桑提取物在制备预防和/或治疗慢性肾病的药物中的应用的制作方法

本发明属于医药领域，具体涉及桑提取物在制备预防和/或治疗慢性肾病的药物中的应用。

背景技术：

1、慢性肾病的定义为肾脏结构或功能异常≥3个月(中华肾脏病杂志2022年5月第38卷第5期)。

2、慢性肾病(chronic kidney disease,ckd)是一个全球性的公共卫生问题，发病率高达16％。流行病统计学数据显示，引起慢性肾病的主要原因为糖尿病和高血压。慢性肾损害可进一步发展为肾衰竭，不可避免地需要透析或肾移植，从而显著降低生活质量。然而，目前ckd的治疗策略主要集中在控制危险因素和缓解症状方面，例如血管紧张素转化酶抑制剂(acei)及血管紧张素ⅱ受体拮抗剂(arb)可以一定程度延缓慢性肾病的进程，但仍不能阻止其发展，并且可能伴有严重的副作用—包括咳嗽(使用acei)和严重的高钾血症，这通常限制了它们的使用。因此，任何新的可以预防和/或治疗慢性肾病的治疗方法均具有十分重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供桑提取物或其主要活性成分的药物新用途。

2、本发明所提供的桑提取物或其主要活性成分的新用途为如下(a1)-(a4)中任一所述：

3、(a1)桑提取物在制备治疗慢性肾病的药物中的应用；

4、(a2)桑提取物在制备预防慢性肾病的药物中的应用；

5、(a3)桑提取物在治疗慢性肾病中的应用；

6、(a4)桑提取物在预防慢性肾病中的应用。

7、所述慢性肾病包括糖尿病肾病或非糖尿病慢性肾病(如高血压肾病、肾小球肾炎、隐匿性肾炎、肾盂肾炎、过敏性紫癜肾炎、红斑狼疮肾炎、痛风肾、iga肾病、肾病综合征、膜性肾病、肾病综合征、多囊肾等)，即慢性肾病伴有或不伴有糖尿病。

8、进一步的，所述糖尿病为2型糖尿病。

9、所述预防和/或治疗慢性肾病体现在下述至少一方面：

10、1)改善慢性肾病患者的肾功能指标；

11、2)改善慢性肾病患者的氧化/硝化应激及炎症状态；

12、3)降低慢性肾病患者的肾脏炎症因子水平；

13、4)改善慢性肾病患者肾脏病理改变；

14、5)改善慢性肾病患者肾脏纤维化；

15、6)降低慢性肾病患者血肌酐的趋势；

16、7)缓解慢性肾病患者肾脏体重比增大的趋势；

17、8)改善慢性肾病患者的肾脏炎症。

18、进一步的，所述慢性肾病为糖尿病肾病；

19、改善糖尿病肾病患者的肾功能指标具体表现在下述至少一方面：降低糖尿病肾病患者血尿素氮的水平；降低糖尿病肾病患者尿白蛋白和尿β2微球蛋白含量。

20、改善糖尿病肾病患者的氧化/硝化应激具体体现在下述至少一方面：升高糖尿病肾病患者血清总抗氧化能力(t-aoc)和超氧化物歧化酶(sod)水平的趋势，显著降低血清诱导型一氧化氮合酶(inos)和一氧化氮(no)水平，减轻肾脏线粒体病变，缓解线粒体损伤。

