(4-met hoxyphenyl)-8-(3-methylbut-2-en-1-yl)-4-oxo-4h-chromen-7-yl beta-d-glucopyranoside.
5.朝藿定a(epimedin a)分子式：c
39h50o20
，分子量：838.80，cas号：110623-72-8，别名：淫羊霍定a，英文别名：epmedina；4h-1-benzopyran-4-one，3-[(6-deoxy-2-o-β-d-glu copyranosyl-α-l-mannopyranosyl)oxy]-7-(β-d-glucopyranosyloxy)-5-hydroxy-2-(4-methoxypheny l)-8-(3-methyl-2-buten-1-yl)-3-{[6-deoxy-2-o-(beta-d-glucopyranosyl)-alpha-l-mannopyranosyl]o xy}-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methylbut-2-en-1-yl)-4-oxo-4h-chromen-7-yl beta-d-g lucopyranoside.
[0006]
朝藿定b(epimedin b)分子式：c
38h48o19
，分子量808.77632，英文别名：3-((6-deoxy
ꢀ‑
2-o-beta-d-xylopyranosyl-alpha-l-mannopyranosyl)oxy)-7-(beta-d-glucopyranosyloxy)-5-hydrox y-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methyl-2-butenyl)-4h-1-benzopyran-4-one；4h-1-benzopyran-4-one， 3-[(6-deoxy-2-o-β-d-xylopyranosyl-α-l-mannopyranosyl)oxy]-7-(β-d-glucopyranosyloxy)-5-hydr oxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methyl-2-buten-1-yl)-3-[(6-deoxy-2-o-beta-d-xylopyranosyl-alpha
‑ꢀ
l-mannopyranosyl)oxy]-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methylbut-2-en-1-yl)-4-oxo-4h-chr omen-7-yl beta-d-glucopyranoside.
[0007]
朝藿定c(epimedin c)分子式c
38h50o19
，分子量808.77632，cas号110642-44-9，中文名：淫羊藿苷c，宝藿苷vi，外观表现为一种黄色的结晶粉末。英文别名：3-((6-deoxy-2-o-(6
‑ꢀ
deoxy-alpha-l-mannopyranosyl)-alpha-l-mannopyranosyl)oxy)-7-(beta-d-glucopyranosyloxy)-5-h ydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methyl-2-butenyl)-4h-1-benzopyran-4-one；(4-methoxyphenyl)
‑ꢀ
8-(3-methyl-2-buten-l-yl)-4h-1-benzopyran-4-one，3-[[6-deoxy-2-o-(6-deoxy-α-l-mannopyranosy l)-α-l-mannopyranosyl]oxy]-7-(β-d-glucopyranosyloxy)-5-hydroxy-2-3-{[6-deoxy-2-o-(6-deoxy
‑ꢀ
alpha-l-mannopyranosyl)-alpha-l-mannopyranosyl]oxy}-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-me thylbut-2-en-1-yl)-4-oxo-4h-chromhen-7-ylbeta-d-glucopyranoside.
[0008]
宝藿苷i分子式c
27h30o10
，分子量808.77632，cas号：113558-15-9，别名：淫羊藿次苷 ii，脱水淫羊藿苷，英文别名：baohuoside i；3，5，7-trihydroxy-4
′‑
methoxyl-8-prenylflavone-3
‑ꢀ
o-rhamnopyranoside4h-1-benzopyran-4-one，3-((6-deoxy-alpha-l-mannopyranosyl)oxy)-5，7-dihy droxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methyl-2-butenyl)-5，7-dihydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-8-(3-meth ylbut-2-en-1-yl)-4-oxo-4h-chromen-3-yl 6-deoxy-alpha-l-mannopyranoside.
[0009]
1.化学成分
[0010]
《中华本草》中记载淫羊藿地上部分含淫羊藿黄酮苷(icariin)，淫羊藿黄酮次苷(icariside) i，并含钾、钙等无机元素。箭叶淫羊藿全草含淫羊藿黄酮苷、皂苷、鞣质、挥发油、二十六醇(ceryl alcohol)、三十烷(triacontane)、植物甾醇(phytosterol)、油酸(oleic acid)、亚油酸(linoeic acid)、软脂酸(palmitic acid)、槲皮素(quercetin)及槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖苷(quercetin-3-o-β-d-glucoside)，此外，含少量钾等无机元素，另有文献报道合淫羊藿黄酮次苷i、淫羊藿素-3-鼠李糖苷(icaritin-3-o-a-rhamnoside)、脱
水淫羊藿素-3-鼠李糖苷 (anhy-droicaritin-3-o-a-rhamnoside)、箭叶苷(sagittatoside)a、b、c，淫羊藿定(epimedin) a、b、c，箭叶亭苷(sagittatin)a、b；地上部分含淫羊藿苷(icariside)a1、b2、b6、b9、 d3、e6、e7、h1，淫羊藿苷元b1(icarisidinb1)，淫羊藿醇(icariol)a1、a2，赤式及苏式狄利格醇(dilignol)，5，5’二甲氧基秋利格醇(5，5
′‑
dimethoxydilignol)，赤式及苏式狄利格醇鼠李糖苷(dilignol rhamnosid)，赤式5
’‑
甲氧基狄利格醇鼠李糖苷(5
’‑
