一种通过降低神经细胞氧化损伤来治疗抑郁症的药物

1.本发明属于抑郁症技术领域，尤其涉及一种通过降低细胞氧化损伤来治疗抑郁症的药物。


背景技术：

2.抑郁症是是对人类健康产生严重危害的精神疾病，抑郁症的病因十分复杂且患者的复发率高，同时患者存在着自杀倾向。而且，抑郁症是一种严重影响人类情绪和认知功能的慢性精神疾病，该类疾病常反复发生，间歇期可以完全缓解，但是部分患者具有残留症状。
3.目前的研究发现氧化应激可能参与了抑郁症的病理过程，且氧化应激指标的变化与其病程和症状特点相关。氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时，体内高活性自由基产生过多，超出氧化物的清除能力，倾向于氧化，导致组织损伤的过程。氧化应激会降低神经细胞的活性，从而进一步导致患者出现抑郁症的情况。因此，有效的减少氧化应激对于神经细胞的损伤，将有助于治疗抑郁症患者。
4.cycloviolacin o1是由香堇菜中提取的一种多肽，其氨基酸序列为caescvyipctvtallgcscsnrvcyngip，目前cycloviolacin o1已知的功能为抑制细菌，真菌和病毒。关于cycloviolacin o1在降低神经细胞氧化损伤中的功能尚不可知。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供cycloviolacin o1多肽通过降低神经细胞氧化损伤来治疗抑郁症的新应用，从而将其用于制备新的治疗抑郁症的药物。
6.为实现上述目的，本发明提供了如下的技术方案：本发明提供了一种通过降低神经细胞氧化损伤来治疗抑郁症的药物，所述药物包括有效剂量的cycloviolacin o1多肽。
7.优选地，所述cycloviolacin o1多肽的氨基酸序列为: caescvyipctvtallgcscsnrvcyngip。
8.优选地，所述药物恢复氧化损伤导致的神经细胞活性下降；恢复氧化损伤导致的神经细胞功能下降；恢复氧化损伤导致的促细胞增殖蛋白活性下降；恢复氧化损伤导致的细胞促细胞凋亡蛋白活性上调。
9.其次，本发明提供了 cycloviolacin o1多肽在制备恢复氧化损伤导致的神经细胞活性下降药物中的应用。
10.优选地，所述cycloviolacin o1多肽的氨基酸序列为: caescvyipctvtallgcscsnrvcyngip。
11.其次，本发明提供了cycloviolacin o1多肽在制备恢复氧化损伤导致的神经细胞功能下降药物中的应用。
12.优选地，所述cycloviolacin o1多肽的氨基酸序列为: caescvyipctvtallgcscsnrvcyngip。
13.其次，本发明提供了 cycloviolacin o1多肽在制备恢复氧化损伤导致的神经促细胞增殖蛋白活性下降药物中的应用。
14.优选地，所述cycloviolacin o1多肽的氨基酸序列为: caescvyipctvtallgcscsnrvcyngip。
15.其次，本发明提供了一种治疗抑郁症的药用组合物，所述药用组合物包括cycloviolacin o1多肽和可药用载体，所述cycloviolacin o1多肽的氨基酸序列为: caescvyipctvtallgcscsnrvcyngip。
16.本发明的有益效果是：本发明提供了cycloviolacin o1多肽通过降低神经细胞氧化损伤来治疗抑郁症的新应用，cycloviolacin o1恢复氧化损伤导致的神经细胞活性下降；恢复氧化损伤导致的神经细胞功能下降；恢复氧化损伤导致的促细胞增殖蛋白活性下降；恢复氧化损伤导致的细胞促细胞凋亡蛋白活性上调来有效的降低氧化损伤对于神经细胞的损害，从而可将其制备成药物来治疗抑郁症患者。
附图说明
17.图1为cycloviolacin o1对于神经细胞存活率的影响；图2为cycloviolacin o1对于神经细胞氧化损伤的作用；图3为cycloviolacin o1对于神经细胞中细胞增殖活性和凋亡活性相关蛋白的影响；图4为cycloviolacin o1对于氧化损伤导致的神经细胞形态变化的影响。
具体实施方式
18.所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
19.实施例1cycloviolacin o1对于神经细胞存活率的影响1.取对数生长期的sh-sy5y细胞，通过细胞计数后调整细胞浓度，按照1
×
105个/ml每孔100μl细胞接种于96孔板中，于37℃ 5% co2中培养24h后，弃掉上清液；2.对照组加入100μl dmem培养基，实验组加入5μg/ml，50μg/ml,100μg/ml，200μg/ml，400μg/ml，800μg/ml的cycloviolacin o1多肽溶液，同时设置只加100μl dmem培养基不含细胞的空白对照组，每组设置有5个重复；3.继续培养24h后，弃掉上清，加入100μl mtt溶液，然后温育4h；4.吸除液体，加入150μl dmso，测定490nm吸光度值，计算细胞活性。
20.实施例2cycloviolacin o1对于神经细胞氧化损伤的作用1.取对数生长期的sh-sy5y细胞，通过细胞计数后调整细胞浓度，按照1
×
105个/
