一种医用交联重组一型胶原凝胶及其制备方法与流程

本发明涉及药物制备，特别涉及一种医用交联重组一型胶原凝胶及其制备方法。

背景技术：

1、目前已上市的常见的软组织填充剂，以交联透明质酸钠凝胶为主，近年来随着聚左旋乳酸，聚己内酯等新材料的应用，在医美领域开辟了新的应用途径，虽然都是医美领域中以塑形、软组织填充为最终目的，但仍然存在一些明显差异，其中交联透明质酸钠凝胶为代表的产品以即时效果显著著称，可以即时起效，以聚左旋乳酸，聚己内酯等新材料为代表开发的产品，主要以原位刺激胶原再生为主要卖点。

2、随着重组人源胶原蛋白()行业的兴起，以胶原为主要原材料的软组织填充剂越来越收到广泛关注。重组人源胶原蛋白()是根据人胶原蛋白的结构特性，利用先进生物科学技术和国际领先发酵技术，通过微生物(如活性酵母)高密度发酵，绿色分离纯化工艺生产的一种高分子的生物源蛋白，与人胶原蛋白高度类似。在医用领域和美容领域得到了广泛的好评和应用。在正常皮肤组织中，胶原主要以i、iii型胶原纤维的形式存在。ⅲ型胶原与皮肤损伤修复过程和修复质量紧密相关。正常胎儿皮肤ⅲ型胶原占60％，随着生长发育，ⅲ型胶原不断减少，i型胶原不断增加。

3、所以在以交联透明质酸钠凝胶注射填充产品为参考，将重组人源胶原蛋白()经过交联技术赋予其良好的流变学性能，既能满足真皮组织塑形、矫正轮廓以达到满意的效果的同时，外源性的补充聚左旋乳酸微球，能有效刺激皮肤胶原再生速度，起到即时填充与原位再生效果二合一的优良效果。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题在于将重组人源胶原蛋白()经过交联技术赋予其良好的流变学性能，既能满足皮肤塑形、矫正轮廓以达到满意的效果的同时，外源性的补充聚左旋乳酸微球，能有效刺激皮肤胶原再生速度，起到即时填充与原位再生效果二合一的优良效果。

2、本发明所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：

3、一种医用交联重组一型胶原凝胶及其制备方法，具有如下步骤:

4、(1)碱溶液配制

5、配制含氢氧化钠浓度为0.1％～0.85％的碱溶液。

6、(2)溶解

7、将重组i型人源胶原蛋白，用上述氢氧化钠溶液完全溶解，浓度范围8％～25％。

8、(3)交联反应

9、将步骤(2)中溶解完成的重组i型人源胶原蛋白，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，浓度控制在10～60ppm，进行轻度交联反应进行修饰，反应时间为30～120min。再加入1,4-丁二醇二缩水甘油醚交联剂，其中1,4-丁二醇二缩水甘油醚：重组i型人源胶原蛋白溶液质量比范围为0.1:10至0.35:10，混合均匀，在水浴中保温进行交联反应，时间为4～10小时，得到合适交联度的重组i型人源胶原蛋白。

10、(4)配制洗脱液

11、配制含有氯化钠，辛酸钠，磷酸氢二钠以及磷酸二氢钠的洗脱液，备用；

12、(5)洗脱

13、将步骤(3)的交联重组i型人源胶原蛋白，用步骤(4)制备的洗脱液进行洗脱，过程中将凝胶分散成颗粒为0.1～0.5cm尺寸，同时更换洗脱液连续多次洗脱，直至交联重组i型人源胶原蛋白凝胶溶胀至饱和状态。

