3-苯基戊二酸衍生物类小分子在制备防治顺铂诱导的急性肾损伤药物中的应用的制作方法

1.本发明属于医药领域，具体涉及一种3-苯基戊二酸衍生物类小分子84-b10在制备防治顺铂诱导的急性肾损伤药物中的应用。


背景技术：

2.急性肾损伤(acute kidney injury，aki)是由多种病因造成的肾功能在短期内的急性减退，其发病率高，极易进展为慢性肾脏病或终末期肾病，发生心血管事件及死亡等，已成为全球关注的公共卫生问题。流行病学调查显示，aki在住院患者中的发生率约15％
–
25％，在重症监护室中高达30％
–
60％(参考文献：ronco c,et al.acute kidney injury.lancet.2019；394(10212):1949-64；pickkers p,et al.acute kidney injury in the critically ill:an updated review on pathophysiology and management.)。顺铂是临床上广泛使用的化疗药物，用于治疗乳腺癌、肺癌、前列腺癌和淋巴癌多种恶性肿瘤。顺铂主要经肾脏排泄，以肾小管浓度最高，而肾小管上皮细胞暴露于顺铂刺激下极易发生dna损伤和氧化应激，进而诱发凋亡和铁死亡，导致肾小管功能障碍。凋亡是一种程序性细胞死亡，而铁死亡是一种区别于凋亡的铁依赖的、以脂质过氧化为特征的细胞死亡，这两种细胞死亡形式并行存在于顺铂诱导的肾损伤病理进程中。因此，同时减轻肾小管细胞的凋亡和铁死亡是治疗顺铂引起aki的有效干预手段。
3.5-[[2-(4-甲氧基苯氧基)-5-(三氟甲基)苯基]氨基]-5-氧代-3-苯基戊酸(5-[[2-(4-methoxyphenoxy)-5-(trifluoromethyl)phenyl]amino]-5-oxo-3-phenylpentanoicacid)是一种新型的3-苯基戊二酸衍生物小分子，其分子式为c
25h22
f3no5，cas号为698346-43-9。目前尚无该小分子化合物在aki中的研究报道。


技术实现要素：

[0004]
本发明的目的在于公开了一种3-苯基戊二酸衍生物类小分子在制备用于防治顺铂诱导的aki的药物中的用途，从而为顺铂导致的aki提供一种新的候选药物。
[0005]
其中，所述3-苯基戊二酸衍生物类小分子为5-[[2-(4-甲氧基苯氧基)-5-(三氟甲基)苯基]氨基]-5-氧代-3-苯基戊酸(5-[[2-(4-methoxyphenoxy)-5-(trifluoromethyl)phenyl]amino]-5-oxo-3-phenylpentanoicacid)，其分子式为c
25h22
f3no5，cas号为698346-43-9，后文简称为84-b10。
[0006]
本研究通过体内和体外实验证明84-b10可通过同时减少肾小管细胞的凋亡和铁死亡而发挥防治顺铂诱导的aki的作用。
[0007]
具体地，84-b10可以84-b10通过改善顺铂诱导的肾脏病理损伤、保护肾功能、降低其急性肾损伤相关指标ngal和kim-1的表达水平来防治顺铂诱导的急性肾损伤。
[0008]
同时，84-b10可以通过抑制顺铂诱导的肾脏组织与肾小管上皮细胞凋亡来防治顺铂诱导的急性肾损伤。
[0009]
进一步地，84-b10通过抑制顺铂诱导的肾脏组织与肾小管上皮细胞铁死亡来防治顺铂诱导的急性肾损伤。
[0010]
同时，本技术还发现，84-b10在保护顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤的同时，还保护了顺铂诱导的肝脏及心脏损伤，且不会促进乳腺癌及非小细胞肺癌细胞活力，证明其作为防治顺铂诱导的急性肾损伤药物使用的安全性。
[0011]
因此，将84-b10应用于药物中可以起到防治顺铂诱导的急性肾损伤的作用，具有良好的开发应用前景。
附图说明
[0012]
下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
[0013]
图1显示3个不同治疗剂量(5mg/kg/d、10mg/kg/d、15mg/kg/d)的84-b10对顺铂诱导的小鼠肾脏病理损伤和肾功能的影响；
[0014]
图2显示3个不同治疗剂量(5mg/kg/d、10mg/kg/d、15mg/kg/d)的84-b10对顺铂诱导的肾脏ngal和kim-1的表达水平的影响；