ml每孔100μl细胞接种于96孔板中，于37℃ 5% co2中培养24h后，弃掉上清液；2. 对照组加入100μl dmem培养基，实验组1加入100 μl dmem培养基，实验组2加入100μl含有200μg/ml cycloviolacin o1多肽的培养基，处理24h，每组设置有5个重复；3.处理结束后，去除培养基，对照组加入100μl dmem培养基，实验组1和实验组2加入100μl含有200μmol/ml h2o2的dmem培养基，处理24h；4.处理结束后，弃掉上清，加入100μl mtt溶液，然后温育4h；5.吸除液体，加入150μl dmso，测定490nm吸光度值，计算细胞活性。
21.实施例3cycloviolacin o1对于神经细胞中细胞增殖活性和凋亡活性相关蛋白的影响1.取对数生长期的sh-sy5y细胞，制成细胞悬液将细胞均匀接种于6孔板中，于37℃ 5% co2中培养，待细胞密度达到85%以上的时候，弃掉上清液；2. 对照组加入2ml dmem培养基，实验组1加入2ml dmem培养基，实验组2加入2ml含有 200μg/ml cycloviolacin o1多肽的培养基，处理24h，每组设置有5个重复；3.处理结束后，去除培养基，对照组加入2ml dmem培养基，实验组1和实验组2加入含有2ml的含有200μmol/ml h2o2的dmem培养基，处理24h；4.处理结束后，去除培养基加入适量含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的蛋白裂解液，使用细胞刮刀将细胞刮下并收集至离心管中；5.置于摇床上，冰上裂解30min，结束后将离心管置于预冷的离心机中，离心15min；6.离心结束之后，将得到的上清转移到新的离心管中，使用bca法测定各组蛋白样品的浓度，添加loading buffer，置于95℃水浴中 煮5min得到最终的蛋白样品；7.配置12%分离胶和5%浓缩胶，安装电泳架，进行蛋白上样，初始电压为恒压80v，进入分离胶后，调整为恒压120v至电泳结束；8.电泳结束后，按照经典的三明治模型安装电转夹，电转电流调节为恒流250ma，电转时间为90min；9. 电转结束后，将膜放入5%的脱脂奶粉中室温封闭1h；10. 按照抗体说明书稀释bax，cyclin-d1，gapdh一抗，并根据蛋白大小孵育相应的一抗，4℃孵育过夜；11. 使用tbst缓冲液洗膜3次，每次10min，之后孵育相应的二抗，摇床常温孵育1h；12. 去除二抗，使用tbst将pvdf膜清洗3次，共30min，置于显影仪上进行显影。
22.实施例4cycloviolacin o1对于氧化损伤导致的神经细胞形态变化的影响1.取对数生长期的sh-sy5y细胞，制成细胞悬液将细胞均匀接种于6孔板中，于37℃ 5% co2中培养，待细胞密度达到85%以上的时候，弃掉上清液；2. 对照组加入2ml dmem培养基，实验组1加入2ml dmem培养基，实验组2加入2ml 200μg/ml cycloviolacin o1多肽溶液，处理24h，每组设置有5个重复；3.处理结束后，去除培养基，对照组加入2ml dmem培养基，实验组1和实验组2加入含有2ml的含有200μmol/ml h2o2的dmem培养基，处理24h；
4.处理结束后，置于显微镜下，观察细胞的突触形态变化。
23.实验结果实施例1得到的结果如图1所示，可以看出，在本发明25-800 μg/ml的浓度区间中，cycloviolacin o1对于sh-sy5y细胞不具有细胞毒性，而且，在50-800μg/ml的区间中，cycloviolacin o1对于sh-sy5y细胞的生长具有促进作用，且促进作用在200μg/ml达到最大。
24.实施例2得到的结果如图2所示，实验组1的细胞活性为49.70
±
2.98，实验组2的细胞活性为69.49
±
4.06。实验组1相较于对照组细胞活性明显下降，且p＜0.05，差异具有统计学意义，说明h2o2处理会导致sh-sy5y细胞的活性下降；实验组2相较于对照组细胞活性升高，且p＜0.05，差异具有统计学意义；说明cycloviolacin o1可以有效的提高神经细胞在氧化损伤环境下的活性。
25.实施例3得到的结果如图3所示，实验组1中促细胞凋亡蛋白bax的灰度升高，而促细胞增殖蛋白cyclin-d1的灰度下降，说明h2o2处理会导致sh-sy5y细胞中促细胞凋亡蛋白bax的蛋白表达升高，而导致促细胞增殖蛋白cyclin-d1的蛋白表达下降；相较于实验组1，实验组2中bax的灰度下降，而ccyclin-d1的灰度上升；说明cycloviolacin o1可以有效的降低氧化损伤导致的细胞中促细胞凋亡蛋白bax的蛋白表达升高，并且有效的增加氧化损伤导致的细胞中增殖促进蛋白cyclin-d1的蛋白表达降低，从而有效的增加神经细胞的活性。
26.实施例4得到的结果图4所示，相较于对照组，实验组1中细胞的轴突长度明显降低；而实验组2相较与实验组1中细胞的轴突长度则明显升高，说明使用cycloviolacin o1可以有效的恢复氧化损伤导致的神经细胞突触变短的情况，从而有效的恢复神经细胞的功能。
27.最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。