一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种caerin1.1/1.9联合抗cd47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。

背景技术：

1、恶性黑色素瘤是由皮肤和其他器官黑素细胞产生的肿瘤。皮肤黑色素瘤表现为色素性皮损在数月或数年中发生明显改变。虽其发病率低，但其恶性度高，转移发生早，死亡率高，因此早期诊断、早期治疗很重要。恶性黑素瘤大多发生于成人，巨大性先天性色素痣继发癌变的病例多见于儿童。由于黑色素瘤对人体危害极大，因此，其治疗一直是备受各界关注的。

2、免疫治疗是肿瘤治疗的新方法。免疫检查点抑制剂如抗pd1，ctla4已广泛在临床使用。随着科学研究的不断发展进步，新的免疫检查点也不断被发现，如anti-cd47，但是这些免疫检查点在实际使用时，存在一个共性问题，由于这些免疫检查点在诱导肿瘤细胞凋亡的同时，还会影响巨噬细胞，使其无法吞噬肿瘤细胞，最终破坏肿瘤免疫微环境，限制了免疫治疗效率。

3、caerin1多肽家族是澳大利亚树蛙皮肤分泌的抗菌多肽，包括caerin1.1、caerin1.9等，具有抗菌和抗肿瘤细胞生长的活性。研究发现，caerin1.1、caerin1.9在体外可以抑制人和小鼠宫颈癌细胞，人甲状腺癌细胞，人乳腺癌细胞生长，通过tnfalpha信号传导通路诱导hela细胞凋亡；偶联核素，可以提高其抗肿瘤效率；体内可以抑制tc-1细胞生长，并吸引血细胞如t细胞，nk细胞等到肿瘤组织。但是这些仅证明了caerin1.1、caerin1.9可以抑制肿瘤，并不会改变上述问题。而且，现有技术中并没有关于caerin1.1、caerin1.9用于黑色素瘤的报道。

4、综上可知，现有技术中普遍具有在治疗过程中，破坏肿瘤免疫微环境，影响免疫治疗效率，caerin1.1、caerin1.9应用范围窄等技术问题。

技术实现思路

1、针对现有技术普遍具有的问题，本发明提供了一种caerin1.1/1.9联合抗cd47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。三者联合用于制备治疗黑色素瘤的药物，提高了免疫治疗效果。

2、为了达到上述目的，本发明采用的技术效果为：

3、一种caerin1.1/1.9联合抗cd47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。

4、优选地，所述caerin1.1/1.9与抗cd47抗体（clone:miap301）的质量比为3：10~25（即60μg：200~500μg/小鼠）。

5、小鼠添加的抗cd47抗体的剂量为200~500μg /小鼠，caerin1.1/1.9的添加剂量为60μg/小鼠，其中，caerin1.1与caerin1.9的质量比为1：1，即各添加30μg/小鼠。

6、优选地，所述caerin1.1的氨基酸序列如seq id no.1所示；所述caerin1.9的氨基酸序列如seq id no.2所示。

7、gllsvlgsvakhvlphvlphvvpviaehl-nh2（seq id no.1）；

8、glfgvlgsiakhvlphvvpviaekl-nh2（seq id no.2）；

9、本发明还提供了一种caerin1.1/1.9在诱导黑色瘤细胞b16大量表达cd47中的应用。

10、优选地，所述药物还包括药学上可接受的载体。

11、本发明还提供了一种caerin1.1/1.9在制备治疗肿瘤药物组合物中的应用。

12、优选地，所述药物组合物还包括anti-cd47抗体、治疗型疫苗。

13、优选地，所述治疗型疫苗由黑色素瘤治疗性疫苗，mpla，α-il10r组成。

14、优选地，所述肿瘤为黑色素瘤、子宫颈癌。

15、机理研究发现，caerin1.1/1.9改善肿瘤免疫微环境，重新极化肿瘤浸润巨噬细胞，使其从m2型向m1型转化。分泌更多的白介素12，更少的白介素10。如果治疗型疫苗含黑色素瘤治疗性疫苗，白介素10抑制抗体，caerin1.1/1.9与之联合使用，抑制tc-1细胞生长的效率更好。caerin1.1/1.9与anti-cd47抗体，治疗型疫苗三者联合使用，可以使20-50%的tc-1荷瘤小鼠完全清除肿瘤。

16、发明人发现，caerin1.1/1.9 体外抑制黑色素瘤b16细胞生长，诱导黑色素瘤b16细胞凋亡，并可以进入b16细胞，在体内抑制b16细胞生长。使b16细胞高表达cd47，在b16模型中提高抗cd47抗体效率，吸引血细胞到肿瘤，特别是巨噬细胞，cd4+t细胞到肿瘤，使巨噬细胞吞噬肿瘤细胞。与anti-cd47抗体，治疗型疫苗联用，可以使50%荷瘤小鼠完全清除肿瘤。

17、与现有技术相比，本发明技术方案具有如下优势：本发明解决了抗cd47在黑色素瘤的疗效问题，诱导b16细胞高表达cd47，抗cd47与caerin1.1/1.9联用提高了其治疗b16肿瘤的疗效。抗cd47与治疗性疫苗和caerin1.1/caerin1.9进行三联治疗能达到较使用α-pd-1时更好的治疗b16肿瘤的效果。

技术特征：

1.一种caerin1.1/1.9联合抗cd47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述caerin1.1/1.9与抗cd47抗体的质量比为3：10~25。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述caerin1.1的氨基酸序列如seq id no.1所示；所述caerin1.9的氨基酸序列如seq id no.2所示。

4.一种caerin1.1/1.9在诱导黑色瘤细胞b16大量表达cd47中的应用。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。

6.一种caerin1.1/1.9在制备治疗肿瘤药物组合物中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物组合物还包括anti-cd47、治疗型疫苗。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述治疗型疫苗由黑色素瘤治疗性疫苗，mpla，α-il10r组成。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为上皮细胞肿瘤。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述上皮肿瘤包括黑色素瘤、子宫颈癌。

技术总结
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。本发明中Caerin1.1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；Caerin1.9的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的Caerin1.1/1.9可以使B16细胞凋亡的同时促使B16细胞高表达CD47，在抗CD47抗体的存在下，促使巨噬细胞吞噬肿瘤细胞，提高caerin1.1/1.9的疗效，也优于单独使用抗CD47抗体，为扩大CD47抑制/阻断药物的应用奠定基础。本发明提供的Caerin1.1/1.9还可以与anti‑CD47抗体，治疗型疫苗联用，使50%荷瘤小鼠完全清除肿瘤。

技术研发人员：刘晓松,李俊杰,倪国颖,王天放
受保护的技术使用者：中奥生物医药技术（广东）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13