1.本发明关于一种秋姬李发酵物，特别是涉及一种秋姬李发酵物、其制作方法和其用于制备美白、提升粒线体活性及减少肌肤斑的用途。
背景技术：
：：2.自有机及/或天然的饮食概念兴起后，生技公司及食品业者积极投入关于天然植物的相关产品的研发。为使植物相关产品对身体健康帮助有科学验证的基础，植物的活性成分分析及功效评估成为产品开发的重点项目。3.被誉为日本李王品种的秋姬李(prunussalicina)，是由日本山梨县所孕育出的新品种。秋姬李果实硕大，果皮鲜浓红润，果肉肥厚细密，味道浓甜且香气浓郁。并且，因其透红的外型，更被封为「日本李姬」。因此，生技公司及食品业者积极研究秋姬李的活性成分分析及功效评估并据以开发成为相关产品。技术实现要素：4.在一些实施例中，一种秋姬李(prunussalicina)发酵物是由秋姬李经溶剂萃取后再经由厌氧发酵而得。5.在一些实施例中，此厌氧发酵系以酵母菌及/或乳酸菌进行厌氧发酵。6.在一些实施例中，一种秋姬李发酵物用于制备美白的组合物的用途。7.在一些实施例中，此秋姬李发酵物具有减少黑色素及/或抑制黑色素生成的作用。8.在一些实施例中，此秋姬李发酵物具有抑制酪氨酸酶活性的作用。9.在一些实施例中，一种秋姬李发酵物用于制备提升粒线体活性的组合物的用途。10.在一些实施例中，一种秋姬李发酵物用于制备减少肌肤色素斑的组合物的用途。11.在一些实施例中，此色素斑为深层棕色斑、可见斑点或其组合。12.在一些实施例中，前述的秋姬李发酵物包含2,5-呋喃二甲醇(2,5-bis-(hydroxymethyl)furane)、5-羟基糠酸(5-hydroxymethyl-2-furonicacid)、反式-4-羟基环己烷羧酸(trans-4-hydroxycyclohaxanecarboxlicacid)、酪醇(tyrosol)、6-羟基-6-(羟甲基)-2h-吡喃-3(6h)-酮(6-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-2h-pyran-3(6h)-one)、2-羟基-1-(5-(羟甲基)呋喃-2-基)丙烷-1-酮(2-hydroxy-1-(5-(hydroxymethyl)furan-2-yl)propan-1-one)或其组合。13.在一些实施例中，一种秋姬李发酵物的制作方法，其包括以溶剂萃取秋姬李以得到秋姬李萃取物、以及厌氧发酵秋姬李萃取物以得到秋姬李发酵物。14.综上，任一实施例的秋姬李发酵物，其能提升粒线体活性或提升肤况。换言之，任一实施例的秋姬李发酵物适用于制备提升粒线体活性或提升肤况的组合物。在一些实施例中，秋姬李发酵物或其所制得的组合物还具有下列一种或多种功能：美白、减少黑色素、抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶活性、减少肌肤棕色斑、及减少肌肤斑点。附图说明15.图1是一实施例的秋姬李发酵物的制作方法的流程图。16.图2是图1中步骤s11的一实施例的流程图。17.图3是秋姬李萃取液、秋姬李好氧发酵物及秋姬李发酵物的总多酚含量检测结果的柱状图。18.图4是相对酪氨酸酶活性的细胞实验结果的柱状图。19.图5是相对黑色素含量的细胞实验结果的柱状图a。20.图6是相对粒线体活性的细胞实验结果的柱状图。21.图7是粒线体活性的细胞实验结果的荧光染色图。22.图8是第0周及第8周的相对肌肤斑点程度的人体实验结果的柱状图。23.图9是第0周及第8周的相对肌肤棕色斑程度的人体实验结果的柱状图。24.图10是秋姬李萃取液及秋姬李发酵物的hplc指纹图谱。25.图11是tci-gsf-01的氢-核磁共振光谱图谱。26.图12是tci-gsf-03的氢-核磁共振光谱图谱。27.图13是tci-gsf-04的氢-核磁共振光谱图谱。28.图14是tci-gsf-05的氢-核磁共振光谱图谱。29.图15是tci-gsf-05的碳-核磁共振光谱图谱。30.图16是tci-gsf-07的氢-核磁共振光谱图谱。31.图17是tci-gsf-09的氢-核磁共振光谱图谱。32.图18是tci-gsf-09的碳-核磁共振光谱图谱。33.图19是相对黑色素含量的细胞实验结果的柱状图b。34.其中，附图标记：35.s10:步骤36.s11:步骤37.s111:步骤38.s112:步骤具体实施方式39.以下将描述本案的部分具体实施态样。在不背离本案精神下，本案尚可以多种不同形式的态样来实践，不应将保护范围限于说明书所具体陈述的条件。40.于本文中，在提及含量时所使用的含量单位「％」通常是指重量百分比。41.请参阅图1。在一些实施例中，秋姬李(prunussalicina)发酵物是由是由秋姬李经溶剂萃取(步骤s10)后再经由厌氧发酵(步骤s11)而得。42.在一些实施例中，在萃取步骤(即步骤s10)中，进行萃取的秋姬李可为秋姬李的植株、根、茎、叶、或果实。在一些实施例中，进行萃取的秋姬李为秋姬李的去除种子的带皮果实。43.在一些实施例中，在萃取步骤(即步骤s10)中，进行萃取的秋姬李可为原材料(如，完整的去除种子的带皮果实)，或为经物理前处理而分解成碎片、颗粒或粉末等细小尺寸的型态。所采用的物理前处理可包括下列至少一种：粗碎、切碎、打碎、剪碎、捣碎、及研磨。44.在一些实施例中，在萃取步骤(即步骤s10)中，进行萃取的秋姬李可为刚采收并收集的秋姬李、干燥后的秋姬李或冷冻过的秋姬李。举例来说，在萃取步骤(即步骤s10)中，利用溶剂对干燥后的秋姬李进行萃取。45.在一些实施例中，在萃取步骤(即步骤s10)中，进行萃取的溶剂可为水或酒精。在一些实施例中，在萃取步骤(即步骤s10)中，进行萃取的溶剂为水。46.在一些实施例中，可先将秋姬李打碎成秋姬李颗粒，然后再以溶剂进行萃取。举例来说，将秋姬李去子带皮果实打碎成粒径为12mm以下的秋姬李颗粒，再将秋姬李颗粒以水进行萃取。47.在一些实施例中，以溶剂于80-100℃下萃取秋姬李0.5-1小时以得到秋姬李萃取液，然后再加入菌种进行厌氧发酵来得到秋姬李发酵物。举例来说，可将秋姬李(如粒径12mm以下的秋姬李颗粒)浸泡在95℃水中0.5小时，使秋姬李中的效性成分溶解至水中而得到秋姬李萃取液。48.在一些实施例中，在萃取步骤(即步骤s10)中，溶剂与秋姬李的重量比为10-30：1-3。在一些实施例中，在萃取步骤(即步骤s10)中，溶剂与秋姬李的重量比为10：1。49.在一些实施例中，在萃取完成后添加菌种之前，可先将秋姬李萃取液冷却至室温以得到冷却的秋姬李萃取液，然后再殖入菌种。50.在一些实施例中，秋姬李萃取液是在未移除萃取材料(即包含秋姬李)的情况下，进行厌氧发酵步骤(即步骤s11)。51.在一些实施例中，厌氧发酵步骤(即步骤s11)为在没有持续供应氧气的环境中进行发酵。在一些实施例中，在厌氧发酵步骤(即步骤s11)中，以保鲜膜包覆发酵桶槽外身与盖孔，阻隔外部空气进入发酵桶槽内。52.在一些实施例中，厌氧发酵步骤(即步骤s11)系加入多个菌种进行厌氧发酵5-10日以得到秋姬李发酵物。在一些实施例中，厌氧发酵步骤(即步骤s11)系加入多个菌种进行厌氧发酵2～6日以得到秋姬李发酵物。53.在一些实施例中，此菌种为酵母菌及/或乳酸菌。在一些实施例中，此菌种为酵母菌及乳酸菌。54.在一些实施例中，厌氧发酵步骤(即步骤s11)系为两阶段发酵。在一些实施例中，厌氧发酵步骤(即步骤s11)系于秋姬李萃取液中依序添加酵母菌及乳酸菌进行发酵。55.请参阅图2。在一些实施例中，厌氧发酵步骤(即步骤s11)系于秋姬李萃取液中添加酵母菌进行第一次发酵以得到第一初发酵液(步骤s111)后，再于所述第一初发酵液中添加乳酸菌进行第二次发酵以得到第二初发酵液(步骤s112)。56.在一些实施例中，步骤s111系于秋姬李萃取液中殖入0.2％啤酒酵母(如，保藏编号bcrc20271的啤酒酵母)并在28℃-37℃下发酵1～3天，以得到第一初发酵液。在一些实施例中，殖入啤酒酵母后的秋姬李萃取液系在30℃下发酵3天。57.在一些实施例中，在步骤s111中，藉由添加酵母菌于秋姬李萃取液中，得以使秋姬李萃取液发酵而生成酒精，藉以有利于提取出秋姬李内的有效成份。58.在一些实施例中，第一初发酵液的ph值≦4.0，且其糖度约为3.6°bx(白利糖度，degreesbrix)。在一些实施例中，第一初发酵液的ph值为3.95。59.在一些实施例中，步骤s112是于第一初发酵液中殖入0.06％胚芽乳酸杆菌(如，保藏编号bcrc910760的胚芽乳酸杆菌)并在28℃-37℃下发酵1～3天，以得到第二初发酵液。在一些实施例中，殖入胚芽乳酸杆菌后的第一初发酵液系在30℃下发酵3天。60.在一些实施例中，在步骤s112中，藉由添加乳酸菌于第一初发酵液中，得以使第一初发酵液内的葡萄糖被消耗而降低糖度，并且产生乳酸而降低第一初发酵液的ph值。于此，降低第一初发酵液的ph值有利于进一步提取出秋姬李内的其他不同有效成分。61.在一些实施例中，第二初发酵液的ph值≦3.5，且其糖度约为1.5°bx。在一些实施例中，第二初发酵液的ph值为3.32。62.在一些实施例中，于步骤s112后，可进一步将第二初发酵液过滤，以得到初发酵过滤液。