一种负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶的制备方法及其在宫腔粘连治疗中的应用与流程

本发明属于生物医药，具体涉及一种负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶的制备方法及其在宫腔粘连治疗中的应用。

背景技术：

1、女性子宫在生理和生殖功能中起着重要的作用，正常的子宫内膜能进行自身修复与再生。但是人工流产、引产、刮宫、内分泌严重失调、子宫内感染等情况会导致子宫内膜损伤，从而破坏子宫内膜正常结构，引起组织纤维化提高，腺体减少，宫腔或(和)宫颈管部分或全部闭塞，导致宫腔粘连(iua)。宫腔粘连(iua)又称asherman综合，临床上可表现为月经量减少、闭经、精子受阻、绝经期提前、周期性下腹痛、复发性流产、不孕，以及出现胎盘植入、胎盘粘连等产科并发症，这种疾病在妇科疾病中较为严重，对育龄期女性的生育和月经都会造成严重影响，经常会使育龄期的妇女产生生育功能的障碍或月经异常等情况，且治疗之后如护理不当则很可能复发，导致再次粘连，是严重危害女性生殖健康的公共卫生问题之一。

2、宫腔粘连的治疗是目前临床面临的难题，尤其中重度宫腔粘连，现有的治疗手段效果欠佳。比如宫腔镜下粘连分离术以及术后预防粘连包括术中宫腔内放置节育器、cook球囊、再生纤维素防粘连膜等物理屏障，并结合术后使用大剂量雌激素促进子宫内膜增长，是目前iua的主要治疗方法；但是对于中重度宫腔粘连患者的治疗效果较差。目前，已有阴道栓剂、灌洗剂、口服片剂作为子宫内膜修复制剂已有报道，但其疗效有待提高，主要原因在于现有这些制剂无法保证治疗药物与内膜损伤部位紧密接触并维持长时间有效浓度。此外，由于子宫内膜黏液的快速分泌更新，导致受损子宫的腔道内治疗药物快速流失，从而无法达到有效的药物治疗浓度，这些因素成为阻碍目前制剂在子宫内膜损伤修复应用的瓶颈。因此将药物载入凝胶中可以令药物长期作用于病灶部位，减少药物的在递送中的损失和提升了药物的疗效。

3、姜黄素是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的黄色色素，姜黄和姜黄素是天然植物成分，具备药用价值，而且无明显的毒副作用。然而，虽然姜黄素的用途广泛并且药用价值较高，但是姜黄素存在难溶于水，被人体摄入后在体内吸收少、代谢速率快等，极大地限制了姜黄素的应用。

4、重组胶原蛋白在多种创伤修复疾病中均体现出了良好的疗效。研究发现，重组胶原蛋白在病灶部位可以调节疾病微环境，促进损伤组织进行修复和再生，在创伤性疾病的治疗中展现了巨大的潜能。但重组胶原蛋白直接局部应用在宫腔粘连部位重组胶原蛋白流失严重，在病灶作用时间短，治疗效果仍不理想。提升重组胶原蛋白在宫腔粘连部位治疗的效果是亟需解决的技术难题，而且目前尚未有姜黄素结合重组胶原蛋白用于宫腔粘连治疗的研究。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶的制备方法及其在宫腔粘连治疗中的应用；本发明创造性的以均质处理的姜黄素为原料，结合交联剂和重组胶原蛋白制备得到一种水凝胶，其可用于宫腔粘连的治疗，并取得了显著的技术效果。

2、为实现上述技术目的，本发明提供的技术方案如下：

3、本发明首先提供了一种负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶，由下列原料成分组成：

4、姜黄素、交联剂、重组胶原蛋白和水；原料成分中姜黄素的质量分数为0.15-1.0％，重组胶原蛋白质量分数为5～10％；交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(nhs)和n-羟基琥珀酰亚胺(edc)，其用量均为重组胶原蛋白质量的0.3-0.4％；余量为水；所述姜黄素在使用时先溶于水中，是以均质处理后的均质液添加。

5、优选的，所述水包括去离子水、注射用水、生理盐水；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺与n-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1：1；重组胶原蛋白为重组人ⅲ型胶原蛋白，优选用量为8％。

6、本发明还提供一种负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶的制备方法，包括以下步骤：

7、(1)首先称取一定量的姜黄素粉末加入到水中，经磁力搅拌、均质循环处理后得到姜黄素均质液；其中磁力搅拌的时间为1.5-2h，均质循环的次数为20-30次；

8、(2)将重组胶原蛋白原料溶解在姜黄素均质液中，搅拌均匀，形成负载姜黄素的胶原溶液；然后加入交联剂n-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀，反应一段时间得到负载姜黄素的重组胶原蛋白可吸收水凝胶，对负载姜黄素的重组胶原蛋白可吸收水凝胶切成适合透析的尺寸，得到负载姜黄素的重组胶原蛋白可吸收水凝胶块，置于磷酸盐缓冲液中进行透析交换交联剂，设定pbs渗透压和透析时间进行透析，经透析后，再对块状负载姜黄素的重组胶原蛋白可吸收水凝胶进行粉碎法制粒，再经灌装、灭菌即得负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶。