methoxydilignolrhamnoside)，赤式及苏式的1，2-双-(4羟基-3-甲氧基苯基)-丙烷-1，3-二醇[1，2-bis-(4-hydro xy-3-methoxyphenyl)-propane-1，3-diol]，5-甲氧基异落叶松脂醇〔5-methoxy(solaritiresinol〕，异落叶松脂醇，5-甲氧基-9-木糖基异落叶松脂醇，左旋-橄榄脂素(olivil)，右旋-丁香树脂酚-葡萄糖苷(syringaresinol-o-β-d-glucopy-glucopy-ranoside)，山矾脂素葡萄糖苷 (symplocosigenin-o-β-d-glucopyra-noside)，二氢去氢双松柏醇(dihydrodehydrodiconiferylalcohol)，苯乙醇基葡萄糖苷(phenethyl glucoside)，(z)-己-3-烯醇葡萄糖苷[(z)-3-hexenylglucoside]，布卢门醇-c-葡萄糖苷(blumenol-c-glucoside)。巫山淫羊藿地上部分含淫羊藿黄酮甙及巫山淫羊藿黄酮苷(wushanicariin)，宝藿苷(baohuoside)i、ii、vi，柔藿苷 (rouhuoside)，槲皮素-3-半乳糖苷，槲皮索-3-鼠李糖苷，淫羊藿属苷(epimedoside)a淫羊藿素，8-异戊烯基山柰酚-4
’‑
甲氧基-3-〔木糖基(l
→
4)鼠李糖苷]-7-葡萄糖苷 {8-prenylkaempferol-4
′‑
methoxy-3-[xylosyl(l
→
4)rhamnoside]-7-glucoside}，此外，尚含钙等无机元素。朝鲜淫羊藿地上部分含淫羊藿黄酮苷及淫羊藿属苷a淫羊藿定a、b、c，淫羊藿定a1、b1，槲皮素，脱水淫羊藿素-3-鼠李糖苷，朝鲜淫羊藿属苷(epimedokoreanodide) i、ii，从地下部分分得二十九烷(n-nonacosane)，三十一烷(nhentriacotane)，菜油甾醇 (campesterol)，β-谷甾醇(β-sitosterol)，β-谷甾醇-3-葡萄糖苷，某油甾醇-3-葡萄糖苷，2
”‑ꢀ
鼠李糖意卡瑞忒a(2
”‑
orhamnosylikarisosidea)，2
”‑
鼠李糖淫羊藿黄酮次苷ii，淫羊藿黄酮苷，淫羊属苷a，意卡瑞苷(ikarisioside)a，即宝藿苷(baohuoside)ii，此外，尚含钙等无机元素。柔毛淫羊藿地上部分含淫羊藿黄酮苷，淫羊藿黄酮次苷i，淫羊藿属苷c，藿苷ii、 iv，金丝桃苷(hyperosde)及柔藿苷。此外，尚含钙等无机元素。宝兴淫羊藿全草含淫羊藿黄酮苷，淫羊藿属甙a、c，淫羊藿素，去甲淫羊藿素，宝霍苷i、ii、iii、iv、v、vi、viii，宝藿素(baohuosu)，小麦黄素(tricin)，山柰酚-3-双鼠李糖苷(kaempfero-3-dirhamnoside) 及金丝桃苷，此外，尚含钙等无机元素。
[0011]
柴士伟等从淫羊藿干燥叶中分离鉴定7个化合物，分别为2，3，4，6，7-五甲氧基-菲、 4，5，-二羟基-2，3，6-三甲氧基-9，10-二氢菲、5，7，4
′‑
三甲氧基-4-苯基香豆素、3，5，7，4
′‑
四甲氧基黄酮、4-羟基-3-异戊二烯基-苯甲酸、4-羟基肉桂酸甲酯和4-羟基-(2e)-2
‑ꢀ
壬烯酸(天津中医药，2016，33，114-117)。吴雪韦从朝鲜淫羊藿乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位共分离得到44个化合物，经波谱学方法鉴定为：koreanosidef、koreanosideg、 epicomuina、epicomuin f、epicormuinb、朝藿素b、朝藿素c、朝藿素d、淫羊藿素、p-脱水淫羊藿素、epimedoninc、3，7-二甲基山奈酚、槲皮素、木犀草素、5，7-dihydroxy-2
‑ꢀ
(p-hydroxyphenoxy)-6-prenylchromone、epimedoninb、淫羊藿次苷1、宝藿苷i、koreanosided、koreanoside e、淫羊藿苷、epimedoside c、金丝桃苷、淫羊藿素-3-o-鼠李糖苷、朝藿苷c、 ikarisoside a、korepimeosidea、korepimeosideb、korepimedosidea、箭藿苷c、
epimedokoreanoside iii、朝藿苷甲、朝藿菲苷a、icariside a2、2-羟基-3，4，6，7-四甲氧基-9，10-二氢菲、7
‑ꢀ
羟基-2，3，4，6-四甲氧基-9，10-二氢菲、2，3，5，6，7-五甲氧基-9，10-二氢菲、麦芽酚、朝藿酮a、沙立苷、1，4-二羟基-2-异戊烯基苯、2，3-二羟基硬脂酸丙脂、β-谷甾醇和胡萝卜苷(山东大学， 2018年学位论文)。李英等从淫羊藿总黄酮提取物中分离得到11个化合物，分别鉴定为5-羟基-2-异戊烯基苯酚-1-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、kaempferol-orhamnopranosyl-3-(1
ꢀ→
2)-rhamnopyranoside、3-o-α-l-rhamnosyl-7-o-β-d-glucosyl kaempferol、sagittasinec、山柰酚-3-o-[α-l-鼠李糖基(1
→
6)-β-d-半乳糖苷]-7-o-α-l-鼠李糖苷、槲皮素-3，7
‑ꢀ
二氧-α-l-双鼠李糖苷、山柰酚-3，7-o-α-l-二鼠李糖苷、rhamnocitrin-3-o-β-neohespe ridoside、山柰酚-3-o-α-l-鼠李糖-7-o-[α-l-鼠李糖基(1
→
2)-β-d-葡萄糖]苷、hexandrasi de e和柔藿苷(中草药，2015，46，2057-2061)。廖思红等从偏斜淫羊藿叶片中鉴定出 6个化合物：朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、3，5，7-三羟基4
’‑
甲氧基-8-异戊烯基黄酮-3-o-α-l-吡喃鼠李糖基(1
→
2)-α-l-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-o-鼠李糖甙、山奈苷 (植物科学学报，2013，31，385-390)。崔祥龙等从箭叶淫羊藿的三氯甲烷萃取部位分离得到7个化合物，其结构分别鉴定为1，5-二羟基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌(1，5-dihydro xy-3-methoxy-7-methyl-anthraquinone)、2，2-二甲基-1-苯并吡喃-6-醇(2，2-dimethyl-2h
‑ꢀ
1-benzopyran-6-ol)、淫羊藿素(icaritin)、5，7，4
′‑
三羟基-8，3
′‑
二异戊烯基黄酮(5，7，4
′‑
trih ydroxy-8，3
′‑
diprenylflavone)、大黄素(emodin)、苜蓿素(tricin)和β-谷甾醇(β-sitosterol) (中国实验方剂学杂志，2010，16，101-103)。张海艳等从光叶淫羊藿根、茎中分离得到了8个化合物，分别为(7s，8r，8
′
r)-3，3
′‑
二甲氧基-4，4
′
，8
′‑
三羟基-9-乙酰氧基-7，9
‑ꢀ
环氧木脂素、胡萝卜苷、淫羊藿次苷c、2
″‑
鼠李糖大花淫羊藿苷a、淫羊藿苷、淫羊藿次苷a、朝藿定c和柔藿苷；从光叶淫羊藿叶中分离得到了4个化合物，分别鉴定为thalictoside、sutchuenoside aicariside d2和山柰苷(中草药，2009，40，1719-1723)。宋丽娜等从四川淫羊藿70％乙醇提取物中分离得到了10个化合物，鉴定其结构为川藿苷a(sutchuenoside a)、川藿苷b(sutchuenosideb)、大豆苷元(daidzein)、宝藿苷i(baohuoside i)、kaempferide3-rhamnoside、淫羊藿苷(icariin)、an-hydroicaritin-3
