寨卡疫苗和免疫原性组合物以及其使用方法与流程

发明领域本公开涉及具有来自寨卡病毒(例如寨卡病毒克隆分离株、非人细胞适应性寨卡病毒等)的一种或多种抗原的寨卡病毒疫苗和免疫原性组合物，以及所述寨卡病毒疫苗和免疫原性组合物的治疗方法和用途。

背景技术：

1、寨卡病毒自2013年引入巴西以来，所述病毒在半球流行病中迅速传播，寨卡病毒是黄病毒科中的与其他蚊媒病毒(例如黄热病病毒、登革热病毒、西尼罗河病毒和日本脑炎病毒)一起分类的一种黄病毒。所述病毒已到达中美洲和北美洲(包括美国领土)，因此现在威胁美国大陆。实际上，寨卡病毒株prvabc59分离自2015年前往波多黎各旅行的人的血清。已对这种毒株的基因组进行了至少3次测序(参见lanciotti等人emerg.infect.dis.2016年5月；22(5):933-5和genbank登录号ku501215.1；genbank登录号kx087101.3；以及yun等人genome announc.2016年8月18日；4(4)和genbank登录号ank57897.1)。

2、最初于1947年在乌干达分离，所述病毒在1952年首次与人疾病相关，并且在非洲和东南亚被偶发地识别为轻度、自限性发热疾病的原因(weaver等人(2016)antiviralres.130:69-80；faria等人(2016)science.352(6283):345-349)。然而，在2007年，在北太平洋的雅浦岛出现爆发，且然后在整个太平洋的岛屿之间播散开来，导致法属波利尼西亚在2013-2014年的广泛爆发，然后扩散至新喀里多尼亚、库克群岛且最终到达复活节岛。亚洲谱系病毒随后通过仍未确定的途径转移至西半球(faria等人(2016)science.352(6283):345-349)。所述病毒可由埃及伊蚊、白纹伊蚊以及可能由赫斯里伊蚊和波利尼西亚伊蚊进行人畜共患传播(weaver等人(2016)antiviral res.130:69-80)。另外，认为可存在用于传播病毒的其他载体，并且病毒可通过输血、胎盘和/或通过性传播来传播。

3、在2015年末，在广泛寨卡病毒感染地区的胎儿异常(例如小头畸形)和格林-巴利综合征(gbs)显著增加使人们警惕寨卡病毒可能比原先认为的毒性更强，从而促使世界卫生组织(who)宣布国际关注的突发公共卫生事件(pheic)(heymann等人(2016)lancet 387(10020):719-21)。尽管who此后宣布终止pheic，但寨卡继续对孕妇及其未出生婴儿构成特别严重的威胁。

4、尽管寨卡病毒构成重大公众健康威胁，但目前尚无fda批准的疫苗或治疗，并且控制寨卡病毒的唯一预防措施涉及管理蚊子群体。

5、在表征重组寨卡病毒以开发潜在疫苗的最近努力中，鉴定了一种非人细胞适应性寨卡病毒，所述非人细胞适应性寨卡病毒在病毒包膜蛋白中在位置330处具有突变(weger-lucarelli等人(2017)journal of virology 91(1):1-10)。这一研究的作者发现，寨卡病毒株prvabc59的全长感染性cdna克隆在克隆过程中扩增时在遗传上不稳定，并且选择分裂病毒基因组以解决所观察到的不稳定性，开发并应用了双质粒系统。然而，用于寨卡疫苗开发的双质粒系统是不太理想的。

技术实现思路

1、因此，需要开发用于治疗和/或预防寨卡病毒的疫苗和免疫原性组合物。因此，本公开的某些方面涉及一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含1μg至40μg剂量的来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述抗原是灭活全病毒。

2、因此，本公开的某些方面涉及一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含1μg至40μg剂量的来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述寨卡病毒包含至少一种非人细胞适应突变。

3、因此，本公开的某些方面涉及一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含1μg至40μg剂量的来自寨卡病毒的(一种)抗原，所述寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处具有突变。

4、为了满足上述和其他需求，本公开至少部分涉及遗传稳定的非人细胞适应性寨卡病毒，所述非人细胞适应性寨卡病毒在非结构蛋白1(具有野生型包膜蛋白)中具有适应性，从而允许使用单一病毒/病毒基因组系统用于疫苗生产。本公开还至少部分涉及遗传上同质的和/或已经从一种或多种外来因子中纯化出来的寨卡病毒克隆分离株。因此，本公开提供了可用于治疗和/或预防寨卡病毒感染(人中)的疫苗和免疫原性组合物，所述疫苗和免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的一种或多种寨卡病毒抗原(例如，来自全灭活寨卡病毒的一种或多种抗原)，所述寨卡病毒携带至少一种非人细胞适应突变(例如，寨卡病毒非结构蛋白1中的突变)；和/或一种寨卡病毒克隆分离株。

5、本公开至少部分基于以下出人意料的发现：包含来自非人细胞适应性寨卡病毒的单独来源的克隆病毒群体的一种或多种抗原的高剂量和低剂量疫苗两者均能够诱导稳健免疫应答并提供针对寨卡病毒感染的显著保护(参见下文的实施例2和实施例6)。寨卡病毒株的克隆分离还允许：1)从污染因子(例如可与亲本毒株共同纯化的外来因子)中成功纯化出所述病毒，以及2)产生遗传上同质的病毒群体。此外，本公开至少部分地基于以下发现：在蛋白ns1中具有适应突变的克隆分离的寨卡病毒在vero细胞中生长良好并且可预测地生长至高滴度，并且出人意料地，是遗传上稳定的/遗传上同质的而在病毒包膜蛋白中没有任何可检测的突变(参见下文实施例1和2)。虽然在寨卡病毒株prvabc59的3个公开序列中的1个的基因组测序分析中可能观察到寨卡病毒非结构蛋白1的类似突变(yun等人genomeannounc.2016aug 18；4(4))，但这一参考文献未能教导或表明ns1中的突变可提高病毒的稳定性；未能教导或表明带有所述突变的病毒可用于开发针对寨卡病毒的有效疫苗；并且未能教导或表明这种疫苗在低剂量和高剂量下使用时均可有效诱导稳健免疫应答并提供针对寨卡病毒感染的显著保护。因此，在不希望受理论束缚的情况下，本公开的发明人已经确定，蛋白质ns1中的适应突变似乎增强寨卡病毒内的遗传稳定性，从而导致提高的/增强的复制效率。此外，在蛋白质ns1中具有适应突变的寨卡毒株能够传代多次而不发展进一步突变。这种稳定的寨卡病毒株作为主病毒种子(mvs)或源自mvs的后续种子，对于疫苗生产和制造而言是有利的，因为降低了主病毒种子发展不期望的突变的风险。此外，不希望受理论束缚，本公开的寨卡毒株的蛋白质ns1中的适应突变也可减少或以其他方式抑制不期望的突变如寨卡病毒株的包膜蛋白e(env)内的突变的发生。

