用于减少或防止转移的组合物和方法与流程

本发明涉及使用吡喃葡萄糖基脂质佐剂(如gla或短的，sla)单独或与cox2抑制剂和β肾上腺素能受体阻断剂组合来减少或甚至防止转移的发展。

背景技术：

0、发明背景

1、在近十年来，尽管癌症早期检测和治疗干预取得了进展，但总的癌症存活率没有显著改善，而且转移仍然是大多数实体恶性肿瘤的主要致死原因。

2、近来人们开始认识到，原发性肿瘤切除术的围手术期，即外科手术即将开始前、术中和术后的时期，潜伏着几种未被人注意到的长期癌症复发风险因素，因此围手术期的特征在于既存的微小转移爆发和新的转移起始的风险都很高。这些围手术期风险大部分是由于原发性肿瘤的手术去除所诱导的各种扰动所致，人们认为这些扰动通过若干机制促进既存的微小转移的进展和新的转移起始，其中一些机制是最近才被鉴定的。

3、在整个围手术期中，作为患者对于(i)原发性肿瘤的存在，(ii)生理和心理应激，和(iii)手术过程本身及其伴随的麻醉、镇痛，输血和其它手术中的程序的神经内分泌和旁分泌响应的结果，多种可溶的因子系统性地增加。这些可溶的化合物包括儿茶酚胺、前列腺素、糖皮质激素、阿片类药物，和各种施用的麻醉和镇痛剂。近年来已经清楚，在体外，这些因子中许多直接作用于恶性细胞，激活对肿瘤转移活动而言关键的几种分子过程，包括肿瘤细胞增殖、粘附、运动、胞外基质侵入能力、对细胞凋亡和失巢凋亡(anoikis)的抗性，和促血管生成因子的分泌。此外，体外以及人类和动物体内研究显示，这些可溶的因子中许多可导致抗转移细胞介导的免疫(cmi)的阻遏，这确实是一种常见的围手术期现象。

4、cmi，特别是细胞毒性t淋巴细胞(ctl)和自然杀伤(nk)细胞，甚至在手术前就被抑制，而且在手术后抑制更显著，抑制的程度与手术创伤和组织损伤的程度对应。值得注意的是，已经在因果关系上证明，cmi抑制可介导促进动物模型中的癌症转移，而且临床研究已将cmi抑制与转移发展的易感性增加关联起来。

5、在各种旨在减少恶性组织和/或防止cmi抑制的治疗中，癌症患者中的免疫治疗在过去的十年中已重新获得了发展势头。具体而言，已知1型t辅助细胞(th1)和促炎细胞因子(例如il-2，il-12，ifn-γ)显著增强cmi，在恶性细胞的体内消除中起重要的作用。免疫刺激方法(isa)通常利用确立的生物反应调节剂(brm)，包括含有病原体相关分子模式的天然或合成的化合物(例如lps、cpg)，或这些化合物诱导的促炎/th1型细胞因子。

6、然而，虽然采用抗肿瘤isa的动物研究显示了有希望的结果，但癌症患者中的临床研究大体上不太成功。有人提出这种差异背后的原因是在动物模型中模拟人类癌症发生的几个难点，这些难点大多集中在植入的癌性组织的生物学与宿主生理学(包括免疫易感性和与植入组织的兼容性)的差异。有人提出这种差异的背后原因还有应激反应，已知应激反应可诱导免疫抑制作用，它由癌症患者中的特征性心理和生理状况所产生，这些状况在动物模型中并不存在。

7、neeman等(2012)clin cancer res.，18(18):4895-902描述了一种通过利用同时阻断β-肾上腺素能和抑制cox-2，在围手术期靶向儿茶酚胺和前列腺素来减少术后癌症复发的方法。

8、avraham等(2010)brain behav immun.，24(6):952-8描述了免疫刺激疗法与防止手术后免疫抑制的内分泌阻断剂药物干预的集成，以减少手术后肿瘤进展。

9、尽管围手术期的重要性得到了承认，而且在使用isa的动物实验中获得了明显有希望的结果，但免疫刺激疗法很少在围手术期中被用于患者，这可能是由于预期isa有热原效应和不良作用，它们无法与手术环境中危及生命的感染的指征相区分。为数不多的尝试过该手段的临床试验使用了单一的th1(例如，il-2，il-12)或促炎性(例如，ifn-α)细胞因子，且确实报告了对这些疗法的严重不良反应，包括白细胞减少症、体能状况恶化、发热、呕吐，和精神抑郁。近来fda批准的合成药物，它们基于病原体相关分子模式(pamp)，引起的不良反应明显较少，同时可诱导有效的、自控的、内源性的多细胞因子应答。这样的isa包括tlr-4激动剂，称为吡喃葡萄糖基脂质佐剂(如us 8,273,361和wo 2010/141861中公开的glas)，其激活t细胞、b细胞和树突细胞。

