一种布鲁氏菌病疫苗、制备方法和应用与流程

本发明涉及生物，具体而言，涉及一种布鲁氏菌病疫苗、制备方法和应用。

背景技术：

1、布鲁氏菌病(布病)是一种重大的人畜共患病，从发现至今已经蔓延至各个国家，每年对养殖业的经济回报和从业人员的健康造成严重损害。疫苗接种是预防布鲁氏菌病的最有效手段，当前使用的疫苗均为减毒活疫苗，主要有a19、s2、m5等，动物接种疫苗后可有效抵御感染。但是在疫苗的接种过程中很容易出现人员暴露，因此而带来的人员感染是疫苗使用过程中急需解决的痛点。国内外学者针对上述问题已经开展了许多探索，主要集中在亚单位疫苗、灭活疫苗、dna疫苗等新型疫苗的开发。虽然新型疫苗解决了布病疫苗的安全性问题，但很少能达到预期的保护效果。因此即绝对安全又高效防护的布病疫苗的研制仍是当前急需解决的问题。

2、mrna为传染病疫苗的开发打开了新的领域，许多动物性传染病疫苗的研制也在尝试mrna疫苗的可行性。但mrna疫苗同样也面临着不可回避的瓶颈，当前mrna疫苗使用的提送载体主要为阳离子脂质体，其产能和价格是限制mrna疫苗量产的主要因素，因此很难在兽用疫苗中推广应用。

技术实现思路

1、为解决现有技术中的问题，本发明的目的之一在于提供一种布鲁氏菌病疫苗。

2、本发明的目的之二在于提供一种布鲁氏菌病疫苗的制备方法。

3、本发明的目的之三在于提供一种布鲁氏菌病疫苗或由上述的制备方法制得的布鲁氏菌病疫苗在制备预防布鲁氏菌病的产品中的应用。

4、为实现上述目的之一，本发明采用以下技术方案：

5、一种布鲁氏菌病疫苗，该疫苗包括mrna和布鲁氏菌菌影。该疫苗采用保留天然结构的布鲁氏菌菌影作为mrna的递送载体，充分利用了菌影载体的天然结构和mrna诱导产生高保护的特点。该疫苗提升了布病传统灭活疫苗保护效力又解决了mrna递送系统的瓶颈问题。

6、在本发明的一些实施例中，mrna序列包含布鲁氏菌virb8蛋白、omp19蛋白、p39蛋白的编码序列。

7、在本发明的一些实施例中，所述mrna序列包括以下结构：a1-a2-a3-a4-a5-a6-a7-a8-a9，其中a1为5’utr序列；a2和a7相同或不同，为信号肽序列；a3、a5、a8为布鲁氏菌mrna编码序列；a4为2a肽序列；a6为内部核糖体进入位点；a9为3’utr序列。

8、在本发明的一些实施例中，所述a1为牛β血红蛋白基因的5’utr序列；a2和a7相同，为牛血清免疫球蛋白e的信号肽序列；a3为virb8蛋白编码序列，a5为omp19蛋白编码序列、a8为p39蛋白编码序列；a4为p2a肽编码序列；a6为脑炎心肌炎病毒的ires序列；a9为牛β血红蛋白基因的3’utr序列。

9、在本发明的一些实施例中，5’utr的氨基酸序列如seq id no:4所示；和/或，3’utr的氨基酸序列如seq id no:5所示。

10、在本发明的一些实施例中，mrna的氨基酸序列如seq id no:9所示。

11、在本发明的一些实施例中，该布鲁氏菌菌影由布鲁氏菌a19菌株制备得到。

12、在本发明的一些实施例中，每毫升疫苗中mrna的含量为55-65μg；和/或，每毫升疫苗中布鲁氏菌菌影的含量为1.5-2.5×1010cfu。申请人通过实验发现，在上述含量区间内布鲁氏菌影对mrna的包封率最佳，每毫升疫苗mrna的含量和/或每毫升疫苗中布鲁氏菌菌影中高于或低于该区间会导致疫苗包封率低于80％。

13、在本发明的一些实施例中，所述菌株含有噬菌体裂解基因e。该基因在42℃激活后形成跨膜通道，可在渗透压作用下使细菌内容物流失，由此产生细菌空壳并最大程度保留抗原表位。