[0015]
图3显示3个不同治疗剂量(5mg/kg/d、10mg/kg/d、15mg/kg/d)的84-b10对肾脏组织的凋亡水平的影响；
[0016]
图4显示84-b10对顺铂诱导的小鼠肾小管上皮细胞凋亡水平的影响；
[0017]
图5显示3个不同治疗剂量(5mg/kg/d、10mg/kg/d、15mg/kg/d)的84-b10对肾脏组织铁死亡水平的影响；
[0018]
图6显示84-b10对小鼠肾小管上皮细胞铁死亡水平的影响；
[0019]
图7显示3个不同治疗剂量(5mg/kg/d、10mg/kg/d、15mg/kg/d)的84-b10对顺铂诱导的小鼠肝脏及心肌损伤的影响；
[0020]
图8显示治疗剂量的84-b10对乳腺癌及非小细胞肺癌细胞活力的影响。
具体实施方式
[0021]
本发明实施例中涉及的实验材料和方法如下：
[0022]
(1)小鼠饲养、顺铂诱导的急性肾损伤模型构建和药物干预
[0023]
本发明涉及的c57bl/6野生型雄性小鼠(购买时7周龄，体重20-24g)购自江苏集萃药康生物科技股份有限公司，饲养于南京医科大学实验动物中心spf级屏障环境中，维持12h：12h昼夜交替节律，自由进食和饮水，维持温度恒定(22
±
2℃)。小鼠在适应性饲养1周后进行实验。
[0024]
本发明使用的小分子化合物84-b10委托上海美迪西生物医药股份有限公司合成，给药时采用的溶媒为10％dmso稀释至磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline，pbs)。将40只小鼠随机分为5组(每组8只小鼠)：溶剂组(vehicle)、顺铂组(cisplatin)和三个不同剂量的顺铂+84-b10治疗组(cisplatin+84-b10)，84-b10的用量分别为5mg/kg/d、10mg/kg/d和15mg/kg/d。cisplatin+84-b10组小鼠提前48h和24h通过腹腔注射进行两次相应药物剂量的84-b10预处理，第3天cisplatin组和cisplatin+84-b10组小鼠均一次性腹腔注射剂量为25mg/kg的顺铂，vehicle组注射等量生理盐水。顺铂造模之后，cisplatin+84-b10组
小鼠每天定时84-b10腹腔注射给药1次，vehicle组和cisplatin组小鼠腹腔注射同样体积的上述溶媒。顺铂造模72h后将小鼠安乐死，并留取肾脏和血清样本。
[0025]
(2)小鼠肾小管上皮细胞(tkpt)的培养与给药
[0026]
小鼠肾小管上皮细胞(tkpt)培养于含7％(v/v)胎牛血清、0.003％(w/v)的胰岛素、青霉素(100u/ml)和链霉素(100μg/ml)的deme/f12培养基中，培养在含5％co2的37℃培养箱中。选择对数生长期的细胞分别接种于6孔板和12孔板中，当细胞密度70％左右时，给予84-b10(40μm)预处理2h，再给予5μg/ml的顺铂刺激，24h后收集6孔板细胞提蛋白，收集12孔板细胞通过流式细胞术检测细胞凋亡和脂质过氧化。
[0027]
(3)人乳腺癌细胞mcf-7及非小细胞肺癌a549的培养与给药
[0028]
人乳腺癌细胞mcf-7及非小细胞肺癌a549培养于含10％(v/v)胎牛血清、青霉素(100u/ml)和链霉素(100μg/ml)的1640培养基中，培养在含5％ co2的37℃培养箱中。选择对数生长期的细胞接种于96孔板中，当细胞密度70％左右时，给予84-b10(10-100μm)处理；或给予84-b10(10-40μm)预处理2h后，再给予5μg/ml的顺铂刺激。
[0029]
(4)肾脏、肝脏及心脏功能检测
[0030]
采用血清生化分析仪对血清样本中尿素氮(bun)、肌酐(scr)、谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)和乳酸脱氢酶(ldh)的浓度进行检测。
[0031]
(5)肾脏组织碘酸-希夫(periodic acid-schiff，pas)染色
[0032]
使用pas染色试剂盒(索莱宝，货号g1281)进行染色。切取各组小鼠肾组织，于4％多聚甲醛室温固定组织24h，脱水，石蜡包埋切片。切片脱蜡至水，浸入高碘酸溶液中室温氧化15min，自来水冲洗2次，双蒸浸洗2次，沥干水分后将切片浸入schiff染液中室温避光孵育20min，流水冲洗5min，苏木素核染1-2min，自来水冲洗返蓝，常规脱水透明，中性树胶封片，显微镜观察拍片。
