乳源成分在降低单增李斯特菌引起的感染风险中的应用的制作方法

本发明属于医药、食品领域，具体涉及乳源成分在降低单增李斯特菌引起的感染风险中的应用。

背景技术：

1、单核细胞增生李斯特菌简称单增李斯特菌，是一种重要的食源性人畜共患病原菌。单增李斯特菌为兼性厌氧的革兰氏阳性菌，在营养丰富的条件下可以形成荚膜，耐低温(-1.5～45℃可生长，-20℃下可以存活1年)，耐高盐，对环境的适应能力很强。因此检测和控制食品中的单核细胞增生李斯特菌比较困难，易感染孕妇、老人、婴儿等免疫力低下的人群。

2、单增李斯特菌可导致2种类型的疾病症状。其中，一种为侵袭性李氏杆菌病，该菌通常会感染身体的无菌部位，如肝脏、脾脏、脑脊髓液和血液，主要导致孕妇出现死胎、流产、新生儿李斯特菌病，老人或免疫力低下者患脑膜炎或败血症。另一种为非侵袭性疾病，通常导致健康成人患肠胃炎，与由受污染的熟食肉类、奶酪、熏鱼、玉米等食物引起的爆发有关。

3、单增李斯特菌容易定殖在广泛的基质，如土壤、污水、人和动物粪便及多种食物，且对人、家禽或家畜、野生动物等均有致病性，病原体也栖息在人类和动物的胃肠道中。食源性的单增李斯特菌可以随污染的食物经口腔进宿主的消化道，并在肠道内增殖，其中有一部分通过粪便直接排出体外，并且再次污染食物、水源以及饲料等，形成一个完整的粪口传播途径；另一部分通过调节毒力因子，如内化素和溶血素，侵入宿主细胞并向邻近细胞扩散，穿过肠道上皮细胞屏障进入机体的肠道深层，再通过血液循环或淋巴循环被转移到肝脏，或穿过血脑屏障引起脑膜炎等神经症状，还可以穿越胎盘屏障，造成流产或新生儿溶血。

4、李斯特菌病患病初期，人们通常使用青霉素或氨苄青霉素与氨基糖苷类药物(庆大霉素)和甲氧苄啶-磺胺甲恶唑的组合，来治疗李斯特菌病。但由于在临床中过量使用药物以及大量使用药物作为养殖场动物的生长促进剂，细菌耐药性的进化已经大大加快，同时也出现了多重耐药菌株，因此减少抗生素使用，寻找辅助治疗和替代疗法十分必要。

5、病原菌通过其表面的黏附蛋白等黏附因子与宿主细胞上的配体形成稳固的结合作用，进而诱发一系列炎症反应和感染。病原菌在肠上皮的黏附是其诱发感染的第一步，因此阻碍病原菌在肠上皮的黏附是预防或治疗病原菌感染的关键。针对病原菌与宿主细胞的黏附机制，开发具有抗黏附作用的药物已成为抗耐药细菌治疗的新靶点。据报道，糖基神经酰胺葡萄糖苷酶的酶替代疗法已成功用于治疗戈谢病和系统性沙门氏菌病的患者。

6、值得注意的是，抑菌或杀菌与抗黏附的作用机制完全不同，例如lf能够通过剥夺细菌生长所必须的铁离子从而使病原菌停止生长甚至死亡，而抗黏附作用的发挥则需要其表面具有特异性与细胞受体相结合的结构成分从而竞争性占据病原菌与细胞的结合位点，具有抑菌作用的成分并非可以达到抗粘附的作用。

7、母乳(人乳以及动物乳)不仅为子代生长发育提供了必不可少的营养物质，其中的活性成分更是起到促进子代免疫发育，大脑认知以及抗感染等多种功能，对婴幼儿早期以及长期健康均发挥着极其重要的作用。

8、本发明通过试验筛选，配制了一种可以从杀菌，抑制病原菌黏附，抗病原菌快速生长以及免疫调节四个方面抗李斯特菌感染的成分，对开发具有降低李斯特菌引起感染风险的功能性产品具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供乳源成分在杀菌，抑制病原菌黏附，抗病原菌快速生长以及免疫调节四个方面达到抗单增李斯特菌感染的应用。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明的第一方面，提供一种组合物，所述组合物包含乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖中的至少一种。