在一些实施例中，以200目数的滤网过滤第二初发酵液，以得到初发酵过滤液。63.在一些实施例中，还可将第二初发酵液或初发酵过滤液在55℃～65℃下进行减压浓缩，以得到发酵浓缩液。在一些实施例中，减压浓缩可在60℃下进行。64.在一些实施例中，可将前述的初发酵过滤液或发酵浓缩液进行过滤而得到发酵原液。在一些实施例中，此过滤步骤可以200目数的滤网进行。65.在一些实施例中，发酵原液的ph值≦3.5，且其糖度约为1.5°bx。在一些实施例中，发酵原液的ph值为3.2。66.在一些实施例中，可添加寡糖至发酵原液中来将发酵原液的糖度调整至24°bx，进而得到糖度调整后发酵原液。在一些实施例中，寡糖系由3～10个单醣分子聚合而成的低聚糖。在一些实施例中，寡糖系为，但不限于，果寡糖、半乳寡糖、木寡糖或异麦芽寡糖。在一些实施例中，寡糖为含20％～50％异麦芽寡糖的寡糖溶液。67.在一些实施例中，发酵原液还可进一步以醇类与水进行液相-液相分配萃取而得到醇类可溶部。在一些实施例中，醇类可为正丁醇，且此醇类可溶部为正丁醇可溶部。68.在一些实施例中，正丁醇可溶部可进一步以醇类为冲提液进行分离而得到多种化合物。69.应能理解的是，可依实际需求以厌氧发酵所得的第二初发酵液、初发酵过滤液、发酵浓缩液、发酵原液、糖度调整后发酵原液、醇类可溶部、分离得的化合物或其任意组合作为秋姬李发酵物。70.在一些实施例中，前述的秋姬李发酵物包含2,5-呋喃二甲醇(2,5-bis-(hydroxymethyl)furane)、5-羟基糠酸(5-hydroxymethyl-2-furonicacid)、反式-4-羟基环己烷羧酸(trans-4-hydroxycyclohaxanecarboxlicacid)、酪醇(tyrosol)、6-羟基-6-(羟甲基)-2h-吡喃-3(6h)-酮(6-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-2h-pyran-3(6h)-one)、2-羟基-1-(5-(羟甲基)呋喃-2-基)丙烷-1-酮(2-hydroxy-1-(5-(hydroxymethyl)furan-2-yl)propan-1-one)或其组合。在一些实施例中，秋姬李发酵物可由2,5-呋喃二甲醇、5-羟基糠酸、反式-4-羟基环己烷羧酸、酪醇、6-羟基-6-(羟甲基)-2h-吡喃-3(6h)-酮及2-羟基-1-(5-(羟甲基)呋喃-2-基)丙烷-1-酮所构成。71.在一些实施例中，前述的秋姬李发酵物具有美白的能力。换言之，秋姬李发酵物施予一个体时能美白此个体的肌肤。因此，秋姬李发酵物适用于制备美白的组合物。72.在一些实施例中，秋姬李发酵物具有减少黑色素、抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶活性、或其任意组合等能力。换言之，秋姬李发酵物施予个体时能减少黑色素、抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶活性、或其任意组合。因此，秋姬李发酵物适用于制备减少黑色素、抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶活性、或其任意组合的组合物。73.在一些实施例中，前述的秋姬李发酵物具有提升粒线体活性的能力。换言之，秋姬李发酵物施予个体时能提升此个体的粒线体活性。因此，秋姬李发酵物适用于制备提升粒线体活性的组合物。74.在一些实施例中，前述的秋姬李发酵物具有减少肌肤棕色斑及/或减少肌肤斑点的能力。换言之，秋姬李发酵物施予个体时能减少此个体肌肤的棕色斑及/或斑点。因此，秋姬李发酵物适用于制备减少肌肤棕色斑及/或减少肌肤斑点的组合物。75.在一些实施例中，前述的个体可为人。76.在一些实施例中，制备所得的组合物可为医药组合物、食品组合物、化妆品组合物或保养品组合物。77.在一些实施例中，当前述的组合物为医药组合物时，此医药组合物包含有效含量的秋姬李发酵物。其中，此医药组合物可利用本领域普通技术人员所详知的技术而被制造成适合于经肠道地、非经肠道地(parenterally)、口服地(orally)、或局部地(topically)投药剂型。78.在一些实施例中，经肠道或口服地投药剂型可为，但不限于，锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersiblepowder)或细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)或类似的物。79.在一些实施例中，非经肠道地或局部地投药剂型可为，但不限于，注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterileaqueoussolution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterilepowder)、外部制剂(externalpreparation)或类似的物。[0080]在一些实施例中，注射品的投药方式可为，但不限于，腹膜内注射(intraperitonealinjection)、皮下注射(subcutaneousinjection)、表皮内注射(intraepidermalinjection)、皮内注射(intradermalinjection)、肌肉内注射(intramuscularinjection)、静脉内注射(intravenousinjection)或病灶内注射(intralesionalinjection)。[0081]在一些实施例中，含有有效含量的秋姬李发酵物的医药组合物可进一步包含被广泛地使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂(pharmaceuticallyacceptablecarrier)。在一些实施例中，医药上可接受的载剂可为下列载剂中一种或多种：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspendingagent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegratingagent)、分散剂(dispersingagent)、黏结剂(bindingagent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelatingagent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gellingagent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wettingagent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelayingagent)、脂质体(liposome)以及类似的物。关于选用的载剂的种类与数量是落在本领域普通技术人员的专业素养与例行技术范畴内。其中，作为医药上可接受的载剂的溶剂可为水、生理盐水(normalsaline)、磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline，pbs)或含有醇的水性溶液(alcoholcontainingaqueoussolution)。[0082]在一些实施例中，含有有效含量的秋姬李发酵物的医药组合物可利用本领域普通技术人员所详知的技术而被制造成适合于局部地施用于皮肤上的外部制剂(externalpreparation)。在一些实施例中，外部制剂包括，但不限于：乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、软膏(ointment)、乳霜(cream)、贴片(patch)、擦剂(liniment)、粉末(powder)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆(serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)、滴剂(drop)、悬浮液(suspension)、油膏(salve)以及绷带(bandage)。[0083]在一些实施例中，当前述的医药组合物为外部制剂时，此医药组合物可由有效含量的秋姬李发酵物与为本领域普通技术人员所详知的基底(base)相混合而制成。