[0033]
(6)免疫印迹(western blot)
[0034]
使用组织与细胞裂解液(含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂)充分裂解肾脏组织和细胞，高速离心后收集上清至新的离心管。取部分上清，使用bca法测定样本的蛋白浓度，剩余上清按比例加入5
×
上样缓冲液并混匀，100℃煮沸10min，取30或50μg蛋白样本进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，并将分离后的蛋白转印至pvdf膜上。将转印后的pvdf膜置于含5％脱脂奶粉中室温封闭1h，tbst洗膜2次后加入一抗，一抗ngal(abcam，货号ab63929)、kim-1(r&d systems，货号af1817)，bax(proteintech，货号50599-2-lg)、bcl-2(abcam，货号ab182858)、cleaved caspase-3(cell signaling technology，货号9664s)、gpx4(proteintech，货号67763-1-lg)、nrf2(proteintech，货号16396-1-ap)、slc7a11(proteintech，货号26864-1-ap)、4-hne(abcam，货号ab46545)和gapdh(proteintech，货号60004-1-lg)稀释于tbst中，4℃摇床孵育过夜，次日tbst洗膜后室温孵育二抗(1：2000稀释)，滴加增强化学发光液并置于凝胶成像系统显影，image j软件对目的条带进行灰度值分析。
[0035]
(7)实时荧光定量pcr(quantitative real-time pcr，rt-pcr)
[0036]
加入trizol提取组织总rna，分光光度法测rna浓度和纯度，立即利用逆转录试剂盒(takara)将质量为1μg的rna逆转录成cdna，反应体系见表1，逆转录条件：37℃15min，85℃5s，4℃保持。
[0037]
采用sybr green(罗氏)，在lightcycler96实时荧光定量pcr仪(罗氏)中进行扩增，反应体系见表2，pcr反应程序：预变性95℃10min，随后95℃15s和60℃1min循环40次。
[0038]
表1：逆转录体系
[0039][0040]
表2：real-time pcr反应体系
[0041][0042]
(8)dutp nick end labeling(tunel)染色
[0043]
使用tunel染色试剂盒(诺唯赞，货号a112)进行染色。石蜡切片脱蜡至水，每个样本滴加100μl终浓度为20μg/ml的proteinase k溶液进行通透处理，pbs洗涤3次，每次5min，每个样本再滴加100μl的1
×
equilibration buffer室温平衡10-30min，平衡结束后在样本上滴加50μl按比例配制好的tdt孵育缓冲液，37℃避光孵育60min，pbs清洗后dapi染核，抗荧光淬灭剂封片，激光共聚焦显微镜观察并拍片。
[0044]
(9)annexin v/pi染色检测细胞凋亡
[0045]
将处理结束的12孔板细胞用不含edta的胰酶进行消化，轻柔吹打细胞，将细胞悬液转移至1.5ml ep管中，常温离心机1000rpm离心5min，弃去上清，用预冷的pbs清洗2遍，每管细胞加入100μl的1
×
binding buffer、5μl的fitc染液(bd biosciences，货号556547)和5μl的pi(bd biosciences，货号556547)，轻弹管底混匀，室温避光孵育15min，再加入400μl的1
×
binding buffer，轻弹混匀，使用流式细胞仪检测细胞凋亡。
[0046]
(10)bodipy 581/591c11法检测细胞脂质过氧化水平
[0047]
基于bodipy 581/591c11试剂(invitrogen，货号c10445)的氧化来检测活细胞中的脂质过氧化水平。同上述方法收集细胞，将细胞重悬于含bodipy 581/591c11(终浓度为10μm)的无血清培养液中，37℃孵育30min，pbs洗涤细胞三次，使用流式细胞仪检测细胞脂质过氧化。