6、因此，本公开的某些方面涉及一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物含有来自寨卡病毒的一种或多种抗原，其中所述寨卡病毒含有至少一种非人细胞适应突变。在一些实施方案中，所述至少一种非人细胞适应突变位于寨卡病毒非结构蛋白1(ns1)中。在一些实施方案中，所述至少一种适应突变发生在seq id no:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处。在一些实施方案中，所述至少一种适应突变是trp98gly突变。

7、因此，本公开的某些方面涉及一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含1μg至40μg剂量的来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述寨卡病毒包含至少一种非人细胞适应突变。

8、因此，本公开的某些方面涉及一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含1μg至40μg剂量的来自寨卡病毒的(一种)抗原，所述寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处具有突变。

9、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，与缺乏至少一种适应突变的寨卡病毒相比，所述至少一种适应突变增强遗传稳定性。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，与缺乏至少一种适应突变的寨卡病毒相比，所述至少一种适应突变增强病毒复制。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，寨卡病毒在包膜蛋白e(env)中不包含突变。

10、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述非人细胞是哺乳动物细胞。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述非人细胞是是猴细胞。在一些实施方案中，所述猴细胞来自vero细胞系。在一些实施方案中，所述vero细胞系是who vero 10-87细胞系。

11、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，寨卡病毒是非洲谱系病毒或亚洲谱系病毒。在一些实施方案中，寨卡病毒是亚洲谱系病毒。在一些实施方案中，寨卡病毒来自毒株prvabc59。

12、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是纯化的抗原疫苗或免疫原性组合物、亚单位疫苗或免疫原性组合物、灭活全病毒疫苗或免疫原性组合物或减毒病毒疫苗或免疫原性组合物。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是灭活全病毒疫苗或免疫原性组合物。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含纯化的灭活全寨卡病毒。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处包含突变。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处包含trp98gly突变。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seqid no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处包含trp98gly突变，其中所述寨卡病毒源自毒株prvabc59。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seqid no:1的位置98的位置处包含trp98gly突变，其中所述寨卡病毒源自包含根据seq idno:2的基因组序列的毒株prvabc59。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒与毒株prvabc59的区别在于seq idno:1的位置98处的trp98gly突变。

13、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述病毒经化学灭活。在一些实施方案中，将病毒用洗涤剂、福尔马林、β-丙内酯(bpl)、二元乙胺(bei)、乙酰基乙烯亚胺、亚甲蓝和补骨脂素中的一者或多者化学灭活。在一些实施方案中，将病毒用福尔马林化学灭活。

14、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物还包含佐剂。在一些实施方案中，所述佐剂选自铝盐、toll样受体(tlr)激动剂、单磷酰基脂质a(mla)、合成脂质a、脂质a模拟物或类似物、mla衍生物、细胞因子、皂苷、胞壁酰二肽(mdp)衍生物、cpg寡核苷酸、革兰氏阴性细菌的脂多糖(lps)、聚磷腈、乳剂、病毒体、螺旋体、聚(丙交酯-共-乙交酯)(plg)微颗粒、泊洛沙姆颗粒、微颗粒、脂质体、完全弗氏佐剂(cfa)和/或不完全弗氏佐剂(ifa)。在一些实施方案中，所述佐剂是铝盐。在一些实施方案中，所述佐剂选自由以下组成的组：明矾、磷酸铝、氢氧化铝、硫酸铝钾和铝胶85。在一些实施方案中，至少75％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的所述一种或多种抗原吸附至佐剂。

15、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是低剂量或中等剂量的疫苗或免疫原性组合物(例如，含有约1μg至约5μg抗原或2μg抗原或5μg抗原)。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是高剂量的疫苗或免疫原性组合物(例如，含有约10μg抗原)。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物含有约1μg至约25μg的所述一种或多种抗原，特别是2μg、5μg或10μg或者特别是10μg的所述一种或多种抗原。在某些此类实施方案中，所述抗原是纯化的灭活全病毒，如具有突变的寨卡病毒，所述突变是如本文所述的seq id no:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处的色氨酸至甘氨酸取代。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处包含trp98gly突变，其中所述寨卡病毒源自毒株prvabc59。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seqid no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处包含trp98gly突变，其中所述寨卡病毒源自包含根据seq id no:2的基因组序列的毒株prvabc59。在某些此类实施方案中，所述寨卡病毒是噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含约0.1μg至约100μg的寨卡病毒抗原或env。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是无佐剂的。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述寨卡病毒是克隆分离株。在一些实施方案中，所述克隆分离株基本上不含一种或多种外来因子(例如，不含可与亲本毒株共同纯化的一种或多种外来因子)。

16、本公开的其他方面涉及一种包含寨卡病毒的疫苗，所述寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处具有突变。在一些实施方案中，所述疫苗包含纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处包含trp98gly突变，其中所述寨卡病毒源自毒株prvabc59。在一些实施方案中，所述疫苗包含纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处包含trp98gly突变，其中所述寨卡病毒源自包含根据seq id no:2的基因组序列的毒株prvabc59。在某些此类实施方案中，所述寨卡病毒是噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株。

17、本公开的其他方面涉及一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含：a)铝盐佐剂；和b)纯化的灭活全寨卡病毒，其中所述寨卡病毒含有非人细胞适应突变，并且其中所述非人细胞适应突变是在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处的trp98gly突变。

18、本公开的其他方面涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者施用治疗有效量的本文所述的疫苗或免疫原性组合物中的任一种。

19、本公开的其他方面涉及一种用于在有需要的人受试者中诱导免疫应答的方法，所述方法包括向所述人受试者施用免疫原性量的本文所述的疫苗或免疫原性组合物中的任一种。

20、在一个方面，本公开涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者施用所述疫苗或免疫原性组合物。

21、在一个方面，本公开涉及一种用于在有需要的人受试者中诱导针对寨卡病毒抗原的免疫应答的方法，所述方法包括向所述人受试者施用所述疫苗或免疫原性组合物。

22、在一个方面，本公开涉及一种预防有需要的人受试者的寨卡病毒疾病的方法，所述方法包括向所述人受试者施用所述疫苗或免疫原性组合物。在这种情况下，所述疾病涉及轻度发热、斑状丘疹、结膜炎和关节痛。此外，寨卡病毒是嗜神经性黄病毒，可潜在引起中枢神经系统内的疾病和格林-巴利综合征(gbs)。

