用于递送核酸的组合物和方法与流程

本公开总体上涉及包括可生物还原的可电离阳离子脂质的新型脂质纳米颗粒(“lnp”)、制备这些lnp的方法以及这些lnp用于基因疗法和基于细胞的疗法应用的用途。

背景技术：

1、本领域长期以来一直需要用于将核酸递送到细胞以及用于在体内、离体和体外对细胞进行基因修饰的组合物和方法，但这种需求未得到满足。广泛接受的基因传递和基因修饰技术，如使用病毒载体，包含aav，可以在患者中引起急性毒性和有害的副作用。本公开提供了用于在体内、离体和体外将核酸递送到包含肝细胞在内的各种类型细胞的改进的组合物、方法和试剂盒。更具体地，本公开提供了改进的脂质纳米颗粒组合物以及使用其的方法。这些脂质纳米颗粒组合物和方法允许以高效率和低毒性将特定类型的核酸(例如，rna)递送到肝脏细胞。此外，本公开的脂质纳米颗粒组合物表现出改进的储存稳定性，这在临床和商业环境中是有利的。因此，本公开的组合物和方法可以广泛应用于多种领域，包含基因疗法和基于细胞的治疗剂的生产。

技术实现思路

1、在一些方面，提供了包括可生物还原的可电离阳离子脂质的新型脂质纳米颗粒(“lnp”)。一方面，所述可生物还原的可电离阳离子脂质是coatsome ss-op。

2、一方面，提供了药物组合物，其包括本公开的组合物和至少一种药学上可接受的赋形剂或稀释剂。

3、一方面，提供了将至少一种核酸递送到至少一种细胞的方法，所述方法包括使所述至少一种细胞与本公开的至少一种组合物接触。

4、一方面，提供了基因修饰至少一种细胞的方法，所述方法包括使所述至少一种细胞与本公开的至少一种组合物接触。

5、一方面，提供了治疗有需要的受试者的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一种治疗有效量的本公开的至少一种组合物。

6、一方面，提供了将至少一种核酸递送到至少一种细胞的方法，所述方法包括使所述至少一种细胞与本公开的至少一种组合物接触。

7、一方面，提供了根据本公开的方法修饰的细胞。

8、上述方面中的任何方面可以与任何其它方面组合。

9、除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在本说明书中，除非上下文另外明确规定，否则单数形式也包含复数形式；作为实例，术语“一个/一种(a/an)”和“所述”被理解为单数或复数，并且术语“或”被理解为是包含的。举例来说，“要素”意指一个或多个要素。贯穿本说明书，词语“包括(comprising)”或如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”等变体应当被理解为暗示包含所陈述要素、整数或步骤或要素组、整数组或步骤组，但不排除任何其它要素、整数或步骤或要素组、整数组或步骤组。约可以被理解为在所陈述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％范围内。除非上下文另有明确说明，否则本文提供的所有数值均由术语“约”修饰。

10、尽管类似或等效于本文所描述的方法和材料的方法和材料可以用于实践或测试本公开，但是下面描述了合适的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献均通过全文引用的方式并入本文中。不承认本文所引用的参考文献是所要求保护的发明的现有技术。在有矛盾的情况下，将以本说明书(包含定义)为准。另外，材料、方法和实例仅是说明性的并且不旨在是限制性的。根据以下详细描述和权利要求，本公开的其它特征和优点将显而易见。

技术特征：

1.一种组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

2.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

3.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

4.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

5.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

6.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

7.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

8.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

9.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

10.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

11.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

12.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

13.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

14.根据权利要求1所述的组合物，其包括包含以下的至少一种脂质纳米颗粒：

15.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中所述rna分子是mrna分子，优选地其中所述mrna分子进一步包括5'帽。

16.根据权利要求1至13或15中任一项所述的组合物，其中所述至少一种rna分子包括编码至少一种转座酶的核酸序列，优选地其中所述转座酶是piggybactm(pb)转座酶、piggybac样(pbl)转座酶、super piggybactm(spb)转座酶多肽、睡美人转座酶(sleepingbeauty transposase)、过度活跃的睡美人(hyperactive sleeping beauty)(sb100x)转座酶、helitron转座酶、tol2转座酶、tcbuster转座酶或突变tcbuster转座酶。

17.根据权利要求14所述的组合物，其中所述dna分子是环状dna分子、doggybone dna分子、dna质粒、dna纳米质粒或线性化dna分子，优选地其中所述dna分子是doggybone dna分子或dna纳米质粒。

18.根据权利要求14或权利要求17所述的组合物，其中所述至少一种dna分子包括编码至少一种转座子的核酸序列。

19.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述至少一种核酸分子包括编码至少一种治疗性蛋白的核酸序列。

20.根据权利要求14、17和18中任一项所述的组合物，其中所述至少一种核酸分子包括编码至少一种转座子的核酸序列，其中所述转座子包括编码至少一种治疗性蛋白的核酸序列。

21.根据权利要求19或权利要求20所述的组合物，其中所述至少一种治疗性蛋白是鸟氨酸氨甲酰转移酶(ornithine transcarbamylase，otc)、甲基丙二酸单酰辅酶a变位酶(methylmalonyl-coa mutase，mut1)、因子viii(factor viii)或因子ix(factor ix)。

22.一种将至少一种核酸递送到至少一种细胞的方法，所述方法包括使所述至少一种细胞与至少一种根据前述权利要求中任一项所述的组合物接触。

23.一种基因修饰至少一种细胞的方法，所述方法包括使所述至少一种细胞与至少一种根据前述权利要求中任一项所述的组合物接触。

24.根据权利要求22或权利要求23所述的方法，其中所述至少一种细胞是至少一种肝脏细胞，优选地其中所述至少一种肝脏细胞是肝细胞、肝星状细胞、库普弗细胞(kupffercell)或肝窦内皮细胞。

25.一种治疗有需要的受试者的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效量的至少一种根据权利要求1至21中任一项所述的组合物。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述至少一种疾病或病症是肝脏疾病或病症，优选地其中所述肝脏疾病或病症是代谢性肝脏病症，优选地其中所述代谢性肝脏病症是：

27.根据权利要求25所述的方法，其中所述至少一种疾病或病症是血友病，优选地其中所述血友病是血友病a、血友病b、血友病c或其任何组合。

28.根据权利要求1至13、15和16中任一项所述的组合物，其中所述至少一种rna分子包括编码融合蛋白的核酸序列，其中所述融合蛋白包括(i)失活cas9(dcas9)蛋白或其失活核酸酶结构域，(ii)clo051蛋白或其核酸酶结构域。

29.根据权利要求28所述的组合物，其中所述组合物进一步包括至少一种向导rna分子。

技术总结
本公开提供了用于基因修饰细胞的组合物和方法，所述细胞包含但不限于肝细胞。所述组合物和方法可以包括脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒包括至少一种可生物还原的可电离阳离子脂质、至少一种结构脂质、至少一种磷脂和至少一种PEG化脂质。

技术研发人员：J·莱查克,S·埃塞克斯,M·布彻,P·格里芬,B·麦迪逊,R·马丁,N·帕拉亚斯,M·J·贝内特,K·A·哈吉,O·阿尔瓦雷斯,D·J·史密斯
受保护的技术使用者：波赛达治疗公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15