10、us 8,273,361基于发现一种以基本上均质的化学形式提供的合成吡喃葡萄糖基脂质佐剂(gla)的有用的免疫佐剂性质而公开了组合物和方法，包括用于诱导或增强免疫应答的疫苗和药物组合物。还提供了疫苗和药物组合物，其包括gla和一种或多种抗原，toll样受体(tlr)激动剂、共佐剂和载体如药物载体。

11、wo 2010/141861公开了具有替代的化学结构和性质的化合物，特别是吡喃葡萄糖基脂质佐剂(gla)化合物。也公开了药物组合物、疫苗组合物，和用于诱导或增强免疫应答的相关方法。

12、仍然需要针对转移发展的更有效的治疗。

13、本文引用的所有出版物、专利和专利申请在此通过提述以其整体并入用于所有目的。

技术实现思路

1、本发明提供使用吡喃葡萄糖基脂质佐剂(gla)减少或预防癌症转移形成的组合物和方法。根据一些实施方案，本发明涉及使用gla的局部-区域递送来减少或预防转移发展。根据一些实施方案，在没有癌症抗原的共施用(无论作为确定的肽，蛋白质，或肽、蛋白质或片段的混合物，还是作为灭活或修饰的癌细胞制备物)的条件下使用gla。根据一些实施方案，将gla与cox2抑制剂和β-肾上腺素能受体阻断剂组合。

2、本发明首次公开了将gla局部-区域递送至与待治疗的肿瘤邻近的空间或空腔，或递送至与待治疗的肿瘤的引流淋巴结邻近的空间或空腔，或直接递送入待治疗的肿瘤的引流淋巴结中。这种gla局部-区域递送也可在去除原发性肿瘤后进行，将其递送至切除肿瘤块后形成的空间或空当。本发明因此提供一种更受控的gla施用方式，以改善治疗结果。有利地，局部-区域递送可提供活性成分的更持续的作用。此外，gla的局部-区域递送可允许较低的gla全身给药，并减少在癌症背景中可与全身递送相关的有害副作用。

3、本发明进一步公开了使用gla对抗癌症转移而不共施用癌抗原，例如：来源于被治疗的受试者的肿瘤的抗原；含有已知与被治疗的受试者的肿瘤类型相关的抗原的抗原或抗原组合物；或者来源于肿瘤细胞施用的抗原(antigens derived from administration oftumor cells)的制备物，或来自患者的肿瘤细胞的制备物，或患者定义的肿瘤(patientdefined tumors)的混合物，由此区别于在用于癌症疫苗的组合物的语境中的gla施用。有利地，本发明中gla的所述使用不限于已鉴定了癌症特异性抗原的癌症类型。

4、在一些实施方案中，将gla用于在肿瘤切除手术后防止实体瘤的转移。现在公开了在手术之前和之后施用的gla实现转移发展的有效抑制。

5、本发明进一步公开了可将gla治疗与用β肾上腺素能受体阻断剂和/或cox2-选择性抑制剂的治疗组合，以进一步优化转移抑制的结果。不受限于任何特定的作用机制或理论，我们设想β肾上腺素能受体阻断剂和cox2抑制剂的组合对抗在癌症患者中可能发生的应激诱导的免疫抑制，由此导致gla功效的改善。本技术公开的活性成分的组合至少加和性地起作用，优选协同性地起作用。

6、在一个方面，本发明提供治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括对所述受试者施用包含吡喃葡萄糖基脂质佐剂(gla)或其药物可接受的盐作为活性成分的药物组合物的步骤，其中所述施用对治疗癌症是有效的。

7、根据一个方面，本发明提供用于减少或防止受试者中转移发展的方法，所述方法包括对所述受试者施用包含吡喃葡萄糖基脂质佐剂(gla)或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物的步骤，其中所述施用对减少或防止转移是有效的。

8、如本技术使用的，术语“转移”、“癌症转移”或“肿瘤转移”可互换地使用，指源自位于一个器官或组织中的原发性癌性肿瘤的癌细胞在另一个非邻近的器官或组织中的生长。转移还涵盖微转移(micrometastasis)，微转移是在与原始的原发性癌性肿瘤的器官不直接相连的身体部分或器官中存在不可检测量的癌细胞。转移也可以被定义为过程的几个步骤，如癌细胞从原始肿瘤部位出发，和癌细胞迁移和/或侵入到身体的其他部分。

