含有黄芪肽熟化物的皮肤活力改善用化妆品组合物的制作方法

1.本发明涉及一种含有分子量为10,000da以下的黄芪肽熟化物的皮肤活力改善用化妆品组合物，其功能在于所述化妆品组合物除此之外还具有皮肤再生、皱纹改善或保湿功能。


背景技术：

2.皮肤作为在人体中与外部环境的接触最为密切的身体器官，起到对人体内部进行保护的功能，大体上可以分为表皮(epidermis)、真皮(dermis)以及皮下脂肪(hypodermis)三个部分。皮肤是由具有多种不同功能的细胞以及具有对应物性的物质构成的复杂器官，其中真皮层由具有弹性的固态物质(纤维)以及具有粘性的液态物质结合而成，从而可以维持固有的皮肤弹性。因此，皮肤会根据其独特的物性对客观张力做出相应的反应，这被称之为粘弹性。皮肤之所以具有如上所述的粘弹性，是因为胶原纤维以及弹性蛋白纤维会在蛋白聚糖的基质中形成独特的三维结构。通常来讲伴随着年龄的增长，皮肤会因为如紫外线、污染以及压力等原因而出现功能下降以及萎缩性变化，而且会呈现出皮肤细胞数量减少或皮肤厚度减少等现象。在如上所述的过程中，皮肤的弹性纤维会发生弹性变形并导致皮肤弹性减少或皮肤松弛的问题。胶原蛋白是构成皮肤的主要组合物，其中i型胶原蛋白占80％，ⅲ型胶原蛋白占15％。在皮肤长时间暴露于紫外线时，皮肤内将生成大量的活性氧，因此基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，mmps)中对胶原蛋白进行分解的酶即基质金属蛋白酶1(mmp-1，matrixmetalloproteinase-1)的表达或活性将得到促进并因此造成胶原蛋白合成的下降，最终导致皮肤弹性的减少以及皱纹的形成。
3.因此，为了防止如上所述的因为内在以及外在因素而导致的皮肤老化以及损伤并借此维持更加健康美丽的皮肤，人们一直以来尝试通过将各种不同的生理活性物质添加到化妆品中使用而维持皮肤的固有功能并将皮肤细胞活性化，从而促进皮肤的新陈代谢并借此提升皮肤活性。
4.黄芪(astragalus membranaceus bunge)是属于豆科的多年生草本植物。根茎可以作为药材使用，有效组合物包括如叶酸(folic acid)以及胆碱(choline)等。具有对中枢神经系统的兴奋作用以及利尿作用，可以抑制肾炎的发生，还有报告指出具有延缓蛋白尿以及胆固醇血症发生的效果以及降压效果。此药的药性温和且味甘。对于容易疲劳、虚弱、声音低沉、脉搏微弱以及爱出汗的人群具有显著的功效，因此自古以来被大量作为人参的替代品使用。此外，还广泛用于子宫下垂、胃下垂、脱肛以及子宫出血，可以增强体力并提升全身肌肉的张力。因此，属于在中药药方中大量使用的药物。但是，在严重发热时不得使用。民间传言将此药与鸡肉同煮进食可以缓解虚汗症状并增强体力，因此被广泛使用。作为代表性的处方，包括广泛适用于没有力气且失去食欲的人群的补中益气汤。
5.此外，本发明人作为用于改善皮肤活力的组合物选择了黄芪并作为用于对其进行加工的方法使用了蛋白分解法，并确认了通过蛋白分解获得的组合物具有优秀的增强皮肤细胞内的线粒体活性的功效，从而完成了本发明。
6.先行技术文献
7.专利文献
8.(专利文献1)大韩民国注册专利第10-1663030号(发明名称：包含黄芪肽的用于防止皮肤老化的化妆品组合物，申请人：cosmecca korea株式会社，注册日期：2016年09月29日)
9.(专利文献2)大韩民国注册专利第10-1415993号(发明名称：作为有效组合物含有利用配备有陶器的提取装置提取出的黄芪提取物的皮肤外用剂组合物，申请人：(株)amore pacific，注册日期：2014年07月01日)
10.(专利文献3)大韩民国注册专利第10-0858629号(发明名称：作为有效组合物含有扁柏提取物、红松提取物以及白皮松提取物的皮肤活力强化用化妆品组合物，申请人：coreana化妆品株式会社，注册日期：2008年09月09日)
11.(专利文献4)大韩民国注册专利第10-1219683号(发明名称：对米曲霉以及黄芪进行发酵的谷物类酒曲的具有酪氨酸酶阻碍活性的组合物及其制造方法，申请人：建国大学校产学协作团，注册日期：2013年01月02日)
12.(专利文献5)大韩民国公开专利第10-2020-0074361号(发明名称：作为有效组合物含有对黄芪进行发酵的黄芪发酵物的提取物的皮肤美白用组合物以及紫外线阻隔用组合物，申请人：大韩民国(农村振兴厅长)，公开日期：2020年06月25日)


技术实现要素：

13.本发明的目的在于提供一种含有分子量为10,000da以下的黄芪源性成熟肽的皮肤活力改善用化妆品组合物。本发明的另一目的在于提供一种含有所述黄芪源性成熟肽的具有皮肤再生、皱纹改善或保湿功能的化妆品组合物。
14.本发明涉及一种含有黄芪(astragalus membranaceus bunge)成熟肽的化妆品组合物。
15.所述肽的特征在于其分子量为10,000da以下。
16.所述化妆品组合物的特征在于具有皮肤活力改善功能。
17.此外，所述化妆品组合物的特征在于具有皮肤再生、皱纹改善或保湿功效。