[0084]在一些实施例中，此基底可包含有一或多种选自于下列的添加剂(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氢化合物(hydrocarbons)[诸如石油胶(petroleum,jelly)以及白凡士林(whitepetrolatum)]、蜡(wax)[诸如石蜡(paraffin)以及黄蜡(yellowwax)]、保存剂(preservingagents)、抗氧化剂(antioxidants)、界面活性剂(surfactants)、吸收增强剂(absorptionenhancers)、安定剂(stabilizingagents)、胶凝剂(gellingagents)[诸如974p(974p)、微结晶纤维素(microcrystallinecellulose)以及羧基甲基纤维素(carboxymethylcellulose)]、活性剂(activeagents)、保湿剂(humectants)、气味吸收剂(odorabsorbers)、香料(fragrances)、ph调整剂(phadjustingagents)、螯合剂(chelatingagents)、乳化剂(emulsifiers)、闭塞剂(occlusiveagents)、软化剂(emollients)、增稠剂(thickeners)、助溶剂(solubilizingagents)、渗透增强剂(penetrationenhancers)、抗刺激剂(anti-irritants)、着色剂(colorants)以及推进剂(propellants)等。有关这些添加剂的选用与数量是落在本领域普通技术人员的专业素养与例行技术范畴内。[0085]在一些实施例中，当前述的组合物为食品组合物时，此食品组合物包含特定含量的秋姬李发酵物。其中，此食品组合物的型态可为粉末、颗粒、溶液、胶体或膏体。[0086]在一些实施例中，含有秋姬李发酵物的食品组合物可为食品产品或食品添加物(foodadditive)。[0087]在一些实施例中，含有秋姬李发酵物的食品产品可为饮料(beverages)、发酵食品(fermentedfoods)、烘培产品(bakeryproducts)、健康食品(healthfoods)或膳食补充品(dietarysupplements)等。在一些实施例中，含有秋姬李发酵物的食品产品可更包括佐剂。举例来说，佐剂可为麦芽糖糊精(maltodextrin)、苹果酸、蔗糖素、柠檬酸、水果香料、蜂蜜香料、甜菊糖苷或其组合等。关于选用的载剂的种类与数量是落在本领域普通技术人员的专业素养与例行技术范畴内。[0088]在一些实施例中，含有秋姬李发酵物的食品添加物可为调味料、甜味料、香料、ph值调整剂、乳化剂、着色料或稳定剂等。[0089]在一些实施例中，当前述的组合物为化妆品组合物或保养品组合物。换言之，化妆品组合物或保养品组合物包含有效含量的秋姬李发酵物。[0090]在一些实施例中，含有秋姬李发酵物的化妆品组合物或保养品组合物可为下列任一种型态：化妆水、凝胶、冻膜、泥膜、乳液、乳霜、唇膏、粉底、粉饼、蜜粉、卸妆油、卸妆乳、洗面奶、沐浴乳、洗发精、护发乳、防晒乳、护手霜、指甲油、香水、精华液及面膜。[0091]在一些实施例中，含有秋姬李发酵物的化妆品组合物或保养品组合物可视需要更包含外用品可接受成分。在一些实施例中，外用品可接受成分例如可为乳化剂、渗透促进剂、软化剂、溶剂、赋型剂、抗氧化剂、或其组合。[0092]下列范例中若无特别叙明，所进行的实验步骤是在室温(约25℃)且常压(1atm)下进行。[0093]例一[0094]a.原料：[0095]1.干燥后的秋姬李(prunussalicina)的带皮果实(去除种子)，产地：中国，以下简称「秋姬李果实」。[0096]2.二次水，又称ro水(逆渗透；reverseosmosis)或二次蒸馏水，以下简称「水」。[0097]3.啤酒酵母，其购自食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(bcrc)且具有保藏编号bcrc20271。[0098]4.胚芽乳酸杆菌，其购自bcrc且具有保藏编号bcrc910760。[0099]5.寡糖溶液，其为以水与异麦芽寡糖所配制成的20％～50％异麦芽寡糖溶液。[0100]b.制备流程：[0101]1.将秋姬李果实以粉碎机(型号：12speedblender；厂牌：osterizer)进行打碎，以形成粒径12mm以下的秋姬李颗粒。[0102]2.将水加热至95℃后，投入秋姬李颗粒，并且使秋姬李颗粒于95℃的水中浸泡0.5小时，以形成秋姬李萃取液。于此，投入的秋姬李颗粒与水的重量比为1：10。[0103]3.于冷却后的秋姬李萃取液(含有秋姬李)中殖入0.2％啤酒酵母，并在30℃下厌氧发酵3天，以得到第一初发酵液。第一初发酵液的ph值为3.95，且其糖度约为3.6°bx。于此，厌氧发酵全程是在发酵桶槽内进行，并且厌氧发酵全程皆以保鲜膜包覆发酵桶槽外身与盖孔，以阻隔外部空气进入发酵桶槽内。[0104]4.于第一初发酵液中殖入0.06％胚芽乳酸杆菌，并在30℃下厌氧发酵3天，以得到第二初发酵液。第二初发酵液的ph值为3.32，且其糖度约为1.5°bx。于此，厌氧发酵全程是在发酵桶槽内进行，并且厌氧发酵全程皆以保鲜膜包覆发酵桶槽外身与盖孔，以阻隔外部空气进入发酵桶槽内。[0105]5.将第二初发酵液以200目数的滤网进行过滤以得到初发酵过滤液。[0106]6.将浓缩机(型号：rotavaporr-100；厂牌：buchi)温度设定为60℃后，利用浓缩机对初发酵过滤液进行减压浓缩而得到发酵浓缩液。[0107]7.将发酵浓缩液以200目数的滤网进行过滤以得到发酵原液。发酵原液的ph值为3.2，且其糖度约为1.5°bx。[0108]8.于发酵原液中添加20％～50％异麦芽寡糖溶液以将发酵原液的糖度调整为24°bx，以得到秋姬李发酵物a。[0109]例二[0110]a.原料：[0111]与例一所使用的原料皆相同。[0112]b.制备流程：[0113]1.将秋姬李果实以粉碎机进行打碎，以形成粒径12mm以下的秋姬李颗粒。[0114]2.将水加热至95℃后，投入秋姬李颗粒，并且使秋姬李颗粒于95℃的水中浸泡0.5小时，以形成秋姬李萃取液。于此，投入的秋姬李颗粒与水的重量比为1：10。[0115]3.于冷却后的秋姬李萃取液(含有秋姬李)中殖入0.2％啤酒酵母，并在30℃下发酵3天，以得到第一初发酵液。于此，发酵全程是在发酵桶槽内进行，但发酵全程皆未以保鲜膜包覆发酵桶槽外身与盖孔。[0116]4.于第一初发酵液中殖入0.06％胚芽乳酸杆菌，并在30℃下发酵3天，以得到第二初发酵液。于此，发酵全程是在发酵桶槽内进行，但发酵全程皆未以保鲜膜包覆发酵桶槽外身与盖孔。[0117]5.将第二初发酵液以200目数的滤网进行过滤以得到初发酵过滤液。[0118]6.将浓缩机(型号：rotavaporr-100；厂牌：buchi)温度设定为60℃后，利用浓缩机对初发酵过滤液进行减压浓缩而得到发酵浓缩液。[0119]7.将发酵浓缩液以200目数的滤网进行过滤以得到发酵原液。[0120]8.于发酵原液中添加20％～50％异麦芽寡糖溶液以将发酵原液的糖度调整为24°bx，以得到秋姬李发酵物b。[0121]例三[0122]秤取10.0mg的没食子酸(gallicacid)置于10ml容量瓶中，然后以水(h2o)定量至10ml，以得到没食子酸的储备溶液(stocksolution)(即含1000ppm的没食子酸)。将没食子酸的储备溶液稀释10倍，即100μl没食子酸的储备溶液加900μl的水，以得到100μg/ml没食子酸的初始溶液(即含100ppm的没食子酸)。然后，依据下表一配制0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、及100μg/ml的没食子酸的标准溶液，并分别取100μl的各浓度的标准溶液至玻璃试管中。加入500μl的福林酚试剂(folin-ciocalteu'sphenolreagent，购自merck)至各玻璃试管内与标准溶液混合均匀并静置3分钟后，再加入400μl的7.5％碳酸钠混合均匀后反应30分钟以得到标准反应溶液。取200μl的标准反应溶液至96孔板中，并测量其在750nm下的吸光值，以获得标准曲线。[0123]表一[0124]标准溶液(μg/ml)020406080100初始溶液(μl)020406080100水(μl)100806040200[0125]分别取例一所制得的秋姬李萃取液和秋姬李发酵物a，以及例二所制得的秋姬李发酵物b作为样本。将各样本以水稀释10倍后取100μl到离心管中。接着，加入500μl的福林酚试剂至各玻璃试管中与样本混合均匀并静置3分钟后，再加入400μl的7.5％碳酸钠混合均匀后反应30分钟以得到待测反应溶液。将装有待测反应溶液的玻璃试管进行震荡以确保无气泡后，取200μl的待测反应溶液至96孔板中，并测量待测反应溶液于750nm下的吸光值。[0126]接着，利用标准曲线与内插法将待测反应溶液的吸光值换算成总多酚(polyphenol)含量，并回乘稀释倍数以得到实际总多酚含量。[0127]于此，可得到秋姬李萃取液的总多酚含量为95.4ppm(即为95.4μg/ml)，秋姬李发酵物b的总多酚含量为213.913ppm(即为213.913μg/ml)，以及秋姬李发酵物a的总多酚含量为283.47ppm(即为283.47μg/ml)，如图3所示。