节ph为8.5的30％乙醇溶液中，60℃水浴加热1h,补去离子水，调整乙醇浓度为5％，然后添加沉淀a质量的5.0％的吐温-20(济南鸿程化工有限公司)，搅拌10min，4℃静置4小时，5000r/min离心，弃去上清液，加3倍量去离子水洗涤沉淀，离心，收集沉淀b。
55.步骤(三)：将上述沉淀b，用5倍量50％乙醇复溶，柠檬酸调节ph值至4.5，加入溶液质量5％的聚酰胺，搅拌0.5小时，过滤，收集滤液c。滤液c中加入滤液c质量0.2％的活性炭，50℃搅拌0.5小时，过滤除去活性炭，收集滤液，回收溶剂，干燥后得望春花花提取物28.57g，hplc测定其中木兰脂素含量为71.2％，木兰脂素的富集率为67.0％(富集率＝实际得到木兰树脂含量/望春花药材中木兰脂素含量*100％)。本实施例制备的望春花花提取物
的色泽浅，气味浅，配方1％添加量无明显特征性气味。
56.实施例2
57.本实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，包括以下步骤：
58.步骤(一)：1kg望春花的花粉碎，加7倍重量的100％乙醇，70℃提取1.5小时，过滤，收集滤液，提取后的望春花的花再加6倍量100％乙醇，70℃提取1小时，过滤，合并两次提取滤液。加水稀释至醇的浓度为9％，加液体质量7％的nacl，搅拌溶解后，2℃静置5小时，离心，收集沉淀a。
59.步骤(二)：将上述沉淀a，分散溶解于5倍体积的用氢氧化钾调节ph为8的25％乙醇溶液中，55℃水浴加热1.5h，补去离子水，调整乙醇浓度至5％，然后添加沉淀a质量的1.0％的吐温-40(济南鸿程化工有限公司)，搅拌10min，4℃静置4小时，5000r/min离心，弃去上清液，加5倍量去离子水洗涤沉淀，离心，收集沉淀b。
60.步骤(三)：将上述沉淀b，用6倍量50％乙醇复溶，柠檬酸调节ph值至6.5，加入溶液质量3％的聚酰胺，搅拌0.5小时，过滤，收集滤液c。滤液c中加入滤液c质量0.05％的活性炭，50℃搅拌0.5小时，过滤除去活性炭，收集滤液，回收溶剂，干燥后得望春花花提取物29.6g，hplc测定其中木兰脂素含量为70.5％，木兰脂素的富集率为68.7％。
61.实施例3
62.本实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，包括以下步骤：
63.步骤(一)：1kg望春花的花粉碎，加10倍重量的60％乙醇，70℃提取1.5小时，过滤，收集滤液，提取后的望春花的花再加8倍量60％乙醇，70℃提取1小时，过滤，合并两次提取滤液。加水至乙醇的浓度为6％；再加液体质量10％的nacl，搅拌溶解后，8℃静置3小时，离心，收集沉淀a。
64.步骤(二)：将上述沉淀a，分散溶解于5倍体积的用三乙醇胺调节ph为8的40％乙醇溶液中，65℃水浴加热45min，补去离子水，调整乙醇浓度至9％，然后添加沉淀a质量的3.0％的伯洛沙姆-188(西安天正药用辅料有限公司)，搅拌10min，4℃静置4小时，5000r/min离心，弃去上清液，加5倍量去离子水洗涤沉淀，离心，收集沉淀b。
65.步骤(三)：将上述沉淀b，用5倍量60％乙醇复溶，柠檬酸调节ph值至5.5，加入溶液质量2％的聚酰胺，搅拌0.5小时，过滤，收集滤液c。滤液c中加入滤液c质量0.1％的活性炭，50℃搅拌0.5小时，过滤除去活性炭，收集滤液，回收溶剂，干燥后得望春花花提取物27.6g，hplc测定其中木兰脂素含量为71.1％，木兰脂素的富集率为64.6％。
66.实施例4
67.本实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，包括以下步骤：
68.步骤(一)：1kg望春花的花粉碎，加8倍重量的40％1,3-丙二醇，90℃提取1.5小时，过滤，收集滤液，提取后的望春花的花再加5倍量40％1,3-丙二醇，90℃提取1小时，过滤，合并两次提取滤液，加水调整醇浓度为5％，4℃静置4小时，离心，收集沉淀a。
69.步骤(二)：将上述沉淀a，分散溶解于4倍体积的用氢氧化钠调节ph为8.5的25％乙醇溶液中，60℃水浴加热1h，补去离子水，调整乙醇浓度为5％，然后添加沉淀a质量的5.0％的吐温-20，搅拌10min，5000r/min离心，弃去上清液，加3倍量去离子水洗涤沉淀，离心，收集沉淀b。
70.步骤(三)：将上述沉淀b，用5倍量50％乙醇复溶，柠檬酸调节ph值至4.5，加入溶液
质量5％的聚酰胺，搅拌0.5小时，过滤，收集滤液c。滤液c中加入滤液c质量0.2％的活性炭，50℃搅拌0.5小时，过滤除去活性炭，收集滤液，回收溶剂，干燥后得望春花花提取物22.85g，hplc测定其中木兰脂素含量为70.0％，木兰脂素的富集率为52.7％。
71.实施例5
72.本实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，与实施例1的方法基本相同，不同之处仅在于：本实施例中，步骤(二)中进行水浴加热处理后，调整乙醇浓度为20％，进行色素去除。
73.本实施例方法制备所得望春花花提取物20.4g，hplc测定其中木兰脂素含量为75.0％，木兰脂素的富集率为50.4％。
74.对比实施例1
75.本对比实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，与实施例1的方法基本相同，不同之处仅在于：不进行步骤(二)的处理。具体包括以下步骤：
