一种药物组合物及其在制备防治眼部新生血管性疾病药物中的应用

本发明涉及生物医学，具体地，涉及一种药物组合物及其在制备防治眼部新生血管性疾病药物中的应用，尤其涉及一种针对runt相关转录因子(runx1)基因位点的药物组合物及其在制备预防和/或治疗眼部新生血管性疾病药物中的应用。

背景技术：

1、眼底新生血管是众多眼底疾病的病理基础，一般发生于缺血缺氧的视网膜脉络膜组织，常见于糖尿病性视网膜病变、湿性老年相关性黄斑变性、早产儿视网膜病变、脉络膜新生血管、视网膜中央/分支静脉阻塞、高度近视视网膜病变、中心性浆液性视网膜病变等。有数据显示眼底新生血管性疾病患者人数在4000万以上，且随着人口老龄化程度加重，患者人数还在不断上升。该病患者视力普遍低下，严重影响患者的生活质量，造成巨大的家庭及社会经济负担。

2、该病主要的原因在于各种因素引起的视网膜缺血缺氧，刺激血管内皮生长因子(vegf)等血管生成因子的产生，导致异常的新生血管形成。不同于发育过程中生理性的血管发生，眼底新生血管的血管壁结构薄弱，通透性高，会导致渗漏、出血、组织水肿等一系列改变，最终严重影响视力。目前控制视网膜新生血管形成的方法是通过高频的眼内注射vegf抑制剂，如vegf单抗或vegfr竞争性结合蛋白，抑制vegf的功能。这一方法虽可抑制新生血管的形成，但需要反复多次的给药，且不能解决视网膜缺血缺氧的问题，属于治标不治本。

3、近年来，有研究(identification of runx1as a mediator of aberrantretinal angiogenesis[j].diabetes,2017:1950-1956.)发现了一种视网膜新生血管形成或视网膜异常血管生长的新型治疗靶点—runx1。runx1是一种转录因子，由1个runx1基因编码的α亚基和1个cbfb基因编码的β亚基组成。runt结构域介导其中一个亚基直接与dna结合，另一个则是非dna结合亚基，被称为核心结合因子β(core binding factorβ，cbfβ)，runx1和cbfβ形成的异二聚体增加了runx1的dna亲和力，可以激活或抑制目标基因的表达。在病理性新生血管组织，如pdr的血管膜、脉络膜新生血管膜等，均可检测到异常的runx1高表达，而正常血管中runx1无表达。在体外，抑制runx1可减少c-pvr细胞的增殖，并且在抑制了新鲜分离的人pvr膜的生长。对于某些特定视网膜病变的眼病来说，通过抑制runx1来抑制异常血管形成可能是一种靶向性更强的治疗方法。已有研究在动物实验中证实玻璃体腔注射ro5-3335(runx1-cbfβ相互作用抑制剂)可减少新生血管的面积，然而无法改善视网膜无灌注区面积。且ro5-3335高剂量应用可能会产生药物毒性作用。探索新的rux1调控方法具有重要的临床意义。

4、由于dna纳米结构具有广泛的生物学功能，dna纳米技术已被开发并应用于各种领域。dna四面体(tetrahedral dna nanostructures，tdns)是一种由4条单链dna通过变性和复性进而通过链间碱基互补配对形成的一种四面体结构，它易于合成，结构稳定，生物兼容性高，具有稳定结构和优异机械性能，已被广泛应用于各种生物领域。在先的专利对于tdns在眼科疾病中的用途进行了公开，如专利cn109646450b中披露了tdns在制备治疗角膜损伤的药物中的用途，专利cn112007044b中公开了tdns-mir155复合物及其在制备预防或治疗湿性黄斑病变的药物中的用途，专利cn112843085b中公开了tdns-mir22复合物及其在制备治疗视神经损伤的药物中用途。目前尚未见tdns与sirna复合物在眼科疾病中的治疗应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种针对runt相关转录因子(runx1)基因位点的药物组合物。

2、本发明的第二个目的在于提供上述药物组合物在制备预防和/或治疗眼部新生血管性疾病和/或促进生理性血管生成的药物中的应用。

3、本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

4、一种靶向runx1的药物组合物，包括runx1-cbfβ相互作用抑制剂和dna核酸四面体与靶向runx1的小干扰rna的复合物。

5、本发明提供的药物组合物的两种组分中，所述runt相关转录因子(runx1)与核心转录因子β(cbfβ)的相互作用抑制剂可抑制runx1/cbfb依赖性反式激活，从而直接抑制runx1的激活及作用发挥。在一定浓度范围内通过玻璃体腔眼内注药可抑制视网膜新生血管形成。所述dna核酸四面体与靶向runx1的小干扰rna(sirna)的复合物，其中小干扰rna与dna四面体的至少一条单链连接。所述dna核酸四面体作为携带靶向runx1的sirna的载体，不易被核酸酶溶解；无需转染，易于穿过细胞膜，药物的细胞摄取效果增强，进而提高sirna对的降解效力，增加runx1的沉默效果，阻止新生血管的生成。在使用浓度下，血管内皮细胞未显示出明显的细胞毒性或不良反应。本发明所述药物组合物相较于两者单独处理可更加有效减少runx1的表达，阻止病理性新生血管的生成，具有显著的协同作用，并且还能够促进生理性血管的生成，从而改善视网膜无灌注区面积，可用于预防和/或治疗眼部新生血管性疾病。

