增强狂犬病疫苗体液和细胞免疫应答与保护的白细胞介素7/21/23分子新佐剂及应用的制作方法

本发明属于生物技术及生物医疗领域，涉及狂犬病疫苗新型佐剂以及增效剂的研发和应用，具体涉及增强狂犬病疫苗体液和细胞免疫应答与保护的白细胞介素7/21/23分子新佐剂及应用。

背景技术：

1、狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus，rabv)引起的人畜共患病，能感染神经系统导致人类及恒温动物严重脑炎。

2、狂犬病病毒是一种非分段的负义单链rna病毒，属于丽沙病毒属家庭。它的基因组按以下顺序编码五种结构蛋白：核蛋白(n)，磷蛋白(p)，基质蛋白(m)，糖蛋白(g)和rna依赖性rna聚合酶(l)(3’-n-p-m-g-l-5’)。完整的狂犬病病毒长度约为200纳米左右，直径70纳米左右，呈子弹型，由囊膜(脂质双分子层外膜与包膜基质蛋白m组成的结构蛋白外壳)与遗传核心(病毒核衣壳与rna、核蛋白n、磷蛋白p及聚合酶l)组成。g蛋白是病毒粒子表面唯一的蛋白质，诱导产生狂犬病毒中和抗体(vnas)。

3、目前，接种狂犬病疫苗仍是现代医学防治狂犬病的最佳手段，因此狂犬病及其预防性制剂的研究对人类健康与农牧业发展具有重要的意义。通常，在疫苗中添加佐剂如传统铝佐剂、皮卡佐剂、各类cpg或油包水佐剂等往往可以增强疫苗的免疫原性，但其提高免疫反应的能力有限，作用时间缓慢，经常会引发注射局部明显的疼痛不适与组织损伤，并且产生中和抗体较迟缓且含量低；对需要快速产生大量中和抗体防止病毒感染靶细胞极为不利。目前急需开拓新的途径研发和应用安全高效的新佐剂，增强对各类传染病疫苗或肿瘤疫苗的免疫应答和免疫保护水平，延长其有效保护期。

4、细胞因子是由组织或免疫细胞等经过多途径刺激诱导分泌出的一类小分子可溶性蛋白质，具有信号转导作用，在胞间或胞内进行细胞生长、分化或免疫应答调控。细胞因子是动物调节各类免疫细胞、非免疫细胞和各种免疫分子参与机体抗感染防御和免疫保护应答中最重要和最高效的关键分子，调控免疫细胞的免疫识别与激活、免疫应答和免疫效应清除过程，并且主导损伤组织细胞增殖、器官结构的再生和功能修复。细胞因子是动物体内协调保障动物细胞组织与各种器官生物功能安全的导演和卫士。近年来，细胞因子因其高效和安全的协同增强动物机体针对各类病原的免疫应答的效应，开始用于疫苗佐剂被广泛研究，并应用于人和动物的各类疫苗研发和应用。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种增强狂犬病疫苗体液和细胞免疫应答与保护的白细胞介素7/21/23分子新佐剂及应用。

