PSG1用于治疗骨关节炎

本发明涉及胎盘表达的蛋白质用于治疗疾病的用途。

背景技术：

1、妊娠特异性糖蛋白(psg)被认为与妊娠期间母胎界面和母体循环中免疫、血管生成和血小板反应的调节有关。psg蛋白是癌胚抗原细胞粘附分子(ceacam)家族的一部分，其本身是免疫球蛋白超家族的成员。psg蛋白在灵长类、马科动物和啮齿类动物之间的结构差异很大，但保留了保守的功能(aleksic d,et al.convergent evolution of pregnancy-specific glycoproteins in human and horse.reproduction.2016sep；152(3):171-84.doi:10.1530/rep-16-0236.epub 2016jun 8.moore t,dveksler gs.pregnancy-specific glycoproteins:complex gene families regulating maternal-fetalinteractions.int j dev biol.2014；58(2-4):273-80.doi:10.1387/ijdb.130329gd.review.pmid:25023693.)。在人体和小鼠中分别有11种和17种不同的psg基因编码psg蛋白。人psg由一个n-末端免疫球蛋白可变区(igv)样结构域(n结构域)和通常两至三个两种不同类型(命名为a和b)的lg恒定区(igc)样结构域构成，而啮齿动物psg包含两至九个连续的n结构域和一个igc样结构域。7种马ceacam衍生的psg样蛋白具有单一的n和a2结构域(aleksic et al.,2016)。

2、psg1是11种不同人psg基因中大量表达的成员，在一项研究中，估计在妊娠末三月总psg蛋白浓度大于100μg/ml。在妊娠期间，转化生长因子β(tgf-β)调节滋养层侵袭、血管生成和细胞外基质产生。用psg1或其他psg处理不同的细胞，通过elisa试验测定发现增加了上清液中总tgf-β1的分泌以及潜在的tgf-β1的活化(ballesteros a,mentink-kane mm,warren j,kaplan gg,dveksler gs.induction and activation of latenttransforming growth factor-β1are carried out by two distinct domains ofpregnancy-specific glycoprotein 1(psg1).jbiol chem.2015feb 13；290(7):4422-31.doi:10.1074/jbc.m114.597518.epub 2014dec 29.)。

3、wo2017049082描述了一种特异性psg蛋白，psg1，及其参与诱导免疫耐受的途径。psg1参与转化生长因子-β1(tgfβ1)的激活，转化生长因子-β1是一种抑制炎性t细胞所必需的细胞因子，对诱导耐受的cd4+cd25+foxp3+调节性t细胞(tregs)的分化至关重要，tregs是一种在预防移植物抗宿主病(gvdh)中很重要的细胞群。

4、jones等(biology of blood and marrow transplantation,1september 2018)描述了重组psg1在急性移植物抗宿主病的鼠模型中发挥的保护作用。

5、blois等(mucosal immunology,vol.7,no.2,14august 2013)描述了psg1在预防dss诱导的小鼠结肠炎中的用途。

技术实现思路

1、一方面，本发明提供了妊娠特异性糖蛋白(例如psg1)，用于治疗或预防以软骨损失或损伤为特征的病症的方法中的用途。在一个实施方案中，所述病症是退行性关节病症。在一个实施方案中，退行性关节病症是骨关节炎。在另一个实施方案中，所述病症是由创伤(例如，跌倒或运动损伤)引起的软骨损伤。在一个实施方案中，psg1通过关节内注射施用。在一个实施方案中，所述方法是减缓、停止或逆转受影响关节中软骨损失的方法。在一个实施方案中，所述方法用于治疗膝盖、臀部或手部的骨关节炎。在一个实施方案中，治疗是因果治疗。在另一个实施方案中，治疗是对症治疗，例如治疗骨关节炎症状(例如关节疼痛或僵硬)的方法。在一个实施方案中，所述方法是修复受试者受损软骨的方法。图3a-c显示了使用psg1-fc和cc49-fc对骨关节炎的有效治疗。