由此可知，相较于发酵前(即秋姬李萃取液)，经发酵后的秋姬李发酵物的总多酚含量明显增加。其中，经微生物厌氧发酵后，可增加总多酚含量3倍(297％)。并且，经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物a的总多酚含量明显多于经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b。多酚类物质为富含于植物中的抗氧化物质，经文献证实其可有效减少体内自由基的形成。由此可知，经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物能具有较高的总多酚含量，进而能提升个体的抗氧化活性。[0128]例四[0129]a.材料与仪器：[0130]1.细胞株：小鼠黑色素瘤细胞，购自atcc(americantypeculturecollection)，细胞编号6475，以下简称b16f10细胞。[0131]2.细胞培养基：dmem(dulbecco’smodifiedeagle’smedium，购自gibco，产品编号12800017)，添加10％fbs(fetalbovineserum，购自gibco，产品编号10437-028)以及1％抗生素(购自gibco，产品编号15240-062)。[0132]3.曲酸(kojicacid)，购自sigma，产品编号k3125。[0133]4.bsa的储备溶液：以水及bsa(购自sigma，产品编号a9647-100g)配制而成。[0134]5.细胞裂解试剂：以ripalysisandextractionbuffer(购自thermo，产品编号89900)及pmsf(phenylmethylsulfonylfluorid，购自thermo，产品编号36978)配制而成。[0135]6.蛋白质测定试剂：以bio-radproteinassaydyereagentconcentrate(购自bio-rad，产品编号5000006)和其4倍体积的水稀释配制而成。[0136]7.10mml-多巴(l-dopa，3,4-二羟苯丙氨酸)：以9.8mgl-多巴(购自sigma，产品编号d9628-5g)和5ml0.1mm磷酸盐缓冲液(phosphatebuffer，ph7.0，购自gibco，产品编号14200-075)配制而成。[0137]8.酵素免疫分析仪(elisareader)，购自biotek公司(美国)。[0138]b.试验流程：[0139]1.将b16f10细胞以每孔1.5×105个的密度，接种于含细胞培养基的6孔培养盘中，并在37℃下培养24小时。于此，b16f10细胞分为五个试验组别，其分别为：空白组、曲酸组、实验组a、实验组b与实验组c。各组进行三重复(意即各组各有三孔)。[0140]2.培养24小时后，将各组更换为实验培养基，并于37℃下继续培养48小时。其中，空白组的实验培养基为不含样品或曲酸的细胞培养基；曲酸组的实验培养基为含有200μg/ml的曲酸的细胞培养基，其中曲酸已被广泛认知为具有降低黑色素生成效果的物质；实验组a的实验培养基为含有0.0625％(v/v)的例一制得的秋姬李萃取液的细胞培养基；实验组b的实验培养基为含有0.5％(v/v)的例二制得的秋姬李发酵物b的细胞培养基；以及实验组c的实验培养基为含有0.5％(v/v)的例一制得的秋姬李发酵物a的细胞培养基。[0141]3.移除培养后的各组的实验培养基，并以dpbs进行润洗2次。[0142]4.于润洗后，添加200ul细胞裂解试剂至各孔中以裂解细胞，形成细胞裂解液。[0143]5.将各组离心试管离心使细胞沉淀。[0144]6.收集各组离心试管内的上清液以进行蛋白定量。[0145]7.标准曲线建立：依据下表二于96孔盘中配制0mg/ml、0.15625mg/ml、0.3125mg/ml、0.625mg/ml、1.25mg/ml、及2.5mg/ml的bsa的标准溶液。接着，加入200μl的蛋白质测定试剂至各孔内与标准溶液混合均匀并静置5分钟以得到标准反应溶液，测量其在595nm下的吸光值，以获得标准曲线。[0146]表二[0147][0148]8.各组上清液蛋白质定量：于96孔盘每孔中分别加入1μl的步骤6所收集的各组离心试管内的上清液，并分别加入9μl的水，混合均匀以得到各组的上清液蛋白质定量溶液。接着，加入200μl的蛋白质测定试剂至各孔内与各组的样品蛋白质定量溶液混合均匀并静置5分钟以得到待测反应溶液，测量其在595nm下的吸光值。利用标准曲线与内插法将待测反应溶液的吸光值换算成蛋白质定量值。[0149]9.将含有10mg蛋白质定量值的各组离心试管内的上清液加到新的96孔盘的对应孔中，并于每孔加入细胞裂解试剂使每孔最终体积为100μl。(即，使各组的蛋白质浓度相同，皆为100mg/ml)[0150]10.于每孔加入10μl10mml-多巴，并于37℃下避光反应20分钟以进行氧化反应。[0151]11.反应20分钟后，利用酵素免疫分析仪测量每孔405nm的吸光值(od405值)。[0152]c.试验结果：[0153]所有组别的相对酪氨酸酶活性系依下列公式计算：相对酪氨酸酶活性(％)＝(各组od405值/空白组od405值)×100％。[0154]空白组与其他各组，以及实验组b与实验组c的试验结果之间的统计学显著差异是以学生t检验(studentt-test)统计分析得到。于图式中，「*」代表在与空白组比较下其p值小于0.05、「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01，以及「***」代表在与空白组比较下其p值小于0.001；而于图式中，「#」代表在与实验组b比较下其p值小于0.05、「##」代表在与实验组b比较下其p值小于0.01，以及「###」代表在与实验组b比较下其p值小于0.001。[0155]请参阅图4。空白组未使用样品或曲酸进行处理，因此空白组的试验结果代表b16f10细胞在正常的生理代谢情况下的表现。于此，在设定空白组的相对酪氨酸酶活性为100％的情况下，曲酸组的相对酪氨酸酶活性为85.2％，实验组a的相对酪氨酸酶活性为97.7％，实验组b的相对酪氨酸酶活性为71.7％，而实验组c的相对酪氨酸酶活性为60％。也就是说，相对于空白组，曲酸组的相对酪氨酸酶活性显著降低约14.8％，实验组a的相对酪氨酸酶活性降低约2.3％，实验组b的相对酪氨酸酶活性显著降低约28.3％，而实验组c的相对酪氨酸酶活性显著降低约40％。并且，相对于实验组b，实验组c亦显著降低约11.7％的相对酪氨酸酶活性。[0156]酪氨酸酶是生物体内黑色素合成的关键酵素，l-多巴在酪氨酸酶的作用下，会产生多巴醌(dopaquinone)并进而形成黑色素。因此透过藉由黑色素的检测，可评估酪氨酸酶活性，并评估黑色素细胞产生黑色素的能力。[0157]由实验结果可知，秋姬李萃取液、经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物a、以及经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b皆能降低酪氨酸酶活性。而经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物a具有显著降低酪氨酸酶活性的能力，且相较曲酸、秋姬李萃取液及经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b优异。换言之，经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物能明显降低酪氨酸酶活性，藉以抑制及/或减少黑色素的合成，进而有益于减少个体的黑色素以及提升个体皮肤的通透与亮白程度。[0158]例五[0159]a.材料与仪器：[0160]1.细胞株：小鼠黑色素瘤细胞，购自atcc，细胞编号6475，以下简称b16f10细胞。[0161]2.细胞培养基：dmem(dulbecco’smodifiedeagle’smedium，购自gibco，产品编号12800017)，添加10％fbs(fetalbovineserum，购自gibco，产品编号10437-028)以及1％抗生素(购自gibco，产品编号15240-062)。[0162]3.曲酸(kojicacid)，购自sigma，产品编号k3125。[0163]4.1nnaoh：以水及naoh(购自sigma，产品编号221465)配制而成。[0164]5.胰蛋白酶：以10x胰蛋白酶(购自thermo，产品编号15400-054)和其9倍体积的dpbs稀释配制而成。即，将10x胰蛋白酶进行十倍稀释。[0165]6.酵素免疫分析仪(elisareader)，购自biotek公司(美国)。[0166]b.试验流程：[0167]1.将b16f10细胞以每孔1.5×105个的密度，接种于每孔含2ml的细胞培养基的6孔培养盘中，并在37℃下培养24小时。于此，b16f10细胞分为五个试验组别，其分别为：空白组、曲酸组、实验组a、实验组b与实验组c。