21、改善糖尿病肾病患者的炎症状态具体体现在：显著降低糖尿病肾病患者血清il-1β和mcp-1水平。

22、肾脏炎症因子包括tnfα、il-1β、il-6以及c反应蛋白(crp)。

23、肾脏病理改变包括下述至少一方面：肾小球结节性硬化(至少有一处确定的kw结节)，不同程度的肾间质纤维化和炎症、血管玻璃样变和硬化，以及肾小管上皮细胞萎缩。

24、所述肾脏纤维化包括肾小球纤维化和肾小囊纤维化。

25、进一步的，所述慢性肾病为非糖尿病慢性肾病。

26、改善非糖尿病慢性肾病患者的肾功能指标具体表现在：降低慢性肾病患者血清肌酐、血清尿素氮以及血清尿酸的水平。

27、改善非糖尿病慢性肾病患者的氧化应激具体表现在：提高慢性肾病患者sod、cat和gss的表达，降低mda的水平，减轻肾脏线粒体病变，缓解线粒体损伤。

28、改善非糖尿病慢性肾病患者的肾脏纤维化具体表现在：改善慢性肾病患者纤维化相关蛋白的表达；所述纤维化相关蛋白包括下述至少一种：col1a1、α-sma(α-平滑肌肌动蛋白)、fibronectine、col4a1。

29、改善非糖尿病慢性肾病患者的肾脏炎症具体体现在：抑制肾脏白细胞和巨噬细胞的浸润。

30、肾脏病理改变包括下述至少一方面：肾小管萎缩或扩张，刷状缘丢失，肾脏基底膜不均匀增厚，足细胞融合或消失。

31、本发明还保护桑提取物或其主要活性成分的应用，为如下(b1)-(b12)中任一所述：

32、(b1)制备改善慢性肾病患者的肾功能指标的产品；

33、(b2)制备改善慢性肾病患者的氧化/硝化应激及炎症状态的产品；

34、(b3)制备降低慢性肾病患者肾脏炎症因子水平的产品；

35、(b4)制备改善慢性肾病患者肾脏病理改变的产品；

36、(b5)制备改善慢性肾病患者肾脏纤维化的产品；

37、(b6)制备降低慢性肾病患者血肌酐的趋势的产品；

38、(b7)改善慢性肾病患者的肾功能指标；

39、(b8)改善慢性肾病患者的氧化/硝化应激及炎症状态；

40、(b9)降低慢性肾病患者肾脏炎症因子水平；

41、(b10)改善慢性肾病患者肾脏病理改变；

42、(b11)改善慢性肾病患者肾脏纤维化。

43、(b12)降低慢性肾病患者血肌酐的趋势。

44、所述产品为药物或药物制剂。

45、所述桑提取物为桑枝提取物、桑白皮提取物和/或桑叶提取物。或，所述桑提取物也可以采用市售的桑枝总生物碱片(国药准字z20200002)的形式提供。

46、桑提取物可参照cn 113143997 a中记载的方法进行制备，具体制备方法包括以下步骤：

47、1)制备桑科植物粗提液；

48、2)将所述粗提液经阳离子树脂和/或任选的阴离子树脂分离，得到所述桑提取物。

49、所述方法还可包括下述步骤：

50、3)对步骤2)的树脂流出液进行醇沉处理，收集上清液；

51、4)对所述上清液进行浓缩干燥处理。

52、所述方法还可包括下述步骤：将步骤2)的树脂流出液进行浓缩干燥处理。

53、所述桑提取物作用于人或哺乳动物。

54、所述桑科植物可选自广东桑、鲁桑、白桑、细齿桑、山桑或杂交桑，所述杂交桑优选为粤桑11号、桂桑优62号或桑特优2号。可以使用所述植物的叶、根、枝、皮、芽、茎、果实等各部位。

55、在本发明的一种实施方式中，所述桑提取物主要包括生物碱，还包括多糖、黄酮和氨基酸。

56、优选地，所述生物碱包含1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin或dnj)、n-甲基-1-脱氧野尻霉素(n-methly-1-deoxynojirimycin)、荞麦碱(fagomine或fag)、3-表荞麦碱(3-epi-fagomine)、1,4-双脱氧-1,4-亚氨基-d-核糖醇(1,4-dideoxy-1，4-imino-d-arabinitol或dab)、打碗花精b2(calysteginb2)、打碗花精c1(calysteginc1)、2-氧-(α-d-半乳吡喃糖基)-1-脱氧野尻霉素(2-o-(α-d-galactopyranosyl)-1-deoxynojirimycin)、6-氧-(β-d-吡喃葡萄糖)-1-脱氧野尻霉素(6-o-(β-d-glucopyranosyl)-1-deoxynojirimycin)、1，4-双脱氧-1，4-亚胺-(2-氧-β-d-吡喃葡萄糖)-d-阿拉伯糖醇(1,4-dideoxy-1,4-imino-(2-o-β-d-glucopyranosyl)-d-arabinitol)中的至少一种。