23、在一个方面，本公开涉及一种预防有需要的胎儿或新生儿的寨卡病毒疾病的方法，所述方法包括向怀孕的人受试者或打算怀孕的人受试者或有生育潜力的女性施用所述疫苗或免疫原性组合物。在这种情况下，寨卡疾病涉及胎儿和新生儿的严重后果。与寨卡病毒感染相关的一系列先天畸形(称为先天性寨卡综合征(czs))包括重度小头畸形伴有颅骨部分塌陷、大脑皮层具有皮层下钙化、黄斑瘢痕和局灶性色素性视网膜斑点、先天性挛缩和明显早期肌张力过高伴有锥体束外受累的症状。

24、在一个方面，本公开涉及一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物用于治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者的寨卡病毒感染的方法中、用于在有需要的人受试者中诱导针对寨卡病毒抗原的免疫应答的方法中以及用于预防有需要的人受试者、胎儿或新生儿的寨卡病毒疾病的方法中。

25、在一个方面，本公开涉及所述疫苗或免疫原性组合物在制造用于治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者的寨卡病毒感染的方法、用于在有需要的人受试者中诱导免疫应答的方法以及用于预防有需要的人受试者、胎儿或新生儿的寨卡病毒疾病的方法的药剂中的用途。

26、在本公开的含义内，治疗包括单个人受试者的治疗和人受试者群体的治疗。人受试者群体被认为涵盖了多于一个个体例如2个或更多个个体的治疗。

27、因此，本公开的某些方面涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以第一(初免)和第二(加强)施用约1至约16周的间隔进行施用，并且其中所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述加强施用后14和/或28天在至少20名未感染黄病毒的人受试者和/或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的大于300、或大于500、或大于1000、或大于1500、或大于2000、或大于3000的几何平均中和抗体滴度。

28、因此，本公开的某些方面涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以第一(初免)和第二(加强)施用约1至约16周的间隔进行施用，并且其中所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述加强施用后28天在至少20名未感染黄病毒的人受试者和/或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定比所述初免施用后28天诱导的几何平均中和抗体滴度高至少10倍、或至少15倍、或至少20倍、或至少25倍的几何平均中和抗体滴度。因此，加强施用提供负责长期保护的极高几何平均中和抗体滴度。

29、因此，本公开的某些方面涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂或初免施用进行施用，并且其中所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述单剂或初免施用后14和/或28天在至少20名未感染黄病毒的人受试者和/或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的大于10、或大于50、或大于100、或大于200、或大于250的几何平均中和抗体滴度。高几何平均中和抗体滴度指示保护作用的早期开始，这在爆发情况下或旅行者在距离施用疫苗或免疫原性组合物的短时间内访问流行地区时是有益的。

30、在本公开的含义内，prnt是指如先前所描述通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的人受试者中的寨卡病毒中和抗体滴度(参见sun,w.等人protection of rhesus monkeysagainst dengue virus challenge after tetravalent live attenuated dengue virusvaccination.j.infect.dis.193,1658–1665(2006)。muthumani k,griffin bd,agarwals,等人in vivo protection against zikv infection and pathogenesis throughpassive antibody transfer and active immunisation with a prmenv dnavaccine.npj vaccines 2016；1:16021)。

31、在本公开的含义内，尤其应认为人受试者中的gmt值如下进行测量。在zika prnt测定中，将人血清从1:5至1:10,240进行2倍连续稀释，并与等体积的经稀释的寨卡病毒(zikv)(prvabc59)混合以获得1:10至1:20,480的最终稀释度。在2℃-8℃下进行中和20±2小时，然后使用血清/病毒混合物来接种vero e6细胞。病毒吸附在37℃±2℃在湿度和co2下进行60±10分钟，然后添加甲基纤维素覆盖层。将经感染的细胞在37℃±2℃在湿度和co2下孵育72±2小时。通过使用结晶紫染色使噬斑可视化，并使用ctl(cellulartechnology limited)阅读器进行计数。百分之五十的中和滴度(prnt50)的确定是基于与没有血清的病毒对照的病毒噬斑相比，在血清存在下病毒噬斑的减少百分比，并通过线性回归进行计算。滴度表示使得噬斑数目减少50％的最高稀释度的倒数。通过评价与临床样品并行测试的病毒对照(靶向约60pfu/孔)、细胞对照、阳性对照(prnt50为173-658)和阴性对照(prnt50<10)来评估接受度。如果通过线性回归生成的滴定曲线的相关系数≥0.85，则接受单独样品和阳性对照结果。另外的接受度标准是基于结晶紫染色的质量和针对板或运行产生的噬斑。报告prnt50结果直至测定的起始稀释度(1:10)。高于uloq的prnt50结果将在预稀释时重复，以产生在所述测定的可定量范围内的结果。来自预稀释样品的结果将乘以稀释因子以产生最终结果。

32、在本公开的含义内，血清阳性率被定义为如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的滴度≥10；寨卡病毒血清阴性人受试者是如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的滴度<10的受试者，血清转化被定义为：寨卡病毒血清阴性人受试者(滴度<10)在疫苗接种后如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定具有滴度≥10；如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的结果<10被分配5的滴度；如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的介于10(检测限)与26(定量下限)之间的滴度被分配13的值。

33、本公开的未感染黄病毒的人受试者被定义为如通过基于反应性抗体的测定法(luminex)所测量，没有针对一组黄病毒的可检测血清抗体的人受试者。黄病毒筛选测定是基于luminex平台以同时检测同一样品中的多种靶抗原。这种基于珠粒的测定是灵敏的、特异性的且可重复的。对于本公开，所靶向的抗原是寨卡、登革热、黄热病、jev、usuv、slev和wnv。由于黄病毒之间的交叉反应性，当前抗原组将有助于检测任何先前的黄病毒暴露。关于luminex概念的参考文献是：dias d,van doren j,schlottmann s,kelly s,puchalskid,ruiz w,boerckel p,kessler j,antonello jm,green t,brown m,smith j,chirmulen,barr e,jansen ku,esser mt.2005.optimization and validation of amultiplexedluminex assay to quantify antibodies to neutralizing epitopes on humanpapillomaviruses 6,11,16,and 18.clin.diagn.lab.immunol.12:959–969[pmc freearticle][pubmed].ayouba a等人development of a sensitive and specificserological assay based on luminex technology for detection of antibodies tozaire ebola virus.j clin microbiol.2017年12月28日；55(1):165-176.doi:10.1128/jcm.01979-16。