各组进行三重复(意即各组各有三孔)。[0168]2.培养24小时后，将各组更换为2ml实验培养基，并于37℃下继续培养48小时。其中，空白组的实验培养基为不含样品或曲酸的细胞培养基；曲酸组的实验培养基为含有200μg/ml的曲酸的细胞培养基，其中曲酸已被广泛认知为具有降低黑色素生成效果的物质；实验组a的实验培养基为含有0.0625％(v/v)的例一制得的秋姬李萃取液的细胞培养基；实验组b的实验培养基为含有0.5％(v/v)的例二制得的秋姬李发酵物b的细胞培养基；以及实验组c的实验培养基为含有0.5％(v/v)的例一制得的秋姬李发酵物a的细胞培养基。[0169]3.移除培养后的各组的实验培养基，并以dpbs进行润洗2次。[0170]4.于润洗后，添加200μl胰蛋白酶至各孔中反应3分钟。反应后，添加细胞培养基以终止反应。而后收集各孔中的悬浮细胞与细胞培养基至对应的离心试管内。[0171]5.将各离心试管离心使细胞沉淀、移除各组离心试管内的上清液，再以dpbs清洗并悬浮沉淀细胞，然后反复进行2次后，得到以200μldpbs回溶的细胞悬浮液。[0172]6.将细胞悬浮液以液态氮冷冻约10秒后，置于室温约30分钟至完全解冻。[0173]7.完全解冻后，将离心试管离心。而后移除离心试管内的上清液后，加入120μl1nnaoh至各离心试管后，置于60℃的干浴槽加热1小时使黑色素溶出，以获得各组的待检测样本。[0174]8.各组取100μl各组的待检测样本至96孔培养盘，并利用酵素免疫分析仪测量每孔405nm的吸光值(od405值)。[0175]c.试验结果：[0176]所有组别的相对黑色素含量系依下列公式计算：相对黑色素含量(％)＝(各组od405值/空白组od405值)×100％。[0177]空白组与其他各组，以及实验组b与实验组c的试验结果之间的统计学显著差异是以学生t检验(studentt-test)统计分析得到。于图式中，「*」代表在与空白组比较下其p值小于0.05、「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01，以及「***」代表在与空白组比较下其p值小于0.001；而于图式中，「#」代表在与实验组b比较下其p值小于0.05、「##」代表在与实验组b比较下其p值小于0.01，以及「###」代表在与实验组b比较下其p值小于0.001。[0178]请参阅图5。空白组未使用样品或曲酸进行处理，因此空白组的试验结果代表b16f10细胞在正常的生理代谢情况下的表现。于此，在设定空白组的相对黑色素含量为100％的情况下，实验组a的相对黑色素含量为107.3％，实验组b的相对黑色素含量为104.7％，而实验组c的相对黑色素含量为87.9％。也就是说，相对于空白组，实验组a的相对黑色素含量提升约7.3％，实验组b的相对黑色素含量提升约4.7％，而实验组c的相对黑色素含量显著降低约12.1％。并且，相对于实验组b，实验组c的相对黑色素含量亦显著降低约16.8％。[0179]由此可知，秋姬李萃取液及经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b皆无法降低b16f10细胞的黑色素含量，反而提升b16f10细胞的黑色素含量。而经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物a具有显著降低黑色素含量的能力，且相较秋姬李萃取液及经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b优异。换言之，经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物能减少黑色素及/或抑制黑色素生成，藉以减少个体的黑色素，进而提升个体皮肤的通透与亮白程度。[0180]例六[0181]a.材料与仪器：[0182]1.细胞株：人类皮肤纤维母细胞，购自bcrc(bioresourcecollectionandresearchcenter，生物资源保存及研究中心)，细胞编号60153，以下简称ccd-966sk细胞。[0183]2.细胞培养基：mem(minimumessentialmedium，购自gibco，产品编号11095080)，添加10％fbs(fetalbovineserum，购自gibco，产品编号10437-028)、1％青霉素-链霉素(购自gibco，产品编号15140122)、1mm丙酮酸钠(sodiumpyruvate，购自gibco，产品编号11360-070)、1.5g/l碳酸氢钠(sodiumbicarbonate，购自sigma，产品编号s5761-500g)以及0.1mm非必需氨基酸(non-essentialaminoacids，购自gibco，产品编号11140050)。[0184]3.胰蛋白酶：以10x胰蛋白酶(购自gibco，产品编号15400-054)和其9倍体积的dpbs稀释配制而成。[0185]4.assaybuffer：以10xassaybuffer(mitoscreenflowcytometrymitochondrialmembranepotentialdetectionkit中的试剂，购自bd，产品编号bdb551302)和其9倍体积的dpbs稀释配制而成，并置于恒温水浴槽使其温度维持于37℃。[0186]5.jc-1作用试剂：以130μldmso(购自echo，产品编号da1101-000000-72ec)溶解jc-1dye(mitoscreenflowcytometrymitochondrialmembranepotentialdetectionkit中的试剂，购自bd，产品编号bdb551302)以形成jc-1的储存溶液。接着，再以jc-1的储存溶液和其99倍体积的assaybuffer稀释配制而成。[0187]6.流式细胞仪，购自bd。[0188]b.试验流程：[0189]1.将ccd-966sk细胞以每孔1×105个的密度，接种于每孔含2ml的细胞培养基的6孔培养盘中，并在37℃下培养24小时。于此，ccd-966sk细胞分为四个试验组别，其分别为：空白组、实验组a、实验组b与实验组c。各组进行三重复(意即各组各有三孔)。[0190]2.培养24小时后，将各组更换为实验培养基，并于37℃下继续培养24小时。其中，空白组的实验培养基为不含样品的细胞培养基；实验组a的实验培养基为含有0.0625％(v/v)的例一制得的秋姬李萃取液的细胞培养基；实验组b的实验培养基为含有0.5％(v/v)的例二制得的秋姬李发酵物b的细胞培养基；以及实验组c的实验培养基为含有0.5％(v/v)的例一制得的秋姬李发酵物a的细胞培养基。[0191]3.移除培养后的各组的实验培养基，并以dpbs进行润洗2次。[0192]4.于润洗后，添加200μl胰蛋白酶至各孔中反应5分钟。反应后，添加细胞培养基以终止反应。而后收集各孔中的悬浮细胞与细胞培养基至对应的离心试管内，将各离心试管离心使细胞沉淀。[0193]5.移除各组离心试管内的上清液，并以dpbs清洗沉淀细胞2次后，再以100μljc-1作用试剂重新悬浮细胞，混合均匀并避光作用15分钟。[0194]6.作用后，将各组离心试管离心并移除上清液，再以assaybuffer清洗沉淀细胞2次。[0195]7.于清洗后，于各组离心试管中添加500μldpbs重新悬浮细胞以形成细胞悬浮液。[0196]8.将流式细胞仪的激发光设定为488nm，散射光设定为527nm(fitc)及590nm(pe)后，利用流式细胞仪检测各组的绿色(527nm(fitc))荧光讯号以及红色(590nm(pe))荧光讯号。[0197]c.试验结果：[0198]所有组别的相对粒线体活性系依下列公式计算：相对粒线体活性(％)＝(各组红色荧光讯号值/空白组红色荧光讯号值)×100％。[0199]空白组与其他各组的试验结果之间的统计学显著差异是以学生t检验(studentt-test)统计分析得到。于图式中，「*」代表在与空白组比较下其p值小于0.05、「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01，以及「***」代表在与空白组比较下其p值小于0.001。[0200]请参阅图6。空白组未使用样品进行处理，因此空白组的试验结果代表ccd-966sk细胞在正常的生理代谢情况下的表现。于此，在设定空白组的相对粒线体活性为100％的情况下，实验组a的相对粒线体活性为126.9％，实验组b的相对粒线体活性为120.95％，而实验组c的相对粒线体活性为145.76％。也就是说，相对于空白组，实验组a的相对粒线体活性显著提升约26.9％，实验组b的相对粒线体活性显著提升约20.95％，而实验组c的相对粒线体活性显著提升约45.76％。[0201]由此可知，秋姬李萃取液、经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物a、以及经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b皆能明显提升粒线体活性。