‑ꢀ
o-α-l-rhamnopyranosyl(1
→
2)-α-l-rhamnopyranoside、对羟基苯甲酸(p-hydroxy benzoic acid)、胡萝卜苷(daucosterol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)(中草药，2009，40， 1525-1528)。杨云等从淫羊藿叶子分离得到(7r，8s)-4，9-二羟基-3，3
′‑
二甲氧基-7，8
‑ꢀ
二氢苯并呋喃-1
′‑
丙醇基新木脂素-9
′‑
o-α-l-鼠李糖苷、(7r，8s，8
′
r)-4，4，
′
8，
′
9-四羟基
ꢀ‑
3，3
′‑
二甲氧基-7，9
′‑
单环氧木脂素、(+)-cyc loolivil、3，5，7，4
′‑
四羟基-8-异戊烯基黄酮-3-o-α-l-吡喃鼠李糖苷、β-谷甾醇、对羟基苯甲醛、丁二酸和对羟基苯乙醇(中药材，2009，32，1051-1053)。杨云等从心叶淫羊藿epimedium bievicornum分离得到对硝基乙基苯酚、毛柳苷、沙立苷、5，7，4
′‑
三羟基-8，3
′‑
二异戊烯基黄酮、山柰酚-3-o-α-l
‑ꢀ
鼠李糖苷、宝藿苷i、箭藿苷b、鼠李糖基淫羊藿次苷、7，3
′
，4
′
，5
′‑
四羟基黄酮醇、去甲基淫羊藿素和1-o-β-葡药糖苷-1，4-二羟基-2-(3
′‑
羟基-3
′‑
甲基丁基)苯(中草药，2009， 40，1026-1030)。张树军等从心叶淫羊藿epimedium brevicornum全草分离得到5-羟基-2
‑ꢀ
异戊烯基苯酚-1-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、4-羟基-2-异戊烯基苯酚-1-o-β-d-葡萄糖苷、 5，7，4
′‑
三羟基黄酮-7-o-α-l-鼠李糖苷、宝藿苷(baohuoside i)、宝藿苷(baohuosideii)、淫羊藿苷c(icariside c)、淫羊藿苷(icariin)和淫羊藿苷(icariside)(中草药，2008，39，
325-327)。程岩等从朝鲜淫羊藿水提取物中分离得到3，7，11-三甲基-2，6
‑ꢀ
十二二烯-1，10，11-三羟基-10(s)-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(3，7，11-trimethyl-2，6-dodecadien-1，10，11-trihydroxy-10(s)-o-β-d-glucopyranoside)、淫羊藿苷c1(icarisidec1)、淫羊藿苷a5(icarisidea5)和epimedoicarisosidea(中草药，2007，38，1135-1138)。王斌从朝鲜淫羊藿中分离得到淫羊藿苷(icariin)、朝藿苷甲(korepimedoside a)、槲皮素 (quercetin)、宝藿苷i(baohuoside i)、箭藿苷a(sagittatosidea)、宝藿苷ii(baohuoside ii)、淫羊藿次苷i(icarisidei)和β-脱水淫羊藿素(β-anhydroicatritin)(吉林农业大学，2007年学位论文)。王丹红分离鉴定了朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、淫羊藿次苷i、淫羊藿次苷ii、β-谷甾醇和胡萝卜苷(北京中医药大学，2007年学位论文)。谢娟平鉴定了其中8种化合物的结构，分别为双藿苷a、淫羊藿属苷a、朝藿定c、淫羊藿苷、淫羊藿属苷c、意卡瑞苷a、去多甲基羟基淫羊藿素和齐墩果酸(西北大学，2007年学位论文)。程岩等从朝鲜淫羊藿水提取物中分离得到：淫羊藿苷(icariin)、宝藿苷i(baohuosidei)、箭藿苷b(sagittatoside b)、宝藿苷ii(baohuosideii、stragalin)、3，5，7三羟基4
′
甲氧基8异戊烯基黄酮3-o-α-l鼠李吡喃糖基(1
→
2)-α-鼠李吡喃糖苷、1，2，3，4 tetrahy-dro 3，7 dihydroxy 1(4 hydroxy 3 methoxyphenyl)6 methoxy 2，3 naphthalenedimethanol、朝藿定c(epimedin c)(沈阳药科大学学报，2006，23，644-647+657)。王婷从淫羊藿药材乙酸乙酯萃取部位中分离鉴定了淫羊藿苷、宝藿苷ii、朝藿素b、宝藿苷i、金丝桃苷和木犀草素(中国协和医科大学，2006年学位论文)。郭洪利等从心叶淫羊藿分离得到：5，7，4
′‑ꢀ
三羟基-8，5
′‑
二异戊烯基黄酮、淫羊藿素(i-caritin)、去甲淫羊藿素(desmethylicaritin)、 3，7-二羟基-4
′‑
甲氧基黄酮和3，7，3
′
，4
′
，5
′‑
五羟基黄酮(robinetin)(中国药学杂志，2006， (14)，1060-1062)。李娜从朝鲜淫羊藿提取物中分离得到：朝藿苷f(caohuoside f)，茂藿苷b(maohuoside b)，朝藿定a(epimedin a)，朝藿定b(epimedin b)，淫羊藿苷(icariin)，淫羊藿次苷ii(icrisideii)，淫羊藿次苷i(icariside i)，淫羊藿苷a(epimedoside a)，3，5，7，4
’‑ꢀ
四羟基-8-异戊烯基黄酮-7-o-β-d-吡喃葡萄糖-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(hexandraside e)，β
‑ꢀ
谷甾醇(β-sitosterol)，胡萝卜苷(daucosterol)(沈阳药科大学，2006年学位论文)。甘祺锋等从心叶淫羊藿分离鉴定了：淫羊藿苷(icariin)、淫羊藿苷i(icarisidei)、淫羊藿苷ii(icarisideii)、淫羊藿定a(epimedina)、淫羊藿定b(epimedinb)、淫羊藿定c(epimedinc)、icaritin-3-o-d-rhamnoside、1，3，5，8-四羟基酮和1-羟基-3，4，5，
‑ꢀ
三甲氧基酮、对甲氧基苯酚(p-methoxyphenol)、二十三烷酸(behenicacid)、β
‑ꢀ
谷甾醇(β-sitosterol)和胡萝卜苷(daucosterol)(现代中药研究与实践，2005，19， 39-42)。杨峻山等从偏斜淫羊藿的地上部分中分离得到：宝藿苷ii、金丝桃苷、淫羊藿苷c、齐墩果酸、宝藿苷iii、宝藿苷v、淫羊藿苷a和山奈素-3-双鼠李糖苷(中国药学杂志，2005，40，175-177)。孔令义等对朝鲜淫羊藿epimedium koreanum总黄酮分离得到：宝藿苷i、淫羊藿次苷i、epimedoside c、淫羊藿定b、淫羊藿苷、金丝桃苷、 hexandraside e、脱水淫羊藿素、麦芽酚、去甲基脱水淫羊藿素、肌醇、 epimedoicarisoside a和(+)-cycloolivil(中草药，2002，33，964-967)。王军宪等从小檗科植物茂汶淫羊藿(epimediumpplatyetalum k.meyer)的地上部分首次分离得到：茂藿苷a、茂藿苷b、淫羊藿苷、宝藿苷i和胡萝卜苷(acta botanica sinica，2002， 1258-1260)。杨峻山等从黔岭淫羊藿(epimediumleptorrhizumstearn)根的正丁醇萃取物中分离得到：淫羊藿次苷、淫羊藿苷、淫羊藿次苷c、icariesionl 4
′‑