34、在本公开的含义内，地方病被定义为如由疾病控制和预防中心定义的具有感染风险的地区，如例如截至2018年3月，即：亚洲：孟加拉国、缅甸(burma)(缅甸(myanmar))、柬埔寨、印度、印度尼西亚、老挝、马来西亚、马尔代夫、巴基斯坦、菲律宾、新加坡、泰国、东帝汶(timor-leste)(东帝汶(east timor))、越南。太平洋岛屿：斐济、马绍尔群岛、巴布亚新几内亚、萨摩亚、所罗门群岛、汤加。加勒比地区：安圭拉岛；安提瓜岛和巴布达岛；阿鲁巴岛；巴巴多斯岛；博内尔岛；英属维尔京群岛；古巴；库拉索岛；多米尼加岛；多米尼加共和国；格林纳达；海地；牙买加；蒙特塞拉特岛；波多黎各自由联邦，美国领土；萨巴岛；圣基茨和尼维斯；圣卢西亚岛；法属圣马丁；圣文森特和格林纳丁斯；圣尤斯特歇斯；荷属圣马丁；特立尼达和多巴哥；特克斯和凯科斯群岛；美属维尔京群岛。北美洲：墨西哥；中美洲：伯利兹、哥斯达黎加、萨尔瓦多、危地马拉、洪都拉斯、尼加拉瓜、巴拿马；南美洲：阿根廷、玻利维亚、巴西、哥伦比亚、厄瓜多尔、法属圭亚那、圭亚那、巴拉圭、秘鲁、苏里南、委内瑞拉；非洲：安哥拉、贝宁、布基纳法索、布隆迪、喀麦隆、佛得角、中非共和国、乍得，刚果(刚果-布拉柴维尔)、科特迪瓦、刚果民主共和国(刚果-金沙萨)、赤道几内亚、加蓬、冈比亚、加纳、几内亚、几内亚比绍、肯尼亚、利比里亚、马里、尼日尔、尼日利亚、卢旺达、塞内加尔、塞拉利昂、南苏丹、苏丹、坦桑尼亚、多哥、乌干达。这些地区可改变。

35、因此，本公开的某些方面涉及一种用于在有需要的人受试者群体中诱导免疫应答的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以第一(初免)和第二(加强)施用约1至约16周的间隔进行施用，并且其中所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述加强施用后14和/或28天在至少20名未感染黄病毒的人受试者和/或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体中诱导如通过报告基因病毒颗粒中和试验(rvp)所测定的大于300、或大于500、或大于1000、或大于1500、或大于2000、或大于3000、或大于5000、或大于10,000的几何平均中和抗体滴度。

36、因此，本公开的某些方面涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂或初免施用进行施用，并且其中所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述单剂或初免施用后14和/或28天在至少20名未感染黄病毒的人受试者和/或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过报告基因病毒颗粒中和试验(rvp)所测定的大于300、或大于500、大于1000、或大于2000的几何平均中和抗体滴度。高几何平均中和抗体滴度指示保护作用的早期开始，这在爆发情况下或旅行者在距离施用疫苗或免疫原性组合物的短时间内访问流行地区时是有益的。

37、在本公开的含义内，报告基因病毒颗粒(rvp)中和测定是指通过在96孔板中生长的vero细胞中用恒定量的zika rvp滴定血清样品来分析寨卡中和抗体滴度。rvp含有寨卡的prme蛋白(菌株sph2012)和基于登革热的海肾荧光素酶报告基因。简言之，将血清在56℃热灭活30分钟，稀释，且然后在37℃与rvp一起孵育。然后将血清/rvp混合物与vero细胞混合，并在37℃±2℃/5％co2下孵育72小时，然后使用荧光素酶底物进行检测。使用jmp11非线性4参数分析对数据进行分析，将所述数据标准化至阳性追踪对照，并报告50％有效剂量(ec50)。

38、因此，本公开的某些方面涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以第一(初免)和第二(加强)施用约1至约16周的间隔进行施用，并且其中所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述加强施用后14和/或28天在至少20名血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的血清转化率。

39、因此，本公开的某些方面涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂或初免施用进行施用，并且其中所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述单剂或初免施用后14和/或28天在至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的25％、30％、40％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％或90％的血清转化率。单剂或初免施用后高血清转化率指示保护作用的早期开始，这在爆发情况下或旅行者在距离施用疫苗或免疫原性组合物的短时间内访问流行地区时是有益的。

40、因此，本公开的某些方面涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂或初免施用进行施用，并且其中所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述单剂或初免施用后14和/或28天在至少20名未感染黄病毒的人受试者和/或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的25％、30％、40％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％或90％的血清阳性率。单剂或初免施用后高血清转化率指示保护作用的早期开始，这在爆发情况下或旅行者在距离施用疫苗或免疫原性组合物的短时间内访问流行地区时是有益的。

41、本公开的某些其他方面涉及一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的(一种)抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂或以多剂(例如在第一(初免)和第二(加强)施用中)施用，并且其中施用所述疫苗或免疫原性组合物的直到施用后7天在至少20名人受试者的人受试者群体、特别是至少20名未感染黄病毒的人受试者的群体、或特别是至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体的少于50％中诱导全身性副作用。应理解，上述方法还涉及如本文公开的疫苗或免疫原性组合物用于制造用于治疗或预防寨卡病毒感染的药剂的相应用途，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的(一种)抗原。

42、在本公开的含义内，“全身性副作用”特别是发热、头痛、疲劳、关节痛、肌痛和不适。

43、应理解，上述方法还涉及如本文公开的包含来自寨卡病毒的(一种)抗原的疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物用于治疗或预防寨卡病毒感染。

44、在一些实施方案中，所述施用是肌内或皮下施用。在一些实施方案中，所述施用包括施用间隔约1至约16周(第一(初免)和第二(加强)施用)给予的两剂的如本文所述的疫苗或免疫原性组合物(例如10μg纯化的灭活全病毒，如具有突变的寨卡病毒，所述突变是如本文所述的seq id no:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处的色氨酸至甘氨酸取代)。在某些此类实施方案中，所述寨卡病毒是噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株，特别是如本文所述。

45、本公开的以上方面涉及如本文所述的疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物用于治疗或预防有需要的人受试者的寨卡病毒感染、用于在有需要的人受试者中诱导免疫应答以及用于预防有需要的人受试者、胎儿或新生儿的寨卡病毒疾病。在一些实施方案中，所述施用是肌内或皮下施用。在一些实施方案中，所述施用包括施用间隔约1至约16周(第一(初免)和第二(加强)施用)给予的两剂的如本文所述的疫苗或免疫原性组合物(例如10μg纯化的灭活全病毒，如具有突变的寨卡病毒，所述突变是如本文所述的seq idno:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处的色氨酸至甘氨酸取代)。在某些此类实施方案中，所述寨卡病毒是噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株，特别是如本文所述。