而经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物a具有显著提升粒线体活性的能力，且相较秋姬李萃取液及经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b优异。粒线体是细胞的发电机，扮演能量传递的重要角色，当其活性越高，代表细胞生理活动越旺盛。换言之，经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物能提升粒线体活性，藉以提升细胞生理活动、并且调控细胞凋亡与老化。[0202]例七[0203]a.材料与仪器：[0204]1.细胞株：人类皮肤纤维母细胞，购自bcrc(bioresourcecollectionandresearchcenter，生物资源保存及研究中心)，细胞编号60153，以下简称ccd-966sk细胞。[0205]2.细胞培养基：mem(minimumessentialmedium，购自thermo，产品编号61100061)，添加10％fbs(fetalbovineserum，购自gibco，产品编号10437-028)、1％青霉素-链霉素(购自gibco，产品编号15140122)、1mm丙酮酸钠(sodiumpyruvate，购自gibco，产品编号11360-070)、1.5g/l碳酸氢钠(sodiumbicarbonate，购自sigma，产品编号s5761-500g)以及0.1mm非必需氨基酸(non-essentialaminoacids，购自gibco，产品编号11140050)。[0206]3.assaybuffer：以10xassaybuffer(mitoscreenflowcytometrymitochondrialmembranepotentialdetectionkit中的试剂，购自bd，产品编号bdb551302)和其9倍体积的dpbs稀释配制而成，并置于恒温水浴槽使其温度维持于37℃。[0207]4.jc-1作用试剂：以130μldmso(购自echo，产品编号da1101-000000-72ec)溶解jc-1dye(mitoscreenflowcytometrymitochondrialmembranepotentialdetectionkit中的试剂，购自bd，产品编号bdb551302)以形成jc-1的储存溶液。接着，再以jc-1的储存溶液和其99倍体积的assaybuffer稀释配制而成。[0208]5.hoechst染剂，购自thermo，产品编号d33342。[0209]6.显微镜，购自zeiss，产品编号axioverta1。[0210]b.试验流程：[0211]1.将ccd-966sk细胞以每孔1×104个的密度，接种于每孔含0.5ml的细胞培养基的24孔培养盘中，并在37℃下培养24小时。于此，ccd-966sk细胞分为四个试验组别，其分别为：空白组、实验组a、实验组b与实验组c。各组进行三重复(意即各组各有三孔)。[0212]2.培养24小时后，将各组更换为实验培养基，并于37℃下继续培养24小时。其中，空白组的实验培养基为不含样品的细胞培养基；实验组a的实验培养基为含有0.0625％(v/v)的例一制得的秋姬李萃取液的细胞培养基；实验组b的实验培养基为含有0.5％(v/v)的例二制得的秋姬李发酵物b的细胞培养基；以及实验组c的实验培养基为含有0.5％(v/v)的例一制得的秋姬李发酵物a的细胞培养基。[0213]3.移除培养后的各组的实验培养基，并以dpbs进行润洗1次。[0214]4.于润洗后，添加300μljc-1作用试剂并轻微摇晃以确保孔盘底部皆有jc-1作用试剂覆盖后，避光静置15分钟。[0215]5.避光静置后，移除各组的jc-1作用试剂，并以dpbs进行润洗1次。[0216]6.于润洗后，添加hoechst染剂(1:20000稀释)，并避光染色5分钟。[0217]7.于避光染色后，移除各组的hoechst染剂，并添加500μl细胞培养基，以维持细胞在拍摄过程中的健康状态。[0218]8.利用显微镜拍摄各组的染色结果。其中，于染色结果中，红色荧光系代表正常的粒线体的信号；绿色荧光系代表细胞凋亡的粒线体的信号；而蓝色荧光系代表细胞核的信号。[0219]c.试验结果：[0220]请参阅图7。空白组的绿色荧光比例明显高于红色荧光。相对于空白组，实验组a的绿色荧光比例明显下降，红色荧光比例明显上升，其表示秋姬李萃取液能明显提升粒线体活性，即明显减少细胞凋亡。相对于空白组，实验组b的绿色荧光与红色荧光比例近似于空白组，然其绿色荧光强度明显下降，其表示经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b能些微提升粒线体活性，即些微减少细胞凋亡。相对于空白组，实验组c的绿色荧光比例明显下降，红色荧光比例明显上升，其表示经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物a能明显提升粒线体活性，即明显减少细胞凋亡。[0221]由此可知，秋姬李萃取液、经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物a、以及经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b皆能提升粒线体活性。而经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物a具有显著提升粒线体活性的能力，且相较秋姬李萃取液及经有氧发酵所得的秋姬李发酵物b优异。粒线体是细胞的发电机，扮演能量传递的重要角色，当其活性越高，代表细胞生理活动越旺盛。换言之，经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物能提升粒线体活性，藉以提升细胞生理活动、并且调控细胞凋亡与老化。[0222]例八[0223]a.试验流程：[0224]令12位欲美白或提升肤况的20至55岁受试者每日饮用一瓶50ml试验饮品(其含有6ml的使用例一所制得的秋姬李发酵物a，其余为水和甜味剂)，连续饮用8周(即56日)。[0225]受试者于开始饮用前(脸部已清洁，第0周)及饮用56日(脸部已清洁，第8周)后，进行肌肤检测。肌肤检测为依据不同检测项目，使用对应的仪器及测量方式，纪录脸部肌肤的数值、并拍摄使用前及使用后的照片。肌肤检测项目有肌肤斑点(skinspot)及肌肤棕色斑(skinbrownspot)。并且，于使用前及使用后进行检测时，受试者所在的测试区域的温度与湿度为一致，以减少外界的温湿度等因素会对肌肤所造成的影响。[0226]肌肤斑点系使用购自美国canfieldscientific公司的visia高阶数字肤质检测仪(visiacomplexionanalysissystem)对受试者在饮用试验饮品前，以及饮用56日后的面部肌肤进行检测。此检测仪系透过可见光(白光)拍摄高分辨率的肌肤图像，并以内建软件根据肉眼可见的色素斑点数量与面积进行分析以得到可代表皮肤的斑点状况的一数值(以下称肌肤斑点程度值)。并且，得到的肌肤斑点程度值越高，说明肌肤斑点程度越高。然后，再以下列公式计算出相对肌肤斑点程度：相对肌肤斑点程度(％)＝(各组肌肤斑点程度值/使用前肌肤斑点程度值)×100％。[0227]肌肤棕色斑系使用购自美国canfieldscientific公司的visia高阶数字肤质检测仪(visiacomplexionanalysissystem)对受试者在饮用试验饮品前，以及饮用56日后的面部肌肤进行检测。此检测仪系透过rbx偏振光技术进行脸部肌肤拍摄，侦测肉眼不可见的真皮层黑色素斑以得到可代表皮肤的棕色斑状况的一数值(以下称肌肤棕色斑程度值)。并且，得到的肌肤棕色斑程度值越高，说明肌肤棕色斑程度越高。然后，再以下列公式计算出相对肌肤棕色斑程度：相对肌肤棕色斑程度(％)＝(各组肌肤棕色斑程度值/使用前肌肤棕色斑程度值)×100％。[0228]b.试验结果：[0229]1.关于「肌肤斑点」的检测结果[0230]参照图8。将12位受试者第0周的肌肤斑点程度值视为100％的相对肌肤斑点程度。此时，在第8周(即持续饮用试验饮品8周后)，其平均相对肌肤斑点程度为96.4％。换言之，相较于饮用试验饮品前(第0周)，持续饮用8周含有秋姬李发酵物a的试验饮品后可使此些受试者的相对肌肤斑点程度减少3.6％，并且改善人数比率达66.7％(8位)。由此可知，经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物确实可减少肌肤斑点或淡化可见斑点，并改善受试者肌肤状况，进而提升肌肤质感。[0231]2.关于「肌肤棕色斑」的检测结果[0232]参照图9。将12位受试者第0周的肌肤棕色斑程度值视为100％的相对肌肤棕色斑程度。此时，在第8周(即持续饮用试验饮品8周后)，其平均相对肌肤棕色斑程度为93.3％。