β-乳球蛋白特异性适配体的应用

本发明属于生物医药，涉及一种β-乳球蛋白特异性适配体的应用，具体来说是其在减轻牛乳过敏反应中的应用。

背景技术：

1、牛乳过敏(cow’s milk allergy，cma)是人体对牛乳中蛋白质的免疫响应性疾病。近年来，随着全球经济的快速发展以及生活方式的转变，母乳喂养比例逐渐下降，牛乳与母乳营养成分结构类似，逐渐成为婴幼儿重要的营养物质来源，被视为母乳的最佳补充或者替代品，以牛乳为主的婴幼儿配方食品逐渐构成了婴幼儿日常的饮食主体。但作为who/fao划定的八大类易过敏食物之一，由其所引起的牛乳过敏反应却不容忽视。目前，牛乳过敏已经成为婴幼儿群体中最常见的食物过敏反应，严重影响着婴幼儿的身体健康。流行病学调查结果显示，婴幼儿群体中cma在全球范围内发生率1.9～4.9％，但在1岁及以下年龄段的婴幼儿中cma的发生率为1.8％～7.5％。据调查表明，约82％左右牛乳过敏群体的致敏原为β-乳球蛋白，因此β-乳球蛋白被认为是牛乳中最主要的过敏原蛋白。

2、牛乳过敏反应这种特定的免疫系统疾病在接触含有牛乳过敏原的食物后可以重复发生，其中涉及到个体遗传与环境条件等多个因素。虽然可以通过使用抗组胺药和皮质类固醇来预防并治疗过敏反应，但仍无法完全治愈，迄今为止，最有效的措施是食物过敏患者严格规避相应过敏原，严重影响着牛乳过敏群体的身体健康及生活质量。因此，研究开发一种新型的牛乳过敏治疗策略是目前亟需解决的问题。

技术实现思路

1、本发明旨在解决上述问题，提供了一种β-乳球蛋白特异性适配体的应用，用于减轻牛乳过敏反应。

2、本发明的第一方面提供了β-乳球蛋白特异性适配体在制备减轻牛乳过敏反应的药物中的应用，所述β-乳球蛋白特异性适配体为β-乳球蛋白的环状共价适配体(环状适配体)，所述牛乳过敏反应为β-乳球蛋白引起的牛乳过敏反应。

3、进一步的，所述β-乳球蛋白的环状共价适配体由两条携带互补碱基序列的适配体单体经碱基配对后连接而成，所述适配体单体的核心部分为β-乳球蛋白结合单元，所述β-乳球蛋白结合单元的序列如seq id no：1所示。

4、具体的，所述β-乳球蛋白的环状共价适配体包含两个β-乳球蛋白结合单元，是适配体#t4m8(seq id no：1)通过环化设计，酶促反应制备而成。

5、进一步的，所述药物可以为抑制剂。

6、进一步的，所述β-乳球蛋白的环状共价适配体用于掩盖β-乳球蛋白表面的抗体ige结合表位而抑制抗体ige结合，从而抑制β-乳球蛋白的致敏性。

7、具体的，所述β-乳球蛋白的环状共价适配体与β-乳球蛋白的结合靶点为tyr-20\gln-35\arg-40\asn-152\thr-154，而β-乳球蛋白表面的ige抗体结合表位主要包括三个区域(表位i:aa41-60\表位ii:aa102-124\表位iii:aa149-162)，因此，该环状共价适配体能够有效掩盖β-乳球蛋白表面的过敏原结合表位。

8、进一步的，所述β-乳球蛋白的环状共价适配体用于抑制β-乳球蛋白诱发的嗜碱性白血病细胞株(rbl-2h3)的脱颗粒现象，具体可以表现为降低组胺和β-氨基已糖苷酶的水平。

9、进一步的，所述β-乳球蛋白的环状共价适配体用于抑制β-乳球蛋白诱导的rbl-2h3细胞致敏响应，具体可以表现为降低白细胞介素-4(il-4)为主的细胞因子的水平。

10、进一步的，所述β-乳球蛋白的环状共价适配体用于抑制β-乳球蛋白诱导的balb/c小鼠体内过敏反应，具体可以表现为降低小鼠血清中β-乳球蛋白特异性抗体、mmcpt-1蛋白和il-4的水平。

11、进一步的，所述两条携带互补碱基序列的适配体单体的序列如seq id no：2和seqid no：3，或seq id no：4和seq id no：5，或seq id no：6和seq id no：7所示。