46、本公开的以上方面涉及如本文所述的疫苗或免疫原性组合物在制造用于治疗或预防有需要的人受试者的寨卡病毒感染、用于在有需要的人受试者中诱导免疫应答以及用于预防有需要的人受试者、胎儿或新生儿的寨卡病毒疾病中的用途。在一些实施方案中，所述施用是肌内或皮下施用。在一些实施方案中，所述施用包括施用间隔约1至约16周(第一(初免)和第二(加强)施用)给予的两剂的如本文所述的疫苗或免疫原性组合物(例如10μg纯化的灭活全病毒，如具有突变的寨卡病毒，所述突变是如本文所述的seq id no:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处的色氨酸至甘氨酸取代)。在某些此类实施方案中，所述寨卡病毒是噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株，特别是如本文所述。

47、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述人受试者是怀孕的或打算怀孕的人受试者或有生育潜力的女性。

48、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述人受试者中诱导保护性免疫应答。在一些实施方案中，在所述人受试者中诱导的保护性免疫应答大于在施用含有来自缺乏至少一种非人细胞适应突变的寨卡病毒的一种或多种抗原的疫苗或免疫原性组合物的相应人受试者中诱导的保护性免疫应答。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物的施用在所述人受试者中诱导针对寨卡病毒的中和抗体的产生。在一些实施方案中，在所述人受试者中产生的中和抗体的浓度高于在施用包含来自缺乏至少一种非人细胞适应突变的寨卡病毒的一种或多种抗原的疫苗或免疫原性组合物的相应人受试者中产生的中和抗体的浓度。

49、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，通过选自皮下施用、经皮施用、真皮内施用、真皮下施用、肌内施用、经口施用、鼻内施用、经颊施用、腹膜内施用、阴道内施用、肛门施用和/或颅内施用的途径施用所述疫苗或免疫原性组合物。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物施用一次或多次。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物以第一(初免)和第二(加强)施用进行施用。在一些实施方案中，在第一(初免)施用后至少28天施用第二(加强)施用。在一些实施方案中，所述施用包括施用间隔约1至约16周(第一(初免)和第二(加强)施用)给予的两剂的如本文所述的疫苗或免疫原性组合物(例如10μg纯化的灭活全病毒，如具有突变的寨卡病毒，所述突变是如本文所述的seq id no:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处的色氨酸至甘氨酸取代)。在某些此类实施方案中，所述寨卡病毒是噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株。

50、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，将所述病毒制剂与佐剂混合。在一些实施方案中，所述佐剂选自铝盐、toll样受体(tlr)激动剂、单磷酰基脂质a(mla)、合成脂质a、脂质a模拟物或类似物、mla衍生物、细胞因子、皂苷、胞壁酰二肽(mdp)衍生物、cpg寡核苷酸、革兰氏阴性细菌的脂多糖(lps)、聚磷腈、乳剂、病毒体、螺旋体、聚(丙交酯-共-乙交酯)(plg)微颗粒、泊洛沙姆颗粒、微颗粒、脂质体、完全弗氏佐剂(cfa)和/或不完全弗氏佐剂(ifa)。在一些实施方案中，所述佐剂是铝盐。在一些实施方案中，所述佐剂选自明矾、磷酸铝、氢氧化铝、硫酸铝钾和/或铝胶85。在一些实施方案中，所述病毒制剂中的至少75％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的一种或多种抗原吸附至佐剂。

51、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述至少一种非人细胞适应突变位于寨卡病毒ns1中。在一些实施方案中，所述至少一种适应突变发生在seq idno:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处。在一些实施方案中，所述至少一种适应突变是trp98gly突变。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，与缺乏至少一种适应突变的寨卡病毒相比，所述至少一种适应突变增强遗传稳定性。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，与缺乏至少一种适应突变的寨卡病毒相比，所述至少一种适应突变增强病毒复制。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，寨卡病毒在包膜蛋白e(env)中不包含突变。

52、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述寨卡病毒群体是异质的。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述寨卡病毒群体包含寨卡病毒临床分离株。在一些实施方案中，所述寨卡病毒临床分离株来自毒株prvabc59。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述寨卡病毒群体包含先前已在细胞培养物中传代一次或多次的寨卡病毒。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述接种物包含人血清。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述接种物包含一种或多种外来因子。在一些实施方案中，所述寨卡病毒克隆分离株基本上不含所述一种或多种外来因子。

53、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述方法还包括寨卡病毒克隆分离株的一次或多次另外的噬斑纯化。在一些实施方案中，将所述寨卡病毒克隆分离株进一步噬斑纯化两次或更多次。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述方法还包括使所述寨卡病毒克隆分离株在细胞培养物中传代一次或多次。在一些实施方案中，使所述寨卡病毒克隆分离株传代两次或更多次。

54、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述方法还包括配制疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自所述寨卡病毒克隆分离株的一种或多种抗原。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是纯化的抗原疫苗或免疫原性组合物、亚单位疫苗或免疫原性组合物、灭活全病毒疫苗或免疫原性组合物或减毒病毒疫苗或免疫原性组合物。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是纯化的灭活全病毒疫苗或免疫原性组合物。在一些实施方案中，所述寨卡病毒克隆分离株经化学灭活。在一些实施方案中，将寨卡病毒克隆分离株用洗涤剂、福尔马林、β-丙内酯(bpl)、二元乙胺(bei)、乙酰基乙烯亚胺、亚甲蓝和补骨脂素中的一者或多者化学灭活。在一些实施方案中，将所述寨卡病毒克隆分离株用福尔马林化学灭活。

55、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述方法还包括将所述疫苗或免疫原性组合物与佐剂共混。在一些实施方案中，所述佐剂选自铝盐、toll样受体(tlr)激动剂、单磷酰基脂质a(mla)、合成脂质a、脂质a模拟物或类似物、mla衍生物、细胞因子、皂苷、胞壁酰二肽(mdp)衍生物、cpg寡核苷酸、革兰氏阴性细菌的脂多糖(lps)、聚磷腈、乳剂、病毒体、螺旋体、聚(丙交酯-共-乙交酯)(plg)微颗粒、泊洛沙姆颗粒、微颗粒、脂质体、完全弗氏佐剂(cfa)和不完全弗氏佐剂(ifa)。在一些实施方案中，所述佐剂是铝盐。在一些实施方案中，所述佐剂选自明矾、磷酸铝、氢氧化铝、硫酸铝钾和铝胶85。在一些实施方案中，至少75％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的所述一种或多种抗原吸附至佐剂。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含1μg至约40μg的纯化的灭活全病毒，或1μg至约30μg的纯化的灭活全病毒，或1μg至约20μg的纯化的灭活全病毒，特别是2μg、或5μg、或10μg、或15μg或20μg或特别是10μg的纯化的灭活全病毒，如具有突变的寨卡病毒，所述突变是如本文所述的seq id no:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处的色氨酸至甘氨酸取代。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含1μg至约30μg的纯化的灭活全病毒，特别是2μg、5μg或10μg、或特别是10μg的纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处包含trp98gly突变，其中所述寨卡病毒源自毒株prvabc59。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含1μg至约30μg的纯化的灭活全病毒，特别是2μg、5μg或10μg、或特别是10μg的纯化的灭活全寨卡病毒，所述纯化的灭活全寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处包含trp98gly突变，其中所述寨卡病毒源自毒株prvabc59，所述毒株prvabc59包含根据seq id no:2的基因组序列。