76.步骤(一)：1kg望春花的花粉碎，加8倍重量的40％乙醇，70℃提取1.5小时，过滤，收集滤液，提取后的望春花的花再加5倍量40％乙醇，70℃提取1小时，过滤，合并两次提取滤液。加水至乙醇的浓度为7％，加液体质量5％的nacl，搅拌使其溶解，4℃静置4小时，离心，收集沉淀a。
77.步骤(二)：将上述沉淀a，用5倍量50％乙醇复溶，柠檬酸调节ph值至4.5，加入溶液质量5％的聚酰胺，搅拌0.5小时，过滤，收集滤液。滤液中加入滤液质量0.2％的活性炭，50℃搅拌0.5小时，过滤除去活性炭，收集滤液，回收溶剂，干燥后得望春花花提取物39.0g，hplc测定其中木兰脂素含量为55.2％，木兰脂素的富集率70.9％。
78.对比实施例2
79.本对比实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，与实施例1的方法基本相同，不同之处仅在于：本对比实施例中，步骤(一)中1kg望春花的花粉碎加8倍重量的30％乙醇的乙醇进行提取。
80.本对比实施例方法制备所得望春花花提取物18.1g，hplc测定其中木兰脂素含量为71.0％，木兰脂素的富集率为42.3％。
81.对比实施例3
82.本对比实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，与实施例1的方法基本相同，不同之处仅在于：本对比实施例中，步骤(二)中没有进行碱解的处理，而是将沉淀a分散溶解于4倍重量的用氢氧化钠调节ph为8.5的30％乙醇溶液中，然后补去离子水调整乙醇浓度为5％，添加沉淀a质量的5.0％的吐温-20，搅拌10min，4℃静置4小时，5000r/min离心，弃去上清液，加3倍量去离子水洗涤沉淀，离心，收集沉淀b。
83.本对比实施例的方法制备所得望春花花提取物29.0g，hplc测定其中木兰脂素含量为60.1％，木兰脂素的富集率为57.4％。
84.对比实施例4
85.本对比实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，包括以下步骤：与实施例1的方法基本相同，不同之处仅在于：本对比实施例中，步骤(二)中不添加吐温-20进行増溶。
86.本对比实施例的方法制备所得望春花花提取物28.3g，hplc测定其中木兰脂素含量为66.3％，木兰脂素的富集率为61.8％。
87.对比实施例5
88.本对比实施例提供了一种望春花花提取物的制备方法，与实施例1的方法基本相同，不同之处仅在于：本对比实施例中，步骤(三)中，不进行聚酰胺和活性炭处理，直接将沉淀b作为望春花花提取物36.0g，hplc测定其中木兰脂素含量为59.9％，木兰脂素的富集率为71.0％。
89.效果验证：
90.1)pt-co色度值
91.将上述各实施例和对比实施例制得的望春花花提取物溶解于乙醇溶液中，得到10mg/ml的望春花花提取物-醇溶液。采用型号为pfxi系列195/1型高精度分光光度色度计(专为透光性样品例如液态化学品、燃油、啤酒和水等的色度分析而设计，广泛用于水质色度分析，甲醇、苯、清油、化学品、石化产品，如甘油、增塑剂、溶剂、四氯化碳、石油醇等浅黄色液体的色度分析)，对各望春花花提取物-醇溶液进行色度值检测。量程为0-500mg pt/l。基线0mg pt/l是去离子水的色度值。数值在0-500mg pt/l之间表示样品在正常测量值区间，且数值越小代表样品的色泽越浅。超出500mg pt/l是因为待测样品颜色深，降低透光率值，所以样品的色度会大于500mg pt/l。
92.2)气味评估
93.将各实施例和对比实施例制备的望春花花提取物按下表1中的样品配方进行配制。
94.表1
95.物料名称配方添加质量百分比汉生胶0.5％防腐剂(pe9010)0.6％吐温-200.2％实施例或对比实施例样品1％水余量加水至100％
96.气味评估方法：以纯棉精油闻香卡为基材，选取2cm*2cm面积，涂样量2mg/cm2，以空白配方为参考基准，按照强、中等、弱三个等级进行各样品气味强度判断。
97.所得的pt-co色度值和气味强度结果如下表2所示。
98.表2
[0099][0100]
从表1的结果可见，对比实施例1与实施例1相比未进行步骤(二)的处理，由此制得的望春花花提取物的色度值超过了500，且有强烈的特征性气味，可见该对比实施例的提取方法难以解决所得望春花花提取物的颜色和气味问题；对比例实施例2与实施例1相比可见，提取步骤中采用的醇溶液浓度过低时，会明显导致望春花花提取物的提取率和富集率下降；对比实施例3与实施例1相比可见，不进行碱解处理，则不能有效解决脱色问题，且制备的望春花花提取物中木兰脂素的含量也明显下降；对比实施例4与实施例1相比可见，表面活性剂的添加可明显提高脱色脱味的效果；对比实施例5与实施例1相比可见，不采用吸附材料进行吸附时，会导致脱色效果下降，达不到颜色浅(pt-co色度值小于100)的效果(对比实施例5的色度为450，该颜色比较深，在实际应用时对料体影响大)，且杂质含量也会提高。
[0101]
本发明具体应用途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出，以上实施例仅用于说明本发明，而并不用于限制本发明的保护范围。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。