57、其中，dnj的重量百分比不低于总生物碱的50％。

58、所述桑提取物中，各组分重量含量为

59、

60、优选地，基于所述桑提取物，各组分重量含量为

61、

62、优选地，基于所述桑提取物，各组分重量含量为

63、

64、更优选地，基于所述桑提取物，各组分重量含量为

65、

66、更优选的，基于所述桑提取物，各组分重量含量为：

67、

68、

69、更优选的，基于所述桑提取物，各组分重量含量为：

70、

71、在一种实施方式中，所述桑提取物的制备包括以下步骤：制备粗提液；任选地，经阳离子树脂和/或阴离子树脂分离；任选地，对树脂流出液进行醇沉处理；以及任选地，浓缩干燥处理。优选地，所述桑提取物的制备包括以下步骤：步骤1)：制备粗提液；步骤2)：经阳离子树脂和/或任选的阴离子树脂分离；任选的步骤3)：对步骤2)的树脂流出液进行醇沉处理；任选的步骤4)浓缩干燥处理。

72、在一种实施方式中，所述桑提取物按照以下步骤制备：将桑枝、桑叶或桑白皮粉碎，用水和/或醇溶液或酸水加热回流提取，溶剂量为原药材的3-20倍，重复提取1-3次，合并提取液，浓缩，上阳离子交换树脂，水(优选为蒸馏水)洗尽不吸附的杂质，用0.2-3n氨水洗脱，洗脱液浓缩上阴离子交换树脂，收集不吸附的部分，加入乙醇，沉淀去除杂质，离心，清液浓缩(优选减压浓缩)干燥(优选喷雾干燥或冷冻干燥)，得提取物。

73、在一种实施方式中，所述桑提取物按照以下步骤制备：将桑枝、桑叶或桑白皮粉碎，用水和/或醇溶液或酸水加热回流提取，溶剂量为原药材的3-20倍，重复提取1-3次，合并提取液，浓缩，上阳离子交换树脂，水(优选为蒸馏水)洗尽不吸附的杂质，用0.2-3n氨水洗脱，洗脱液浓缩上阴离子交换树脂，收集不吸附的部分，浓缩(优选减压浓缩)或干燥(优选喷雾干燥或冷冻干燥)，得提取物。

74、在一种实施方式中，所述桑提取物按照以下步骤制备：将桑枝、桑叶或桑白皮粉碎，用水和/或醇溶液或酸水加热回流提取，溶剂量为原药材的3-20倍，重复提取1-3次，合并提取液，浓缩，上阳离子交换树脂，水(优选为蒸馏水)洗尽不吸附的杂质，用0.2-3n氨水洗脱，洗脱液浓缩(优选减压浓缩)或干燥(优选喷雾干燥或冷冻干燥)，得提取物。

75、在一种实施方式中，所述桑提取物按照以下步骤制备：将桑枝、桑叶或桑白皮粉碎，用水加热回流提取，溶剂量为原药材的3-20倍(优选为4-15倍，更优选4-12倍)，重复提取1-3次(提取时间优选为每次0.5-3h，更有选为每次1-2h)，合并提取液，浓缩，上阳离子交换树脂，水(优选为蒸馏水)洗尽不吸附的杂质，用0.2-3n氨水洗脱，洗脱液上阴离子交换树脂，收集不吸附的部分(即阴离子树脂流出液)，加入乙醇，沉淀去除杂质，离心，清液浓缩(优选减压浓缩)或干燥(优选喷雾干燥或冷冻干燥)，得提取物。

