IL-38特异性抗体的制作方法

本发明涉及与il38结合的抗体。

背景技术：

1、人适应性免疫系统通过细胞(t细胞)和体液(b细胞)过程做出反应。体液反应导致选择和克隆扩增这样的b细胞，所述b细胞表达能够与抗原结合的表面结合免疫球蛋白(ig)分子。体细胞超突变和类别转换的过程与克隆扩增一致地发生。这些过程共同导致分泌的抗体，这些分泌的抗体针对靶抗原是亲和力成熟的，并且含有属于五个一般类别之一(也称为同种型(m、d、a、g或e))的恒定结构域。每一类抗体(igm、igd、iga、igg和ige)以不同的方式与细胞免疫系统相互作用。针对靶抗原是亲和力成熟的抗体的标志可以包括：1)核苷酸和随后的氨基酸相对于种系基因的变化；2)对靶抗原的高结合亲和力；3)与其他蛋白质相比对靶抗原的结合选择性。

2、充分理解的是，肿瘤患者可以产生针对肿瘤抗原的免疫反应。那些抗原可能是由于肿瘤内导致突变蛋白质的遗传变化或向免疫系统异常呈递原本正常的蛋白质而产生的。异常呈递可以通过以下过程发生：包括但不限于新生儿蛋白的异位表达、蛋白质过表达至高水平、选择性剪接、细胞内蛋白错误定位至细胞表面、或细胞的裂解。翻译后修饰(如蛋白质的异常糖基化，可能由于酶(诸如但不限于糖基转移酶)的表达的变化而发生)也可能导致产生由体液免疫系统识别的非自身抗原。

3、已经证明与疾病相关的蛋白质(包括与癌症相关的蛋白质)选择性结合的抗体可以成功地以导致治疗功效的方式调节其靶蛋白的功能。人免疫系统针对突变的或在其他方面异常的蛋白质产生抗体反应的能力表明，患者的免疫反应可能包括能够识别和调节关键肿瘤驱动物功能的抗体。

4、肿瘤微环境对于肿瘤细胞逃避免疫系统的检测和消除是必需的。这是通过几种机制实现的，这些机制包括抑制性免疫细胞的募集、免疫检查点分子(像pd-1)的表达以及免疫抑制细胞因子的存在。因此，一些免疫肿瘤疗法旨在靶向负责肿瘤微环境中免疫抑制屏障的关键分子。成功的免疫肿瘤疗法可以导致细胞毒性t细胞和nk细胞的浸润，以及th1细胞因子的上调和成功的抗肿瘤反应的诱导。

5、细胞因子il-1家族(其中il-38是其成员)通过与膜结合受体结合并与其形成复合物而引发下游信号传导事件。il-1受体复合物的例子呈现于图1中。可以预测与其他细胞因子(如肿瘤坏死因子α(tnfa))一样，抗体与细胞因子上的一个或多个表位的结合干扰细胞因子与它们的同源受体形成复合物的能力(hu等人,jbc,2013)。预测il-1的残基(在图1中以球形表示)在il-1与受体白介素-1受体2(il-1r2)和白介素-1受体辅助蛋白(il-1rap)之间形成相互作用面。il-1的这一预测的受体结合区内的残基可以包含抗体可结合的表位。抗体与这些表位的结合将被预测为阻断il-1与其同源受体的结合并拮抗或抑制细胞因子的生物功能。il-1与il-38之间的同源性表明il-38上存在一个或多个相应的表位。抗体与该一个或多个表位的结合将被预测为拮抗或抑制il-38的功能。

