过表达PD-L1细胞膜涂层纳米粒及其制备方法、应用

本发明涉及生物医学材料，具体地说，涉及过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒及其制备方法、应用。

背景技术：

1、纳米粒在感染性疾病的诊断及治疗中的潜力受到广泛关注，通过在纳米粒立的表面涂覆一层细胞膜，采用此细胞膜包被的方式，源细胞的功能如免疫逃避、主动靶向等可赋予纳米粒。细胞膜包被的纳米粒具有良好的仿生特性及整合潜能。同时，当前有通过在细胞膜上过表达pd-l1，提取细胞膜与plga纳米粒制备细胞膜涂层纳米粒。当机体因为自身免疫耐受缺失导致自身免疫性炎症疾病时，细胞膜涂层纳米粒可锚定炎症环境，抑制t淋巴细胞功能且降低炎症因子水平，从而从多方面阻止自身免疫性炎症疾病的发生与发展。

2、如公开号为cn114903977a的专利，公开了一种负载艾片的pd-l1细胞纳米囊泡药物及其制备和应用，其仅在细胞纳米囊泡表面构建pd-l1单一效应分子，免疫抑制效果差，且缺乏炎症靶向能力。而且细胞纳米囊泡负载艾片后，仅测试了皮肤安全性，其体内安全性未知，限制了其进一步全身应用。

技术实现思路

1、本发明解决的技术问题：

2、用以解决现有技术中细胞膜纳米粒构建pd-l1单一效应分子，而存在的免疫抑制效果差、缺乏验证靶向能力的问题。

3、本发明采用的技术方案：

4、针对上述的技术问题，本发明的目的在于提供一种过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒及其制备方法、应用。

5、具体内容如下：

6、第一，本发明提供了一种过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒，包括纳米粒以及包被于纳米粒表面的细胞膜；

7、转染pd-l1基因的细胞经刺激分化得到m1亚型细胞，以m1亚型细胞为材料得到细胞膜。

8、本发明中，m1亚型细胞过表达有pd-l1、整合素β2和炎症因子受体。

9、本发明中，纳米粒选用plga；

10、和/或，

11、细胞膜的细胞种类包括单核巨噬细胞、中性粒细胞、血小板、间充质干细胞中的任意一种。

12、本发明中，过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒的粒径为207.8±0.5nm；过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒的zeta电位为-27.45±4.3mv。

13、第二，本发明提供了一种过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(其制备过程参见图1)

14、s1构建过表达pd-l1细胞稳转株：

15、向细胞株转染pd-l1基因采用慢病毒转染或质粒转染。

16、s2过表达pd-l1细胞稳转株诱导表达整合素β2和炎症因子受体：

17、过表达pd-l1细胞稳转株经佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯刺激细胞分化为m0亚型；再用脂多糖、人源ifn-γ刺激细胞分化为m1亚型。

18、s3细胞破碎得到细胞膜：

19、将s2中经诱导表达后的细胞培养液经离心、沉淀、清洗后，将细胞沉淀重悬于提膜缓冲液中，经离心得到细胞膜。

20、s4细胞膜与纳米粒共混，得到过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒：

21、细胞膜与纳米粒的质量比为5:1；制备方法包括超声法、共挤压法、微流控电穿孔法中的任意一种。

22、第三，本发明提供了一种前述提及的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒在制备炎症治疗制剂中的应用。

23、本发明采用的技术机理及有益效果：

24、本发明利用基因工程及药物刺激的方法，在细胞膜涂层纳米粒表面构建了pd-l1、整合素β2和多种炎症因子受体。

25、体外实验证明：该细胞膜涂层纳米粒可以通过整合素β2与成纤维细胞或血管内皮细胞表面icam-1结合介导细胞膜涂层纳米粒的特异性粘附，同时激活pd-1/pd-l1轴抑制t细胞活性，并通过多种炎症因子受体吸附环境中的炎症因子，表现出多方面的免疫抑制能力与炎症靶向能力。

26、体内实验证明：过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒可以锚定自身免疫性炎症部位，阻止炎症细胞浸润，降低炎症因子水平，重塑pd-l1介导的免疫耐受，表现出较强的免疫抑制作用，有效阻止了自身免疫性炎症的发展。同时过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒具有良好的生物相容性，体内应用未观察到对组织器官的损害。

技术特征：

1.一种过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒，其特征在于，包括纳米粒以及包被于纳米粒表面的细胞膜；

2.根据权利要求1所述的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒，其特征在于，m1亚型细胞过表达有pd-l1、整合素β2和炎症因子受体。

3.根据权利要求1所述的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒，其特征在于，纳米粒选用plga；

4.根据权利要求1至3中任意一项所述的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒，其特征在于，过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒包括特征(1)至特征(2)中的至少一个：

5.根据权利要求1至4中任意一项所述的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒的制备方法，其特征在于，s1中，向细胞株转染pd-l1基因采用慢病毒转染或质粒转染。

7.根据权利要求5所述的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒的制备方法，其特征在于，s2中，过表达pd-l1细胞稳转株经佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯刺激细胞分化为m0亚型；再用脂多糖、人源ifn-γ刺激细胞分化为m1亚型。

8.根据权利要求5所述的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒的制备方法，其特征在于，s3中，将s2中经诱导表达后的细胞培养液经离心、沉淀、清洗后，将细胞沉淀重悬于提膜缓冲液中，经离心得到细胞膜。

9.根据权利要求5所述的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒的制备方法，其特征在于，s4中，细胞膜与纳米粒的质量比为5:1；制备方法包括超声法、共挤压法、微流控电穿孔法中的任意一种。

10.如权利要求1至4任意一项所述的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒、或如权利要求5至9任意一项所述的制备方法得到的过表达pd-l1细胞膜涂层纳米粒在制备炎症治疗制剂中的应用。

技术总结
本发明涉及生物医学材料技术领域，公开了过表达PD‑L1细胞膜涂层纳米粒及其制备方法、应用，包括纳米粒以及包被于纳米粒表面的细胞膜；转染PD‑L1基因的细胞经刺激分化得到M1亚型细胞，以M1亚型细胞为材料得到细胞膜。本细胞膜涂层纳米粒表面过表达PD‑L1及多种炎症因子受体，既可抑制T细胞促炎功能，又能降低炎症微环境中的多种炎症因子浓度，即从炎症发生发展的多维度共同发挥抑炎作用。

技术研发人员：周兴,袁洪峰,张成元,刘垚,龙红艳
受保护的技术使用者：重庆理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11