技术特征：
1.一种负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶，其特征在于：包括牙龈间充质干细胞外泌体、矿化胶原粉体、壳聚糖和β-甘油磷酸钠；所述牙龈间充质干细胞外泌体由超速离心法从牙龈间充质干细胞条件培养液中分离得到；矿化胶原水凝胶由同步进行的胶原自组装与羟基磷灰石形成制备；所述矿化胶原水凝胶包括：羟基磷灰石、胶原溶液、乙酸溶液、nah2po4溶液、cacl2溶液和naoh溶液。2.根据权利要求1所述的负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶，其特征在于：所述矿化胶原凝胶的组分含量为：干细胞外泌体40μg/ml，矿化胶原2-20mg/ml，2％(w/v)壳聚糖溶液，56％(w/v)β-甘油磷酸钠溶液。3.根据权利要求1所述的负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶，其特征在于：所述壳聚糖溶液与所述β-甘油磷酸钠溶液的混合体积比为7:3。4.根据权利要求1所述的负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶，其特征在于：所述培养液为含有20％体积分数的胎牛血清(fbs)和2％体积分数的双抗α-mem培养液。5.根据权利要求1所述的负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶，其特征在于：所述牙龈间充质干细胞外泌体粒径为90-110nm。6.根据权利要求1所述的负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)外泌体提取通过梯度离心法及超速离心法，在牙龈间充质干细胞条件培养液中提取外泌体并鉴定。(2)矿化胶原制备通过同步进行的胶原自组装与羟基磷灰石合成制备矿化胶原水凝胶，随后将水凝胶洗涤后冷冻干燥，获得多孔支架，进一步粉碎后获得矿化胶原粉体。(3)外泌体的温敏凝胶负载稀释外泌体，与矿化胶原粉体混合为悬浊液；配制壳聚糖溶液并加入β-甘油磷酸钠溶液后添加前述的悬浊液并混匀搅拌，即获得负载有外泌体的矿化胶原温敏凝胶。7.根据权利要求6所述的负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，梯度离心法的具体操作为：在4℃条件下以300g，20min；2000g，30min；10000g，30min；110000g，70min；110000g，70min进行梯度离心。8.根据权利要求6所述的负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述粉碎是通过液氮淬冷后研磨获得。9.根据权利要求6所述的负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，外泌体原液的浓度为200μg/ml。10.根据权利要求6所述的负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，配制壳聚糖溶液并加入β-甘油磷酸钠溶液后添加前述的悬浊液并混匀，混合体积比为1：5。
技术总结
本发明公开了一种负载牙龈间充质干细胞外泌体的矿化胶原凝胶及其制备方法。所述的凝胶包括牙龈间充质干细胞外泌体、矿化胶原和壳聚糖/β-甘油磷酸钠。本发明中，外泌体具有抗炎和促进成骨的作用，矿化胶原具有骨诱导性，壳聚糖能够抗菌且引入β-甘油磷酸钠后具有温敏特性，以上成分合成凝胶可注射于牙周炎状态下的骨缺损区域，以促进局部的骨修复或骨扩增。该凝胶可以改善外泌体的治疗效果，显著提高机体的药物吸收率和药物在局部的驻留率，具有良好的生物相容性和生物活性，为大分子药物提供了新型的给药途径，且为可注射的使用方式，拥有良好的应用前景。拥有良好的应用前景。拥有良好的应用前景。
技术研发人员：徐全臣
受保护的技术使用者：青岛大学附属医院
技术研发日：2022.04.02
技术公布日：2022/6/21