6、细胞因子的il-1家族在调节肿瘤发展期间以及治疗期间的炎症方面起重要作用(baker等人,2019)。虽然一些il-1家族成员促进炎症，但是其他家族成员可以抑制炎症。il-38是阻断通过il-1家族受体(包括il-36r和il1ralp1)的信号传导的拮抗剂，并通过抑制炎症充当免疫检查点(veerdonk等人,2017)。具体地，il-38显示出减少炎性细胞因子的产生，所述炎性细胞因子可以在有效的抗肿瘤反应中发挥关键作用。此外，从凋亡的肿瘤细胞分泌的il-38可以在体外抑制巨噬细胞和t细胞反应(mora等人,2016)。类似地，在患有肺腺癌的患者中已经显示il-38表达与较差的预后相关以及与pdl1表达相关(takada等人,2017)。然而，在非小细胞肺癌中已经报道了相互矛盾的证据，其中il-38的较低表达与较差的预后相关(wang等人,2018)。il-38可以充当肿瘤微环境内的免疫抑制细胞因子，因此阻断il-38信号传导可以触发有效的抗肿瘤反应(图2)。

技术实现思路

1、在一些方面，本发明涉及il-38细胞因子在各种癌症中的作用的发现。因此，在一些实施方案中，本文提供了特异性结合并抑制有效治疗癌症的il-38的抗体。在一些实施方案中，与il-38特异性结合的所述抗体包含m3的cdr序列。在一些实施方案中，与il-38特异性结合的所述抗体包含含有seq id no:23中所示的氨基酸序列的vh cdr1、含有seq idno:24中所示的氨基酸序列的vh cdr2、含有seq id no:25中所示的氨基酸序列的vh cdr3、含有seq id no:58中所示的氨基酸序列的vl cdr1、含有seq id no:59中所示的氨基酸序列的vl cdr2、和含有seq id no:60中所示的氨基酸序列的vl cdr3。在一些实施方案中，与il-38特异性结合的所述抗体包含含有seq id no:98中所示的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:101中所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述癌症选自头颈部鳞状细胞癌(hnsc)、食管癌(esca)、肺鳞状细胞癌(lusc)、宫颈癌(cesc)、膀胱癌(blca)、皮肤黑色素瘤(skcm)、前列腺腺癌(prad)、胃食管癌、宫颈鳞状细胞癌、宫颈鳞状细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、基底细胞癌、皮肤黑色素瘤、肺腺癌、宫颈腺癌、膀胱尿路上皮癌和前列腺腺癌以及肺腺癌(luad)。

2、本发明涉及对人白介素-38(il-38)具有特异性的抗体(包括分离的抗体)或其抗原结合片段，所述抗体含有seq id no:22、seq id no:27、seq id no:32、seq id no:37、seq id no:42、seq id no:47、seq id no:52、seq id no:2或seq id no:7的可变重链(vh)氨基酸序列内含有的和/或seq id no:57、seq id no:62、seq id no:67、seq id no:72、seq id no:77、seq id no:82、seq id no:4或seq id no:9的可变轻链(vh)氨基酸序列内含有的至少一个互补决定区(cdr)的至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或至少8个任选连续氨基酸。

3、更具体地，本发明的抗体或抗原结合片段的cdr可以含有以下氨基酸序列的至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、或至少8个任选连续氨基酸：seq id no:23、28、33、38、43、48、53或15的vh cdr1氨基酸序列；

4、seq id no:24、29、34、39、44、49、54或16的vh cdr2氨基酸序列；

5、seq id no:25、30、35、40、45、50、55或17的vh cdr3氨基酸序列；

6、seq id no:58、63、68、73、78、83或18的vl cdr1氨基酸序列；

7、seq id no:59、64、69、74、79、84或19的vl cdr2氨基酸序列；和/或

8、seq id no:60、65、70、75、80、85或20的vl cdr3氨基酸序列。

9、本发明的抗体或其抗原结合片段部分或完全阻断、抑制或中和il 38的生物活性。因此，本发明的方法包括通过向受肿瘤生长和/或转移影响的个体施用治疗有效量的包含所述抗体或其抗原结合片段的组合物来抑制所述个体的肿瘤生长或转移从而进行治疗的方法，其中本发明的抗体或其抗原结合片段部分或完全阻断、抑制或中和促进或维持肿瘤生长和/或转移的il-38的生物活性。

10、将pct申请号pct/us2020/044260的披露内容以其整体并入本文。