β-d glucopyranoside 和朝
藿定c(中国药学杂志，2002，37，740-742)。孙朋悦等自朝鲜淫羊藿(epimediumkoreanum nakai)的地上部分分离得到：麦芽酚、沙立苷、槲皮素、淫羊藿苷a和粗毛淫羊藿苷(中国药物化学杂志，1998，33，919-922)。肖培根等从巫山淫羊藿(epimediumwushanense t.s.ying)全草中分离得到：胡萝卜甙(daucosterol)、宝藿甙i(baohuosidei)、淫羊藿次甙i(karisid i)、槲皮素(quercetin)、淫羊藿次甙c(epimedoside c) 和淫羊藿甙(icariin)(西北药学杂志，1997，12，10-12)。张如意等从巫山淫羊藿中分离鉴定了：脱水淫羊藿素、去甲脱水淫羊藿素、朝藿定b、朝藿定c、双藿苷b和双藿苷a(中国中药杂志，1996，21，38-40)。肖培根等从小檗科植物朝鲜淫羊藿 epimediumkoreanum的地上部分分得：胡萝卜甙、淫羊藿甘、淫羊藿次甙c、金丝桃甙、槲皮素、淫羊藿次甙i、宝藿甙i和淫羊藿素(中草药，1995，26，453-455)。李珠莲等从箭叶淫羊藿epimediumsagittafim中分到了：β-谷甾醇，β-谷甾醇葡萄糖苷和箭叶素(中草药，1995，26，451-452)。李文魁从朝鲜淫羊藿地上部分的乙酸乙酯提取物中分离鉴定了：朝藿酮a，朝藿素a、b、c、d，朝藿甙a、b、c、d、e和朝藿菲苷a(中国协和医科大学，1995年学位论文)。李也实从小檗科植物柔毛淫羊藿epimediumpubescens maxim.的地上部分得：淫羊藿苷i、淫羊藿苷c、宝藿苷v、淫羊藿苷、金丝桃苷和宝藿苷i(中草药，1992，23，8-11+54)。回瑞华等从淫羊藿挥发油中分离出薄荷醇、1，2-二甲氧基-4-(2-丙烯基)-苯、5-(1-丙烯基)-1，3-苯并间二氧杂环戊烯、3，5-二甲氧基-甲苯、冰片、十五(碳)烷、1，2，3-三甲氧基-5-甲苯、2，6，6-三甲基-2，4-环庚二烯-1-酮、 2-莰酮等(分析试验室，2005，24，63-66)。孙永杰等对朝鲜淫羊藿多糖(efpc)进行分离纯化，得到中性多糖(efpn)和酸性多糖(efpa)；efpc、efpn和efpa糖含量分别为79.59％、87.14％和91.43％，efpn和efpa的分子量分别为1.5
×
104～ 1.4
×
105da和2.5
×
104～9.8
×
104da；efpn由甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖和葡药糖组成，其物质的量比为0.6∶1.0∶1.4∶1.6∶1.7；efpa由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和阿拉伯糖组成，其物质的量比为1.7∶7.4∶1.4∶1.8∶1.0(化学试剂，2022， 44，369-375)。李畅提取分离得到淫羊藿多糖eps-1-1和eps-2-1，分子量分别为9733da、 204888da；eps-2-1的糖醛酸含量明显高于eps-1-1，eps-1-1由摩尔比为1.90∶0.67∶0.05∶ 0.08∶3.29∶1.51∶0.05∶0.37的果糖、甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成；eps-2-1由摩尔比为5.25∶0.18∶0.32∶0.13∶1.14∶0.16∶0.55∶0.08∶0.22果糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成(南京中医药大学， 2020)。张宁分离得到朝鲜淫羊藿中性多糖efpc、efpn和efpn-1，efpc主要由man、rha、glaa、glc、gal、ara构成，百分摩尔比为0.9∶1.0∶1.2∶1.5∶1.1∶1.8；efpn由man、rha、 glc、gal、ara构成，百分摩尔比为0.6∶1.0∶1.4∶1.6∶1.7；efpn-1则由rha、glc、gal、ara构成，百分摩尔比为1.0∶6.8∶1.8∶0.7(长春中医药大学，2019年学位论文)。李金玉等对朝鲜淫羊藿(epimedium koreanum)叶的中共分离得到：金圣草素-7-o-β-d-葡萄糖醛酸-6
″‑
甲酯、芹菜素-7-o-β-d-葡萄糖醛酸-6
″‑
甲酯、3
′
，5，7-三羟基-4
′‑
甲氧基黄酮-3-o-α-l-吡喃鼠李糖基(1
→
6)-β-d-葡萄糖苷、山奈酚-3-o-α-l-吡喃鼠李糖基(1
→
6)-β-d-葡萄糖苷、芦丁和槲皮素-3-o-β-d-半乳糖-7-o-β-d-葡萄糖苷(云南中医中药杂志，2014，35， 67-69)。张红飞等从柔毛淫羊藿叶中分离得到：脱水淫羊藿素、淫羊藿次苷ii、，2
′″ꢀ‑
o-鼠李糖基淫羊藿次苷ii、去甲基脱水淫羊藿素、宝藿苷ii、朝霍素b、粗毛淫羊藿苷(7)，苜蓿素、山柰酚、大豆素和对羟基苯甲酸乙酯(中国中药杂志，2013，38，1 942-1946)。
[0012]
2.药理作用
[0013]
邬仁华等报道了淫羊藿素可以抑制肝癌hep-g2细胞增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与下调bcl-2蛋白和上调bax蛋白的表达以及增强caspase-3的活性相关(西部医学，2022，34，819-823)。肖平等报道了淫羊藿总黄酮联合戊酸雌二醇通过上调t gf-β1、smad2表达，调节骨质疏松大鼠骨代谢，增加骨量，提高骨密度和骨强度，从而起到抗骨质疏松作用(中国骨质疏松杂志，2022，28，818-824)。张学学等报道了淫羊藿苷可以抑制bpa和肾阳虚诱导睾丸细胞凋亡，机制与上调ar表达、下调p
‑ꢀ
ar及p-akt表达有关(中国中西医结合杂志，2022，42，733-739)。邓冬杰等报道了淫羊藿素能够抑制hucct1细胞的增殖，其作用机制可能与akt/mtor信号通路调控的糖酵解途径有关(中草药，2022，53，3061-3069)。何嘉怡等报道了淫羊藿苷可通过激活taz表达来预防大鼠激素性股骨头坏死的发生发展(骨科，2022，13，255-263)。秦明慧等报道了巫山淫羊藿对大鼠甲状腺功能减退症有一定的治疗作用(中国处方药， 2022，20，23-25)。田雨等报道了淫羊藿次苷ii能抑制caspase 3/bax/bcl-2信号通路减少h2o2诱导的n2a细胞的凋亡(现代中药研究与实践，2022，36，38-43)。刘卫国等报道了淫羊藿素联合cddp较cddp单用对人乳腺癌细胞及其cddp耐药细胞株的增殖、侵袭抑制作用和凋亡诱导作用更加明显(广西医科大学学报，2022，39，666-671)。郑层层等报道了淫羊藿苷可减轻lps和ifn-γ联合诱导的bv2细胞拟神经炎症反应，其机制可能与抑制nlrp3炎症小体相关蛋白表达有关(中国药理学与毒理学杂志，20 22，36，260-266)。李藤藤等报道了淫羊藿苷能够减轻泡沫巨噬细胞的凋亡，抑制炎症因子的表达，从而可能延缓动脉粥样硬化的发展进程(中国比较医学杂志，2022，3 2，9-15)。魏德华等报道了淫羊藿苷可通过调控p38 mapk信号通路缓解炎症反应及氧化应激，发挥减轻腹部皮瓣缺血再灌注损伤的作用(现代生物医学进展，2022，22， 1024-1027+1017)。毕瑜婷等报道了淫羊藿苷可抑制阻滞肝细胞癌细胞周期，抑制肝细胞癌增殖，作用机制可能与抑制akt/gsk3β/cdk通路有关(中国实验方剂学杂志，20 22，28，96-102)。