一种积雪草总苷脂质体凝胶剂及其制备方法和抗皮肤癌应用

本发明属于生物医药领域。更具体地，涉及一种积雪草总苷脂质体凝胶剂及其制备方法和抗皮肤癌应用。

背景技术：

1、积雪草是伞形科植物积雪草centella asiatica(l.)urb的干燥全草，具有清热利湿，解毒消肿的功效，可用于治疗湿热黄疸、中暑腹泻、石淋血淋、痈肿疮毒和跌扑损伤。积雪草从古至今一直被用于治疗临床上的多种疾病，我国古代的一些医药典籍也有积雪草的相关记录，而在现代，积雪草也被广泛用于临床上治疗慢性肾脏病、糖尿病肾病、恶性肠梗阻、创面愈合和局限性硬皮病等。经分析研究，积雪草中的化学成分主要包括：氨基酸及其衍生物类、生物碱类、类脂化合物、糖和苷类化合物、三萜类化合物、黄酮类化合物和甾体类化合物等，其中，三萜类化合物是主要的药效成分。药理研究证实，积雪草提取物具有抗肿瘤、抗炎、保护神经系统功能、促进伤口愈合、抑制瘢痕增生和修复皮肤损伤等活性。

2、积雪草总苷是从积雪草中提取得到的皂苷类物质的总称(包括积雪草苷和羟基积雪草苷)，在临床上主要被用于治疗皮肤损创伤和修复瘢痕。

3、另外，积雪草总苷常用透皮制剂为积雪苷霜软膏，如用积雪草总苷联合曲尼司特治疗局限性硬皮病，能明显改善机体免疫功能，改善相关症状；用积雪苷霜软膏联合积雪苷片治疗肛肠病术后患者，能显著促进患者的创面愈合；用650nm强脉冲光联合积雪苷霜软膏治疗痤疮萎缩性瘢痕有较好的临床效果；用积雪苷霜软膏治疗眼镜蛇咬伤局部创面，有较好的临床疗效，并可改善全身炎症反应。而积雪草苷和羟基积雪草苷分子量均较大，在水中的溶解度小，logp(油水分配系数)值偏大，不容易透过皮肤屏障，其在体内的透皮吸收性能可能较差。角质层是阻碍药物透皮吸收的主要皮肤屏障，在研发透皮给药制剂时，常通过各种物理法(微针法、离子导入法)、化学法(添加透皮吸收促进剂)和药剂学法(研发新型经皮给药制剂)，促进药物的吸收，增加药物在皮肤的滞留和减轻毒副作用。由于物理法和化学法都不可避免地对皮肤有一定的刺激性或不同程度地破坏皮肤角质层，因此，通过研发新型经皮给药制剂(如微乳、脂质体等)，来改善药物的经皮渗透吸收性能是目前药剂学上的一个重要的研究方向。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷和不足，拓展积雪草总苷的应用，并解决积雪草总苷分子量大、在水中的溶解度小、不容易透过皮肤屏障、在体内的透皮吸收性能可能较差，而致使治疗效果差的问题，提供一种积雪草总苷脂质体凝胶剂及其制备方法和应用。

2、本发明的第一个目的是提供包括积雪草苷和羟基积雪草苷的积雪草总苷在制备抗皮肤癌药物中的应用。

3、本发明的第二个目的是提供一种积雪草总苷脂质体凝胶剂。

4、本发明的第三个目的是提供所述积雪草总苷脂质体凝胶剂在抗皮肤癌中的应用。

5、本发明上述目的通过以下技术方案实现：

6、本发明的研究显示，包括积雪草苷和羟基积雪草苷的积雪草总苷对皮肤癌(黑色素瘤)的抑制作用显著优于积雪草苷。

7、因此，本发明要求保护包括积雪草苷和羟基积雪草苷的积雪草总苷在制备抗皮肤癌药物中的应用。

8、优选地，积雪草苷和羟基积雪草苷的质量比为1:1.5～2。

9、优选地，所述积雪草总苷中积雪草苷和羟基积雪草苷的总含量为55％～95％。

10、本发明还开发了一种抗皮肤癌的积雪草总苷脂质体凝胶剂，对积雪草总苷制备成脂质体凝胶剂进行配方和工艺的研究，最终得到的积雪草总苷脂质体凝胶剂透皮吸收性能显著提升，抗皮肤癌(黑色素瘤)作用显著提升。