76、优选地，在阳离子树脂装柱后，按照酸性溶液洗、碱性溶液洗、酸性溶液洗的顺序进行活化。优选地，碱性溶液洗至洗出液ph为8.0-9.5，优选为8.5-9.5；优选地，所述碱性溶液选自氨水溶液、氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液或碳酸钠溶液；优选地，所述碱性溶液的浓度为0.5-4mol/l。优选地，酸性溶液洗至洗出液ph为3.0-7.0，优选为4.5-6.5。优选地，所述酸性溶液选自盐酸溶液(浓度可为1.5-2mol/l)、磷酸溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。任选地，所述阳离子树脂经最后一次酸性溶液洗后还可以使用3-5倍柱体积的去离子水冲洗。

77、优选地，所述阳离子树脂为732型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂、002sc型强酸性苯乙烯系阳离子树脂、734型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂、d001型大孔强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂或d113型大孔弱酸性阳离子树脂。

78、优选地，所述阳离子树脂的用量与植物原材料投料重量比为1:2-20(更优选的所述阳离子树脂的用量与植物原材料投料重量比为1：2-7)。上样植物粗提液至阳离子树脂后，用洗脱剂对上样后的阳离子树脂进行洗脱，优选地，所述洗脱剂的浓度为0.5-2.5mol/l。优选地，洗脱剂流速为5-10bv/h，更优选为5-6bv/h。检测阳离子柱流出液的ph>7时收集洗脱液，将收集液直接过阴离子柱纯化。

79、优选地，在阴离子树脂装柱后，按照碱性溶液洗、酸性溶液洗、碱性溶液洗的顺序进行活化。优选地，碱性溶液洗至洗出液ph为8.0-9.5，优选为8.5-9.5；优选地，所述碱性溶液选自氨水溶液、氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液或碳酸钠溶液；优选地，所述碱性溶液的浓度为0.5-4mol/l。优选地，酸性溶液洗至洗出液ph为3.0-7.0，优选为3.5-4.5。优选地，所述酸性溶液选自盐酸溶液(浓度可为1.5-2mol/l)、磷酸溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。

80、优选地，所述阴离子树脂为711型强碱性苯乙烯系阴离子树脂、717型强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂，d201型大孔强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂或d218型大孔强碱性丙烯酸系阴离子交换树脂。优选地，所述阴离子树脂的用量与植物原材料投料重量比为1:1-32(更优选的所述阴离子树脂的用量与植物原材料投料重量比为1：5-16)。当液体流出阴离子树脂时开始收集(优选收集ph大于8的流出液)。优选地，当收集液的体积达到植物原材料投料重量的0.1-5倍时，停止收集。

81、优选地，醇沉处理所用的乙醇与植物原材料投料重量比为1:20-300(更优选为1：20-50)。醇沉处理中，搅拌速度为40-500rpm。醇沉处理的时间为12-24h。

82、进一步的，所述醇沉处理前，还包括将阴离子树脂流出液进行离心除杂或微滤膜过滤除杂，再进行反离子渗透膜浓缩的步骤。浓缩后的液体比重可为1.1-1.25。

83、优选地，所述药物还包括药学上可接受的载体。所述载体为符合用药途径或给药方式的对人体无毒害作用的非活性成分。所述载体可以是固体或液体辅料。固体辅料，例如，包括微晶纤维素、甘露醇、乳糖、预胶化淀粉，低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮，羧甲基淀粉钠、阿斯巴甜、磷酸氢钙、乳酸钠、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钠、明胶、黄原胶、聚维酮、淀粉、硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠和滑石粉；液体辅料，例如，包括水、乙醇、糖浆和甘油。

84、优选地，所述药物为口服给药剂型；进一步优选地，所述药物为片剂、胶囊剂、口服溶液剂、口服乳剂、丸剂、颗粒剂、糖浆剂和散剂。

85、与现有技术相比，本发明具有以下优点：

86、本发明提供的特定组成成分的桑提取物能够效果很好的治疗包括糖尿病肾病在内的慢性肾病。