9、上述步骤(2)中，所述反应一段时间为2-6h；设置磷酸盐缓冲液的渗透压为200～500mosm/kg，透析时间为4-6天；所述磷酸盐缓冲液的ph为7.5-8；所述负载姜黄素的重组胶原蛋白可吸收水凝胶切成适合透析的尺寸为1-2cm3。

10、本发明的负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶在制备预防和治疗宫腔粘连、子宫抗纤维化以及促进子宫内膜恢复产品中的应用。

11、一种复合制剂，包括所述的负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶。

12、所述复合制剂用于制备子宫内膜各种损伤的修复产品中的用途，所述子宫内膜各种损伤的修复包括治疗宫腔粘连、子宫抗纤维化以及促进子宫内膜恢复。

13、本发明的有益效果在于：

14、(1)本发明制备的负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶生物相容性好，不会对患者病患部位以及衣物造成污染、舒适度高；而且具有抗粘连作用，在防止术后组织粘连方面具有很高的临床价值。

15、(2)本发明所使用的姜黄素，是经过均质处理，以均质液的形式添加；其目的一方面在于使得姜黄素由脂溶性变成水溶性，能够更好的被人体所吸收，增强生物利用度；另一方面是实现了基于姜黄素制备的水凝胶在宫腔粘连治疗中的应用，并且取得了显著的技术效果。

16、(3)本发明进一步限定了所述负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶中姜黄素的用量；姜黄素的用量过低，会导致负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶黏度太低，治疗宫腔粘连效果不明显；姜黄素用量过高，也会导致黏度增大，使水凝胶不利于吸收以及排出体外，对治疗宫腔粘连效果并不好。因此，姜黄素的用量至关重要，过高或过低均不利于应用，无法有效实现宫腔粘连的治疗效果。

17、(4)本发明创造性的引入姜黄素和交联剂的协同作用，促使胶原间发生交联，可以令重组胶原蛋白长期作用于病灶部位，减少重组胶原蛋白的在递送中的损失和提升了重组胶原蛋白的疗效；两者相结合有效解决了重组胶原蛋白直接局部应用在宫腔粘连部位重组胶原蛋白流失严重、在病灶作用时间短、治疗效果不理想的技术问题。

技术特征：

1.一种负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶，其特征在于，由下列成分组成：姜黄素、交联剂、重组胶原蛋白和水；

2.根据权利要求1所述的一种负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶，其特征在于，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺与n-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1：1；重组胶原蛋白为重组人ⅲ型胶原蛋白，质量分数为8％。

3.根据权利要求1所述的一种负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶，其特征在于，所述水包括去离子水、注射用水、生理盐水。

4.根据权利要求1-3任一所述的负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中磁力搅拌的时间为1.5-2h，均质循环的次数为20-30次。

6.根据权利要求4所述的负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述反应一段时间为2-6h；设置磷酸盐缓冲液的渗透压为200～500mosm/kg，透析时间为4-6天；磷酸盐缓冲液的ph为7.5-8。

7.根据权利要求4所述的负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述负载姜黄素的重组胶原蛋白可吸收水凝胶切成适合透析的尺寸为1-2cm3。

8.根据权利要求1-3任一项所述的负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶在制备预防和治疗宫腔粘连、子宫抗纤维化以及促进子宫内膜恢复产品中的应用。

9.一种复合制剂，其特征在于，包括权利要求1-3任一所述的负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶。

10.根据权利要求9所述的一种复合制剂用于制备子宫内膜各种损伤的修复产品中的用途，其特征在于，所述子宫内膜各种损伤的修复包括治疗宫腔粘连、子宫抗纤维化以及促进子宫内膜恢复。

技术总结
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种负载姜黄素的重组胶原蛋白水凝胶的制备方法及其在宫腔粘连治疗中的应用。本发明创造性的引入均质处理的姜黄素，其目的在于使得姜黄素由脂溶性变成水溶性，能够更好的被人体所吸收，增强生物利用度；同时以特定浓度结合交联剂促使胶原间发生交联，可以令重组胶原蛋白长期作用于病灶部位，减少重组胶原蛋白的在递送中的损失，并提升了重组胶原蛋白的疗效；所制备的水凝胶有效解决了重组胶原蛋白直接局部应用在宫腔粘连部位重组胶原蛋白流失严重、治疗效果不理想的技术问题；显著提升了重组胶原蛋白在宫腔粘连部位治疗的效果，而且具有抗粘连作用，在防止术后组织粘连方面具有很高的临床价值。

技术研发人员：储筠,王欣慧,翟源心,凡孝菊,钱松
受保护的技术使用者：江苏创健医疗科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15