11、本发明的积雪草总苷脂质体凝胶剂，按重量百分比计包括如下组分：积雪草总苷1％～5％、卵磷脂0.1％～0.5％、胆固醇0.02％～0.1％、卡波姆940或海藻酸钠1％～5％、甘油10％～20％、三乙醇胺2％～4％、无水乙醇5％～20％和纯化水50％～75％。

12、优选地，所述积雪草总苷中积雪草苷和羟基积雪草苷总含量为55％～95％；所述卵磷脂为大豆或蛋黄来源，其中pc(磷脂酰胆碱)含量为20％～90％。

13、优选地，上述积雪草总苷脂质体凝胶剂按重量百分比计包括如下组分：积雪草总苷2％、蛋黄卵磷脂0.15％、胆固醇0.03％、卡波姆940 1.5％、甘油17.5％、三乙醇胺4％、无水乙醇5％和纯化水69.82％。

14、更优选地，所述积雪草总苷中积雪草苷和羟基积雪草苷总含量为85％，所述蛋黄卵磷脂中pc含量为80％。

15、本发明提供一种制备上述积雪草总苷脂质体凝胶剂的方法，包括以下步骤：

16、s1.将积雪草总苷、卵磷脂和胆固醇，加入无水乙醇使其溶解，得澄清溶液；

17、s2.将上述溶液滴加至搅拌状态的纯化水中，搅拌得到积雪草脂质体溶液；

18、s3.取卡波姆940或海藻酸钠，加甘油使其润湿，再加无水乙醇和纯化水使其溶胀，得空白凝胶；

19、s4.取上述积雪草脂质体溶液，加至空白凝胶中，搅拌均匀，再加三乙醇胺，搅拌均匀，得积雪草总苷脂质体凝胶剂。

20、优选地，步骤s1中使用超声溶解。

21、优选地，步骤s2中的搅拌条件为：25～50℃下搅拌2～6小时。

22、更有选地，步骤s2中的搅拌条件为：40℃下搅拌4小时。

23、本发明还提供上述积雪草总苷脂质体凝胶剂在抗皮肤癌中的应用。

24、优选地，所述皮肤癌为黑色素瘤。

25、更优选地，所述黑色素瘤为皮肤黑色素瘤细胞b16f10。

26、本发明具有以下有益效果：

27、本发明将包括积雪草苷和羟基积雪草苷的积雪草总苷，用于制备抗皮肤癌(黑色素瘤)的积雪草总苷脂质体凝胶剂，对黑色素瘤细胞具有很好的抑制增殖作用，且脂质体是具有磷脂双分子层结构的微型囊泡，其组成和结构与生物膜类似，具有两亲性和膜流动性，可通过增加角质层的湿化和水合作用，改变角质层的通透性来促进药物的经皮吸收。脂质体中的磷脂与皮肤角质层的脂质有高度相容性，能相互融合，一方面起到降低皮肤角质层的屏障作用，另一方面磷脂与脂质融合，发生生物转化，使得以脂质体为载体的药物易在皮肤角质层内积累，形成药物储库，被脂质体包裹的药物可持续释放，并更好地透过角质层，进而对病变部位起到治疗作用，极大地提高治疗效果。脂质体凝胶剂是将脂质体混悬液分散在高分子凝胶基质中的新型凝胶剂，凝胶剂可以降低脂质体磷脂双分子层的流动性，一定程度上减少药物的流失，对脂质体产生稳定作用并增加药物的稳定性，凝胶剂与脂质体结合，可增强药物在皮肤的滞留性能，提高药物生物利用度，降低给药频率，能增强药物在皮肤上的渗透，并减少剂量相关的副作用，提高治疗效果。

28、本发明的积雪草总苷脂质体凝胶剂，经包封率和离体透皮实验测定，药物包封率为90.80％，经皮渗透吸收性能良好，优于普通凝胶剂；并经体外mtt(噻唑蓝)比色试验证明，能体外抑制黑色素瘤细胞生长的作用，对b16f10小鼠黑色素细胞毒性的ic50值(致死50％宿主细胞所需要的药物的最小浓度)显著低于积雪草总苷普通凝胶剂。本发明的积雪草苷总苷脂质体凝胶剂拓宽了积雪草的应用范围。