18.所述组合物可以增强线粒体内的能量活性，还具有增加过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(pgc-1α，peroxisome proliferator-activated receptor gamma co-activator 1α)、i型胶原蛋白或弹性蛋白的表达的功效。
19.所述黄芪肽熟化物的特征在于通过如下所述的方法进行制造。
20.较佳地，可以包括：(第一步骤)在向黄芪根茎加水并利用果胶酶和纤维素酶的混合物进行处理之后执行第一次蛋白分解的步骤；
21.(第二步骤)通过利用蛋白酶进行追加处理而执行第二次蛋白分解的步骤；
22.(第三步骤)通过对执行第二次蛋白分解之后获得的酶处理物进行过滤而获取低分子量肽组合物的步骤；以及，
23.(第四步骤)在对所述低分子量肽组合物进行浓缩之后在黄金熟化槽内进行熟化的步骤。
24.所述第三步骤的低分子量肽组合物的特征在于其分子量为10,000da以下。较佳
地，组合物的分子量为100～10,000da为宜。
25.此外，在所述第四步骤中可以将低分子量肽组合物浓缩成固态组合物含量为80重量％以上。
26.在所述第四步骤中在黄金熟化槽内进行70～100天的熟化为宜。
27.以100重量份的所述黄芪根茎为基准添加500～3000重量份的水为宜，并以100重量份的黄芪根茎为基准分别添加0.5～3重量份的所述果胶酶、纤维素酶以及蛋白酶为宜。此时，使用经过干燥的黄芪根茎为宜，而且可以细切成4～6cm的长度。所述第一次蛋白分解在大约37～42℃下执行18～30小时为宜。第二次蛋白分解在大约47～52℃下执行18～30小时为宜。在超出如上所述的条件的情况下，可能会因为黄芪的蛋白分解过程中的各个酶的活性不适当且蛋白分解不顺利而导致无法获得适当状态的肽组合物的问题。
28.在对所述肽进行酶处理之后浓缩时，以减压浓缩法执行为宜。
29.在本发明中使用的黄金熟化槽是在内部镀金且没有涂布釉料的陶瓷材料，其特征在于是一种可以盖上盖子对肽组合物进行保管的容器。
30.在接下来的内容中将对本发明进行详细的说明。
31.此外，本发明提供一种含有黄芪肽熟化物的皮肤活力改善用药学组合物。
32.所述药学组合物，可以分别按照一般的方法制剂化成如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浊液、乳液、糖浆以及气雾剂等口服剂型或外用剂、栓剂以及灭菌注射溶液的形态使用。作为可包含在所述药学组合物中的载体、赋形剂以及稀释剂，可以以如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁以及矿物油为例。在进行制剂化时，可以使用通常所使用的如填充剂、增量剂、湿润剂、崩解剂以及表面活性剂等稀释剂或赋形剂进行制备。用于经口给药的固态制剂包括如片剂、烷基、散剂、颗粒剂以及胶囊剂等，而如上所述的固态制剂可以通过向本发明的复合草本提取物添加如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖以及明胶等至少一种以上的赋形剂的方式进行制备。而且，除了单纯的赋形剂之外还可以使用如硬脂酸镁以及滑石等润滑剂。用于经口给药的液态制剂包括如悬浮剂、内服液剂、乳剂以及糖浆等，除了通常所使用的单纯稀释剂即水以及液态石蜡之外，还可以包含如湿润剂、甜味剂、芳香剂以及保存剂等各种赋形剂。用于非经口给药的制剂包括灭菌水溶液、非水性溶剂、悬浮剂、乳剂、冻结干燥制剂以及栓剂。作为非水性溶剂以及悬浮剂，可以使用如丙二醇、聚乙二醇、如橄榄油等植物油以及如油酸乙酯等注射用酯类等。作为栓剂的基剂，可以使用如witepsol、macrogol、tween 61、可可脂、月桂酸甘油酯以及甘油明胶等。
33.本发明的药学组合物的给药量可以根据需要接受治疗的对象的年龄和性别以及体重、需要治疗的特定疾病或病理状态、疾病或病理状态的严重程度、给药途径以及开处方者的判断发生变化。相关从业人员可以根据自己的水平以如上所述的因素为基础决定给药量，一般的给药量是在0.01
㎎
/
㎏
/天至大约2000
㎎
/
㎏
/天的范围之内。更交加的给药量为1
㎎
/
㎏
/天至500
㎎
/
㎏
/天。给药可以每天进行一次给药，也可以分成多次进行给药。所述给药量在任何方面都不是为了对本发明的范围做出限定。
34.本发明的药学组合物可以通过多种途径向如老鼠、家畜以及人类等哺乳动物进行给药。给药可以通过任何方式，例如可以通过如经口、直肠或静脉、肌肉、皮下、子宫内硬膜
或脑血管内注射的方式进行给药。因为本发明的提取物几乎没有任何毒性以及副作用，因此是一种即使以预防为目的长期服用的情况下也可以放心使用的药剂。
35.此外，本发明提供一种包含黄芪肽熟化组合物以及食品可容许的食品辅助添加剂的皮肤活力改善用健康功能食品。本发明的健康功能食品包括如片剂、胶囊剂、烷基或液剂等形态，可以添加本发明的提取物的食品包括如各种饮料、肉类、香肠、面包、糖果、零食、面类、冰淇淋、乳制品、汤类、离子饮料、饮用水、酒精饮料、口香糖、茶以及维生素复合剂等。
36.作为本发明的化妆品组合物的剂型，可以制造成本行业所通常制造的任意剂型，可以包含如精华液、润肤乳、乳液、面膜、护手霜、护脚霜、润唇膏、口红、眼影、眼线笔、眉笔、腮红、高光粉、一般化妆水、护肤液、面霜、精华素、美容香皂、柔肤化妆水、药用化妆水、身体沐浴露、洁面泡沫、洁面乳液、啫喱、洁面油、洁面霜、洗发水、染发剂、护发素、护发乳、洁面纸以及洁面水等。
