一种蒙脱石负载益生菌药物制剂的制备方法及其应用

本发明涉及微生物医药，特别是一种蒙脱石负载益生菌药物制剂的制备方法及其应用。

背景技术：

1、肠道菌群对人类健康至关重要，很多疾病的发生与肠道微生物菌群失调密切相关，一个健康的肠道微生物区系对于维持宿主的健康很重要。益生菌的肠道定植可以有效调节肠道菌群失调。益生菌是通过定植在人体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物，通过调节宿主黏膜与免疫系统功能以及通过调节肠道内菌群平衡，进而保持肠道健康的作用。

2、益生菌对胃肠道环境比较敏感，人体内低ph的胃酸、胆盐、酶以及胃肠道的快速转运等不利条件严重影响益生菌的活性，另外，大多数益生菌治疗面临着严重的肠道病理环境，如炎症性肠病（ibd）。在炎症病理微环境中，多种免疫细胞（中性粒细胞、白细胞、炎性巨噬细胞等）高度浸润，肠道炎症环境过度激活，微生物群代谢紊乱，导致肠道硫化氢大量增加。硫化氢的增加会损伤肠道黏膜屏障以及上皮细胞，从而进一步显著影响益生菌在肠道的定殖。由于炎症的发展和肠上皮细胞的损伤，黏液受损耗尽无法代谢更新，益生菌往往无法定植到肠炎部位。此外，病理微环境中的h2s等也会抑制益生菌定植。由此，能否抵抗胃肠道的各种不利条件并且粘附到炎症肠段，来更好的发挥益生菌治疗作用。

3、为了解决这个问题，国内外大多通过多糖类、蛋白质类等保护材料将益生菌包封起来，以抵抗胃部环境，使它们不会在肠内降解，并通过包裹带正电荷的材料来增加与肠粘液的作用。然而，这些方法始终只能提供暂时的生理条件下的胃肠道保护，很难在肠道病理环境中实现优越的增殖和定植，不能达到良好的治疗疾病的作用，基于此，研发一种口服可以在肠道病理环境中实现优越的增殖和定植的益生菌药物制剂势在必行，但至今未见有公开报导。

技术实现思路

1、针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种蒙脱石负载益生菌药物制剂的制备方法及其应用，可有效解决现有技术始终只能提供暂时的生理条件下的胃肠道保护，很难在肠道病理环境中实现优越的增殖和定植，不能达到良好的治疗疾病的问题。

2、本发明解决的技术方案是，一种蒙脱石负载益生菌药物制剂的制备方法，包括以下步骤：

3、（1）制备分散的蒙脱石悬液：将100毫克蒙脱石分散到20～30ml去离子水中，搅拌24小时，于5000rpm离心5min，取上清液，得分散的蒙脱石悬液；

4、（2）制备蒙脱石纳米分散体：取分散的蒙脱石悬液20～30ml，超声细胞破碎仪中在200w功率下，处理20分钟，得纳米蒙脱石悬浮液；

5、（3）制备fe3+-蒙脱石：将2～3ml浓度0.1m的fecl3溶液滴加到20～30ml超声处理后的纳米蒙脱石悬浮液中，将悬浮液在室温下再搅拌24小时，用20～50ml去离子水洗涤3～5次，得含fe3+-蒙脱石悬液；

6、（4）取104～1010cfu/ml处于对数生长期益生菌的菌液2～3ml，于5000rpm离心8min，用2～3ml、ph7.2～7.4的pbs缓冲溶液（以下同）洗涤两次，重悬于无菌pbs缓冲溶液中，使益生菌od600为0.8～0.9，得益生菌菌液；

7、所述的益生菌是大肠杆菌nissle1917；

8、（5）制备mnt-fe@ecn：益生菌菌液和fe3+-蒙脱石悬液以体积比为1︰1～2.5，在磁力搅拌下，缓慢滴加2ml益生菌菌液到fe3+-蒙脱石悬液中，反应1～2h，得反应液，将反应液于5000rpm离心8min，用2～3mlpbs缓冲溶液洗涤两次，干燥，得蒙脱石负载益生菌药物制剂，即mnt-fe@ecn（或称fe3+-蒙脱石@ecn）。

9、所述的蒙脱石负载益生菌药物制剂可按常规方法制备成粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂的一种。

10、所述的蒙脱石负载益生菌药物制剂在制备治疗肠道疾病口服药物中的应用。

11、本发明原料丰富，制备方法简单，易操作，适于大规模生产，且所用原料均为国家食品药品监督管理局批准的药物原料，相比于市面上现有益生菌制剂，该制剂能调节肠道紊乱环境更有效地促进益生菌在肠炎等病理微环境下的存活率与定植率，从而更好地改善肠道菌群的紊乱，有利于肠道健康和炎症缓解，是益生菌药物制剂上的创新，有显著的经济和社会效益。

技术特征：

1.一种蒙脱石负载益生菌药物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的蒙脱石负载益生菌药物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求1所述的蒙脱石负载益生菌药物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求1所述的蒙脱石负载益生菌药物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.权利要求1-4任一项所述方法制备的蒙脱石负载益生菌药物制剂，可按常规方法制备成粉剂、颗粒剂、胶囊剂或片剂的一种。

6.权利要求1-4任一项所述方法制备的蒙脱石负载益生菌药物制剂在制备治疗肠道疾病口服药物中的应用。

技术总结
本发明涉及蒙脱石负载益生菌药物制剂的制备方法及其应用，可有效解决现有技术始终只能提供暂时的生理条件下的胃肠道保护，很难在肠道病理环境中实现优越的增殖和定植，不能达到良好的治疗疾病的问题，将蒙脱石分散到去离子水中，离心，取上清液，超声处理，滴入FeCl<subgt;3</subgt;溶液，室温搅拌后，去离子水洗涤，得含Fe<supgt;3+</supgt;‑蒙脱石悬液；取对数生长期益生菌的菌液，离心，PBS缓冲溶液洗涤，重悬于无菌PBS缓冲溶液中，磁力搅拌下滴加益生菌菌液到Fe<supgt;3+</supgt;‑蒙脱石悬液中反应，反应液离心，PBS缓冲液洗涤，干燥，得蒙脱石负载益生菌药物制剂。本发明原料丰富，易操作，适于大规模生产，有效地促进益生菌在肠炎等病理微环境下的存活率与定植率，改善肠道菌群紊乱。

技术研发人员：王志豪,史进进,刘军杰,张振中,葛生婵,杨佳丽
受保护的技术使用者：郑州大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15