14、为实现上述目的之二，本发明采用以下技术方案：

15、一种布鲁氏菌病疫苗的制备方法，包括：将mrna和布鲁氏菌菌影彼此混合即得所述布鲁氏菌病疫苗。

16、在本发明的一些实施例中，上述混合包括：将mrna和布鲁氏菌菌影在2-8℃下以75-125r/min的速度搅拌12-16h。

17、为实现上述目的之三，本发明采用以下技术方案：

18、一种布鲁氏菌病疫苗或由上述的制备方法制得的布鲁氏菌病疫苗在制备预防布鲁氏菌病的产品中的应用。该制备方法工艺简单，操作方便，且制备得到的布鲁氏菌病疫苗具有良好的疫苗保护效力和生物安全性，适于推广应用。

19、相对于现有技术，本发明至少具有如下优点或有益效果：

20、本发明提供的一种布鲁氏菌病疫苗，采用保留天然结构的布鲁氏菌菌影作为mrna的递送载体，充分利用了菌影载体的天然结构和mrna诱导产生高保护的特点。该疫苗提升了布病传统灭活疫苗保护效力又解决了mrna递送系统的瓶颈问题。

21、本发明提供的一种布鲁氏菌病疫苗的制备方法，通过将mrna和布鲁氏菌菌影彼此混合即可得到所述布鲁氏菌病疫苗。该制备方法工艺简单，操作方便，且制备得到的布鲁氏菌病疫苗具有良好的疫苗保护效力和生物安全性，适于推广应用。

技术特征：

1.一种布鲁氏菌病疫苗，其特征在于，所述疫苗包括mrna和布鲁氏菌菌影。

2.根据权利要求1所述的布鲁氏菌病疫苗，其特征在于，所述mrna序列包含布鲁氏菌virb8蛋白、omp19蛋白、p39蛋白的编码序列。

3.根据权利要求2所述的布鲁氏菌病疫苗，其特征在于，所述mrna序列包括以下结构：a1-a2-a3-a4-a5-a6-a7-a8-a9；其中a1为5’utr序列；a2和a7相同或不同，为信号肽序列；a3、a5、a8为布鲁氏菌抗原编码序列；a4为2a肽序列；a6为内部核糖体进入位点；a9为3’utr序列。

4.根据权利要求2或3所述的布鲁氏菌病疫苗，其特征在于，所述5’utr的氨基酸序列如seq id no:4所示；和/或，所述3’utr的氨基酸序列如seq id no:5所示。

5.根据权利要求4所述的布鲁氏菌病疫苗，其特征在于，所述mrna的氨基酸序列如seqid no:9所示。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的布鲁氏菌病疫苗，其特征在于，所述布鲁氏菌菌影由布鲁氏菌a19菌株制备得到。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的布鲁氏菌病疫苗，其特征在于，每毫升疫苗中所述mrna的含量为55-65μg；和/或，每毫升疫苗中所述布鲁氏菌菌影的含量为1.5-2.5×1010cfu。

8.一种如权利要求1-7中任一项所述的布鲁氏菌病疫苗的制备方法，其特征在于，包括：将mrna和布鲁氏菌菌影混合即得所述布鲁氏菌病疫苗。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述混合包括：将mrna和布鲁氏菌菌影在2-8℃下以75-125r/min的速度搅拌12-16h。

10.一种如权利要求1-7中任一项所述的疫苗或由权利要求8-9中任一项所述的制备方法制得的疫苗在制备预防布鲁氏菌病的产品中的应用。

技术总结
本发明提出了一种布鲁氏菌病疫苗、制备方法和应用，涉及生物技术领域。该疫苗包含mRNA和布鲁氏菌菌影，该疫苗采用保留天然结构的布鲁氏菌菌影作为mRNA的递送载体，充分利用了菌影载体的天然结构和mRNA诱导产生高保护的特点。该疫苗提升了布病传统灭活疫苗保护效力又解决了mRNA递送系统的瓶颈问题。该制备方法通过将mRNA和布鲁氏菌菌影彼此混合即可得到所述布鲁氏菌病疫苗。该制备方法工艺简单，操作方便，且制备得到的布鲁氏菌病疫苗具有良好的疫苗保护效力和生物安全性，适于推广应用。

技术研发人员：贺笋,何传雨,刘梦志,赵海龙,吴冬玲,穆榕博,黄伟伟,韩瑞,师伟伟,王雨朦,冯慧云
受保护的技术使用者：天康制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16