37.本发明的化妆品组合物还可以追加包含从由水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖、鞘脂以及海藻提取物构成的组中选择的组合物。
38.水溶性维生素可以是可混合到化妆品中的任意物质，较佳地可以是如维生素b1、维生素b2、维生素b6、吡哆醇、盐酸吡哆醇、维生素b12、泛酸、盐酸、烟酰胺、叶酸、维生素c以及维生素h等，而且可以在本发明中使用的水溶性维生素还包括其盐(如硫胺素盐酸盐以及抗坏血酸钠盐等)或衍生物(如抗坏血酸-2-磷酸钠盐以及抗坏血酸-2-磷酸镁盐等)。水溶性维生素可以通过如微生物转化法、维生素培养物提纯法、酶法或化学合成法等一般的方法获取。
39.油溶性维生素可以是可混合到化妆品的任意物质，较佳地可以是如维生素a、胡萝卜素、维生素d2、维生素d3、维生素e(如dl-α生育酚以及d-α生育酚等)等，而且可以在本发明中使用的油溶性维生素还包括上述物质的衍生物(如抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、抗坏血酸二棕榈酸酯、dl-α生育酚乙酸酯、dl-α生育酚烟酸酯、维生素e、dl-泛酰醇以及泛酰乙醚等)等。油溶性维生素可以通过如微生物转化法、维生素培养物提纯法、酶或化学合成法等一般的方法获取。
40.高分子肽可以是可混合到化妆品组合物的任意物质，较佳地可以是如胶原蛋白、水解胶原蛋白、明胶、弹性蛋白、水解弹性蛋白以及角蛋白等。高分子肽可以通过如微生物培养液提纯法、酶法或化学合成法等一般的方法提纯获取，或者从如一般的猪或牛等的真皮以及蚕丝纤维等天然物质提纯使用。
41.高分子多糖可以是可混合到化妆品组合物的任意物质，较佳地可以是如羟乙基纤维素、黄原胶、透明质酸钠、硫酸软骨素或其盐(如钠盐等)等。例如，硫酸软骨素或其盐等通常可以从哺乳动物或鱼类提纯使用。
42.鞘脂可以是可混合到化妆品组合物的任意物质，较佳地可以是如神经酰胺、植物鞘氨醇以及鞘糖脂等。鞘脂通常可以从哺乳类、鱼类、贝类、酶或植物等通过一般的方法提纯或通过化学合成法获取。
43.海藻提取物可以是可混合到化妆品组合物的任意物质，较佳地可以是褐藻提取物、红藻提取物以及绿藻提取物等，而且可以在本发明中使用的海藻提取物还包括从如上所述的海藻提取物提纯的如角叉菜胶、精氨酸、精氨酸钠以及精氨酸钾等。海藻提取物可以从海藻通过一般的方法提纯获取。
44.混合到一般的化妆品中的其他组合物也可以混合到本发明的化妆品组合物中。
45.作为其他可添加的混合组合物，可以包含如油脂组合物、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机以及无机颜料、有机粉体、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、植物提取物、ph调节剂、醇、颜料、香料、血液循环促进剂、清凉剂、制汗剂以及纯净水等。
46.作为油脂组合物，可以包含如酯类油脂、烃类油脂、有机硅类油脂、氟类油脂、动物油脂以及植物油脂等。
47.作为酯类油脂，可以包含如三2-乙基己酸甘油酯、2-乙基己酸十六酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸丁酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸乙酯、棕榈酸辛酯、异硬脂酸异十六酯、硬脂酸丁酯、亚油酸乙酯、亚油酸异丙酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异十六酯、肉豆蔻酸异硬脂酸酯、棕榈酸异硬脂酸酯、肉豆蔻酸辛基十二烷酯、异硬脂酸异十六酯、癸二酸二乙酯，己二酸二异丙酯、新戊酸异烷酯、三(辛酸，癸酸)甘油酯、三2-乙基己酸三羟甲基丙烷酯、三异硬脂酸酯三羟甲基丙烷酯、四2-乙基己酸季戊四醇酯、辛酸十六酯、月桂酸癸酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸癸酯、肉豆蔻酸十四酯、肉豆蔻酸十六酯、硬脂酸十八烷酯、油酸癸酯、蓖麻油酸十六酯、月桂酸异硬脂酸酯、肉豆蔻酸异十三烷酯、棕榈酸异十六酯、硬脂酸辛酯、硬脂酸异十六酯、油酸异癸酯、油酸辛基十二烷酯、亚油酸辛基十二烷酯、异硬脂酸异丙酯、2-乙基己酸鲸蜡硬脂酸酯、2-乙基己酸硬脂酸酯、异硬脂酸己酯、乙二醇二辛酸酯、乙二醇二油酸酯、丙二醇二癸酸酯、二(辛酸，癸酸)丙二醇、丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二癸酸酯、新戊二醇二辛酸酯、三辛酸甘油酯、三(十一烷)甘油酯、三异棕榈酸甘油酯、三异硬脂酸甘油酯、新戊酸辛基十二烷酯、辛酸异硬脂酸酯、异壬酸辛酯、新癸酸己基癸酯、新癸酸辛基十二烷酯、异硬脂酸异十六酯、异硬脂酸异硬脂酸酯、异硬脂酸辛基癸酯、聚甘油油酸酯、聚甘油异硬脂酸酯、柠檬酸三异十六酯、柠檬酸三异烷酯、柠檬酸三异辛酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、乳酸十六酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸乙酰三乙酯、柠檬酸乙酰三丁酯、柠檬酸三辛酯、苹果酸二异硬脂酸酯、羟基硬脂酸2-乙基己酯、琥珀酸二2-乙基己酯、己二酸二异丁酯、癸二酸二异丙酯、癸二酸二辛酯、硬脂酸胆固醇酯、异硬脂酸胆固醇酯、羟基硬脂酸胆固醇酯、油酸胆固醇酯、油酸二氢胆固醇酯、异硬脂酸植物甾醇酯、油酸植物甾醇酯、12-硬脂酰羟基硬脂酸异十六烷酯、12-硬脂酰羟基硬脂酸硬脂酸酯以及12-硬脂酰羟基硬脂酸异硬脂酸酯等酯类。