换言之，相较于饮用试验饮品前(第0周)，持续饮用8周含秋姬李发酵物a的试验饮品后可使此些受试者的相对肌肤棕色斑程度减少6.7％，并且改善人数比率达66.7％(8位)。由此可知，经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物确实可减少肌肤棕色斑或深层班，并改善受试者肌肤状况，进而提升肌肤质感。[0233]例九[0234]a.材料与仪器：[0235]1.高解析液相层析质谱仪：串连超高效液相层析仪(ultimate3000hplc,thermofisherscientific)与高分辨率轨道式离子阱质谱仪(q-exactivesystemwithionmaxsource，thermofisherscientific)测定，单位为m/z。[0236]2.高效能液相层析仪(highperformanceliquidchromatography，hplc)：hitachichromaster5260系列；冲提溶剂输送系hitachichromaster5110；管柱恒温装置hitachichromaster5310；光二极管数组侦测器(diodearraydetector,dad)系hitachichromaster5430，侦测波长为210nm。[0237]3.hplc分析管柱：mightysilrp-18gp250(kanto，250x4.6mm，5μm)。[0238]4.管柱层析(columnchromatography)填充材料：[0239](1)大孔树脂：diaionhp-20，购自三菱化学公司，日本。[0240](2)正相硅胶：merckkieselgel60，40-63um，购自默克，德国，产品编号art.9385。[0241](3)逆相硅胶：merckrp-18，40-63um，购自默克，德国，产品编号art.0250。[0242]5.溶剂(solvent)：甲醇(methanol)，购自默克中国台湾。[0243]6.聚偏氟乙烯薄膜过滤(polyvinylidenefluoridemembranefilters，pvdf)，孔径0.22微米，购自millipore，美国。[0244]7.样品：(1)例一所制得的秋姬李萃取液，以及(2)例一所制得的秋姬李发酵物a。[0245]b.hplc分析流程：[0246]1.秋姬李萃取液及秋姬李发酵物a，系以聚偏氟乙烯薄膜过滤进行过滤。为了将秋姬李萃取液及秋姬李发酵物a的脂溶性成分与水溶性成分分离，以正丁醇为溶剂，将例一所制得的秋姬李萃取液及秋姬李发酵物a进行液相-液相分配萃取，分别得到秋姬李萃取液的正丁醇可溶部(脂溶性成分)和秋姬李萃取液的水可溶部(水溶性成分)，以及秋姬李发酵物a的正丁醇可溶部和秋姬李发酵物a的水可溶部。[0247]2.使用hplc对各样品的组分进行分析，以得到各样品的指纹图谱。于此，以甲醇(a)与水(b)为溶剂，额外添加0.1％甲酸，并设定流速为1ml/min。冲提条件：0分钟时，甲醇(a):水(b)＝2:98；10分钟时，a:b＝2:98；40分钟时，a:b＝70:30；50分钟时，a:b＝100:0；60分钟时，a:b＝100:0。其中，样品为秋姬李萃取液样品(包含秋姬李萃取液的正丁醇可溶部和秋姬李萃取液的水可溶部)以及秋姬李发酵物a样品(包含秋姬李发酵物a的正丁醇可溶部和秋姬李发酵物a的水可溶部)，并且样品浓度皆为50mg/ml，注射量为10μl。其中，于hplc分析时，管柱温度为40℃。[0248]c.hplc分析结果：[0249]请参阅图10。秋姬李萃取液的hplc指纹图谱较无明显波锋，且峰度较低。而相对于秋姬李萃取液，秋姬李发酵物a的hplc指纹图谱有较多明显波锋(波锋02-s、01、03、05、08、04、06、07以及09)，且峰度较高。也就是说，相对于秋姬李萃取液，经由微生物厌氧发酵所得的秋姬李发酵物得以大幅增加其所含有的化合物，甚至是具有秋姬李萃取液所未含有的化合物。[0250]由此可知，经厌氧发酵所得的秋姬李发酵物相对于秋姬李萃取液具有更加丰富且多元化的化合物组成。[0251]例十[0252]a.材料与仪器：[0253]1.核磁共振光谱仪(nuclearmagneticresonancespectrometer，nmr)：1d与2d光谱使用ascend400mhz，brukerco.，germany，以δ表示化学位移(chemicalshift)，单位为ppm。[0254]2.高解析液相层析质谱仪：串连超高效液相层析仪(ultimate3000hplc,thermofisherscientific)与高分辨率轨道式离子阱质谱仪(q-exactivesystemwithionmaxsource，thermofisherscientific)测定，单位为m/z。[0255]3.中压液相层析仪(mediumpressureliquidchromatography，mplc)：rf+，teledyneisco，lincoln，ne。[0256]4.高效能液相层析仪(highperformanceliquidchromatography，hplc)：hitachichromaster5260系列；冲提溶剂输送系hitachichromaster5110；管柱恒温装置hitachichromaster5310；光二极管数组侦测器(diodearraydetector,dad)系hitachichromaster5430，检测波长为210nm。[0257]5.hplc分析管柱：mightysilrp-18gp250(kanto，250x4.6mm，5μm)。[0258]6.hplc分离管柱：5μmc18(2)(250x10mm)，购自phenomenex，美国。[0259]7.管柱层析(columnchromatography)填充材料：[0260](1)大孔树脂：diaionhp-20，购自三菱化学公司，日本。[0261](2)正相硅胶：merckkieselgel60，40-63um，购自默克，德国，产品编号art.9385。[0262](3)逆相硅胶：merckrp-18，40-63um，购自默克，德国，产品编号art.0250。[0263]8.薄层色层分析(thin-layerchromatography)：[0264](1)tlc铝片：薄层层析片，涂覆硅胶60f254(0.25mm)，购自默克，德国。[0265](2)tlc铝片：薄层层析片，涂覆rp-18f254-s(0.25mm)，购自默克，德国。[0266]9.紫外光灯(uvlamp)：uvpuvgl-25，波长为254nm及365nm。[0267]10.溶剂(solvent)：正己烷(n-hexane)、乙酸乙酯(ethylacetate)、丙酮(acetone)、甲醇(methanol)、乙醇(ethanol)、乙腈(acetonitrile)、氯仿-d1(氘化程度99.5％)、甲醇-d4(氘化程度99.5％)、重水(deuteriumoxide，氘化程度》99.8％)、以及二甲基亚砜-d6(氘化程度》99.9％)，皆购自默克中国台湾。[0268]11.样品：例一所制得的秋姬李发酵物a。[0269]b.化合物分离与结构鉴定流程：[0270]1.为了将秋姬李发酵物的脂溶性成分与水溶性成分分离，以正丁醇为溶剂，将5l例一所制得的秋姬李发酵物a进行液相-液相分配萃取，得到12.6g正丁醇可溶部(脂溶性成分)以及101.9g水可溶部(水溶性成分)。[0271]2.功效化合物分离纯化过程中，系依据生物活性导引分离方法(bioassayguidedfractionation)；并且，以降低黑色素细胞的黑色素的功效，做为分层及其后续细分离部的选择依据。[0272]3.12.6g正丁醇可溶部继续以diaionhp-20大孔树脂管柱层析(columnchromatography)分离法进行初步分离，依序以纯水、纯水-甲醇体积比1:1、甲醇为冲提液，得到3个分离部(以下称buf1分离部、buf2分离部以及buf3分离部)。[0273]4.取buf1分离部并以逆向-中压液相层析仪(rp-mplc)对buf1分离部进行再分离，以得到多种冲提物。于此，冲提液由水至甲醇线性冲提，冲提时间60分钟，流速每分钟10毫升。后续利用薄层色层分析(tlc铝片：薄层层析片，涂覆硅胶60f254(0.25mm)，购自默克，德国)合并相似结果的冲提物，而得到3个次分离部(以下称buf1-1分离部、buf1-2分离部以及buf1-3分离部)。[0274]5.将buf1-2分离部经逆相-高效率液相层析纯化(甲醇/水＝1/9)，而得到二化合物tci-gsf-01与tci-gsf-03。经氢-核磁共振光谱(1h-nmr)分析其化学结构后，经文献比对确认化合物tci-gsf-01为2,5-呋喃二甲醇(2,5-bis-(hydroxymethyl)furane)，如图11所示；以及，化合物tci-gsf-03为5-羟基糠酸(5-hydroxymethyl-2-furonicacid)，如图12所示。[0275]6.