[0048]
(11)cck-8检测试剂检测细胞活力
[0049]
使用cck-8检测试剂盒(apexbio，货号k1018)，将对数生长期的细胞均匀接种于96孔板，相应处理后，弃去培养基。每孔加入90μl的hbss培养基和10μl的cck-8试剂，培养板放
入37℃5％ co2培养箱中孵育1h，使酶标仪检测各孔在450nm波长处的od值。
[0050]
(12)统计分析
[0051]
所有统计分析数据使用均值
±
sem表示，统计方法用方差分(anova)或student’st检验。p《0.05为具有统计学意义；相对于vehicle组，p《0.05标记为*；p《0.01标记为**；p《0.001标记为***；相对于cisplatin组，p《0.05标记为#；p《0.01标记为##；p《0.001标记为###。
[0052]
下面结合具体实施例详细阐述本发明。
[0053]
实施例1 84-b10可显著改善顺铂诱导的小鼠肾脏病理损伤和肾功能。
[0054]
小鼠随机分为5组，分别为vehicle组，cisplatin组，cisplatin+84-b10(5mg/kg/d)组，cisplatin+84-b10(10mg/kg/d)组，cisplatin+84-b10(15mg/kg/d)组。各组小鼠按照具体实施方式中所述方法进行顺铂造模和给药，在顺铂造模72h后将小鼠安乐死，留取肾脏进行pas染色；留取血清样本检测血清肾功能值scr和bun。
[0055]
实验结果：pas染色后显微镜下观察，与vehicle组相比，cisplatin小鼠的肾小管出现管腔扩大、管型形成、刷状缘消失等病理损伤现象，3个不同治疗剂量(5mg/kg/d、10mg/kg/d、15mg/kg/d)的cisplatin+84-b10组小鼠的以上病理损伤现象均显著减轻(图1a)。对肾小管损伤病理进行评分，结果显示84-b10可剂量依赖性地改善顺铂诱导的肾小管病理损伤(图1b)。与此相一致，与cisplatin组相比，3个不同治疗剂量的cisplatin+84-b10组小鼠的肾功能标志物scr(图1c)和bun(图1d)的浓度均显著降低，说明84-b10可显著改善顺铂导致的小鼠急性肾功能损伤。因此，3个不同治疗剂量(5mg/kg/d、10mg/kg/d、15mg/kg/d)的84-b10均可显著改善顺铂诱导的小鼠肾脏病理损伤和肾功能。
[0056]
实施例2 84-b10可显著降低顺铂诱导的肾脏ngal和kim-1的表达水平。
[0057]
小鼠随机分为5组，分别为vehicle组，cisplatin组，cisplatin+84-b10(5mg/kg/d)组，cisplatin+84-b10(10mg/kg/d)组，cisplatin+84-b10(15mg/kg/d)组，各组小鼠按照具体实施方式中所述方法进行顺铂造模和给药，在顺铂造模72h后将小鼠安乐死，留取肾脏组织进行western blot和rt-pcr检测肾小管损伤指标ngal和kim-1的蛋白及mrna水平。
[0058]
实验结果：
[0059]
与vehicle组相比，cisplatin组小鼠的肾组织中肾小管损伤指标ngal和kim-1的蛋白表达水平均大幅升高，其差异有统计学意义。这一结果表明顺铂造模后，小鼠肾小管受到较严重的损伤，而3个治疗剂量的84-b10均可显著降低ngal和kim-1的蛋白表达水平(图2a-c)。同样的，我们使用rt-pcr法检测lcn2(编码ngal)和havcr-1基因(编码kim-1)的转录水平，结果亦证实以上两个基因的转录水平也在cisplatin组显著上调，而在84-b10作用下均显著降低(图2d-e)。
[0060]
实施例3 84-b10可显著降低肾脏组织的凋亡水平。
[0061]
小鼠随机分为5组，分别为vehicle组，cisplatin组，cisplatin+84-b10(5mg/kg/d)组，cisplatin+84-b10(10mg/kg/d)组，cisplatin+84-b10(15mg/kg/d)组，各组小鼠按照具体实施方式中所述方法进行顺铂造模和给药，在顺铂造模72h后将小鼠安乐死，留取肾脏组织。使用western blot和rt-pcr检测促凋亡分子bax的蛋白及mrna水平；使用tunel染色法检测肾组织的细胞凋亡水平。
[0062]
实验结果：