48.作为烃类油脂，可以包含如角鲨烯、液态石蜡、α-烯烃低聚物、异链烷烃、地蜡、石蜡、液态异链烷烃、聚丁烯、微晶蜡以及凡士林等烃类油脂。
49.作为有机硅类油脂，可以包含如聚甲基硅油、甲基苯基硅油、甲基环聚硅氧烷、八甲基聚硅氧烷、十甲基聚硅氧烷、十二甲基环硅氧烷、二甲基硅氧烷
·
甲基十六烷氧基硅氧烷共聚物、二甲基硅氧烷
·
甲基硬脂氧基硅氧烷共聚物、烷基改性硅油以及氨基改性硅油等。
50.作为氟类油脂，可以包含如全氟聚醚等。
51.作为动物或植物油脂，可以包含如鳄梨油、杏仁油、橄榄油、芝麻油、米糠油、红花油、大豆油、玉米油、油菜籽油、杏仁油、棕榈仁油、棕榈油、蓖麻油、葵花籽油、葡萄籽油、棉籽油、椰子油、苦葵果油、小麦胚芽油、大米胚芽油、乳木果油、月见草油、夏威夷果油、蛋黄油、牛油、马油、貂油、橙鲷油、荷荷巴油、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、液态羊毛脂以及氢化蓖麻油等动物或植物油脂。
52.作为保湿剂，可以包含如水溶性低分子保湿剂、脂溶性分子保湿剂、水溶性高分子
以及脂溶性高分子等。
53.作为水溶性低分子保湿剂，可以包含如丝氨酸、谷氨酰胺、山梨糖醇、甘露醇、吡咯烷酮-羧酸钠、甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、乙二醇、聚乙二醇b(聚合度n＝2以上)、聚丙二醇(聚合度n＝2以上)、聚甘油b(聚合度n＝2以上)、乳酸以及乳酸盐等。
54.作为脂溶性低分子保湿剂，可以包含如胆固醇以及胆固醇酯等。
55.作为水溶性高分子，可以包含如羧乙烯基聚合物、聚天冬氨酸、黄蓍胶、黄原胶、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、水溶性甲壳素、壳聚糖以及糊精等。
56.作为脂溶性高分子，可以包含如聚乙烯吡咯烷酮
·
二十碳烯共聚物、聚乙烯吡咯烷酮
·
十六碳烯共聚物、硝化纤维素、糊精脂肪酸酯以及高分子量硅油等。
57.作为润肤剂，可以包含如长链酰基谷氨酸胆固醇酯、羟基硬脂酸胆固醇酯、12-羟基硬脂酸、硬脂酸、松香酸以及羊毛脂脂肪酸胆固醇酯等。
58.作为表面活性剂，可以包含如非离子性表面活性剂、阴离子性表面活性剂、阳离子性表面活性剂以及两性表面活性剂等。
59.作为非离子性表面活性剂，可以包含如自乳化型单硬脂酸甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚烯烃弹性体(poe)(聚氧乙烯)山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚烯烃弹性体(poe)山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚烯烃弹性体(poe)甘油脂肪酸酯、聚烯烃弹性体(poe)烷基醚、聚烯烃弹性体(poe)脂肪酸酯、聚烯烃弹性体(poe)氢化蓖麻油、聚烯烃弹性体(poe)蓖麻油、聚烯烃弹性体(poe)/聚烯烃塑性体(pop)(聚氧乙烯
·
聚氧丙烯)共聚物、聚烯烃弹性体(poe)/聚烯烃塑性体(pop)烷基醚、聚醚改性硅油、月桂酸链烷醇酰胺、烷基氧化胺以及氢化大豆磷脂等。
60.作为阴离子性表面活性剂，可以包含如脂肪酸皂、α-酰基磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基烯丙基磺酸盐、烷基萘磺酸盐、烷基硫酸盐、聚烯烃弹性体(poe)烷基醚硫酸盐、烷基酰胺硫酸盐、烷基磷酸盐、聚烯烃弹性体(poe)烷基磷酸盐、烷基酰胺磷酸盐、烷酰基烷基牛磺酸盐、n-酰基氨基酸盐、聚烯烃弹性体(poe)烷基醚羧酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基磺基乙酸钠、酰化水解胶原肽盐以及全氟烷基磷酸酯等。
61.作为阳离子性表面活性剂，可以包含如氯化烷基三甲基铵、硬脂基三甲基氯化铵、硬脂基三甲基溴化铵、鲸蜡硬脂醇基三甲基氯化铵、二硬脂基三甲基氯化铵、硬脂基二甲基苄基氯化铵、山嵛基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、二乙基氨基乙基酰胺硬脂酸酯、二甲基氨基丙基酰胺硬脂酸酯以及羊毛脂衍生物的季铵盐等。
62.作为两性表面活性剂，可以包含如羧基甜菜碱型、酰胺甜菜碱型、磺基甜菜碱型、羟基磺基甜菜碱型、酰胺磺基甜菜碱型、磷酸甜菜碱型、氨基羧酸盐型、咪唑啉衍生物型以及酰胺化胺型等两性表面活性剂。
