一种中药组合物在制备口服美容组合物中的应用的制作方法

本发明涉及一种中药组合物的新用途，具体涉及该中药组合物在制备口服美容组合物中的应用。

背景技术：

1、随着社会的进步、人们生活水平的日益提高，对美容的需求也就日益增加，而富有弹性的皮肤是美容的基础和关键。皮肤的弹力主要与纤维状胶原蛋白和弹性蛋白相关。胶原蛋白分子头尾相连和周围的胶原蛋白分子形成具有一定稳定性和弹力的纤维束。皮肤真皮含有大约90%的胶原纤维，其中ⅰ型胶原占皮肤总胶原纤维的70-90%，其余大约10-30%的皮肤总胶原纤维主要是ⅲ型胶原纤维。弹性纤维虽然在真皮中含量较胶原纤维少，约占真皮细胞外基质的2-4%，但其在真皮中能形成弹性纤维网，对皮肤的弹性也起着重要的作用。

2、当皮肤受到某些特定外界影响，如紫外线照射、干燥时，胶原纤维和弹性纤维会丢失，当衰老和处于压力状态下时，皮肤中的胶原纤维和弹性纤维也会丢失，皮肤状态便会松弛，影响容貌的美观。

3、在自然老化下，真皮层会变薄发生萎缩，成纤维细胞数量减少，造成弹力纤维和胶原纤维的丢失。胶原纤维量减少是真皮衰老的主要原因，随着皮肤老化程度增加，衰老皮肤的纤维结构丢失明显。弹力纤维最重要的生物学作用是赋予组织弹性，在老化过程中会发生损伤，并在慢性炎症中发挥潜在作用。在皮肤衰老过程中，包括mmp-2、mmp-9和mmp-14在内的基质金属蛋白酶（mmp）可使弹力纤维的机械性能发生改变，将其降解。

4、p16作为识别衰老细胞的标志物，属细胞周期抑制蛋白的一种，p16表达量与年龄呈正相关，在大多数正常组织中水平较低。p16通过竞争性降低cdk4和cdk6水平，阻碍下游蛋白磷酸化,从而阻碍细胞从g1期进入s期，导致细胞产生衰老变化。研究发现，抑制转录因子p53表达会减少皮肤细胞的凋亡，从而减缓衰老，在 p53慢性激活的小鼠中发现到皮脂细胞的减少与正常皮肤老化过程相关，p53介导的皮肤老化使得皮脂腺活性下降导致皮肤干燥。

5、肥大细胞存在于真皮，是过敏性炎症的主要效应细胞，肥大细胞脱颗粒就是其分泌介质和细胞因子等产生相关作用。研究表明肥大细胞类胰蛋白酶激活mmp-9并降解胶原，促进皱纹形成。衰老的发生使得机体消除炎症的能力降低，从而导致炎症和抗炎之间失衡。有研究表明，老化的成纤维细胞数量增加，产生衰老相关分泌表型，这些细胞因子可诱导c-junn端激酶和转录因子激活蛋白，随后激活mmp，导致胶原分解，降解细胞外基质（ecm）是mmp-9的主要功能。il-1启动炎症反应，其活性主要由il-1β表达，具有促炎作用，但过度的免疫激活会导致慢性炎症发展。th2细胞会产生il-10，同时il-10可以发挥抑制th1细胞的功能，是机体主要抗炎因子。

6、目前人们为了达到美容的目的多使用外用化妆品，但一般治标不治本，只能短时间改善皮肤的表面状态，长期使用还有可能使皮肤表皮变薄，让皮肤变得更加脆弱。近年来口服胶原蛋白美容的观念开始流行，但是目前尚无确切证据证明胶原蛋白口服后仍能保持原有的功效。

技术实现思路

1、针对以上技术现状，本发明提供一种中药组合物在制备口服美容组合物中的应用，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子150-350、枸杞子100-200、五味子30-60、蛇床子20-50、金樱子20-50、韭菜子20-50、巴戟天20-50、肉苁蓉20-50、生地黄30-60、川牛膝20-50、淫羊藿40-100、覆盆子20-50、人参 15-35、鹿茸 10-25、海马 15-35、川楝子15-35。

2、在一些实施方式中，本发明中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子150、枸杞子200、五味子30、蛇床子50、金樱子20、韭菜子20、巴戟天50、肉苁蓉20、生地黄30、川牛膝50、淫羊藿40、覆盆子50、人参15、鹿茸25、海马15、川楝子35。

3、在一些实施方式中，本发明中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子350、枸杞子100、五味子60、蛇床子20、金樱子50、韭菜子50、巴戟天20、肉苁蓉50、生地黄60、川牛膝20、淫羊藿100、覆盆子20、人参35、鹿茸10、海马35、川楝子15。