12、进一步的，所述适配体单体上修饰有标记分子和/或化学官能团。

13、进一步的，所述标记分子和/或化学官能团选自荧光基团、同位素、电化学标记物、酶标记物、亲和配基和巯基中一种或多种。

14、本发明的第二方面提供了一种减轻牛乳过敏反应的药物，所述牛乳过敏反应为β-乳球蛋白引起的牛乳过敏反应；

15、所述药物包含β-乳球蛋白特异性适配体，所述β-乳球蛋白特异性适配体由两条携带互补碱基序列的适配体单体经碱基配对后连接而成，所述适配体单体的核心部分为β-乳球蛋白结合单元，所述β-乳球蛋白结合单元的序列如seq id no：1所示。

16、进一步的，所述两条携带互补碱基序列的适配体单体的序列如seq id no：2和seqid no：3，或seq id no：4和seq id no：5，或seq id no：6和seq id no：7所示。

17、进一步的，所述适配体单体上修饰有标记分子和/或化学官能团，所述标记分子和/或化学官能团选自荧光基团、同位素、电化学标记物、酶标记物、亲和配基和巯基中一种或多种。

18、进一步的，所述药物还包括添加剂。

19、进一步的，所述添加剂选自抗氧化剂、防腐剂、增溶剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、分散剂和表面活性剂中的一种或多种。

20、进一步的，所述药物的给药方式为静脉注射或肌肉注射。

21、进一步的，所述药物的给药量为：每100mgβ-乳球蛋白，2-15nmolβ-乳球蛋白特异性适配体。

22、本发明的技术方案相比现有技术具有以下优点：

23、本发明基于β-乳球蛋白环状适配体在β-乳球蛋白表面的结合表位与抗体ige在β-乳球蛋白表面的结合表位具有共定位现象，能够有效掩盖β-乳球蛋白表面的过敏原结合表位，提出了利用β-乳球蛋白特异性适配体减轻牛乳过敏反应；

24、经细胞实验和动物实验验证，该环状适配体能有效抑制β-乳球蛋白引发的过敏反应，在减轻牛乳过敏反应方面具有良好的应用前景。

技术特征：

1.β-乳球蛋白特异性适配体在制备减轻牛乳过敏反应的药物中的应用，所述β-乳球蛋白特异性适配体为β-乳球蛋白的环状共价适配体，所述牛乳过敏反应为β-乳球蛋白引起的牛乳过敏反应。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述β-乳球蛋白的环状共价适配体由两条携带互补碱基序列的适配体单体经碱基配对后连接而成，所述适配体单体的核心部分为β-乳球蛋白结合单元，所述β-乳球蛋白结合单元的序列如seq id no：1所示。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述两条携带互补碱基序列的适配体单体的序列如seq id no：2和seq id no：3，或seq id no：4和seq id no：5，或seq id no：6和seqid no：7所示。

4.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述适配体单体上修饰有标记分子和/或化学官能团。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述标记分子和/或化学官能团选自荧光基团、同位素、电化学标记物、酶标记物、亲和配基和巯基中一种或多种。

6.一种减轻牛乳过敏反应的药物，其特征在于，所述牛乳过敏反应为β-乳球蛋白引起的牛乳过敏反应；

7.如权利要求6所述的减轻牛乳过敏反应的药物，其特征在于，所述两条携带互补碱基序列的适配体单体的序列如seq id no：2和seq id no：3，或seq id no：4和seq id no：5，或seq id no：6和seq id no：7所示。

8.如权利要求6所述的减轻牛乳过敏反应的药物，其特征在于，所述适配体单体上修饰有标记分子和/或化学官能团，所述标记分子和/或化学官能团选自荧光基团、同位素、电化学标记物、酶标记物、亲和配基和巯基中一种或多种。

9.如权利要求6所述的减轻牛乳过敏反应的药物，其特征在于，还包括添加剂。

10.如权利要求9所述的减轻牛乳过敏反应的药物，其特征在于，所述添加剂选自抗氧化剂、防腐剂、增溶剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、分散剂和表面活性剂中的一种或多种。

技术总结
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种β‑乳球蛋白特异性适配体的应用。本发明基于β‑乳球蛋白环状适配体在β‑乳球蛋白表面的结合表位与抗体IgE在β‑乳球蛋白表面的结合表位具有共定位现象，能够有效掩盖β‑乳球蛋白表面的过敏原结合表位，提出了利用β‑乳球蛋白特异性适配体减轻β‑乳球蛋白引起的牛乳过敏反应；经细胞实验和动物实验验证，该环状适配体能有效抑制β‑乳球蛋白引发的过敏反应，在减轻牛乳过敏反应方面具有良好的应用前景。

技术研发人员：段诺,齐硕,吴世嘉,王周平
受保护的技术使用者：江南大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14