63.作为有机以及无机颜料，可以包含如硅酸、硅酸酐、硅酸镁、滑石、绢云母、云母、高岭土、三氧化二铁、黏土、膨润土、钛涂层云母、氯氧化铋、氧化锆、氧化镁、氧化锌、氧化钛、氧化铝、硫酸钙、硫酸钡、硫酸镁、碳酸钙、碳酸镁、氧化铁、群青、氧化铬、氢氧化铬、炉甘石以及所述之复合体等无机颜料；如聚酰胺、聚酯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氨酯、乙烯基树脂、尿素树脂、酚醛树脂、氟树脂、硅树脂、丙烯酸树脂、三聚氰胺树脂、环氧树脂、聚碳酸酯树脂、二乙烯基苯
·
苯乙烯共聚物、蚕丝粉末、纤维素、ci颜料黄以及c i颜料橙等无机颜料；以及
所述无机颜料以及有机颜料的复合颜料等。
64.作为有机粉体，可以包含如硬脂酸钙等金属皂；如棕榈酸锌钠、月桂酸锌以及月桂酸钙等烷基磷酸金属盐；如n-月桂酰-β-丙氨酸钙、n-月桂酰-β-丙氨酸锌以及n-月桂酰甘氨酸钙等酰基氨基酸多价金属盐；如n-月桂酰-牛磺酸钙以及n-棕榈酰-牛磺酸钙等酰胺磺酸多价金属盐；如n-ε-月桂酰-l-赖氨酸、n-ε-棕榈酰赖氨酸、鸟氨酸、n-α-月桂酰精氨酸以及n-α-氢化牛油脂肪酸酰基精氨酸等n-酰基碱性氨基酸；如n-月桂酰基甘氨酰甘氨酸等n-酰基多肽；如α-氨基辛酸以及α-氨基月桂酸等α-氨基脂肪酸；聚乙烯、聚丙烯、尼龙、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、二乙烯基苯
·
苯乙烯共聚物以及四氟化乙烯等。
65.作为紫外线吸收剂，可以包含如对氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲酸戊酯、对氨基苯甲酸辛酯、水杨酸乙二醇酯、水杨酸苯酯、水杨酸辛酯、水杨酸苄酯、水杨酸丁苯酯、水杨酸高孟酯、肉桂酸苄酯、对甲氧基肉桂酸-2-乙氧基乙酯、对甲氧基肉桂酸辛酯、二对甲氧基肉桂酸单-2-乙基己烷甘油酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、二异丙基
·
二异丙基肉桂酸酯混合物、尿刊酸、尿烷酸乙酯、羟基甲氧基二苯甲酮、羟基甲氧基二苯甲酮磺酸及其盐、二羟基甲氧基二苯甲酮、二羟基甲氧基二苯甲酮二磺酸钠、二羟基二苯甲酮、四羟基二苯甲酮、4-叔丁基-4'-甲氧基二苯甲酰甲烷、2,4,6-三苯胺基-对-(羰-2'-乙基己基-1'-氧基)-1,3,5-三嗪以及2-(2-羟基-5-甲基苯基)苯并三唑等。
66.作为杀菌剂，可以包含如桧木醇、三氯生、三氯羟基二苯醚、葡萄糖酸氯己定、苯氧乙醇、间苯二酚、异丙基甲基苯酚、甘菊环烃、水杨酸、吡啶硫酮锌、苯扎氯铵、光敏剂301号、单硝基愈创木酚钠以及十一烯酸等。
67.作为抗氧化剂，可以包含如丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯以及异抗坏血酸等。
68.作为ph调节剂，可以包含如柠檬酸、柠檬酸钠、苹果酸、苹果酸钠、富马酸、富马酸钠、琥珀酸、琥珀酸钠、氢氧化钠以及磷酸一氢钠等。
69.作为醇，可以包含如鲸蜡醇等高级醇。
70.此外，其他可添加的混合组合物并不限定于此，而且如上所述的任何组合物都可以在不损害本发明的目的以及效果的范围内进行混合，但是较佳地相对于总重量可以混合0.01至5重量％，更较佳地可以混合0.01～3重量％。
71.本发明的化妆品组合物可以采用如溶液、乳化物、粘性混合物等形态。
72.在本发明的化妆品组合物所包含的组合物中，作为有效组合物除了所述提取物之外还可以包含在化妆品中通常使用的组合物，例如可以包含如稳定剂、溶解剂、维生素、颜料以及香料等一般的辅助剂以及载体。
73.在本发明的化妆品组合物的剂型为糊剂、霜剂或凝胶剂的情况下，作为载体组合物可以使用如动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、有机硅、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌等。
74.在本发明的化妆品组合物的剂型为粉剂或喷雾剂的情况下，作为载体组合物可以使用如乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末等，尤其是在喷雾剂的情况下，还可以追加包含如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚等推进剂。
75.在本发明的化妆品组合物的剂型为溶液或乳浊液的情况下，作为载体组合物可以使用如溶剂、溶剂化剂或乳浊化剂，例如可以使用如水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁基乙二醇油、甘油脂肪族酯、聚乙二醇或山梨糖醇酐的
脂肪酸酯。
76.在本发明的化妆品组合物的剂型为悬浊液的情况下，作为载体组合物可以使用如水、乙醇或丙二醇等液态稀释剂；如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯以及聚氧乙烯山梨糖醇酐酯等悬浊剂；微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或黄蓍胶等。
77.在本发明的化妆品组合物的剂型为含表面活性剂的洁面剂的情况下，作为载体组合物可以使用如脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、亚油酸衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等。