56、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含约0.1μg env至约100μg env。在某些此类实施方案中，所述寨卡病毒是噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是无佐剂的。

57、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述寨卡病毒克隆分离株是同质遗传群体。在一些实施方案中，所述寨卡病毒克隆分离株在包膜蛋白e(env)中不含突变。在一些实施方案中，所述寨卡病毒克隆分离株包含至少一种突变。在一些实施方案中，所述至少一种突变位于寨卡病毒非结构蛋白1(ns1)中。在一些实施方案中，所述至少一种突变发生在seq id no:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处。在一些实施方案中，所述至少一种突变是trp98gly突变。在一些实施方案中，所述至少一种突变不在包膜蛋白e(env)中。在一些实施方案中，与缺乏至少一种突变的寨卡病毒相比，所述至少一种突变增强遗传稳定性。在一些实施方案中，与缺乏至少一种突变的寨卡病毒相比，所述至少一种突变增强病毒复制。

58、本公开的其他方面涉及一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物含有来自噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株的一种或多种抗原。在一些实施方案中，所述噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株是从与包含寨卡病毒群体的接种物接触的细胞中噬斑纯化。在一些实施方案中，所述细胞是非人细胞。在一些实施方案中，所述细胞是昆虫细胞。在一些实施方案中，所述昆虫细胞是蚊子细胞。在一些实施方案中，所述细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，所述哺乳动物细胞是猴细胞。在一些实施方案中，所述猴细胞来自vero细胞系。在一些实施方案中，所述vero细胞系是who vero 10-87细胞系。

59、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述寨卡病毒群体是异质的。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述寨卡病毒群体包含寨卡病毒临床分离株。在一些实施方案中，所述寨卡病毒临床分离株来自毒株prvabc59。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述寨卡病毒群体包含先前已在细胞培养物中传代一次或多次的寨卡病毒。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述接种物包含人血清。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述接种物包含一种或多种外来因子。在一些实施方案中，所述噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株基本上不含一种或多种外来因子。

60、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，与野生型寨卡病毒相比，对所述噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株进行修饰。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株是同质遗传群体。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株在包膜蛋白e(env)中不包含突变。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株包含至少一种突变。在一些实施方案中，所述至少一种突变位于寨卡病毒非结构蛋白1(ns1)中。在一些实施方案中，所述至少一种突变发生在seqid no:1的位置98或对应于seq id no:1的位置98的位置处。在一些实施方案中，所述至少一种突变是trp98gly突变。在一些实施方案中，所述至少一种突变不在寨卡病毒包膜蛋白e(env)中。在一些实施方案中，与缺乏至少一种突变的寨卡病毒相比，所述至少一种突变增强遗传稳定性。在一些实施方案中，与缺乏至少一种突变的寨卡病毒相比，所述至少一种突变增强病毒复制。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株是非洲谱系病毒或亚洲谱系病毒。在一些实施方案中，所述噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株是亚洲谱系病毒。

61、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是纯化的抗原疫苗或免疫原性组合物、亚单位疫苗或免疫原性组合物、灭活全病毒疫苗或免疫原性组合物或减毒病毒疫苗或免疫原性组合物。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是灭活全病毒疫苗或免疫原性组合物。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，将噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株化学灭活。在一些实施方案中，将所述噬斑纯化的寨卡病毒用洗涤剂、福尔马林、β-丙内酯(bpl)、二元乙胺(bei)、乙酰基乙烯亚胺、亚甲蓝和补骨脂素中的一者或多者化学灭活。在一些实施方案中，将噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株用福尔马林化学灭活。

62、在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物还包含佐剂。在一些实施方案中，所述佐剂选自铝盐、toll样受体(tlr)激动剂、单磷酰基脂质a(mla)、合成脂质a、脂质a模拟物或类似物、mla衍生物、细胞因子、皂苷、胞壁酰二肽(mdp)衍生物、cpg寡核苷酸、革兰氏阴性细菌的脂多糖(lps)、聚磷腈、乳剂、病毒体、螺旋体、聚(丙交酯-共-乙交酯)(plg)微颗粒、泊洛沙姆颗粒、微颗粒、脂质体、完全弗氏佐剂(cfa)和不完全弗氏佐剂(ifa)。在一些实施方案中，所述佐剂是铝盐。在一些实施方案中，所述佐剂选自明矾、磷酸铝、氢氧化铝、硫酸铝钾和铝胶85。在一些实施方案中，至少75％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的所述一种或多种抗原吸附至佐剂。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物包含0.1μg至约25μg的纯化的灭活全病毒，如具有突变的寨卡病毒，所述突变是如本文所述的seq id no:1的位置98处的色氨酸至甘氨酸取代，特别是2μg、5μg或10μg、或者特别是10μg纯化的灭活全病毒或约0.1μg env至100μg env。在某些此类实施方案中，所述寨卡病毒是噬斑纯化的克隆寨卡病毒分离株。在一些实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物是无佐剂的。

63、应了解，上文和本文所述的各个实施方案的一种、一些或所有特性可组合以形成本公开的其他实施方案。本公开的这些和其他方面对于本领域技术人员将变得显而易见。通过下面的详细描述进一步描述本公开的这些和其他实施方案。

64、本发明还包括以下实施方案：

65、1.一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂或初免施用进行施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物在所述单剂或初免施用后14和/或28天在至少20名未感染黄病毒的人受试者的群体中和/或在至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的大于10、或大于50、或大于100、或大于200、或大于250的几何平均中和抗体滴度。

66、2.一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂或初免施用进行施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物在所述单剂或初免施用后14和/或28天在至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％或至少90％的血清转化率。

67、3.一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂或初免施用进行施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物在所述单剂或初免施用后14和/或28天在至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中或在至少20名未感染黄病毒的人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％或至少90％的血清阳性率。

68、4.一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自寨卡病毒的抗原，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂施用或以包括至少第一(初免)和第二(加强)施用的多剂施用进行施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者的人受试者群体或在至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体的少于50％中诱导全身性副作用。