刘树坤等报道了淫羊藿次苷ii对放射损伤引发的ed和病理变化具有显著的改善作用，其机制可能与其改善放射导致的氧化应激有关，淫羊藿次苷ii在动物实验中能显著降低动物死亡率(中华男科学杂志，2022，28，203-210)。梁建文等报道了淫羊藿通过多靶点、多通路治疗阿尔茨海默病，为以后科研以及临床研究提供理论依据(湖北民族大学学报(医学版)，2022，39，6-11)。刘雨等报道了网络药理学直观地展示了淫羊藿总黄酮可能从多成分、多靶点和多通路来治疗溃疡性结肠炎(沈阳药科大学学报，202 2，39，454-463)。韩庆贤等报道了淫羊藿总黄酮能通过抑制小胶质细胞介导的炎症反应保护髓鞘，可能的机制是通过降低tlr4/nf-κb炎症信号通路发挥作用(中华中医药杂志，2022，37，1357-1361)。岑延祜等报道了结论淫羊藿总黄酮可降低自发性高血压病大鼠血压并提高性功能，机制可能与提高血清睾酮水平和enos表达，降低阴茎海绵体内pde5、rock1/rock2表达有关(中国中西医结合杂志，2022，42，716-721)。孟如丹等报道了淫羊藿苷对h2o2诱导的软骨细胞氧化损伤具有保护作用，能够抑制软骨细胞凋亡，其机制跟nrf2/ho-1信号通路有关(中国现代应用药学，2021，38，3115
ꢀ‑
3121)。穆红光等报道了淫羊藿苷能够抑制肾癌os-rc-2细胞增殖和迁移，促进肾癌 os-rc-2细胞凋亡(中国医院用药评价与分析，2021，21，1339-1343)。薛亚兰等报道了淫羊藿苷通过降低神经元细胞的炎症反应和氧化应激水平，抑制细胞凋亡的发生，从而改善cums诱导的大鼠抑郁样行为(临床和实验医学杂志，2021，20，2152-2156)。李秋瑞等报道了淫羊藿素对人卵巢癌a2780细胞具有抑
制增殖、促进凋亡的作用，可能通过调控emt相关分子表达抑制a2780细胞的侵袭迁移(中国实验方剂学杂志，2 021，27，101-107)。王译雪等报道了淫羊藿素可通过下调ki-67、notch-1因子的表达水平影响scc-9细胞的增殖及凋亡(口腔医学研究，2021，37，505-508)。王甜等报道了淫羊藿多糖、绞股蓝多糖均对prrsv弱毒疫苗具有良好的免疫增强作用(黑龙江畜牧兽医，2021，(11)，122-126)。
[0014]
吕雅鑫等报道了淫羊藿苷可能通过调控三羧酸循环、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸的代谢、乙醛酸和二元酸酯、丙酮酸的代谢产物水平，进而发挥抗非小细胞肺癌生长的作用(上海中医药杂志，2021，55，84-90)。徐飞等报道了淫羊藿次苷ii可通过下调髓系来源抑制性细胞比例，减弱其免疫抑制活性，改善机体炎性微环境，阻碍血管生长，从而发挥显著抗肺癌作用(中华中医药学刊，2021，39，122-125+276-277)。周岳等在精液冷冻保护液中添加淫羊藿多糖可降低精子活性氧的水平，保护精子顶体结构和功能，从而改善解冻后精子顶体功能和精子核的完整性(天然产物研究与开发，2021， 33，1013-1019)。黄群莲等报道了淫羊藿苷抑制胰腺癌bxpc-3细胞增殖，并诱导bxpc-3 细胞凋亡(中国免疫学杂志，2021，37，289-294)。刘颖等报道了朝藿定a可以促进bmscs 向成骨细胞分化并抑制其成脂分化，可以促进成骨细胞矿化并提高成骨细胞opg/ra nkl水平从而发挥骨保护作用(中国兽医学报，2021，41，980-984+991)。周艳等报道了淫羊藿苷可有效防护大鼠gm所致耳毒性损伤(中医药导报，2020，26，35-38+48) 姜棚菲等报道了淫羊藿苷可能通过抑制ikk/nf-κb和凋亡信号通路活化，抑制脊髓损伤诱发的脊髓细胞凋亡和纤维化(中国矫形外科杂志，2020，28，2265-2269)。莫志洋等报道了淫羊藿次苷ii可抑制舌鳞状细胞癌上皮-间质转化(实用医学杂志，2020，36， 3069-3073)。高琛等报道了淫羊藿次苷ii能促进局灶性脑缺血模型大鼠神经功能的恢复(中国药房，2020，31，2386-2391)向藿等报道了淫羊藿苷可降低人ra成纤维细胞样滑膜细胞的增殖能力，诱导其凋亡，并可降低其炎性因子的表达(现代免疫学，2020， 40，360-365+423)。文艳梅等报道了淫羊藿苷可通过影响pi3k/akt信号通路激活抑制 a549细胞存活和转移(中国免疫学杂志，2020，36，2091-2095)。李菲等报道了淫羊藿苷改善血管性痴呆大鼠的学习记忆功能可能与调节海马bdnf信号通路相关(中国新药与临床杂志，2020，39，489-493)。张丽等报道了淫羊藿总黄酮通过调控mir-34a-5p 与smad2相互作用，减轻脂多糖诱导的成骨细胞损伤(中国药理学通报，2020，36， 1158-1164)。王锃等报道了淫羊藿素对hacat细胞存在明显的放射保护作用，具有促进增殖、抑制凋亡、抗氧化和抗炎的能力(辐射防护，2019，39，338-344)。赵雪强等报道了淫羊藿素可抑制人肺腺癌细胞诱导破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化(山东医药，2021，61，5-9)。蒋绍艳等报道了淫羊藿苷能抑制人卵巢癌细胞skov3及多药耐药细胞株的增殖、迁移和侵袭能力，并上调caspase-3蛋白表达，诱导细胞凋亡(四川大学学报(医学版)，2018，49，530-534)。淫羊藿苷具有促进成骨细胞的生成和活化、调节免疫、抗衰老和抗炎等多种功能。临床上淫羊藿(苷)用于治疗生殖系统、骨关节系统、呼吸系统、神经系统、心血管系统和免疫系统等多种疾病。淫羊藿(苷)对男性生殖系统的作用及机制主要包括具有雄性激素样作用，促进睾内睾酮的合成和分泌。淫羊藿(苷)通过改善精子发生的微环境、增强睾丸抗氧化作用促进精子生成，增加精子密度，改善精子活力，减缓生殖衰退。此外，淫羊藿(苷)可促进阴茎勃起，治疗勃起功能障碍及早泄。
[0015]
3.提取分离工艺
[0016]
3.1淫羊藿油 将干燥后的淫羊藿粉碎至10～40目，装入亚临界釜，抽真空排除空气，以亚临界流体r134a为提取剂，并在超声波作用下对所述淫羊藿粉进行多次提取，分别得到脂溶性提取液和淫羊藿渣；将脂溶性提取液过滤后，送入解析釜解析分离，得到r134a流体和淫羊藿油粗品混合液；将淫羊藿油粗品混合液脱溶，制得淫羊藿油粗品；再将淫羊藿油粗品送入精制装置内脱胶、脱蜡、脱酸、脱色、脱除过氧化值，再送入分子蒸馏装置内精制，制得淫羊藿精油(cn113956308a)。刘晓媛采用最佳萃取条件为萃取压力30mpa，萃取温度40℃，萃取时间1h，最佳条件下萃取挥发油，收率为2.7％(分析试验室，2005， 24，63-66)。
[0017]
3.2淫羊藿色素 曾丽萍等采用最佳提取条件为：料液比为1∶10(v/v)时，90％乙醇，50℃提取，提取3h，淫羊藿叶片中类胡萝卜素平均提取得率为29.1454μg/g (时珍国医国药，2011，22，319-321)。
[0018]
3.3淫羊藿多酚 毛白杨等采用最佳工艺条件为：57％乙醇，料液比28ml/g，在50℃下超声提取25min，总多酚得率为34.58mg/g；以dpph自由基清除率为指标时，最佳工艺条件为：58％乙醇，料液比30ml/g，在50℃下超声提取22min(广州化工，2014， 42，64-66)。
[0019]