78.本发明涉及一种含有黄芪肽的熟化物的化妆品组合物，通过对黄芪根茎进行蛋白分解之后在黄金熟化槽中进行熟化而获得的本发明的低分子肽组合物的细胞活力功能优秀且具有皱纹改善功效，因此可以轻易地作为皮肤改善用化妆品组合物使用。
附图说明
79.图1是对本发明的黄芪肽熟化物的细胞再生功效进行确认的结果。
具体实施方式
80.接下来，将对本发明的较佳实施例进行详细的说明。但是，本发明并不限定于在此进行说明的实施例，而是还可以通过其他形态实现。所述实施例只是为了更加彻底且完整地介绍本发明的内容，并向相关从业人员充分传递本发明的思想。
81.实施例1.黄芪肽熟化组合物的制造
82.在对从首尔药令市场购买的经过干燥的黄芪根茎100g进行彻底清洗并裁切成5cm以下之后添加1,000g的纯净水。向其中混合曲霉属真菌(aspergillus)源性果胶酶(pectinase)1g以及纤维素酶(cellulase)1g之后，通过在40℃下进行24小时的提取而执行蛋白分解。接下来，在添加芽孢杆菌(bacillus)源性蛋白酶(protease)1g之后，在50℃下追加执行24小时的蛋白分解。在将通过蛋白分解获得的酶处理物中截留分子量为10,000至300,000da的高分子部分利用滤布过滤的方式进行第一次处理之后，使其通过超滤器而最终获得分子量为10,000da的低分子量肽组合物。接下来，通过利用旋转式减压浓缩器对所述肽组合物进行浓缩而制造成固态组合物含量为80重量％以上的浓缩物状态，并将所述浓缩物在黄金熟化槽中进行了88天的熟化。此时所使用的黄金熟化槽，利用金水在陶瓷内部进行了镀金。将熟化温度维持在1～4℃并将湿度维持在15％以下。
83.实施例2.将熟化时间调整为70天制造出的熟化组合物
84.在实施例1的过程中将黄金熟化槽中的熟化时间调整为70天。
85.实施例3.将熟化时间调整为100天制造出的熟化组合物
86.在实施例1的过程中将黄金熟化槽中的熟化时间调整为100天。
87.比较例1.通过在一般容器中执行熟化而制造出的黄芪肽熟化组合物
88.通过执行与实施例1相同的熟化过程而获得熟化组合物，其中利用聚乙烯容器替代黄金熟化槽进行了熟化。
89.比较例2.黄芪热水提取物
90.在对从首尔药令市场购买的经过干燥的黄芪根茎100g进行彻底清洗并裁切成5cm
以下之后添加1,000g的纯净水。接下来，在没有执行酶处理的情况下进行24小时的提取。在利用滤纸对其进行过滤之后进行减圧浓缩，从而获得了黄芪热水提取物。
91.比较例3.没有执行熟化的组合物
92.在实施例1的过程中对完成蛋白分解以及过滤的肽组合物进行浓缩之后，不单独执行熟化而直接将所述浓缩物作为试验用试料。
93.比较例4.通过执行较短时间的熟化而制造出的组合物
94.在实施例1的过程中将黄金熟化槽中的熟化时间缩短为40天。除此之外的剩余过程按照与实施例1相同的方式制造出了熟化物。
95.比较例5.通过对酶处理步骤进行调整而制造出的组合物i
96.在实施例1的过程中，将果胶酶(pectinase)以及纤维素酶(cellulase)的酶混合物与蛋白酶(protease)进行对调之后进行处理。即，在第一个酶处理步骤中利用蛋白酶(protease)进行处理，而在第二个酶处理步骤中利用果胶酶(pectinase)以及纤维素酶(cellulase)的酶混合物进行处理。除此之外的剩余过程按照与实施例1相同的方式制造出了熟化物。
97.比较例6.通过对酶处理步骤进行调整而制造出的组合物ii
98.在实施例1的第一个酶处理步骤中利用果胶酶(pectinase)以及蛋白酶(protease)对酶混合物进行处理，而在第二个酶处理步骤中利用纤维素酶(cellulase)进行处理。除此之外的剩余过程按照与实施例1相同的方式制造出了熟化物。
99.比较例7.通过对酶处理步骤进行调整而制造出的组合物iii
100.在实施例1的过程中利用胰蛋白酶以及糜蛋白酶(10:1，w/w)替代果胶酶(pectinase)以及纤维素酶(cellulase)。除此之外的剩余过程按照与实施例1相同的方式制造出了熟化物。
101.试验例1.皮肤活力恢复(skin revitalizing)确认(线粒体生物发生学，mitochondrial biogenesis)
102.在本试验例中，对所述实施例1至实施例3以及比较例1至比较例7的组合物的皮肤细胞活力或线粒体生物合成功效进行了测定。
103.在细胞板(cell plate)上接种成纤维细胞(fibroblast cell)并进行24小时的培养之后，利用汉克斯平衡盐溶液(hbss)进行洗涤并照射中波紫外线(uvb)50mj/cm2，接下来在替换成无血清培养基(serum-free medium)并对细胞进行处理而使得试料的最终浓度达到100μg/ml之后进行了24小时的培养。利用qiazol
tm lysis reagent(qiagen)对细胞进行收集并按照制造企业的方法对核糖核酸(rna)进行了分离。在对所分离出的核糖核酸(rna)进行定量之后合成出互补脱氧核糖核酸(cdna)，接下来执行了实时聚合酶链反应(real-timepcr)。其结果如下述表1所示。
104.【表1】
[0105][0106][0107]