69、5.一种治疗或预防、特别是预防有需要的人受试者群体的寨卡病毒感染的方法，所述方法包括向所述人受试者群体的个体人受试者施用所述疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物包含来自通过用于使寨卡病毒制剂灭活的方法可获得的寨卡病毒的抗原，所述方法包括：

70、(a)从一种或多种体外培养的细胞中分离所述寨卡病毒制剂，其中所述细胞用于产生所述寨卡病毒制剂，其中分离所述寨卡病毒制剂包括选自以下的一个或多个步骤：(i)深度过滤，(ii)缓冲液交换和/或稀释；(iii)离子交换色谱法；以及

71、(b)用甲醛、任选地用甲醛处理所述寨卡病毒制剂，其中如以％(w/v)计量的甲醛浓度乘以如以天数计量的使用甲醛的孵育期的数值结果是0.025至0.5。

72、6.如实施方案1至5中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物以第一(初免)和第二(加强)施用约1至约16周的间隔进行施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物在所述加强施用后14和/或28天在至少20名未感染黄病毒的人受试者的群体中和/或在至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的大于300、或大于500、或大于1000、或大于1500、或大于2000、或大于3000的几何平均中和抗体滴度。

73、7.如实施方案1至6中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物以第一(初免)和第二(加强)施用约1至约16周的间隔进行施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物在所述加强施用后14和/或28天

74、在至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、或至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的血清转化率，

75、和/或

76、在至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的群体中或在至少20名未感染黄病毒的人受试者的群体中诱导如通过噬斑减少中和试验(prnt)所测定的至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、或至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的血清阳性率。

77、8.如实施方案1至7中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于29％中诱导头痛症状。

78、9.如实施方案1至8中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的4％或更少中诱导发热，和/或33％或更少中诱导疲劳，和/或10％或更少中诱导关节痛，和/或17％或更少中诱导肌痛，和/或15％或更少中诱导不适。

79、10.如实施方案1至9中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于40％中诱导全身性副作用。

80、11.如实施方案1至10中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中与在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体中在所述初免施用后7天相比，所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天诱导

81、-疲劳减少至少40％、或减少至少45％，和/或

82、-不再发热，和/或

83、-不再肌痛，或肌痛减少至少10％、或减少至少20％或减少至少25％，和/或

84、-不再不适，或不适减少至少10％、或减少至少20％。

85、12.如实施方案1至11中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于4％或0％中诱导发热。

86、13.如实施方案1至12中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于19％中诱导疲劳。

87、14.如实施方案1至13中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于12％或少于8％中诱导肌痛。

88、15.如实施方案1至14中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于13％或10％或更少中诱导不适。

89、16.如实施方案1至15中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的20％或更少中诱导头痛症状，并且8％或更少中诱导关节痛，并且少于4％中诱导发热，并且少于19％中诱导疲劳，并且少于12％中诱导肌痛，并且少于13％中诱导不适。

90、17.如实施方案1至16中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物包含1μg至40μg剂量的所述抗原，其中所述抗原是灭活的全病毒。

91、18.如实施方案17所述的方法，所述寨卡病毒在seq id no:1的位置98处或在对应于seq id no:1的位置98的位置处具有突变。

92、19.如实施方案1至18中任一项所述的方法，其中所述抗原是纯化的，并且其中所述纯化的抗原在尺寸排阻色谱法中的主峰超过所述尺寸排阻色谱法中曲线下总面积的85％。

93、20.如实施方案1至19中任一项所述的方法，其中将所述疫苗或免疫原性组合物施用至来自任选地经历爆发的寨卡流行地区的人受试者。

94、21.如实施方案1至20中任一项所述的方法，其中将所述疫苗或免疫原性组合物施用至从寨卡非流行地区前往流行地区的人受试者。

95、22.如实施方案1至21中任一项所述的方法，其中将所述疫苗或免疫原性组合物施用至18至29岁的人受试者，特别是具有生育潜力的女性。

96、23.如实施方案1至21中任一项所述的方法，其中将所述疫苗或免疫原性组合物施用至30至49岁的人受试者，特别是具有生育潜力的女性。

97、24.如实施方案1至23中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂施用或包括至少第一(初免)和第二(加强)施用的多剂施用进行施用，其中所述疫苗或免疫原性组合物包含约5μg剂量的纯化的灭活全病毒。

98、25.如实施方案24所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于50％、或少于45％或少于40％中诱导全身性副作用，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于40％、或少于35％、或少于30％、或少于25％、或少于20％、或少于15％中诱导全身性副作用。

99、26.如实施方案24或25所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于3％或0％中诱导发热，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于4％、或少于3％、或0％中诱导发热。

100、27.如实施方案24至26中任一项所述的方法，在此所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于29％中诱导头痛，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于20％、或少于15％、或少于10％、或少于5％中诱导头痛。

101、28.如实施方案24至27中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于30％、或少于25％、或少于20％中诱导疲劳，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于20％、或少于15％、或少于10％中诱导疲劳。

102、29.如实施方案24至28中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于4％中诱导关节痛，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于5％、或少于2％、或0％中诱导关节痛。

103、30.如实施方案24至29中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的17％或更少中诱导肌痛，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于12％、或少于10％、或少于5％中诱导肌痛。

104、31.如实施方案24至30中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于10％中诱导不适，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于14％、或少于10％、或少于5％、或0％中诱导不适。

105、32.如实施方案24至31中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中与在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体中在所述初免施用后7天相比，所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天诱导

106、-全身性副作用减少至少70％、或减少至少60％、或减少至少50％、或减少至少40％、或减少至少35％、或减少至少30％，和/或

107、-发热不增加，和/或

108、-头痛减少至少80％、或减少至少70％、或减少至少60％、或减少至少50％、或减少至少45％，和/或

109、-疲劳减少至少60％、或减少至少55％、或减少至少50％、或减少至少45％、或减少至少40％，和/或

110、-关节痛不增加，或关节痛减少至少80％、或减少至少60％、或减少至少40％、或减少至少20％、或减少至少10％，和/或

111、-肌痛不增加，或肌痛减少至少70％、或减少至少60％、或减少至少40％、或减少至少20％、或减少至少10％，和/或

112、-不适不增加，或不适减少至少80％、或减少至少60％、或减少至少40％、或减少至少20％、或减少至少10％。

113、33.如实施方案1至23中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂施用或包括至少第一(初免)和第二(加强)施用的多剂施用进行施用，其中所述疫苗或免疫原性组合物包含约10μg剂量的纯化的灭活全病毒。

114、34.如实施方案33所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于50％中诱导全身性副作用，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于40％、或少于35％、或少于30％中诱导全身性副作用。