6、优选地，所述runx1-cbfβ相互作用抑制剂为ro5-3335，ro5-3335是一种苯二氮化合物(cas编号：30195-30-3)。

7、优选地，所述靶向runx1的小干扰rna包括正义链和反义链，其核苷酸序列依次如seq id no.3～4所示。

8、优选地，所述dna核酸四面体由四条单链dna经碱基互补配对形成，所述四条单链dna的核苷酸序列分别如seq id no.5～8所示。

9、优选地，所述unx1-cbfβ相互作用抑制剂和dna核酸四面体与靶向runx1的小干扰rna(sirna)的复合物所述摩尔比为75：1。

10、所述dna核酸四面体-sirna复合物的制备方法为先将sirna的正义链或反义链与dna核酸四面体其中一条单链连接，再将连接sirna的单链与其他三条单链加热变性再迅速降温复性，制备得到核酸四面体-sirna复合物。

11、本发明的药物组合物没有明显的药物毒性；通过在培养液中加入药物组合物的实验组与对照组相比，药物组合物可有效的抑制缺氧状态下视网膜内皮细胞的增殖作用。通过动物实验可知，玻璃体腔注射药物组合物的实验组与对照组相比，药物组合物组更加有效的抑制了视网膜新生血管的生成，具有协同作用，同时明显的减少了视网膜无血管区的面积，促进了生理性血管的形成；并且药物组合物没有明显的视网膜药物毒性，生物安全性高。鉴于病理性新生血管在所有眼部新生血管性疾病中均可见，因此可利用本发明药物组合物来抑制眼部病理性新生血管生成和/或促进眼部生理性血管生成，从而可起到预防和/或治疗眼部新生血管性疾病的作用。

12、因此，本发明还提供上述任一所述所述药物组合物在制备抑制眼部病理性新生血管生成和/或促进眼部生理性血管生成的药物中的应用。

13、本发明还提供上述任一所述所述药物组合物在制备预防和/或治疗眼部新生血管性疾病和/或促进眼部生理性血管生成的药物中的应用。

14、优选地，所述眼部新生血管性疾病包括但不限于视网膜新生血管相关疾病、角膜新生血管相关疾病、虹膜新生血管相关疾病或脉络膜新生血管相关疾病中的一种或多种。

15、优选地，所述视网膜新生血管性疾病包括但不限于糖尿病性视网膜病变(pdr)、早产儿视网膜病变(rop)、视网膜静脉阻塞(rvo)、视网膜静脉周围炎、年龄相关性黄斑变性(amd)、息肉样脉络膜血管病变、高度近视脉络膜新生血管或特发性脉络膜新生血管中的一种或多种。病理性视网膜新生血管在所有年龄段的常见和严重视网膜疾病中均可见。目前，对晚期rop、pdr或rvo患者进行视网膜光凝治疗，或使用抗血管内皮生长因子(vegf)治疗以抑制新生血管。由于激光导致视网膜组织丢失，视网膜光凝可导致视力下降、夜间视力下降和持续视野狭窄等并发症。抗vegf治疗临床上已用于治疗rop、dr和rvo患者，但存在潜在的缺陷。首先，与阻断血管内皮生长因子信号有关的不良反应，包括对正常视网膜血管生长和视网膜功能的损害。其次，由于持续的缺血/无灌注状态，在玻璃体内注射抗vegf抗体后，病理性新生血管的复发在早产儿或糖尿病患者中很常见。

16、优选地，所述药物组合的制剂方式可以是任何适于眼部局部施用的剂型，包括但不限于注射剂、滴眼剂、脂质体或气雾剂中的一种或多种。

17、作为本发明所述应用的优选实施方式，在细胞给药时，药物组合物中ro5-3335优选剂量为75μm，dna核酸四面体-sirna复合物优选剂量为100nm，药物配比1:1。在动物给药时，ro5-3335优选剂量为75μm 1μl，dna核酸四面体-sirna优选剂量为1μm 1μl。

18、本发明还提供一种预防和/或治疗眼部新生血管性疾病和/或促进生理性血管生成的药物，所述药物包括上述任一所述药物组合物。所述药物以上述任一所述药物组合物为唯一活性成分搭配药物辅料或作为活性成分之一搭配其它治疗眼部新生血管性疾病的物质共同作为活性成分，再搭配药物辅料。

19、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

20、本发明提供了一种靶向runt相关转录因子1(runx1)基因，将直接抑制runx1/cbfb依赖性反式激活的runx1直接抑制剂ro5-3335与高效入胞、性质稳定的runx1mrna翻译过程抑制剂dna核酸四面体-sirna复合物结合的药物组合物，可更加有效减少runx1的表达，阻止新生血管的生成，具有显著的协同作用，并且还能够促进生理性血管的生成，从而改善视网膜无灌注区面积，且该药物组合物无明显的药理毒性，可用于预防和/或治疗眼部新生血管性疾病。