通过表1可以确认，实施例1至实施例3的组合物与比较例1至比较例7的组合物相比增加过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(pgc-1α)的表达的功效更加优秀，证明其属于一种可以通过增加伴随着年龄的增长逐渐减少的过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(pgc-1α)的表达而制造出更加年轻的线粒体并诱导能量的生成，从而为皮肤活力提供帮助的化妆品组合物。
[0108]
试验例2.通过jc-1染色(staining)的细胞活性效果确认
[0109]
为了对线粒体的细胞膜电位变化进行验证，在将角质细胞(human keratinocyte)分株到35mm板(plate)中并进行24小时的稳定化之后，替换成无血清培养基(serum-free medium)并对试料进行了处理。在1小时之后，利用汉克斯平衡盐溶液(hbss，hank's balanced salt solution)缓冲液进行洗涤，接下来在添加新鲜的汉克斯平衡盐溶液(fresh hbss)之后照射了中波紫外线(uvb)50mj/cm2。在将培养基替换成无血清培养基(serum-free medium)之后对试料进行处理，接下来在37℃、5％co2培养箱(incubator)中进行了24小时的培养。在去除培养基之后利用1μg/ml的jc-1溶液(solution)进行处理并在
37℃、5％co2培养箱(incubator)中以没有光线的状态进行2小时的反应，接下来去除培养基并利用荧光显微镜进行观察。
[0110]
通过如上所述的利用jc-1溶液(solution)的染色，在健康线粒体(mitochondria)状态下可以观察到1:1的红:绿(red:green)比例，而在可能诱发线粒体功能紊乱(mitochondrial dysfunction)的应激反应(stress)状态或已诱发细胞损伤或凋亡的状态下，绿(green)值不会发生变化而红(red)值会显著降低，如红:绿(red:green)比例达到0.5:1等。此外，对所述试验结果进行数值化并记录在表2中。
[0111]
【表2】
[0112][0113][0114]
通过其结果可以确认，实施例1至实施例3的组合物可以对因为中波紫外线(uvb)的损伤而增加的线粒体的损伤进行抑制并使得线粒体维持更加健康的状态。
[0115]
试验例3.通过伤口愈合试验(wound healing test)的细胞再生能力效果确认
[0116]
在60mm板(plate)中接种成纤维细胞(fibroblast)并进行24小时的培养。在完成培养之后沿着直线对细胞板(plate)的一部分进行刮擦(scraping)，接下来在替换成无血
清(serum-free)培养基之后以不同的浓度对试料进行处理。接下来，在进行3天的培养之后利用显微镜(leica)通过肉眼对细胞照片之间的差异进行了确认。在图1中对代表性的照片进行了图示。
[0117]
通过其结果可以确认，实施例1的组合物处理组与比较例2的组合物相比起细胞再生能力更加优秀。
[0118]
试验例4.i型胶原蛋白(collagen type i)表达增加确认
[0119]
在本试验例中，对所述实施例1至实施例3以及比较例1至比较例7的组合物的皮肤皱纹改善或弹性功效进行了测定。
[0120]
在细胞板(cell plate)上接种成纤维细胞(fibroblast cell)并进行24小时的培养之后，在将所培养的细胞的培养基替换成无血清(serum free)培养基并对细胞进行处理而使得试料的最终浓度达到50μg/ml之后进行了24小时的培养。利用qiazol
tm lysis reagent(qiagen)对细胞进行收集并按照制造企业的方法对核糖核酸(rna)进行了分离。在对所分离出的核糖核酸(rna)进行定量之后合成出互补脱氧核糖核酸(cdna)，接下来执行了实时聚合酶链反应(real-timepcr)。其结果如下述表3所示。
[0121]
【表3】
[0122][0123][0124]
对各个试料中的ⅰ型胶原蛋白(collagen type i)表达进行确认的结果，可以发现实施例1至实施例3的组合物中的ⅰ型胶原蛋白(collagen type i)显著增加，表明其具有皮肤弹性功效。
[0125]
试验例5.弹性蛋白(elastin)表达增加确认
[0126]
在本试验例中，对所述实施例1至实施例3以及比较例1至比较例7的组合物的皮肤皱纹改善或弹性功效进行了测定。
[0127]
在细胞板(cell plate)上接种成纤维细胞(fibroblast cell)并进行24小时的培养之后，在将所培养的细胞的培养基替换成无血清(serum free)培养基并对细胞进行处理而使得试料的最终浓度达到100μg/ml之后进行了24小时的培养。利用qiazol
tm lysis reagent(qiagen)对细胞进行收集并按照制造企业的方法对核糖核酸(rna)进行了分离。在对所分离出的核糖核酸(rna)进行定量之后合成出互补脱氧核糖核酸(cdna)，接下来执行了实时聚合酶链反应(real-time pcr)。其结果如下述表4所示。
[0128]
【表4】