2、根据本发明的另一方面，提供了妊娠特异性糖蛋白，例如妊娠特异性糖蛋白1(psg1)，用于治疗哺乳动物伤口的方法中。psg1在小鼠和猪的动物模型中，与未处理的伤口相比，表现出促进伤口挛缩或伤口的上皮再形成，并加速伤口愈合。

3、典型地，与未处理的伤口相比，本发明的方法用于加速伤口的愈合。

4、典型地，伤口是皮肤伤口。然而，本发明也适用于非皮肤伤口的治疗，例如除皮肤以外的器官的伤口。这种伤口可以是由例如手术、外伤、药物使用或疾病引起的。在一个实施方案中，伤口是糖尿病性溃疡，例如糖尿病性食物溃疡。

5、典型地，psg1被局部施用于伤口。典型地，所述方法包括将psg1局部制剂施用于伤口，特别是伤口的周围。

6、在任一实施方案中，psg1可以皮下施用于伤口，通常通过皮下注射。

7、psg1通常以有效促进皮肤创伤部位的角质细胞形成上皮的剂量施用。

8、在任一实施方案中，伤口包括疤痕。在任一实施方案中，将psg1施用于疤痕。

9、在任一实施方案中，伤口是由于切除增生性疤痕而产生的伤口。

10、在任一实施方案中，伤口包括瘢痕疙瘩或由瘢痕疙瘩组成。

11、根据本发明的另一方面，提供了妊娠特异性糖蛋白，例如妊娠特异性糖蛋白1(psg1)，用于治疗哺乳动物瘢痕疙瘩的方法中。

12、根据本发明的另一方面，提供了妊娠特异性糖蛋白，例如妊娠特异性糖蛋白1(psg1)，用于治疗或预防哺乳动物增生性疤痕的方法中。在任一实施方案中，所述方法包括切除增生性疤痕，然后将妊娠特异性糖蛋白施用于疤痕切除产生的伤口。

13、在另一个方面，本发明提供了fc标记的妊娠特异性糖蛋白1(psg1-fc)，用于治疗哺乳动物伤口，尤其是皮肤伤口的方法。在一个实施方案中，psg1-fc被局部施用或通过皮内(iv)施用于伤口。

14、在另一方面，本发明提供了psg1局部制剂，其包含治疗有效量的妊娠特异性糖蛋白1(psg1)以及药学上可接受的赋形剂。psg1局部制剂可以是乳膏、软膏、凝胶、油悬液或洗液。

15、在另一方面，本发明提供了fc标记的妊娠特异性糖蛋白1(psg1-fc)用作药物的用途。

16、在一个实施方案中，psg1通过皮下、皮内、静脉内或腹膜内递送施用，或通过注射到受影响的区域施用。在一个实施方案中，psg1通过关节内注射施用。

17、在任一实施方案中，通过用psg1(或psg1-fc)表达载体转染哺乳动物，将psg1施用于哺乳动物。

18、在任一实施方案中，通过向哺乳动物施用已经用psg1(或psg1-fc)表达载体转染的细胞来将psg1施用于哺乳动物。在任一实施方案中，通过向哺乳动物施用已经用psg1预处理的细胞(例如已经与psg1一起孵育或在psg1存在下培养的细胞)，向哺乳动物施用psg1。在任一实施方案中，psg1和细胞(例如间充质干细胞)被共同施用于哺乳动物。在任一实施方案中，细胞是干细胞。在任一实施方案中，细胞是间充质干细胞。在任一实施方案中，供体细胞从受体获得。在一个实施方案中，供体细胞获自同一物种的哺乳动物(例如，人对人，或马对马)(同种异体细胞疗法)。在任一实施方案中，细胞是离体转染的。

19、以上提供的本发明的方法描述了治疗中的psg1和psg1的修饰形式，例如psg1-fc。然而，本发明还涉及除psg1(及其修饰形式)之外的psg蛋白在上述治疗方法中的用途。