14、(6)均质

15、将步骤(5)洗脱完成的交联重组i型人源胶原蛋白凝胶，均质制备成颗粒直径为100～500μm的颗粒。

16、(7)混合

17、将步骤(6)完成的交联重组i型人源胶原蛋白凝胶，加入plla微球，混合均匀，plla微球与凝胶的质量比为1:9～5:5。

18、(8)灌装

19、将步骤(7)制备得到的交联重组i型人源胶原蛋白与plla微球混合物，灌装至预灌封注射器内。

20、(9)灭菌

21、将步骤(8)得到的样品，采用纯蒸汽湿热灭菌，灭菌条件105～121℃，灭菌时间为8～45min，最终得到含plla微球的医用交联重组i型人源胶原蛋白凝胶。

22、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(2)中，重组i型人源胶原蛋白分子量范围为2.5～9.0万道尔顿。

23、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(2)中，胶原蛋白为重组i型人源胶原蛋白，重组iii型人源胶原蛋白中的一种，或2种胶原蛋白的混合物。

24、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(3)中，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐轻度修饰反应温度为20～40℃。

25、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(3)中，在加入1,4-丁二醇二缩水甘油醚交联之前，将反应体系溶液ph采用冰醋酸或氢氧化钠溶液调节至9.5～11.0之间。

26、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(3)中，1,4-丁二醇二缩水甘油醚交联反应温度为30～60℃。

27、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(4)中，配制的洗脱液ph控制范围为6.0～7.4。

28、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(5)中，交联完成的交联重组i型人源胶原蛋白凝胶颗粒，采用洗脱液洗脱次数为5～12次。

29、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(5)中，洗脱液使用量为凝胶重量的40～80倍。

30、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(5)中，洗脱液洗脱的总时间控制在18～36小时。

31、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(6)中，均质次数为重复2～5次。

32、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(7)中，plla微球与凝胶质量比为1:9～5:5之间。

33、在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(7)中，plla微球分子量范围为3～12万道尔顿。

技术特征：

1.一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，具有如下步骤:

2.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，重组i型人源胶原蛋白分子量范围为2.5～9.0万道尔顿。

3.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，胶原蛋白为重组i型人源胶原蛋白，重组iii型人源胶原蛋白中的一种，或2种胶原蛋白的混合物。

4.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐轻度修饰反应温度为20～40℃。

5.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，在加入1,4-丁二醇二缩水甘油醚交联之前，将反应体系溶液ph采用冰醋酸或氢氧化钠溶液调节至9.5～11.0之间。

6.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，1,4-丁二醇二缩水甘油醚交联反应温度为30～60℃。

7.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，配制的洗脱液ph控制范围为6.0～7.4。

8.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中，交联完成的交联重组i型人源胶原蛋白凝胶颗粒，采用洗脱液洗脱次数为5～12次。

9.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中，洗脱液使用量为凝胶重量的40～80倍。

10.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中，洗脱液洗脱的总时间控制在18～36小时。

11.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中，均质次数为重复2～5次。

12.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(7)中，plla微球与凝胶质量比为1:9～5:5之间。

13.如权利要求1所述的一种医用交联重组一型胶原凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤(7)中，plla微球分子量范围为3～12万道尔顿。

14.一种通过权利要求1-13所述制备方法制得的医用交联重组一型胶原凝胶。

技术总结
本发明为一种医用交联重组一型胶原凝胶及其制备方法，具体方法为：碱液配制‑重组I型人源胶原蛋白溶解‑交联剂A轻度修饰‑交联剂B交联反应‑洗脱‑均质‑PLLA微球混合‑灌装‑湿热灭菌。本发明通过设计反应条件，控制重组I型人源胶原蛋白与交联剂交联反应程度，获得合适交联度的重组I型人源胶原蛋白凝胶，再通过洗脱液洗脱‑粉碎均质‑‑PLLA微球混合‑灭菌工序，获得含PLLA微球的医用交联重组I型人源胶原蛋白凝胶。由于最终成品拥有合适的流变学性能，在软组织外形、矫正轮廓领域起到即时填充效果的同时，具备高生物活性的重组I型人源胶原蛋白和PLLA微球能有效刺激原位胶原再生，起到更好的软组织塑形、修复填充效果。

技术研发人员：华清秀,梁佛玲,谢小强,刘道富
受保护的技术使用者：福建镈润生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13