has-miR-129-5p在制备延缓衰老药物中的应用

本发明属于生物医药，涉及在制备has-mir-129-5p延缓细胞衰老的药物中的应用。

背景技术：

1、细胞衰老是指细胞的一种稳定的增殖抑制并伴随有细胞衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,sasp)，其发生主要是由于细胞在复制过程中端粒酶的消耗以及外界衰老相关刺激如癌基因激活、活性氧(reactive oxygenspecies,ros)积聚、dna损伤等。细胞衰老主要表现为细胞周期抑制和细胞的形态学变化如扁平状、变大、核浓缩；以及衰老相关的β半乳糖苷酶活性(senescence-associated-β-galactosidase activity,sa-β-gal)、和分泌衰老或炎性相关因子等。衰老的细胞依旧保持代谢活性并可存活数年以上。短期内衰老细胞的产生有助于机体胚胎发育、损伤修复和肿瘤抑制等；而机体内长期积聚衰老的细胞会导致肿瘤的发生、机体老化和老化相关的疾病。因此越来越多的研究致力于发现、鉴定和试图掌握细胞衰老的机理；然而目前对于调控衰老的分子和细胞机制仍然不完全清楚。此外，由于缺少衰老的特异性标记以及对衰老的机制研究存在局限性，因此筛选新的衰老调控因子并研究它们的调控网络迫在眉睫。

2、近些年细胞内钙信号通路在细胞衰老中的功能越来越受到重视，并逐渐被认为是调控衰老的重要因素；我们之前的研究发现细胞核受体rxra通过肌醇1，4，5-三磷酸受体2型(itpr2)调节细胞内钙信号并调控细胞衰老；此外，itpr2敲除小鼠通过减少线粒体内质网的接触，表现出延长小鼠寿命的功效。然而细胞内钙信号在细胞衰老中的具体作用尚未完全被了解。因此进一步阐明细胞内钙信号调控细胞衰老的路线机理对于进一步理解细胞和机体衰老的发生发展机制具有重要意义。

3、保守型的小分子非编码rna(22bp左右)(mirna)对衰老相关基因表达的调控已有数十年的研究。有研究表明mirna-24(mir-24)通过结合p16 mrna的3'utr抑制细胞的复制性衰老。另一项研究表明，mir-124、mir-34a和mir-29a/b/c作为p53下游衰老调控因子，通过抑制细胞周期蛋白a2(ccna2)调控细胞衰老。然而，目前没有研究关于mirna对itpr2的影响。

4、has-mir-129-5p在细胞衰老过程中的功能尚不可知，目前也尚未有任何现有技术报道has-mir-129-5p在细胞衰老中对itpr2的抑制作用和对延缓细胞衰老的治疗作用，因此能够找到has-mir-129-5p对细胞衰老和衰老相关疾病的治疗将会有很大的推动作用。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供has-mir-129-5p在制备预防和/或治疗细胞衰老和衰老相关疾病的药物中的应用，本发明为预防，诊断，保护，治疗和研究细胞衰老提供了一种新的药物来源，本发明提供的改善博莱霉素诱导的肺老化及自然衰老的药物安全，药理作用较强，疗效明确，副作用小。

2、为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

3、has-mir-129-5p在制备预防或治疗细胞衰老相关疾病的药物中的应用，所述has-mir-129-5p的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述药物通过抑制itpr2表达从而预防或治疗细胞衰老相关疾病。所述药物通过结合itpr2的3'utr区域抑制其表达，进而调控细胞内钙离子从内质网到线粒体的信号转导，钙离子转移导致线粒体膜电位下降、活性氧化物(ros)积累减少、dna损伤减少，最终延缓细胞和机体的衰老。所述3'utr区域的序列如seqid no.2所示，结合区域序列为gcaaaaaa。

4、seq id no.1

5、3’-cguucgggucuggcguuuuuc-5’。

6、seq id no.2

7、taaatatttctgagttgtatttttaatgcctctttcttttctgcctaaatgcttagaaattataaa(gcaaaaaa)aaaaaaaacagcaacaaaaaatcgaagcagacaaaaaaggcacttttcagaacatcaaattcctaatgaagaagaggagaagataatggggaaatttgacatttgatataaatttatatttgttatgtgtatgtttgttaatgcaactggaatatttgacttaggtgagtatcagttaacatccttgtatttatatagtgacatc。