20、在任一实施方案中，psg1(或psg)经功能性部分修饰。功能性部分可被配置成增加经修饰的psg1的血浆半衰期。功能性部分可被配置成增加经修饰的psg1的细胞渗透功能。功能性部分可被配置成增加经修饰的psg1的活性。功能性部分可被配置成促进经修饰的psg1的纯化。psg1多肽的修饰实例提供如下，包括添加抗体片段(例如fc部分)、添加peg官能团、用l-异构体替换天然氨基酸。在一个实施方案中，官能团是fc部分。在一个实施方案中，与天然fc部分相比，fc部分被修饰以具有增加的血浆半衰期。在以下论文中描述了经修饰的fc标记：algirdas grevys,malin bern,stian foss,diane bryant,terje bratlie,anders moen,kristin gunnarsen,audun aase,terje einar michaelsen,ingersandlie and jan andersen.fc engineering of human igg1 for altered binding tothe neonatal fc receptor affects fc effec-tor functions.journal of immunologyjune 1,2015,194(11)5497-5508；dall’acqua wf,kiener pa,wu h.properties of humanigg1s engineered for enhanced binding to the neonatal fc receptor(fcrn).thejournal of biological chemistry.281:23514 -23524(2006).(2006)；abhishek saxenaand donghui wu.advances in therapeutic fc engineering-modulation of igg-associated effector functions and serum half-life.frontiers inimmunology.2016；7:580。对人fc标记的示例性修饰包括ch2结构域中的三置换yte(m252y/s254t/t256e)和ch3结构域中的(h433k/n434f)以增加稳定性和半衰期(sequence id no:3)。这些修饰可以使用定点诱变来进行。在一个实施方案中，本发明提供了与sequence idno:3编码的fc标记结合的psg1蛋白。

21、另一方面，本发明提供了cc49(通常为重组cc49)，用于治疗哺乳动物(通常为非人哺乳动物)伤口的方法中。在一个优选的实施方案中，哺乳动物是马科动物(即马)。本文提供的数据显示，cc49呈现与类似于psg1的组织修复作用一致的一系列基因调节活性。例如，cc49与psg1相似，分别调节代表角质细胞和淋巴细胞谱系的人细胞系(hacat，jurkat)中的细胞因子表达。在体外划痕伤口试验中，cc49增强hacat和间充质干细胞(msc)的迁移(图1a-c)。

22、在另一方面，本发明提供了cc49(通常为重组cc49)，用于治疗哺乳动物以软骨缺失或损伤为特征的病症的方法。在一个优选的实施方案中，哺乳动物是马科动物(即马)。在任一实施方案中，所述病症是退行性关节病症(例如，关节疾病，如骨关节炎)。在任一实施方案中，病症是软骨的创伤性损伤，例如由跌倒或其他类型的创伤引起的损伤。在任一实施方案中，由于响应于刺激(例如损伤)的组织损伤，病症导致跛行。在任一实施方案中，cc449通过直接注射入损伤组织或用于关节内注射来施用。在一个具体方面，本发明提供了cc49，特别是修饰的cc49，例如cc49-fc，用于治疗或预防马科哺乳动物的关节疾病(典型的是骨关节炎)的方法中的用途，其中通过关节内注射到受影响的关节中对马科哺乳动物施用cc49。

23、在任一实施方案中，cc49用官能团修饰。在任一实施方案中，官能团被配置成增加修饰的cc49的血浆半衰期。在任一实施方案中，官能团是衍生自马igg1的fc部分(wagnerb1,robeson j,mccracken m,wattrang e,antczak df.horse cytokine/igg fusionproteins--mammalian expression of biologically active cytokines and a systemto verify antibody specificity to equine cytokines.vet immunolimmunopathol.2005may 1；105(1-2):1-14.doi:10.1016/j.vetimm.2004.11.010描述了一个实例)。fc标记也可用于在药物生产过程中纯化蛋白质。

24、在任一实施方案中，cc49是肠胃外施用。在任一实施方案中，cc449通过关节内注射施用。

25、另一方面，本发明提供了重组cc49用作药物的用途。

26、另一方面，本发明提供了fc标记的cc49，例如fc标记的重组cc49。

27、另一方面，本发明提供了fc-标记的cc49用作药物的用途。

28、本发明的其他方面和优选实施方案在下面阐述的其他权利要求中定义和描述。