[0063]
已知顺铂诱导的急性肾损伤必然伴随着肾小管上皮细胞的凋亡，而促凋亡蛋白bax是这一事件发生发展的关键因子。因此，我们首先检测bax的蛋白表达和rna水平。实验结果表明，与vehicle组相比，cisplatin小鼠的肾组织中，bax的蛋白及mrna表达水平显著上调，而3个治疗剂量的84-b10均可显著下调促凋亡分子bax的蛋白表达(图3a-b)及mrna水平(图3c)，且其作用具有剂量依赖性。进一步，我们使用tunel染色法检测肾脏组织的细胞凋亡水平，tunel染色的原理是当细胞发生凋亡时，细胞dna大量断裂而产生粘性3'-oh，使用荧光素标记脱氧核糖核苷酸对粘性3'-oh末端进行标记，从而达到检测细胞凋亡的目的。定量结果亦显示84-b10可剂量依赖性地抑制顺铂引起的肾脏组织中的细胞凋亡比率。
[0064]
实施例4 84-b10可显著降低顺铂诱导的小鼠肾小管上皮细胞凋亡水平。
[0065]
为研究84-b10对顺铂引起的肾小管上皮细胞凋亡的影响，本实验在体外培养小鼠肾小管上皮细胞tkpt，并采用顺铂诱导细胞凋亡。具体地，首先使用40μm的84-b10预处理2h，随后加入终浓度为5ng/μl的顺铂，24h后收集细胞。使用western blot法检测细胞凋亡相关分子的表达；使用annexin v/pi双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡比率。
[0066]
实验结果：
[0067]
同样地，我们使用western blot法检测促凋亡分子bax和cleaved caspased-3，以及抗凋亡分子bcl-2的蛋白表达水平。与小鼠体内结果相符，体外结果显示，与模型组相比，给药组的促凋亡分子bax和cleaved caspased-3的表达水平显著降低，而抗凋亡分子bcl-2的表达水平显著上调，定量分析显示其差异具有统计学意义(图4a-b)。
[0068]
annexin v/pi双染法检测细胞凋亡的经典方法，annexin v试剂可以与细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸结合，而灵敏地标记早期凋亡的细胞；pi是一种核酸染料，可以标记凋亡中晚期的细胞及死细胞的细胞核。因此将annexin v与pi结合使用，运用流式细胞术，可以实现对早期和晚期凋亡细胞的检测。如图4c-d所示，cisplatin组细胞凋亡比率较vehicle组显著增加，而治疗剂量的84-b10表现出较好的抗凋亡作用，其差异有统计学意义。以上结果共同说明治疗剂量的84-b10可明显减轻cisplatin导致的肾小管上皮细胞凋亡。
[0069]
实施例5 84-b10均可显著降低肾脏组织铁死亡水平。
[0070]
小鼠随机分为5组，分别为vehicle组，cisplatin组，cisplatin+84-b10(5mg/kg/d)组，cisplatin+84-b10(10mg/kg/d)组，cisplatin+84-b10(15mg/kg/d)组，各组小鼠按照具体实施方式中所述方法进行顺铂造模和给药，在顺铂造模72h后将小鼠安乐死，留取肾脏组织。使用western blot检测铁死亡的关键调节因子gpx4蛋白和脂质过氧化终产物4-羟基壬烯醛(4-hne)水平。
[0071]
实验结果：
[0072]
除细胞凋亡之外，近年研究发现顺铂亦诱导肾小管上皮细胞铁死亡。铁死亡是一种区别于凋亡的铁依赖的、以脂质过氧化为特征的细胞死亡。gpx4是铁死亡的关键调节因子，其可以将磷脂过氧化氢还原为相应的醇，若gpx4表达降低，则会触发脂质的过氧化。本研究结果表达，顺铂促使小鼠肾脏组织gpx4表达显著降低，而3个治疗剂量的84-b10可剂量依赖性地恢复gpx4的表达(图5a-b)。
[0073]
进一步，我们检测脂质过氧化终产物4-hne的水平。实验结果表明，与vehicle组相比，cisplatin组小鼠的肾组织中4-hne水平显著上调，表明肾组织中脂质过氧化水平显著，而3个治疗剂量的84-b10可剂量依赖性下调肾组织中脂质过氧化水平，其差异均具有统计
学意义(图5c-d)。以上结果共同说明治疗剂量的84-b10可显著减轻顺铂导致的肾脏组织铁死亡。
[0074]
实施例6 84-b10可显著降低顺铂诱导的小鼠肾小管上皮细胞铁死亡水平。
[0075]