9、如本技术使用的，“减少或防止转移发展(metastasis development)”指延缓或甚至完全抑制转移的扩散、发展和生长。该术语还可包括减少器官或组织中转移的数目，以及减少待通过本发明的组合物治疗的现有癌症的大小、数目或恶性状态。如本领域的普通技术人员会理解的，转移发展的减少或防止可通过本领域已知的标准方法来测量，包括通过本领域已知的多种放射学、影像、循环肿瘤标志物、触诊(palpitation)、直接测量或观察技术测量的肿瘤大小或数目的减少。因此，转移发展的减少或防止还可以用与被治疗的癌症的疾病状态相关的体征或症状的减少、或存活的延长、或因被治疗的癌症的疾病体征或症状而遭受的痛苦的减少来度量。

10、在一些实施方案中，gla或其药学上可接受的盐通过局部-区域递送施用。

11、如本技术使用的，“局部-区域递送”表示递送至与待治疗肿瘤邻近的空间或空腔，或递送至与待治疗肿瘤的引流淋巴结邻近的空间或空腔，或直接递送入待治疗肿瘤的引流淋巴结中。如果局部-区域递送在原发性肿瘤切除手术后施用，则其包括递送至切除肿瘤块后形成的空间或空当。局部-区域递送可如下进行：单次注射至单个或多个局部-区域空间，或作为同时给予或历时至少约一分钟、数分钟、数小时、数天或数周给予的一系列注射。如本技术使用的，局部-区域递送不包括肿瘤内施用。此外，局部-区域递送不包括表面(topical)施用：在表面施用中将药物组合物施用于受试者的外体表上。

12、在一些实施方案中，施用gla或其药学上可接受的盐而无癌症抗原。

13、在一些实施方案中，所施用的包含gla或其药学上可接受的盐的药物组合物基本上没有癌症抗原。

14、如本技术使用的“基本上没有”指小于约1％，优选小于约0.1％，小于约0.01％(w/w)，小于约0.001％(w/w)。

15、在一些实施方案中，将所述方法用于在肿瘤切除手术后减少或防止受试者中的转移发展。在一些实施方案中，在肿瘤切除手术的围手术期中施用gla或其药学上可接受的盐。

16、所述“围手术期”指即将手术之前、手术过程中和刚手术后的时间。它包括手术之前的时间，此时患者正准备手术(“术前期”)，然后是手术中花费的时间(“手术期”)和直到手术后的时间，此时患者正在恢复并通常被监测并发症(“术后期”)。围手术期可发生在医院、外科中心和/或医疗人员的办公室。

17、如本技术使用的，围手术期通常指起于肿瘤切除手术前2-10天、止于该手术后14-21天的时间，例如，起于手术前4-5天、止于手术后约14天，或者起于手术前7天、止于手术后约7天。

18、在一些实施方案中，将gla或其药学上可接受的盐在手术前施用至少一次(例如两次、三次、四次或更多)。在一些实施方案中，将gla或其药学上可接受的盐在手术后施用至少一次(例如两次、三次、四次或更多)。在一些实施方案中，在手术之前和之后均施用gla或其药学上可接受的盐。

19、在一些多次施用gla或其药学上可接受的盐的实施方案中，其以恒定剂量施用。根据这些实施方案，每次施用gla或其药学上可接受的盐时，将其以相同剂量施用。在另外的多次施用gla或其药学上可接受的盐的实施方案中，其以变化剂量施用。根据这些实施方案，gla或其药学上可接受的盐的施用剂量在整个治疗期变化。

20、在一些实施方案中，gla具有下述结构式(i)：

21、

22、其中:r1，r3，r5和r6为c11-c20烃基；r2和r4为c12-c20烃基。

23、在一些实施方案中，r1，r3，r5和r6为十一烷基，r2和r4为十三烷基。

24、在一些实施方案中，gla具有下述结构式(ii)：

25、

26、其中：

27、l1，l2，l3，l4，l5和l6为相同或不同的，且独立地为-o-，-nh-或-(ch2)-；

28、l7，l8，l9,和l10为相同或不同的，且独立地为不存在或为-c(＝o)-；

29、y1为酸官能团；

30、y2和y3为相同或不同的，且独立地为-oh，-sh，或酸官能团；

31、y4为-oh或-sh；

32、r1，r3，r5和r6为相同或不同的，且独立地为c8-c13烃基；且

33、r2和r4为相同或不同的，且独立地为c6-c11烃基。

34、在一些实施方案中，本技术使用的gla佐剂可具有下述结构式(iii)：

35、

36、其中：

37、r1，r3，r5和r6为c11-c20烃基；r2和r4为c9-c20烃基。

38、在更具体的实施方案中，gla具有上面所列的式iii，其中r1，r3，r5和r6为c11-14烃基；且r2和r4为c12-15烃基。

39、在更具体的实施方案中，gla具有上面所列的式iii，其中r1，r3，r5和r6为c11烃基；且r2和r4为c13烃基。

40、在更具体的实施方案中，gla具有上面所列的式iii，其中r1，r3，r5和r6为c11烃基；且r2和r4为c9烃基。

41、在一些实施方案中，gla是合成的，且具有下述结构式(iv)：

42、

43、在上面的gla结构(式iv)的一些实施方案中，r1，r3，r5和r6为c11-c20烃基；且r2和r4为c9-c20烃基。在一些实施方案中，r1，r3，r5和r6为c11烃基；且r2和r4为c9烃基。