3.4淫羊藿生物碱 丁越对淫羊藿叶生物碱进行了提取，最佳提取工艺条件为提取温度为40℃，超声时间为45min，液料比为30ml/g，乙醇体积分数为90％，在此条件下淫羊藿叶生物碱的得率为36.092％；纯化过程中采用柱层析法(氯仿∶甲醇＝5∶1)对淫羊藿叶生物碱进行分离纯化得到淫羊藿总生物碱，总生物碱的纯度为67.2％，总生物碱经过sephadexlh-20 凝胶柱层析分别以氯仿-甲醇(10∶1)、氯仿-甲醇(5∶1)、氯仿-甲醇(2∶1)三个洗脱梯度对总生物碱进行分离纯化得到洗脱馏分进行冷冻干燥，进一步分离，得到木兰花碱(吉林农业大学，2021年学位论文)。张龙发现淫羊藿黄酮可以被阴离子树脂有效吸附，生物碱成分流出，残余在阴离子柱中的生物碱成分也能够被洗脱，流出液及生物碱洗脱液随后再上阳离子层析柱，生物碱也能够被有效吸附、洗脱，能够达到选择性分离的目的，淫羊藿黄酮较佳的洗脱条件：乙醇浓度为70％，盐酸质量分数为0.5％(青岛科技大学，2012年学位论文)。朝鲜淫羊藿叶片用乙醇提取，提取液经浓缩、过滤、除叶绿素，得到总生物碱；再将总碱用酸碱反复转溶，得到较纯的总生物碱；最后采用柱层析法与高效液相法相结合的分离方法，得到了该化合物的纯品，为淡黄色粉末淫羊藿碱a(cn1680385)。
[0020]
3.5淫羊藿多糖 孙永杰等采用超声提取法的最佳提取工艺：提取温度为50℃，提取时间为50min，料液比为1∶30，经deae-纤维素纯化后其得率分别为4.5％(中国食品添加剂，2021，32，158-164)。张曜武采用木瓜蛋白酶除蛋白方法，木瓜蛋白酶液占底物料液体积的10％，温度55℃，ph6.0，酶解1h，木瓜蛋白酶法可作为淫羊藿多糖的除蛋白方法，蛋白去除率可达90％，同时多糖损失率为16％(青岛科技大学学报(自然科学版)，2014，35，167-169+173)。安晓娟采用超声-水提醇沉法提取粗多糖、sevag法去蛋白、deae-52纤维素及sephadex g-100柱层析法纯化得到淫羊藿多糖(生物学杂志，2012，29，39-41+82)。李德耀采用加15倍量的水，在100℃条件下，提取3次，每次1.5小时，多糖的实际收率为7.78％，采用大孔吸附树脂法对淫羊藿多糖的脱色、除蛋白工艺进行了研究，ads-7的脱色、除蛋白效果最好，对淫羊藿粗多糖中的色素和蛋白具有较高的去除效率，淫羊藿粗多糖中的蛋白含量由1.2％下降到0.035％，经冻干所得产品为灰白色；淫羊藿多糖首先进行脱盐，然后经deaea-25、deae sepharo secl-6b、sephacryl s-200hr、sephacryl s-400hr分离纯化得到
10种多糖(郑州大学，2 005年学位论文)。
[0021]
3.6淫羊藿黄酮苷 碳酸钠水溶液提取，滤液用浓盐酸调节滤液的ph至3.5-4.2，静置沉淀，过滤，收集沉淀物，滤液用乙酸乙酯萃取，萃余物与上述沉淀物合并，得到淫羊藿苷粗提物(cn113980065a)。乙醇浸提，过滤，浓缩回收乙醇，得到淫羊藿提取物粗品，提取物粗品用水溶解，过滤，清液过dm301大孔树脂吸附柱吸附；水洗脱吸附柱至无色，依次以20％乙醇、45％乙醇、60％乙醇洗脱吸附柱，对45％乙醇洗脱液进行浓缩，浓缩液调节ph5，以乙酸乙酯进行萃取，回收乙酸乙酯，得到萃取物，用热乙醇对萃取物进行重结晶，干燥得到淫羊藿苷；对60％乙醇洗脱液进行浓缩，浓缩液调节ph5，以乙酸乙酯进行萃取，浓缩回收乙酸乙酯，得到萃取物，用热乙醇对萃取物进行重结晶，干燥得到淫羊藿次苷ii；对20％乙醇洗脱液进行浓缩，干燥后得到淫羊藿黄酮(cn112266399a)。逆流超声提取，用水溶解所述浸膏，先用乙酸乙酯和/或三氯甲烷为萃取溶剂进行萃取，然后用正丁醇萃取，取正丁醇相，浓缩至无溶剂，得淫羊藿粗提物，淫羊藿粗提物进行孔吸附树脂柱层析分离，先以水为流动相进行洗脱，再以10～70％的乙醇水溶液为流动相，收集以50～70％乙醇水溶液洗脱液，即得淫羊藿苷(cn106589020b)。张燕等采用ab-8大孔吸附树脂对淫羊藿总黄酮的吸附容量以湿树脂计为(58.37
±
2.36)mg
·
g-1，解吸附率为(86.77
±
2.32)％，最佳吸附时间为180min，最佳洗脱液为60％乙醇，最佳洗脱液用量为5bv，纯化后真空干燥所得棕褐色淫羊藿ef5黄酮粉末中朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷和宝藿苷i的含量分别为3.51％、4.87％、1.22％、33.05％、1.36％，淫羊藿e f5黄酮纯度为44％(北方药学，2015，12，11-13)。娄方明等采用聚酰胺柱色谱法，以10～40％乙醇水溶液进行梯度洗脱，分离富集淫羊藿苷，淫羊藿苷在30％乙醇水溶液中得到了分离富集，含量可达17.22％，收率为95.97％(安徽农业科学，2010，3 8，4073-4074+4076)。林爱华在tween80-(nh4)2so4液-固萃取体系中，试验了淫羊藿苷在两相的分配行为，选择tween80浓度为9％，(nh4)2so4浓度为1.667mol/l，萃取ph4.20，淫羊藿苷的一次萃取率可达95.2％，选择(nh4)2so4浓度为2.121mol /l，反萃ph10.30，经一次反萃，可使94.2％的淫羊藿苷与tween80分离(中南民族学院学报(自然科学版)，2001，20，1-5)。杨茹采用乙醇回流提取法，hpd100型大孔吸附树脂较适合用于淫羊藿总黄酮的富集纯化，取生药质量浓度为0.5g/ml的淫羊藿黄酮提取液(含乙醇15％)上柱，在25℃下，以1bv/h的流速上样3h，用8bv的蒸馏水洗去糖类等水溶性杂质，5bv的25％乙醇除去其他杂质，再用4bv的60％乙醇洗脱，收集洗脱液，经40℃真空干燥，得淫羊藿总黄酮提取物，淫羊藿总黄酮提取物得率为3.36％，其中淫羊藿苷、朝藿定a、朝藿定b、朝藿定c、宝霍苷i的纯度分别为27.24％、3.51％、4.76％、3. 52％、1.30％(南京中医药大学，2020年学位论文)。以淫羊藿为原料，利用低共熔溶剂作为提取剂，以水为降低体系粘度的稀释剂，在超声的强化下提取黄酮苷类化合物，所述的低共熔溶剂为胆碱类低共熔溶剂，选自氯化胆碱-苯酚1∶2的室温熔盐液体，淫羊藿与低共熔溶剂的重量体积比为：1～20∶200g/ml(cn108354960b)。周国保以65％乙醇提取，hz-8 41大孔树脂纯化总黄酮的最佳工艺条件为：2ghz-841大孔树脂，上样总黄酮含量2mg/ml 的提取液30ml，分别以80ml水、40ml20％乙醇、40ml85％乙醇和20ml95％醇进行梯度洗脱，流速1.5ml/min，纯化提取液后获得干浸膏中总黄酮含量为71.8％，淫羊藿苷含量为9.44％(华东理工大学，2012年学位论文)。
[0022]
目前文献报道的淫羊藿黄酮、淫羊藿苷的提取分离，比较集中在以醇提取，树脂吸附分离，基本没有新型提取分离方法，而且提取分离也集中在过去一二十年内，近年来很少
有提取分离的报道，多集中在药理研究上。
技术实现要素：
[0023]
为克服
背景技术：
中的不足，本发明旨在提供一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法。
[0024]
本发明对淫羊藿脂溶性成分采用超高压提取，超高压提取技术是利用100mpa以上的流体静压力作用于溶剂和植物物料的混合液，加压时，溶剂在非常高的压力差作用下通过渗透作用迅速进入细胞内部，细胞发生了一次破坏：同时，在高压条件作用下，有效成分以较高的溶解速度迅速溶解。在浓度差推动下，有效成分通过渗透由细胞内释放出来；保压几分钟后卸压，卸压时，在非常高的反向压力作用下，细胞发生了二次破坏。不论是一次破坏，还是二次破坏，对提高有效成分的提取率都有明显的加强作用，随后进行分离纯化，从而达到提取的目的。高压提取的常温浸取，有效成分无损失、无变性，提取时间短，提取率高，有利于纯化和分离，节能，无污染。具有提取得率高、耗时短、能耗低、提取液澄清、杂质含量少、常温下操作，保护热不稳定成分的活性、操作简单等优势。高压提取液的分离纯化不仅非常方便、快捷，而且可以节省大量的物质消耗、节省大量的时间和占用的设备。