4、在一些实施方式中，本发明中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子250、枸杞子138、五味子46、蛇床子35、金樱子35、韭菜子35、巴戟天35、肉苁蓉35、生地黄46、川牛膝35、淫羊藿70、覆盆子35、人参25、鹿茸16、海马21、川楝子23。

5、在一些实施方式中，本发明中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子250、枸杞子150、五味子45、蛇床子30、金樱子30、韭菜子30、巴戟天30、肉苁蓉30、生地黄45、川牛膝30、淫羊藿70、覆盆子30、人参20、鹿茸19、海马20、川楝子20。

6、为了实现本发明的目的，可将该中药组合物制成各种药物剂型以便服用，理论上本发明中药组合物可以按照制剂一般方法制成任何剂型，根据其适用对象优选为汤剂、胶囊剂、片 剂、颗粒剂、散剂或丸剂。

7、为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预 胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：peg6000，peg4000，虫蜡等。

8、本发明所述胶囊剂的制备方法包括以下步骤：

9、a、按比例称取蛇床子、菟丝子、五味子、淫羊藿，加6-10倍量70%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇提浸膏；

10、b、将步骤a醇提后的药材残渣与比例量的枸杞子、生地黄、覆盆子、金樱子、韭菜子、巴戟天、川楝子合并，加7-12倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，与步骤a所得醇提浸膏混合，减压浓缩至在60℃测定相对密度为1.25-1.30，得浸膏；

11、c、按比例称取人参、鹿茸、海马、肉苁蓉、川牛膝，粉碎成细粉与步骤b所得浸膏混合均匀，60-70℃干燥，粉碎，过筛，填充胶囊。

12、在本发明所述应用中，所述口服美容组合物为能够增加皮肤弹力纤维和胶原纤维的美容组合物，通过增加皮肤弹力纤维数量和胶原纤维数量延缓皮肤衰老，实现美容效果。

13、所述口服美容组合物为能够增加皮肤胶原纤维的美容组合物，通过增加皮肤胶原纤维数量延缓皮肤衰老，实现美容效果。

14、所述口服美容组合物为能够减少皮肤中衰老标志物p16蛋白表达水平的美容组合物，通过降低p16蛋白表达水平延缓皮肤衰老，实现美容效果。

15、所述口服美容组合物为能够增加皮肤真皮层厚度的美容组合物，通过增加真皮层的厚度延缓皮肤衰老，实现美容效果。

16、所述口服美容组合物为能够降低血浆中il-1β、mmp-9水平，升高il-10水平的美容组合物，通过减轻炎症反应延缓皮肤衰老，实现美容效果。

17、所述口服美容组合物为能够减少皮肤肥大细胞的数量，减少肥大细胞脱颗粒的发生的美容组合物，通过减少皮肤肥大细胞数量，减少肥大细胞脱颗粒的发生延缓皮肤衰老，实现美容效果。

18、所述口服美容组合物为能够降低皮肤中p53蛋白表达水平的美容组合物，通过降低p53蛋白表达水平延缓皮肤衰老，实现美容效果。

19、所述口服美容组合物为能够降低皮肤中p21蛋白表达水平的美容组合物，通过降低p21蛋白表达水平延缓皮肤衰老，实现美容效果。

20、所述口服美容组合物为能够提高sod、gsh-px、t-aoc活性，提高皮肤抗氧化能力的美容组合物的美容组合物，通过提高sod、gsh-px、t-aoc活性，提高皮肤抗氧化能力延缓皮肤衰老，实现美容效果。

21、所述口服美容组合物为提高itga6的含量，改善体重和皮肤结构的美容组合物，通过提高itga6的含量，改善体重和皮肤结构，实现美容效果。

22、所述口服美容组合物为清除老化细胞的美容组合物，通过清除老化细胞实现美容效果。

23、所述口服美容组合物为降低炎症因子il-6、il-2i、l-1β和tnf-α的水平，缓解皮肤氧化应激的美容组合物，通过降低炎症因子il-6、il-2i、l-1β和tnf-α的水平，缓解皮肤氧化应激实现美容效果。

24、所述口服美容组合物为降低mmp2和mmp9的水平，增加vegf的水平，改善皮肤mmps的表达和微循环的美容组合物，通过降低了mmp2和mmp9的水平，增加vegf的水平，改善皮肤mmps的表达和微循环实现美容效果。