另取buf-2分离部并以逆向-中压液相层析仪(rp-mplc)对buf-2分离部进行再分离，以得到多种冲提物。于此，冲提液由水至甲醇线性冲提，冲提时间100分钟，流速每分钟10毫升。后续利用薄层色层分析(tlc铝片：薄层层析片，涂覆rp-18f254-s(0.25mm)，购自默克，德国)合并相似结果的冲提物，而得到6个次分离部(以下称buf2-1分离部、buf2-2分离部、buf2-3分离部、buf2-4分离部、buf2-5分离部以及buf2-6分离部)。[0276]7.将bu2-2分离部经逆向-hplc纯化(甲醇/水＝3/17)，而得到化合物tci-gsf-05。经氢-核磁共振光谱(1h-nmr)与碳-核磁共振光谱(13c-nmr)分析其化学结构后，经文献比对确认化合物tci-gsf-05为6-羟基-6-(羟甲基)-2h-吡喃-3(6h)-酮(6-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-2h-pyran-3(6h)-one)，如图14至图15所示。[0277]8.将bu2-3分离部经逆向-hplc纯化(甲醇/水＝1/4)，而得到化合物tci-gsf-04。经氢-核磁共振光谱(1h-nmr)分析其化学结构后，经文献比对确认化合物tci-gsf-04为反式-4-羟基环己烷羧酸(trans-4-hydroxycyclohaxanecarboxlicacid)，如图13所示。[0278]9.将buf2-4分离部经逆向-hplc纯化(甲醇/水＝1/3)，而得到化合物tci-gsf-07。经氢-核磁共振光谱(1h-nmr)分析其化学结构后，经文献比对确认化合物tci-gsf-07为酪醇(tyrosol)，如图16所示。[0279]10.将buf2-5分离部经逆向-hplc纯化(甲醇/水＝3/7)，而得到化合物tci-gsf-09。经氢-核磁共振光谱(1h-nmr)与碳-核磁共振光谱(13c-nmr)分析其化学结构后，经文献比对确认化合物tci-gsf-09为2-羟基-1-(5-(羟甲基)呋喃-2-基)丙烷-1-酮(2-hydroxy-1-(5-(hydroxymethyl)furan-2-yl)propan-1-one)，如图17至图18所示。[0280]前述化合物的名称及化学结构式如下表三所示。[0281]表三[0282][0283][0284]例十一[0285]a.材料与仪器：[0286]1.细胞株：小鼠黑色素瘤细胞，购自atcc，细胞编号6475，以下简称b16f10细胞。[0287]2.细胞培养基：dmem(dulbecco’smodifiedeagle’smedium，购自gibco，产品编号12800017)，添加10％fbs(fetalbovineserum，购自gibco，产品编号10437-028)以及1％抗生素(购自gibco，产品编号15240-062)。[0288]3.曲酸(kojicacid)，购自sigma，产品编号k3125。[0289]4.1nnaoh：以水及naoh(购自sigma，产品编号221465)配制而成。[0290]5.胰蛋白酶：以10x胰蛋白酶(购自thermo，产品编号15400-054)和其9倍体积的dpbs稀释配制而成。即，将10x胰蛋白酶进行十倍稀释。[0291]6.酵素免疫分析仪(elisareader)，购自biotek公司(美国)。[0292]b.试验流程：[0293]1.将b16f10细胞以每孔1.5×105个的密度，接种于含细胞培养基的6孔培养盘中，并在37℃下培养24小时。于此，b16f10细胞分为八个试验组别，其分别为：空白组、曲酸组、化合物01组、化合物03组、化合物04组、化合物05组、化合物07组与化合物09组。各组进行三重复(意即各组各有三孔)。[0294]2.培养24小时后，将各组更换为实验培养基，并于37℃下继续培养48小时。其中，空白组的实验培养基为不含样品或曲酸的细胞培养基；曲酸组的实验培养基为含有200μg/ml的曲酸的细胞培养基，其中曲酸已被广泛认知为具有降低黑色素生成效果的物质；化合物01组的实验培养基为含有100μm的例九分离所得的化合物tci-gsf-01的细胞培养基；化合物03组的实验培养基为含有100μm的例九分离所得的化合物tci-gsf-03的细胞培养基；化合物04组的实验培养基为含有100μm的例九分离所得的化合物tci-gsf-04的细胞培养基；化合物05组的实验培养基为含有100μm的例九分离所得的化合物tci-gsf-05的细胞培养基；化合物07组的实验培养基为含有100μm的例九分离所得的化合物tci-gsf-07的细胞培养基；以及化合物09组的实验培养基为含有100μm的例九分离所得的化合物tci-gsf-09的细胞培养基。[0295]3.移除培养后的各组的实验培养基，并以dpbs进行润洗2次。[0296]4.于润洗后，添加200μl胰蛋白酶至各孔中反应3分钟。反应后，添加细胞培养基以终止反应。而后收集各孔中的悬浮细胞与细胞培养基至对应的离心试管内。[0297]5.将各离心试管离心使细胞沉淀、移除各组离心试管内的上清液，再以dpbs清洗并悬浮沉淀细胞，然后反复进行2次后，得到以200μldpbs回溶的细胞悬浮液。[0298]6.将细胞悬浮液以液态氮冷冻约10秒后，置于室温约30分钟至完全解冻。[0299]7.完全解冻后，将离心试管离心。而后移除离心试管内的上清液后，加入120μl1nnaoh至各离心试管后，置于60℃的干浴槽加热1小时使黑色素溶出，以获得各组的待检测样本。[0300]8.各组取100μl各组的待检测样本至96孔培养盘，并利用酵素免疫分析仪测量每孔405nm的吸光值(od405值)。[0301]c.试验结果：[0302]所有组别的相对黑色素含量系依下列公式计算：相对黑色素含量(％)＝(各组od405值/空白组od405值)×100％。[0303]空白组与其他各组的试验结果之间的统计学显著差异是以学生t检验统计分析得到。于图式中，「*」代表在与空白组比较下其p值小于0.05、「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01，以及「***」代表在与空白组比较下其p值小于0.001。[0304]请参阅图19。空白组未使用样品或曲酸进行处理，因此空白组的试验结果代表b16f10细胞在正常的生理代谢情况下的表现。于此，在设定空白组的相对黑色素含量为100％的情况下，曲酸组的相对黑色素含量为82.5％，化合物01组的相对黑色素含量为53.5％，化合物03组的相对黑色素含量为85.7％，化合物04组的相对黑色素含量为80.6％，化合物05组的相对黑色素含量为61.6％，化合物07组的相对黑色素含量为83.3％，而化合物09组的相对黑色素含量为86.1％。也就是说，相对于空白组，曲酸组的相对黑色素含量显著降低约17.5％，化合物01组的相对黑色素含量显著降低约46.5％，化合物03组的相对黑色素含量显著降低约14.3％，化合物04组的相对黑色素含量显著降低约19.4％，化合物05组的相对黑色素含量显著降低约38.4％，化合物07组的相对黑色素含量显著降低约16.7％，而化合物09组的相对黑色素含量显著降低约13.9％。[0305]由此可知，化合物tci-gsf-01、tci-gsf-03、tci-gsf-04、tci-gsf-05、tci-gsf-07及tci-gsf-09皆能显著降低黑色素。其中，化合物tci-gsf-01相较其他化合物，具有较为优异的降低黑色素含量的能力。换言之，秋姬李发酵物所包含的2,5-呋喃二甲醇(2,5-bis-(hydroxymethyl)furane)、5-羟基糠酸(5-hydroxymethyl-2-furonicacid)、反式-4-羟基环己烷羧酸(trans-4-hydroxycyclohaxanecarboxlicacid)、酪醇(tyrosol)、6-羟基-6-(羟甲基)-2h-吡喃-3(6h)-酮(6-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-2h-pyran-3(6h)-one)和2-羟基-1-(5-(羟甲基)呋喃-2-基)丙烷-1-酮(2-hydroxy-1-(5-(hydroxymethyl)furan-2-yl)propan-1-one)皆具有减少黑色素及/或抑制黑色素生成的能力，藉以有益于减少个体的黑色素，进而提升个体皮肤的通透与亮白程度。[0306]综上，任一实施例的秋姬李发酵物，其能提升粒线体活性或提升肤况。换言之，任一实施例的秋姬李发酵物适用于制备提升粒线体活性或提升肤况的组合物。在一些实施例中，秋姬李发酵物或其所制得的组合物还具有下列一种或多种功能：美白、减少黑色素、抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶活性、减少肌肤棕色斑、及减少肌肤斑点。[0307]当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。当前第1页12当前第1页12