为研究84-b10对顺铂引起的肾小管上皮细胞铁死亡的影响，本实验在体外培养小鼠肾小管上皮细胞tkpt，并采用顺铂诱导细胞铁死亡。具体地，首先使用40μm的84-b10预处理2h，随后加入终浓度为5ng/μl的顺铂，24h后收集细胞，使用western blot法检测细胞凋亡相关分子的表达；12h后收集细胞，使用bodipy 581/591c11染色法结合流式细胞术检测细胞脂质过氧化水平；最后，使用cck-8法检测84-b10对顺铂作用下肾小管上皮细胞活力的影响。
[0076]
实验结果：
[0077]
除gpx4以外，nrf2可以转录激活抗氧化蛋白，slc7a11通过转运胱氨酸促进还原型谷胱甘肽的合成，二者亦为铁死亡的抑制因子。与小鼠体内研究结果相符，顺铂促使肾小管上皮细胞tkpt中nrf2、slc7a11及gpx4表达显著降低，而84-b10可显著增加以上三种蛋白的表达水平(图6a-b)。相似地，我们使用bodipy 581/591c11染色法检测细胞脂质过氧化水平。实验结果表明，顺铂可诱导肾小管上皮细胞tkpt脂质过氧化水平显著上升，而84-b10可显著下调细胞脂质过氧化水平，其差异具有统计学意义(图6c-d)。以上结果共同说明治疗剂量的84-b10可显著减轻顺铂导致的肾小管上皮细胞铁死亡。
[0078]
最后，我们使用cck8法检测细胞活力，结果表明顺铂处理24h可显著降低肾小管上皮细胞tkpt活力至～50％，而10-40μm的84-b10可剂量依赖性地增加细胞活力(图6e)。此结果说明，84-b10通过同时抑制顺铂导致的肾小管上皮细胞凋亡和铁死亡，而增加肾小管上皮细胞活力。
[0079]
实施例7 84-b10显著改善顺铂诱导的小鼠肝脏及心脏损伤。
[0080]
为考查治疗剂量的84-b10的安全性我们还检测vehicle组、cisplatin组、cisplatin+84-b10(5mg/kg/d)组、cisplatin+84-b10(10mg/kg/d)组和cisplatin+84-b10(15mg/kg/d)组小鼠肝功能标志物血清谷丙转氨酶(alt)、血清谷草转氨酶(ast)及心功能指标血清乳酸脱氢酶(ldh)的水平，以检测84-b10对肝脏和心脏的作用。
[0081]
实验结果：
[0082]
与vehicle组相比，cisplatin组小鼠的血清alt、ast水平显著上升，表明肝脏受到顺铂的明显损伤；同时，血清ldh水平亦明显上升，说明顺铂对小鼠心脏也产生明显的不良作用(图7a-c)。而与cisplatin组相比，3个不同治疗剂量的cisplatin+84-b10组小鼠的血清ast和ldh的浓度均显著降低(图7b-c)，alt在10和15mg/kg/d亦显著改善(图7b)，说明84-b10在改善顺铂引起的肾损伤的同时，也可显著改善顺铂导致的小鼠肝脏和心脏损伤。
[0083]
实施例8治疗剂量的84-b10不促进乳腺癌及非小细胞肺癌细胞活力。
[0084]
顺铂为抗肿瘤的一线化疗药物，主要应用于乳腺癌、肺癌、前列腺癌等肿瘤的治疗中。因此，为研究84-b10在保护肾脏、肝脏及心脏损伤的同时，是否对肿瘤细胞产生不良影响，我们选择人乳腺癌细胞mcf-7及非小细胞肺癌a549进行实验。一方面使用10-100μm的84-b10给予处理24h，检测84-b10对上述两种肿瘤细胞活力的影响；另一方面，使用10-40μm的84-b10预处理2h，随后加入终浓度为5ng/μl的顺铂处理，考查84-b10对顺铂对上述两种肿瘤细胞杀伤作用的影响。
[0085]
实验结果：
[0086]
使用cck-8法检测细胞活力，结果表明10-30μm的84-b10处理24h对mcf-7的细胞活力无显著影响，而治疗剂量的84-b10(40μm)可以显著降低乳腺癌细胞mcf-7的细胞活力(图8a)，且进一步增强顺铂对mcf-7的杀伤作用(图8b)。10-40μm的84-b10处理24h对非小细胞肺癌a549的细胞活力无显著影响(图8c)，且不影响顺铂对a549的杀伤作用(图8d)。本部分实验结果说明，在治疗剂量的84-b10在保护肾小管上皮细胞的同时，不会促进乳腺癌及非小细胞肺癌细胞活力，证明其作为防治顺铂诱导的急性肾损伤药物使用的安全性。
[0087]
本发明提供了一种候选的用于防治顺铂诱导的aki的药物，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。