25、所述口服美容组合物为降低促凋亡蛋白bax和caspase-3的表达，提高抗凋亡蛋白bcl-2的表达，增加自噬小体标志物lc3 ii，减少自噬底物p62，自噬蛋白beclin1表达增加，自噬受体sqstm1表达降低，增加细胞自噬，提升细胞修复能力，抑制细胞凋亡的美容组合物，通过降低促凋亡蛋白bax和caspase-3的表达，提高抗凋亡蛋白bcl-2的表达，增加自噬小体标志物lc3 ii，减少自噬底物p62，自噬蛋白beclin1表达增加，自噬受体sqstm1表达降低，增加细胞自噬，提升细胞修复能力，抑制细胞凋亡实现美容效果。

26、所述口服美容组合物为提高col17a1蛋白表达，增加皮肤中干细胞数量的美容组合物，通过提高col17a1蛋白表达，增加皮肤中干细胞数量实现美容效果。

27、本发明中药组合物的用量，以生药量计为5-30g/天，分2-4次服用，优选为每日6.86克，分3次服用。

28、本发明试验例1选用d-gal皮下注射建立衰老小鼠模型，用于考察本发明中药组合物对衰老小鼠皮肤的干预作用。d-gal致衰模型是国内最常用的亚急性衰老动物模型。此模型较自然衰老动物模型制备时间短、费用低、易成模，可持续30d以上利于后续实验的开展，是理想的内源性衰老模型。研究表明烟酰胺单核苷酸(nmn)能增加烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)含量以延缓衰老，并有效干预衰老相关疾病的进展，故选用nmn胶囊作为阳性对照药。过量给予的d-gal会导致代谢紊乱，引起细胞损害，导致多器官功能衰退引发衰老。颈背部皮下注射给药较其他方式对小鼠损伤小，可以长期注射，故选择颈背部皮下注射给药。在预实验时发现小鼠皮下出现结缔组织结节，可能与注射部位没有更换有关，发现后在正式实验给药时予以避免，同时注意进针时手法轻柔以免对小鼠造成伤害。在给药结束后观察发现model组小鼠皮肤出现干燥、细纹、弹性降低、晦暗无光泽，且活动能力明显下降，显示d-gal造模成功。

29、本发明中药组合能够增加皮肤真皮层厚度，提高皮肤胶原纤维和弹力纤维含量，能增加皮肤弹性，明显改善皮肤衰老状态。同时能够下调血浆il-1β、mmp-9水平，上调il-10水平，减轻炎症反应，减少皮肤肥大细胞数量以及脱颗粒的发生，还能通过清除衰老细胞下调p16、p53蛋白表达，多环节延缓皮肤衰老，表现出显著的皮肤美容效果。

30、本发明试验例2的研究中，我们证明了本发明中药组合物通过协调 samp6 小鼠的皮肤稳态来缓解皮肤衰老。本发明中药组合物通过增强col17a1的表达、改善皮肤结构、降低氧化应激水平和sasp的表达、调节samp6中细胞凋亡和自噬的平衡来延缓皮肤衰老。

31、衰老加速小鼠 (sam) 由易衰老 (samp) 和抗衰老 (samr) 组成，已在世界范围内开发并用于研究人类衰老和与年龄相关的疾病。与samr小鼠相比，samp小鼠表现出衰老的迹象，如皮肤失去光泽、脱发、寿命短等特征。在我们的实验中，我们发现了一个显著的现象，即与 bzbs 组相比，samp6 组的小鼠出现脱发和皮肤松弛的现象，这种现象与之前的结果一致。

32、皮肤结构、真皮厚度和胶原蛋白的量通常被检查并认为是皮肤衰老的症状。半桥粒将基底角质形成细胞连接到基底膜，对于皮肤的组成部分至关重要。我们的研究表明，本发明中药组合物改善皮肤结构，增加真皮厚度，增加胶原蛋白和hyp的含量以及itga6的表达；增强了皮肤组织中 sod、gsh-px 和 t-aoc 的活性。

33、此外，我们检查了更多的衰老标志物，包括 sasp 因子 il-6、il-1β、tnf-α、mmp2和 mmp9。与未治疗的 samp6 小鼠相比，治疗的本发明中药组合物的 sasp 显着降低。并且皮肤衰老可以扰乱细胞凋亡和自噬之间的平衡，这有助于促进细胞凋亡和抑制细胞自噬。用本发明中药组合物治疗后，情况发生了逆转。

34、越来越多的研究表明，干细胞竞争会协调皮肤稳态和衰老。 col17a1 是表皮干细胞的良好标志物，反映了个体细胞自我更新的潜力和质量。在本研究中，我们发现本发明中药组合物提高了干性生物标志物 nanog、sox2 和 oct4 、col17a1的水平在皮肤组织中的表达。总而言之，这些发现表明本发明中药组合物可以通过协调 samp6 小鼠的皮肤稳态，通过增强干细胞和 col17a1 来缓解皮肤衰老。并且本发明组合物口服给药无不良反应，使用安全。