115、35.如实施方案33或34所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于4％中诱导发热，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于4％、或少于3％、或0％中诱导发热。

116、36.如实施方案33至35中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于29％、或少于25％、或少于20％、或少于15％中诱导头痛，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的20％或更少中诱导头痛。

117、37.如实施方案33至36中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的33％或更少中诱导疲劳，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于20％中诱导疲劳。

118、38.如实施方案33至37中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的10％或更少中诱导关节痛，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于5％中诱导关节痛。

119、39.如实施方案33至38中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的17％或更少中诱导肌痛，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于12％、或少于10％中诱导肌痛。

120、40.如实施方案33至39中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的15％或更少中诱导不适，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于13％、或10％或更少中诱导不适。

121、41.如实施方案33至40中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中与在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体中在所述初免施用后7天相比，所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天诱导

122、-全身性副作用减少至少40％、或减少至少35％、或减少至少30％、或减少至少25％，和/或

123、-发热不增加，或发热减少至少80％、或减少至少60％、或减少至少40％、或减少至少20％、或减少至少10％，和/或

124、-疲劳减少至少45％、或减少至少40％，和/或

125、-关节痛不增加，或关节痛减少至少65％、或减少至少60％、或减少至少40％、或减少至少20％、或减少至少10％，和/或

126、-肌痛不增加，或肌痛减少至少45％、或减少至少40％、或减少至少20％、或减少至少10％，和/或

127、-不适不增加，或不适减少至少20％、或减少至少10％。

128、42.如实施方案1至23中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物以单剂施用或包括至少第一(初免)和第二(加强)施用的多剂施用进行施用，其中所述疫苗或免疫原性组合物包含约2μg剂量的纯化的灭活全病毒。

129、43.如实施方案42所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于50％、或少于45％、或少于40％、或少于35％中诱导全身性副作用，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于40％、或少于35％中诱导全身性副作用。

130、44.如实施方案42或43所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于3％或0％中诱导发热，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于4％、或少于3％、或0％中诱导发热。

131、45.如实施方案42至44中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于29％、或少于25％、或少于20％中诱导头痛，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于20％、或少于15％中诱导头痛。

132、46.如实施方案42至45中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于30％、或少于25％中诱导疲劳，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于20％、或少于15％中诱导疲劳。

133、47.如实施方案42至46中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于4％中诱导关节痛，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于8％中诱导关节痛。

134、48.如实施方案42至47中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的17％或更少中诱导肌痛，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于12％、或少于10％中诱导肌痛。

135、49.如实施方案42至48中任一项所述的方法，其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述单剂或初免施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于10％中诱导不适，和/或其中所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体的少于13％、或少于10％、或少于5％、或0％中诱导不适。

136、50.如实施方案42至49中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物在第一(初免)和第二(加强)施用中以多剂施用，并且其中与在至少20名未感染黄病毒的人受试者或至少20名寨卡病毒血清阴性人受试者的人受试者群体中在所述初免施用后7天相比，所述施用所述疫苗或免疫原性组合物直到所述加强施用后7天诱导

137、-发热不增加，和/或

138、-疲劳减少至少50％、或减少至少45％、或减少至少40％，和/或

139、-肌痛不增加，或肌痛减少至少20％、或减少至少10％，和/或

140、-不适不增加，或不适减少至少80％、或减少至少60％、或减少至少40％、或减少至少20％、或减少至少10％。

141、51.如实施方案5至50中任一项所述的方法，其中所述细胞是非人细胞。

142、52.如实施方案51所述的方法，其中所述细胞是vero细胞。

143、53.如实施方案5至52中任一项所述的方法，其中用浓度为0.005％(w/v)至0.02％(w/v)的甲醛处理所述寨卡病毒制剂。

144、54.如实施方案5至53中任一项所述的方法，其中处理所述寨卡病毒制剂持续八至十二天。

145、55.如实施方案54所述的方法，其中处理所述寨卡病毒制剂持续十天。

146、56.如实施方案5至55中任一项所述的方法，其中在15℃至30℃的温度下处理所述寨卡病毒制剂。

147、57.如实施方案56所述的方法，其中在22℃的温度下处理所述寨卡病毒制剂。

148、58.如实施方案5至57中任一项所述的方法，所述方法还包括确定灭活的完全性的步骤(c)。

149、59.如实施方案58所述的方法，其中步骤(c)包括：

150、(i)用根据步骤(b)处理的寨卡病毒制剂接种培养的昆虫细胞，并将所述昆虫细胞孵育第一时间段，从而产生昆虫细胞上清液；

151、(ii)用(i)中产生的所述昆虫细胞上清液接种培养的哺乳动物细胞，并将所述哺乳动物细胞孵育第二时间段；以及

152、(iii)确定所述寨卡病毒制剂是否含有对所述哺乳动物细胞产生细胞病变效应的残留复制病毒。

153、60.如实施方案59所述的方法，其中所述昆虫细胞选自ccl-125细胞、aag-2细胞、rml-12细胞、c6/36细胞、c7-10细胞、ap-61细胞、a.t.grip-1细胞、a.t.grip-2细胞、a.t.grip-3细胞、um-ave1细胞、mos.55细胞、sua1b细胞、4a-3b细胞、mos.42细胞、msq43细胞、lsb-aa695bb细胞、niid-ctr细胞和tra-171细胞，如c6/36细胞。

154、61.如实施方案59或60所述的方法，其中所述第一时间段是3至7天。

155、62.如实施方案59至61中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞选自vero细胞、llc-mk2细胞、mdbk细胞、mdck细胞、atcc ccl34 mdck(nbl2)细胞、mdck 33016(如wo97/37001中所述的保藏号dsm acc 2219)细胞、bhk21-f细胞、hkcc细胞和中国仓鼠卵巢细胞(cho细胞)，如vero细胞。

156、63.如实施方案59至62中任一项所述的方法，其中所述第二时间段是3至14天。

157、64.如实施方案5至63中任一项所述的方法，所述方法还包括用焦亚硫酸钠中和所述经甲醛处理的寨卡病毒制剂的步骤(d)。

158、65.如实施方案64所述的方法，其中在甲醛处理后至少五天、至少七天、至少九天、至少11天或至少14天中和所述经甲醛处理的寨卡病毒制剂。

159、66.如实施方案1至65中任一项所述的方法，其中所述疫苗或免疫原性组合物具有小于50μg/ml的残留甲醛含量。

160、67.一种疫苗或免疫原性组合物，所述疫苗或免疫原性组合物用于如实施方案1至66中任一项所述的方法中。

161、68.疫苗或免疫原性组合物在制造用于如实施方案1至67中任一项所述的方法的药剂中的用途。