4、在本发明的一些优选实施方式中，所述组合物包含乳铁蛋白和骨桥蛋白。

5、在本发明的一些优选实施方式中，所述乳铁蛋白和骨桥蛋白的质量比为1：(0.5～10)。

6、在本发明的一些优选实施方式中，所述乳铁蛋白和骨桥蛋白的质量比为1：(1～5)。

7、本发明的第二方面，提供本发明第一方面所述的组合物在(i)～(vii)至少一种中的应用；

8、(i)减灭单增李斯特菌活菌数量；

9、(ii)制备减灭单增李斯特菌活菌数量的产品；

10、(iii)抑制单增李斯特菌生长；

11、(iv)制备抑制单增李斯特菌生长的产品；

12、(v)抵抗单增李斯特菌在肠上皮黏附；

13、(vi)制备抵抗单增李斯特菌在肠上皮黏附的产品；

14、(vii)制备预防和/或治疗单增李斯特菌感染导致的疾病的产品。

15、在本发明的一些实施方式中，所述单增李斯特菌感染导致的疾病包括胃肠炎、脑膜炎、败血症、单核细胞增多症等。

16、在本发明的一些实施方式中，所述产品包括功能性产品、药品、饲料、试剂、杀菌剂、抑菌剂、日化用品。

17、在本发明的一些实施方式中，所述功能性产品包括食品或保健品。

18、在本发明的一些实施方式中，所述食品包括配方奶粉、调制乳粉、蛋白粉或营养补充剂。

19、在本发明的一些实施方式中，所述乳铁蛋白以3mg～375mg/kg体重/天的剂量给有需要的人或动物受试者。

20、在本发明的一些优选实施方式中，所述乳铁蛋白以50mg～285mg/kg体重/天的剂量给有需要的人或动物受试者。

21、在本发明的一些更优选实施方式中，所述乳铁蛋白以95mg～135mg/kg体重/天的剂量给有需要的人或动物受试者。

22、在本发明的一些实施方式中，所述骨桥蛋白以6mg～375mg/kg的剂量给有需要的人或动物受试者。

23、在本发明的一些优选实施方式中，所述骨桥蛋白以65mg～270mg/kg的剂量给有需要的人或动物受试者。

24、在本发明的一些更优选实施方式中，所述骨桥蛋白以98mg～140mg/kg的剂量给有需要的人或动物受试者。

25、在本发明的一些实施方式中，所述6’-唾液酸乳糖以10-320mg/kg体重/天的剂量给有需要的人或动物受试者。

26、在本发明的一些优选实施方式中，所述6’-唾液酸乳糖以55-200mg/kg体重/天的剂量给有需要的人或动物受试者。

27、在本发明的一些更优选实施方式中，所述6’-唾液酸乳糖以100-140mg/kg体重/天的剂量给有需要的人或动物受试者。

28、在本发明的一些实施方式中，当所述产品为液体时，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均≥0.0195mg/ml。

29、在本发明的一些实施方式中，当所述产品为液体时，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均≥0.039mg/ml。

30、在本发明的一些优选实施方式中，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均为0.039～8mg/ml。

31、在本发明的一些优选实施方式中，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均为0.039～5mg/ml。

32、在本发明的一些更优选实施方式中，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均为0.3125～5mg/ml。

33、在本发明的一些实施方式中，所述动物包括猪，牛，羊等。

34、在本发明的一些实施方式中，所述产品还包含载体或辅料。所述载体包括常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

35、在本发明的一些实施方式中，所述产品为药物时，可与其他具有预防和/或治疗功能的药物联合使用。上述药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式；上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。上述药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。

36、本发明的第三方面，提供一种调制乳粉，包含本发明第一方面所述组合物。

37、在本发明的一些实施方式中，所述调制乳粉包含0～0.4wt％的骨桥蛋白。

38、在本发明的一些优选实施方式中，所述调制乳粉包含0.1～0.2wt％的骨桥蛋白。

39、在本发明的一些实施方式中，所述调制乳粉包含0～0.2wt％的乳铁蛋白。

40、在本发明的一些优选实施方式中，所述调制乳粉包含0.05～0.15wt％的乳铁蛋白。

41、在本发明的一些实施方式中，所述调制乳粉包含0～0.8wt％的6’-唾液酸乳糖。

42、在本发明的一些优选实施方式中，所述调制乳粉包含0.2～0.4wt％的6’-唾液酸乳糖。

43、在本发明的一些实施方式中，所述调制乳粉中还包含50～70wt％的脱脂乳粉、30～40wt％的全脂乳粉、3～4.5wt％的低聚半乳糖。

44、在本发明的一些实施方式中，所述调制乳粉还包含浓缩乳清蛋白，所述浓缩乳清蛋白包含骨桥蛋白，所述骨桥蛋白占浓缩乳清蛋白粉的3～10wt％。

45、本发明的第四方面，提供一种抑制单增李斯特菌活菌数量和/或活性和/或生长和/或感染和/或黏附的方法，包括使用包含本发明第一方面所述的组合物的产品抑制单增李斯特菌的步骤。

46、在本发明的一些实施方式中，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均≥0.0195mg/ml。

47、在本发明的一些实施方式中，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均≥0.039mg/ml。

48、在本发明的一些优选实施方式中，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均为0.039～8mg/ml。

49、在本发明的一些优选实施方式中，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均为0.039～5mg/ml。

50、在本发明的一些更优选实施方式中，所述乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖的浓度均为0.3125～5mg/ml。

51、本发明的有益效果是：

52、本发明筛选了具有抗单增李斯特菌的乳源成分，通过杀菌，抗菌生长，抗菌黏附，免疫调节多个方面进行原料筛选，发现乳铁蛋白、骨桥蛋白、6’-唾液酸乳糖可以具有降低单增李斯特菌引起感染风险，能够抑制单增李斯特菌的生长、抵抗单增李斯特菌在肠上皮黏附，为抗单增李斯特菌感染产品开发和应用提供依据。而且乳源成分为乳汁中天然存在的活性物质，安全无副作用并对生长健康起到重要的作用，且这些组合物成分均来源于牛乳，对未来功能乳制品的开发具有重要的意义，也可用于制备功能性食品、保健品、药物等。