8、进一步的，所述应用包括以下任一项：

9、延缓成纤维细胞的衰老；

10、改善小鼠体内衰老症状及延缓自然衰老；

11、延缓细胞老化相关的疾病发生或发展。

12、进一步的，所述应用包括改善博莱霉素诱导的肺老化和自然衰老。

13、进一步的，所述药物抑制衰老相关细胞的老化，所述衰老相关细胞包括成纤维细胞、幼稚cd4+t细胞、记忆cd8+t细胞等细胞。

14、进一步的，所述药物减轻博莱霉素诱导的小鼠肺老化以及自然老化小鼠的肺组织衰老相关β半乳糖苷酶染色和幼稚t细胞衰竭、记忆t细胞积累，以及衰老标志物cdkn1a、cdkn2a的表达水平。

15、进一步的，所述药物通过腹腔注射方法导入机体组织中。

16、进一步的，所述药物包括活性成分has-mir-129-5p和药学上可接受的载体。

17、进一步的，所述药物为注射剂，采用has-mir-129-5p溶于pbs缓冲液制备而成。

18、进一步的，所述has-mir-129-5p的浓度为5mg/kg。

19、进一步的，所述腹腔注射为2次以上。

20、进一步的，本发明公开了has-mir-129-5p在制备预防和/或治疗细胞衰老和衰老相关疾病的药物中的应用

21、所述的has-mir-129-5p为保守的小分子非编码rna(约22bp)。

22、所述的药物为控制细胞和机体衰老的药物，所述衰老相关细胞包括成纤维细胞、幼稚cd4+t细胞、记忆cd8+t细胞等细胞。

23、所述的药物为抑制itpr2表达的药物。

24、本发明还公开了一种产品，其活性成分为has-mir-129-5p，所述产品的用途至少包括下述用途中的一种：

25、a)延缓成纤维细胞的衰老；

26、b)改善博莱霉素诱导的肺老化；

27、c)延缓自然衰老。

28、本发明还公开了一种药物，其可用于预防/治疗临床上常发生的化疗药物所诱导的衰老(tis)，所述药物是由活性成分has-mir-129-5p和药学上可添加的辅料组成。

29、所述药物能够通过注射吸收，以及物理或化学介导的方法导入机体组织中；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。

30、有益效果

31、本发明提供了has-mir-129-5p在制备延缓细胞衰老和机体老化的药物中的应用。本发明通过模拟与临床治疗过程中常发生的药物诱导的衰老(tis)模型以及自然衰老模型：c57bl/6小鼠气管内滴注(i.i)博莱霉素(1.875mg/kg)诱导肺衰老模型；20月龄c57bl/6小鼠自然衰老模型。实验证明，将has-mir-129-5p腹腔注射入小鼠体内，能显著改善上述肺衰老以及自然衰老的发生发展。同时，本发明采用的体外细胞衰老模型：原代人胚肺成纤维细胞mrc5，采用博莱霉素(1μg/ml)构建细胞衰老模型，转染has-mir-129-5p通过结合itpr2的3'utr区域抑制其表达，进而调控细胞内钙离子从内质网到线粒体的信号转导，钙离子转移导致线粒体膜电位下降、活性氧化物(ros)积累减少、dna损伤反应减少，最终延缓细胞衰老。因此，本发明首次提出了has-mir-129-5p能够应用于预防/治疗临床上常发生的药物诱导衰老(tis)的药物研发制备。

32、本发明提供的控制细胞和机体衰老的药物安全，药理作用较强，疗效明确，副作用小。本发明为预防，检测，保护，治疗和研究细胞和机体衰老提供了一种新的药物来源，本发明提供的控制细胞和机体衰老的药物安全，药理作用较强，副作用小，疗效明确；且容易推广应用临床，能够在较短时间内产生巨大的临床应用前景和社会效益。