[0025]
本发明对淫羊藿水溶性成分采用亚临界水萃取技术，随着温度的升高，亚临界水的氢键被打开或减弱，从而使水从高到低萃取出来，通过控制亚临界水的温度和压力，实现淫羊藿水溶性成分的提取，并选择性提取，亚临界水萃取是以价廉、无污染的水作为萃取剂，是一项绿色环保、前景广阔提取方法。
[0026]
本发明的技术解决方案是：
[0027]
一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法，该方法包含以下步骤：(1)淫羊藿脂溶性成分提取；(2)淫羊藿油的分离；(3)淫羊藿多酚的分离纯化；(4)淫羊藿色素的分离纯化；(5)淫羊藿黄酮和生物碱的分离；(6)淫羊藿生物碱的纯化；(7)淫羊藿黄酮的分离纯化；(8)淫羊藿多糖的提取分离。
[0028]
一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法，其特征在于，步骤(1)中淫羊藿粉末加入提取溶剂，浸泡30～60min后，装入耐压、柔韧的软袋中，启动高压泵，将软袋内的空气排出后密封，然后放入超高压提取装置的提取容器中，在常温下进行提取，得到淫羊藿脂溶性提取液和滤渣；
[0029]
所述的提取溶剂为10～20倍量(w/w)的体积分数为80～90％的乙醇；
[0030]
然后放入超高压提取容器中，在常温下经升压、保压和泄压阶段进行提取；
[0031]
所述的升压阶段，在5～30min内将提取容器内的压强升高到100～600mpa；
[0032]
所述的保压阶段，保持100～600mpa的压强10～30min；
[0033]
所述的泄压阶段，在5～30s内迅速将压强泄为常压；
[0034]
所述的升压、保压、泄压阶段重复1～5次；
[0035]
一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法，其特征在于，步骤(2)中淫羊藿油的分离，将步骤(1)中所得淫羊藿脂溶性提取液，减压浓缩，得到浓缩液，浓缩液加水搅匀，得到固液混合物，微波辅助水蒸汽蒸馏，得到淫羊藿油和蒸馏残留物；
[0036]
所述的淫羊藿脂溶性提取液的浓缩，在真空度-(82.7～90.6)kpa，温度50～60℃下浓缩成相对比重1.05～1.10；
[0037]
所述的固液混合物，浓缩液中加入10～20倍(w/w)纯化水，磁力搅拌下搅匀；
[0038]
所述的微波辅助水蒸汽蒸馏，微波功率1200～1500w，频率为2000mhz；
[0039]
所述的蒸馏得到的馏出液中加入少量nacl，静置分层；
[0040]
分离后的淫羊藿流入填充有无水硫酸钠的干燥柱中干燥。
[0041]
一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法，其特征在于，步骤(3)中淫羊藿多酚的分离纯化，将步骤(2)中所得蒸馏残留物，加入5～10倍(w/w)纯化水，加热至40～70℃充分搅匀，过滤，得到不溶物和滤液，所得滤液为淫羊藿多酚，滤液经酸化后，通过大孔树脂吸附分离；
[0042]
所述的滤液用用质量百分比浓度18％的盐酸调节ph值2～4，得到上柱液；
[0043]
所述的大孔树脂吸附分离，将上柱液通过大孔吸附树脂柱吸附多酚，未吸附的成分流出柱体，待上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，去除杂质，直至洗脱液清亮，柱体再用体积分数为50～80％的乙醇洗脱多酚，得到乙醇洗脱液，乙醇洗脱液在压力-(0.08～0.09) mpa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5～10h后制得淫羊藿多酚。
[0044]
一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法，其特征在于，步骤(4)中淫羊藿色素的分离纯化，将步骤(3)中所得不溶物干燥，加入1～3倍(w/w)石油醚提取3次，得到石油醚液和不溶物，石油醚液为淫羊藿色素，在压力-(0.08～0.09)mpa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，得到淫羊藿色素。
[0045]
一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法，其特征在于，步骤(5)中淫羊藿黄酮和生物碱的分离，将步骤(4)中所得不溶物以乙醇溶解，调节ph值2～4，得到溶解液，在溶解液中加入(nh4)2so4，使得(nh4)2so4的浓度为10～20wt％，然后加入乙醇，使得乙醇的浓度为30～40wt％，体系ph为4～5，得到双水相体系，静置分相后得到上相和下相，收集上相得到淫羊藿黄酮溶液，下相为生物碱溶液；
[0046]
和/或，在溶解液中加入k2hpo4，使得k2hpo4的浓度为20～30wt％，然后加入丙酮，使得丙酮的浓度为30～40wt％，体系ph为4～5，得到双水相体系，静置分相后得到上相和下相，收集上相得到淫羊藿黄酮溶液，下相为生物碱溶液；
[0047]
和/或，在溶解液中加入na2so4，使得na2so4的浓度为20～30wt％，然后加入正丙醇，使得正丙醇的浓度为20～30wt％，体系ph为4～5，得到双水相体系，静置分相后得到上相和下相，收集上相得到淫羊藿黄酮溶液，下相为生物碱溶液；
[0048]
和/或，在溶解液液中加入cacl2，使得cacl2的浓度为20～30wt％，然后加入异丙醇，使得异丙醇的浓度为20～30wt％，体系ph为4～5，得到双水相体系，静置分相后得到上相和下相，收集上相得到淫羊藿黄酮溶液，下相为生物碱溶液；
[0049]
和/或，在溶解液中加入kh2po4，使得kh2po4的浓度为20～30wt％，然后加入正丙醇，使得正丙醇的浓度为20～30wt％，体系ph为4～5，得到双水相体系，静置分相后得到上相和下相，收集上相得到淫羊藿黄酮溶液，下相为生物碱溶液。
[0050]
一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法，其特征在于，步骤(6)淫羊藿生物碱的纯化，将步骤(3)中所得下相生物碱溶液与乳状液加入提取器中，在200～300r/min的低速搅拌下提取5～15min，将乳液转入分液漏斗中静置分层，分出乳液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相即为生物碱溶液，用氨水碱化至ph值9～10，以三氯甲烷萃取，三氯甲烷
萃取液再用稀酸水反萃取，将此酸水液用固体碳酸氢钠碱化至ph值9～10，以三氯甲烷萃取，萃取液在压力-(0.08～0.09)mpa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，得到淫羊藿生物碱；
[0051]
所述乳状液与下相生物碱溶液体积比为0.1～0.5∶1；
[0052]
所述乳状液为将span80、石油醚和仲辛醇混合放入容器中以3000～5000r/min的转速搅拌下加入浓度为10～18wt％的hcl溶液或5～10wt％的硫酸溶液，在8000～10000r/min的转速下搅拌1～3min，得到乳液。
[0053]