2、本发明提供了一种组合物，包括人白细胞介素7、人白细胞介素21和人白细胞介素23。具体的，所述组合物由人白细胞介素7、人白细胞介素21和人白细胞介素23组成。

3、具体的，所述组合物中，人白细胞介素7、人白细胞介素21和人白细胞介素23的质量配比依次为：0.1-1：0.1-1：0.1-1。

4、具体的，所述组合物中，人白细胞介素7、人白细胞介素21和人白细胞介素23的质量配比依次为：0.3-1：0.3-1：0.3-1。

5、具体的，所述组合物中，人白细胞介素7、人白细胞介素21和人白细胞介素23的质量配比依次为：0.3：0.3：0.3。

6、所述组合物的用途为适配于人狂犬病疫苗的疫苗佐剂或者适配于人狂犬病疫苗的增效剂。

7、本发明还保护以上任一所述组合物在制备产品中的应用；

8、所述产品为如下(a)或(b)或(c)：

9、(a)适配于人狂犬病疫苗的疫苗佐剂；

10、(b)适配于人狂犬病疫苗的增效剂；

11、(c)复合型人狂犬病疫苗。

12、本发明还保护以上任一所述组合物的应用；所述应用为如下(d)或(e)：

13、(d)作为适配于人狂犬病疫苗的疫苗佐剂；

14、(e)作为适配于人狂犬病疫苗的增效剂。

15、本发明还保护以上任一所述组合物和人狂犬病疫苗在制备复合型人狂犬病疫苗中的应用。在复合型人狂犬病疫苗中，所述组合物发挥增效功能。

16、本发明还保护白细胞介素在制备产品中的应用；

17、所述产品为如下(a)或(b)或(c)：

18、(a)适配于人狂犬病疫苗的疫苗佐剂；

19、(b)适配于人狂犬病疫苗的增效剂；

20、(c)复合型人狂犬病疫苗；

21、所述白细胞介素为人白细胞介素7或人白细胞介素21或人白细胞介素23。

22、本发明还保护白细胞介素的应用；所述应用为如下(d)或(e)：

23、(d)作为适配于人狂犬病疫苗的疫苗佐剂；

24、(e)作为适配于人狂犬病疫苗的增效剂；

25、所述白细胞介素为人白细胞介素7或人白细胞介素21或人白细胞介素23。

26、本发明还保护白细胞介素和人狂犬病疫苗在制备复合型人狂犬病疫苗中的应用；

27、所述白细胞介素为人白细胞介素7或人白细胞介素21或人白细胞介素23。

28、在复合型人狂犬病疫苗中，所述白细胞介素发挥增效功能。

29、本发明还提供了一种复合型人狂犬病疫苗，为如下(f)或(g)：

30、(f)其包括人狂犬病疫苗和白细胞介素；所述白细胞介素为人白细胞介素7或人白细胞介素21或人白细胞介素23；

31、(g)其包括人狂犬病疫苗和以上任一所述的组合物。

32、具体的，所述复合型人狂犬病疫苗由人狂犬病疫苗和白细胞介素组成。具体的，所述复合人狂犬病疫苗由人狂犬病疫苗、白细胞介素和溶剂组成。具体的，所述溶剂可为灭菌水、灭菌生理盐水或灭菌缓冲液等。

33、具体的，所述复合型人狂犬病疫苗中，人狂犬病疫苗和白细胞介素的配比依次为：7iu：0.1-1μg。

34、具体的，所述复合型人狂犬病疫苗中，人狂犬病疫苗和白细胞介素的配比依次为：7iu：0.3-1μg。

35、具体的，所述复合型人狂犬病疫苗中，人狂犬病疫苗和白细胞介素的配比依次为：7iu：0.3μg。

36、所述白细胞介素与人狂犬病疫苗混合后使用，肌肉或皮下等方式注射接种动物。

37、具体的，所述复合型人狂犬病疫苗由人狂犬病疫苗和所述组合物组成。具体的，所述复合人狂犬病疫苗由人狂犬病疫苗、所述组合物和溶剂组成。具体的，所述溶剂可为灭菌水、灭菌生理盐水或灭菌缓冲液等。

38、具体的，所述复合型人狂犬病疫苗中，人狂犬病疫苗、人白细胞介素7、人白细胞介素21和人白细胞介素23的配比依次为：7iu：0.1-1μg：0.1-1μg：0.1-1μg。

39、具体的，所述复合型人狂犬病疫苗中，人狂犬病疫苗、人白细胞介素7、人白细胞介素21和人白细胞介素23的配比依次为：7iu：0.3-1μg：0.3-1μg：0.3-1μg。

40、具体的，所述复合型人狂犬病疫苗中，人狂犬病疫苗、人白细胞介素7、人白细胞介素21和人白细胞介素23的配比依次为：7iu：0.3μg：0.3μg：0.3μg。

41、所述组合物与人狂犬病疫苗混合后使用，肌肉或皮下等方式注射接种动物。

42、具体的，以上任一所述人狂犬病疫苗可为冻干人用狂犬病疫苗。

43、具体的，以上任一所述人狂犬病疫苗可为冻干人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)。

44、具体的，以上任一所述人狂犬病疫苗可为成都康华生物制品股份有限公司的冻干人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)

45、与单独接种疫苗相比，接种复合型疫苗能显著提高动物更早产生高水平的中和抗体滴度，达到保护动物免受狂犬病病毒感染的水平(0.5iu/ml)，并且高水平抗体滴度维持较对照组更长时期。与单独接种疫苗相比，接种复合型疫苗能明显促进动物产生更多的血液特异性tc、th、tem和tcm、treg细胞，提高动物的特异性细胞免疫及其记忆能力，更持久和高水平地抵抗狂犬病病毒的感染入侵。与单独接种疫苗相比，接种复合型疫苗能明显促进动物产生更多的血液特异性igg、igg1、igg2a、浆细胞、b igm memory cells、b latememory cells、b switched memory活性细胞数量，显著提高动物的特异性体液免疫水平及其记忆应答能力，更好地抵抗狂犬病病毒的感染入侵。

46、本发明对人白细胞介素7、人白细胞介素21和人白细胞介素23作为狂犬病疫苗佐剂的免疫增强作用进行了验证，并获得了有效的细胞因子组合及其剂量，实现了协同增强狂犬病疫苗的免疫应答水平，有利于更好的缩短狂犬病疫苗接种的免疫保护启动时间、提高和维持高水平的免疫保护力及保护期。这些新的狂犬病疫苗佐剂分子体内接种局部未出现无任何炎症损伤和病变，证明它们安全无毒副作用，可作为狂犬病疫苗安全可靠的新型高效免疫佐剂，尤其适宜更早更快和更持久的激发抗狂犬病病毒的特异性体液和细胞免疫保护。