一种水溶性复合佐剂及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物医药和疫苗，具体涉及一种水溶性复合佐剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、疫苗作为对抗病原的一类重要生物制剂，能够有效地保护人类被各种病原所感染。亚单位疫苗是利用病原体自身的蛋白制备的一种疫苗，其具有纯度高，成本低，安全性能高的优点。尽管亚单位疫苗有诸多优势，但也具有一定的劣势。亚单位疫苗的免疫原性较弱，需要多次接种以增强免疫应答，亚单位疫苗的免疫原作为蛋白质在体内还容易被免疫系统快速地清除，因此需要在亚单位疫苗中添加佐剂增强机体免疫反应。

2、佐剂被用来增加抗原的免疫原性具有以下优点：(1)减少抗原的使用量；(2)减少免疫接种次数；(3)更快更持久的诱导相关抗体；(4)提高疫苗在新生儿、老年人或免疫功能低下人群中的疗效。根据作用机制不同，将佐剂分为两类：免疫增强剂和递送系统。一些由病原体相关分子模式或合成的模式识别受体激活剂组成的免疫增强剂激活先天性诱导随后产生细胞因子和趋化因子的免疫反应。由细胞或细胞因子组成的其他免疫增强剂，如树突状细胞、il-12或gm-csf，可以直接激活免疫。递送系统，包括脂质体、胶束、病毒体、纳米颗粒、微球、油/水乳液、病毒样颗粒和免疫刺激复合物，通常将抗原携带到靶细胞，并协助抗原呈递细胞摄取抗原。

3、铝盐的免疫增强作用在20世纪20年代首次报道，已在疫苗中得到应用。含铝佐剂主要诱导t辅助因子2(th2)细胞反应，但不能诱导th1或细胞毒性t淋巴细胞(ctl)反应。因此，通常认为含铝佐剂不能引发对病毒或肿瘤疫苗至关重要的细胞免疫反应。因此，迫切需要开发一种新型佐剂，激起细胞免疫反应。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种水溶性复合佐剂及其制备方法和应用，简化疫苗生产工艺、节约疫苗生产成本和增强疫苗免疫原性。

2、为了实现上述目的，本发明提供了一种复合佐剂，包括人参皂苷、黄芪多糖和二价锰盐；

3、所述复合佐剂中人参皂苷和黄芪多糖的质量比为(1～10)：(1～10)；

4、所述复合佐剂中人参皂苷和二价锰盐的质量比为(1～10)：0.1；所述二价锰盐的质量以二价锰离子的质量计。

5、优选的，所述复合佐剂中人参皂苷的浓度为0.3～3g/l。

6、优选的，所述人参皂苷包括人参皂苷rh2。

7、本发明还提供了上述技术方案所述复合佐剂的制备方法，包括如下步骤：

8、将人参皂苷和溶剂混合，充分溶解得人参皂苷溶液；

9、将黄芪多糖和溶剂混合，充分溶解得黄芪多糖溶液；

10、将二价锰盐和溶剂混合，充分溶解得锰盐溶液；

11、将所述人参皂苷溶液、黄芪多糖溶液和锰盐溶液按照(1～10)：(1～10)：0.1的质量比混合，充分溶解得所述复合佐剂。

12、所述人参皂苷溶液的质量以人参皂苷的质量计；

13、所述黄芪多糖溶液的质量以黄芪多糖的质量计；

14、所述锰盐溶液的质量以二价锰离子的质量计。

15、优选的，所述溶剂包括tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、hepes缓冲液、生理盐水和水中的一种或多种。

16、本发明还提供了上述技术方案所述复合佐剂在制备疫苗中的应用。

17、优选的，所述疫苗包括亚单位疫苗。

18、优选的，所述亚单位疫苗包括猪瘟亚单位疫苗和/或伪狂犬亚单位疫苗。

19、本发明还提供了一种亚单位疫苗，包括抗原蛋白和佐剂；

20、所述佐剂为上述技术方案所述复合佐剂。

21、优选的，所述亚单位疫苗中复合佐剂和抗原蛋白的体积比为(1～1000)：1；

22、所述亚单位疫苗中抗原蛋白的浓度为10～300μg/ml。

23、优选的，所述抗原蛋白包括猪瘟病毒结构蛋白e2、猪伪狂犬病毒gb糖蛋白或猪伪狂犬病毒gd糖蛋白。

24、有益效果：

25、本发明提供了一种复合佐剂，包括人参皂苷、黄芪多糖和二价锰盐；所述复合佐剂中人参皂苷和黄芪多糖的质量比为(1～10)：(1～10)；所述复合佐剂中人参皂苷和二价锰盐的质量比为(1～10)：0.1；所述二价锰盐的质量以二价锰离子的质量计。本发明提供的复合佐剂能够结合蛋白质和各种抗原，被动物机体快速吸收，不产生副反应，具备安全性。与商业化佐剂对比，本发明复合佐剂与蛋白免疫原混合制备成亚单位疫苗后，可以增强蛋白免疫原对机体的免疫效果，用于制备亚单位疫苗。

26、本发明所提供的复合佐剂不同于传统佐剂，无需经过乳化步骤，只需使佐剂和蛋白混合均匀，即可制备疫苗，简化了疫苗生产程序，能够降低疫苗生产成本，增强疫苗免疫原性。

技术特征：

1.一种复合佐剂，其特征在于，包括人参皂苷、黄芪多糖和二价锰盐；

2.根据权利要求1所述复合佐剂，其特征在于，所述复合佐剂中人参皂苷的浓度为0.3～3g/l。

3.根据权利要求2所述的复合佐剂，其特征在于，所述人参皂苷包括人参皂苷rh2。

4.权利要求1～3任一项所述的复合佐剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂包括tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、hepes缓冲液、生理盐水和水中的一种或多种。

6.权利要求1～3任一项所述的复合佐剂或权利要求4或5所述制备方法得到的复合佐剂在制备亚单位疫苗中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述亚单位疫苗包括猪瘟亚单位疫苗和/或伪狂犬亚单位疫苗。

8.一种亚单位疫苗，其特征在于，包括抗原蛋白和佐剂；

9.根据权利要求8所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述亚单位疫苗中复合佐剂和抗原蛋白的体积比为(1～1000)：1；

10.根据权利要求8所述的亚单位疫苗，其特征在于，所述抗原蛋白包括猪瘟病毒结构蛋白e2、猪伪狂犬病毒gb糖蛋白或猪伪狂犬病毒gd糖蛋白。

技术总结
本发明属于生物医药和疫苗技术领域，具体涉及一种水溶性复合佐剂及其制备方法和应用。本发明提供的复合佐剂，包括人参皂苷、黄芪多糖和二价锰盐；所述复合佐剂中人参皂苷和黄芪多糖的质量比为(1～10)：(1～10)；所述复合佐剂中人参皂苷和二价锰盐的质量比为(1～10)：0.1；所述二价锰盐的质量以二价锰离子的质量计。本发明提供的复合佐剂可用于结合蛋白质和各种抗原，能被动物机体快速吸收，不产生副反应，具备安全性，可以简化疫苗生产程序和降低疫苗生产成本，与商业化佐剂对比，可以增强疫苗免疫效果。

技术研发人员：张静
受保护的技术使用者：武汉鑫诺维生物技术有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19