一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法，其特征在于，步骤(7)中淫羊藿黄酮的纯化；将步骤(5)中所得上相得到淫羊藿黄酮溶液，浓缩成相对比重1.05～1.10的浓缩物，以有机溶剂萃取，萃取液以硅胶色谱柱分离；
[0054]
所述的有机溶剂萃取剂为乙酸乙酯或正丁醇中之一；
[0055]
所述的层析柱规格为30mm
×
600mm，洗脱剂为乙酸乙酯-甲醇混合溶剂系统进行梯度洗脱，体积比依次为100∶0、100∶5、100∶7、100∶10、100∶15、100∶20、100∶25、100∶50、0∶100，洗脱液流速3～5ml/min，每一梯度的洗脱液用量与固定相量比为5～15(ml∶g)，每10～2 0ml体积为一流份，收集160个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用gf254薄层板，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(10∶50∶40，v/v/v)为展开剂，以体积比10∶90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3～5min，根据薄层色谱检测结果，合并流份1～4、流份5～8、流份9～14、流份15～82、流份93～103、流份104～108、流份105～112、流份113～129、流份130～136、流份137～151、流份142～147、流份147～160；
[0056]
所述的流份5～8分离纯化得到宝霍苷；所述的第15～82流分分离纯化得到淫羊藿苷，所述的第104～108流分分离得到朝藿定c，所述的第113～129流分分离纯化得到朝藿定b，所述的第137～151流分分离纯化得到朝藿定a；
[0057]
对得到的各成分流份加入凹凸棒和活性炭回流脱色30min，抽滤，在真空度-(82.7～90.6)kpa，温度40～50℃下浓缩至原体积的0.3～0.4倍，放置养晶。
[0058]
一种淫羊藿有效成分的集成化综合提取分离方法，其特征在于，步骤(8)中淫羊藿多糖的分离纯化，将步骤(1)中所得滤渣以亚临界水提取，提取液过滤，浓缩，醇沉，除蛋白，脱色，浓缩，干燥，得到淫羊藿多糖；
[0059]
所述的亚临界水提取，按照固液比1∶15～20g/ml，投入亚临界萃取釜，调整临界压力至 14～21mpa，提取温度100～150℃，提取时间20～100min；
[0060]
所述的过滤，以转速3000～5000r/min离心10～15min；
[0061]
所述的浓缩，用3～50kd截留分子量的超滤膜浓缩至原体积的1/2～1/10；
[0062]
所述的醇沉，淫羊藿多糖浓缩液加入体积分数为90～95％的乙醇，使最终乙醇体积分数为70～80％，搅拌均匀后，静置沉淀10～12h，随后以5000r/min离心10～15min，得沉淀物，沉淀物用无水乙醇洗涤1～3次；
[0063]
所述的除蛋白，配制多糖浓度为5～10wt％的水溶液，上阴离子交换树脂柱，去除蛋白质等杂质，收集多糖流出液；
[0064]
所述的脱色，对多糖流出液进行水浴脱色，水浴温度控制在45～50℃，时长为4h，前2 h以过氧化氢氧化法脱色，后2h以活性炭吸附法脱色。
具体实施方式
[0065]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
[0066]
下述实施例中，室温指15～25℃。
[0067]
仪器与材料：tclx200超声波中药提取仪(宁波振国制药设备制造有限公司)，waters 高效液相色谱、uv-260紫外可见分光光度计(日本岛津公司)，800离心沉淀器(上海易用器械十厂)，水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)、旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)、真空干燥箱(南京沃环科技实业有限公司)、大孔树脂(西安蓝晓科技新材料股份有限公司)、药典筛(新乡市大汉振动机械有限公司)、硅胶、硅胶薄层板(青岛海洋化工有限公司)、点样毛细管(华西医科大学仪器厂)、凹凸棒(灵寿县玄光矿产品加工厂)、活性碳(溧阳市紫金活性炭有限公司)、真空水泵shb-iiig(郑州长城仪器有限公司)。对照品购自美国 sigma公司和中国食品药品检定研究院，无水硫酸钠、乙醇、叔丁醇、硫酸铵、乙醚、石油醚 (60～90℃)、异丙醇、氢氧化钠、盐酸、甲醇、乙酸乙酯、氯化钠、碳酸钠购自阿拉丁、百灵威、aldrich、天津市科密欧化学试剂有限公司和国药集团化学试剂有限公司。
[0068]
将淫羊藿粉末200g加入10～20倍量(w/w)的85％乙醇提取溶剂，浸泡30～60min 后，装入耐压、柔韧的软袋中，启动高压泵，将软袋内的空气排出后密封，然后放入超高压提取装置的提取容器中，在常温下进行提取，(1)升压阶段：在室温下对上述高压容器加压，在5～30min内将提取容器内的压强升高到100～600mpa的预定压力；(2)保压阶段：在上述的预定压力下，保持压强10～30min；(3)泄压阶段：在5～30s内快速打开控制高压回路的阀门，将上述高压容器迅速卸压至常压；(4)重复步骤(1)～(3)1～5次；(5) 将软袋从提取容器中取出，倒出物料，经过滤，离心，得到淫羊藿脂溶性提取液。
[0069]
所得淫羊藿脂溶性提取液，在真空度82.7～90.6kpa，温度50～60℃下浓缩成相对比重 1.05～1.10的浓缩液，在浓缩液中加入10～20倍(w/w)纯化水，磁力搅拌下搅匀，装入蒸馏烧瓶中，置于微波蒸馏器，调整功率至1200～1500w，频率为2000mhz，加热至沸腾，进行水蒸汽蒸馏，直到挥发油收集器中油的量不再增加为止，通过微波蒸馏，挥发油进入冷凝管，经过冷却，蒸馏得到的馏出液中加入少量nacl，静置分层，油水混合物在油水分离器中进行分离，分离后的挥发油流入填充有无水硫酸钠的干燥柱中，干燥柱底部铺有脱脂棉，经干燥后，得到淫羊藿油5.62g，用棕色玻璃瓶密封储存。
[0070]
上述蒸馏所得残留物，加入5～10倍(w/w)纯化水，加热至40～70℃充分搅匀，过滤，得到不溶物和滤液，所得滤液为淫羊藿多酚，滤液经酸化后，通过大孔树脂吸附分离；滤液用用质量百分比浓度18％的盐酸调节ph值2～4，得到上柱液；将上柱液通过大孔吸附树脂柱吸附多酚，未吸附的成分流出柱体，待上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，去除杂质，直至洗脱液清亮，柱体再用质量百分比浓度50～80％的乙醇洗脱多酚，得到乙醇洗脱液，乙醇洗脱液在压力0.08～0.09mpa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50～70℃条件下干燥5～10h后制得淫羊藿多酚6.89g。将所得不溶物干燥，加入1～3倍(w/w)石油醚提取3次，得到石油醚液和不溶物，石油醚液为淫羊藿色素；在压力-(0.08～0.09)mpa、
000r/min离心10～15min，得沉淀物，沉淀物用无水乙醇洗涤1～3次，将沉淀物加入去离子水溶解，配制成多糖浓度为5～10wt％的水溶液，上阴离子交换树脂柱，去除蛋白质等杂质，收集多糖流出液，对多糖流出液进行水浴脱色，水浴温度控制在45～50℃，时长为4h，前2h以过氧化氢氧化法脱色，后2h以活性炭吸附法脱色，脱色液用3～50kd截留分子量的超滤膜浓缩至原体积的1/2～1/10，重复醇沉步骤，浓缩干燥，得到精制的淫羊藿多糖1 0.3g。