[0129][0130]
对各个试料中的弹性蛋白(elastin)表达进行确认的结果，可以发现实施例1至实施例3的组合物中的弹性蛋白(elastin)显著增加，表明其具有皮肤弹性功效。
[0131]
试验例6.透明质酸合酶2(has-2)表达增加确认
[0132]
在本试验例中，对所述实施例1至实施例3以及比较例1至比较例7的组合物的皮肤保湿功效进行了测定。
[0133]
在细胞板(cell plate)上接种成纤维细胞(fibroblast cell)并进行24小时的培养之后，在将所培养的细胞的培养基替换成无血清(serumfree)培养基并对细胞进行处理而使得试料的最终浓度达到100μg/ml之后进行了24小时的培养。利用qiazol
tm lysis reagent(qiagen)对细胞进行收集并按照制造企业的方法对核糖核酸(rna)进行了分离。在对所分离出的核糖核酸(rna)进行定量之后合成出互补脱氧核糖核酸(cdna)，接下来执行了实时聚合酶链反应(real-timepcr)。其结果如下述表5所示。
[0134]
【表5】
[0135][0136]
在各个试料中对于保湿相关的透明质酸合酶2(has-2)表达进行确认的结果，可以发现实施例1至实施例3的组合物中的值得到了显著提升。
[0137]
试验例7.细胞能量活性增强效果
[0138]
利用通过所述实施例1至实施例3以及比较例1至比较例7获得的试料实施了本试验。试验的执行过程如下所述。首先，将人类正常成纤维细胞以1
×
106细胞/孔接种到12-微孔板(nunc，丹麦)中，接下来在达尔伯克改良伊格尔培养基(dmem)(sigma，美国)中以37℃进行24小时的培养。接下来，对替换成各个组合物的最终浓度为100μg/ml的无血清达尔伯克改良伊格尔培养基(dmem)的试验组以及替换成不包含各个提取物的无血清达尔伯克改良伊格尔培养基(dmem)的对照组进行48小时的追加培养。在完成培养之后从各个孔获取细胞，接下来利用细胞能量分析试剂盒(atp assay kit，amersham，美国)对各个细胞的能量活性程度进行了测定。各个提取物的能量活性促进效果如下述表6所示。
[0139]
【表6】
[0140]
[0141][0142]
对各个试料中的透明质酸合酶2(has-2)表达进行确认的结果，可以发现实施例1至实施例3的组合物中的透明质酸合酶2(has-2)显著增加，表明其具有皮肤保湿功效。
[0143]
化妆品制造例1.护肤液
[0144]
将实施例1的熟化物以2.0％(w/w)溶解到1,3-丁二醇作为原料，并按照如下述表7所述的组成通过如下所述的方法制造出了护肤液。向纯净水依次投入甘油、丁二醇、丙二醇以及防腐剂并搅拌溶解，从而获得其混合液。在将聚氧乙烯氢化蓖麻油加热至60℃左右进行溶解之后再投入香料进行溶解，接下来将其投入到所述混合液。最后，在投入实施例1的熟化物2％(w/w)水溶液、乙醇、三乙醇胺以及色素并充分搅拌之后再执行熟化。
[0145]
【表7】
[0146][0147][0148]
化妆品制造例2.营养润肤乳
[0149]
将实施例1的熟化物以2.0％(w/w)溶解到1,3-丁二醇作为原料，并按照如下述表8所述的组成通过如下所述的方法制造出了营养润肤乳。
[0150]
在对丙二醇、羧基聚合物、防腐剂以及纯净水混合搅拌的同时加热至80～85℃之间并投入到制造部之后启动乳化器，接下来在将蜂蜡、聚山梨醇酯0、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、液态石蜡、脱水山梨糖醇硬脂酸酯、亲油性单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、硬脂酸甘油酯/聚乙二醇-400硬脂酸酯以及三乙醇胺加热至80～85℃之间进行加热溶解之后再进行乳化。在完成乳化之后利用搅拌器进行搅拌的同时冷却至50℃，接下来在投入香料并冷却至45℃之后投入色素，然后在35℃下投入实施例1的熟化物的2％(w/w)水溶液并冷却至25℃之后执行熟化。
[0151]
【表8】
[0152][0153][0154]
化妆品制造例3.面霜
[0155]
将实施例1的熟化物以2.0％(w/w)溶解到1,3-丁二醇作为原料，并按照如下述表9所述的组成通过如下所述的方法制造出了营养面霜。在对羧乙烯基聚合物、丁二醇、甘油以及纯净水混合搅拌的同时加热至80～85℃之间并投入到制造部之后启动乳化器，接下来在将硬脂酸、鲸蜡醇、甘油单硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、甘油单硬脂酸酯/甘油硬脂酸酯/聚氧乙烯硬脂酸酯、蜡、液态石蜡、角鲨烷以及辛酸/癸酸甘油三酯加热至80～85℃之间进行加热溶解之后再投入三乙醇胺进行搅拌并投入到制造部进行乳化。在完成乳化之后利用搅拌器进行搅拌的同时冷却至35℃，接下来在投入实施例1的熟化物2％(w/w)水溶液并冷却至25℃之后执行熟化。
[0156]
【表9】
[0157]
原料含量(g)实施例1的熟化物的2％(w/w)水溶液2.0硬脂酸2.0鲸蜡醇2.0单硬脂酸甘油酯2.0聚氧乙烯山梨糖醇酐单硬脂酸酯0.5山梨糖醇倍半油酸酯0.5甘油单硬脂酸酯/甘油硬脂酸酯/聚氧乙烯硬脂酸酯1.0蜡1.0液态石蜡4.0