44、在一些实施方案中，gla是合成的且具有下述结构式(v)：

45、

46、在上面的gla结构(式v)的一些实施方案中，r1，r3，r5和r6为c11-c20烃基；且r2和r4为c9-c20烃基。在一些实施方案中，r1，r3，r5和r6为c11烃基；且r2和r4为c9烃基。

47、在一些实施方案中，gla是合成的且具有下述结构式(vi)：

48、

49、在上面的gla结构(式vi)的一些实施方案中，r1，r3，r5和r6为c11-c20烃基；且r2和r4为c9-c20烃基。在一些实施方案中，r1，r3，r5和r6为c11烃基；且r2和r4为c9烃基。

50、在一些实施方案中，合成的gla具有下述结构：

51、

52、在一些实施方案中，合成的gla具有下述结构：

53、

54、在一些实施方案中，合成的gla具有下述结构：

55、

56、在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括施用β肾上腺素能受体阻断剂和cox2抑制剂的步骤。

57、在一些实施方案中，β肾上腺素能受体阻断剂和cox2抑制剂的施用在肿瘤切除手术的围手术期过程中进行。

58、在一些典型的实施方案中，β肾上腺素能受体阻断剂和cox2抑制剂存在于不同的药物组合物中。

59、在一些实施方案中，将β肾上腺素能受体阻断剂和/或cox2抑制剂在手术前施用至少一次(例如两次、三次、四次或更多)。在另外的实施方案中，将β肾上腺素能受体阻断剂和/或cox2抑制剂在手术后施用至少一次(例如两次、三次、四次或更多)。在一些实施方案中，将β肾上腺素能受体阻断剂和/或cox2抑制剂在手术之前和之后施用。

60、在一些实施方案中，gla或其药学上可接受的盐、β肾上腺素能受体阻断剂和cox2抑制剂在围手术期过程中于同日施用。在另外的实施方案中，将它们于不同日施用。

61、在一些实施方案中，所述β肾上腺素能受体阻断剂选自下组：醋丁洛尔(acebutolol)、阿替洛尔(atenolol)、倍他洛尔(betaxolol)、比索洛尔(bisoprolol)、卡替洛尔(carteolol)、卡维地洛(carvedilol)、塞利洛尔(celiprolol)、艾司洛尔(esmolol)、拉贝洛尔(labetalol)、美托洛尔(metoprolol)、纳多洛尔(nadolol)、奈必洛尔(nebivolol)、氧烯洛尔(oxyprenolol)、喷布洛尔(penbutolol)、吲哚洛尔(pindolol)、普萘洛尔(propranolol)、索他洛尔(sotalol)、噻吗洛尔(timolol)，或它们药学上可接受的盐。每个可能性代表本发明的分别的实施方案。在具体的实施方案中，其为普萘洛尔或其药学上可接受的盐。

62、在一些实施方案中，所述cox2抑制剂选自下组：塞来考昔(celecoxib)、西米考昔(cimicoxib)、艾托考昔(etoricoxib)、依托度酸(etodolac)、依托考昔(eoricoxib)、罗美昔布(lumiracoxib)、美洛昔康(meloxicam)、帕瑞考昔(parecoxib)、罗非考昔(rofecoxib)、替拉考昔(tiracoxib)、伐地考(valdecoxib)，或它们药学上可接受的盐。每个可能性代表本发明的分别的实施方案。在具体的实施方案中，其为依托度酸或其药学上可接受的盐。

63、根据另一个方面，本发明提供包含gla或其药学上可接受的盐作为活性成分的药物组合物，用于减少或防止转移发展，所述组合物基本上没有癌抗原。

64、在一些实施方案中，所述药物组合物由作为唯一活性成分的gla或其药学上可接受的盐组成。

65、在一些实施方案中，将所述药物组合物配制用于局部-区域递送。

66、在一些实施方案中，所述药物组合物在肿瘤切除手术的围手术期过程中使用。

67、在一些实施方案中，所述药物组合物在肿瘤切除手术的围手术期过程中与β肾上腺素能受体阻断剂和cox2抑制剂一起使用。

68、本发明的这些和其他方面和特征通过附图、详细说明、实施例和随附的权利要求将不言自明。