一种四妙丸复方发酵液及其制备方法和应用

本发明属于中药发酵领域，涉及四妙丸复方的发酵液，以及四妙丸复方的发酵方法和所述发酵液的应用。

背景技术：

1、由于中药的组方方式非常灵活，可以根据具体病情和个体差异进行搭配，因此中药的复方数量是非常庞大的。目前，据统计，全国各类中药复方已经超过一万种，而且这个数字还在不断增长。中药复方的不断丰富和发展，也为中医药的临床应用提供了丰富的选择。

2、现代中药发酵技术的原理是筛选并利用恰当的益生菌和/或酶特有的生物转化能力，在特定环境条件下(空气、温度、水分等)改变中草药原料的化学成分和生物活性。

3、在中药微生物发酵过程中，微生物会产生各种代谢产物，包括酸、碱、醇、酮、酯、酶等。这些代谢产物可能对原料中的活性成分进行转化、降解或增强，并产生新的化合物。这种转化过程往往是复杂的，其中涉及多种微生物、多种酶和多个反应路径，因此很难完全预测和控制。

4、另外，中药原料本身的复杂性也增加了微生物发酵的不可预知性。中药通常是由多种植物或动物组成的复方，每种原料中都含有多种活性成分。这些活性成分之间可能存在相互作用和协同效应，而微生物发酵过程中的代谢变化可能会进一步改变这种相互作用和协同效应，导致最终产物的活性和化学组成发生变化。

5、发明人通过微生物发酵技术对四妙丸复方微生物发酵做了大量研究，在实现本发明过程中，发明人发现现有技术中至少存在如下技术问题中的一个问题：

6、1、四妙丸复方是我国中药中的一副古方复方剂，由苍术、黄柏、牛膝、薏苡仁4味中药组成，具有广泛的药理作用，中医临床实践证实了四妙丸复方可有效治疗各种类型的关节炎，如类风湿关节炎、强直性脊柱炎、骨关节炎、痛风性关节炎等功效，但现有技术并没有四妙丸复方微生物发酵的参考资料。

7、2、现有技术没有公开关于微生物发酵四妙丸复方方剂及其生物转化产物的相关影响的研究成果，不能提供四妙丸复方发酵后的生物转化产物与未发酵的四妙丸复方相比的药理作用变化方向指引，如何筛选到目标发酵微生物、以及如何实现有效发酵，都存在很大技术障碍。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明目的之一在于提供一种具有更多药理作用的四妙丸复方发酵液。

2、本发明的目的之二在于提供一种前述四妙丸复方发酵液的制备方法。

3、本发明的目的之三在于提供一种四妙丸复方发酵液用于降低尿酸水平的用途。

4、发明人通过长期的探索和尝试，以及多次的实验和努力，不断的改革创新，为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是，提供一种四妙丸复方发酵液制备方法，包括如下步骤：

5、s1、按预设比例，取牛膝、薏苡仁、苍术、黄柏粉末混合物；

6、或者将牛膝、薏苡仁、苍术、黄柏经乙醇提取，回收乙醇得到醇提物；

7、或者将牛膝、薏苡仁、苍术、黄柏经水提取得到水提物；

8、s2、制备液体培养基；

9、s3、将s1所述粉末混合物加入s2所述液体培养基中得发酵基，高温蒸煮后冷却；或者，所述醇提物或水提物加入灭菌液体培养基，得发酵基；

10、s4、在s3所述发酵基上接种乳酸复合菌，开始发酵培养；

11、s5、高温终止发酵；

12、s6、过滤，离心，取上清液，得到四妙丸复方发酵液。

13、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述粉末混合物中，各组分按重量份计分别为：牛膝2～8份、薏苡仁4～12份、苍术2～8份、黄柏4～12份。

14、优选地，所述粉末混合物中，各组分按重量份计分别为：牛膝4份、苍术4份、薏苡仁8份、黄柏8份。

15、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述液体培养基为pda液体培养基；每1500ml培养基，添加马铃薯150～250g、一水葡萄糖15～35g、硫酸镁2～4g、磷酸二氢钾3～5g、维生素b120～40mg，不加琼脂。

16、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述液体培养基为黄豆粉液体培养基，每250ml培养基，添加黄豆粉4～6g，淀粉1～3g，蔗糖2～3g，酵母浸粉0.1～1g，氯化钠0.1～1g，磷酸氢二钾0.05～0.2g。

17、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述液体培养基为奶液。

18、优选地，所述液体培养基为pda液体培养基；每1500ml培养基，添加马铃薯200g、一水葡萄糖30g、硫酸镁2.25g、磷酸二氢钾4.5g、维生素b130mg，不加琼脂。

19、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述粉末混合物与液体培养基的料液比为1:7～70。

20、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述高温蒸煮将发酵基放入密闭容器，并置于高压锅中，121℃蒸煮25～30min。

21、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述乳酸复合菌包括发酵乳杆菌lactobacillus、植物乳杆菌lactobacillus plantarum、路氏乳杆菌lactobacillus reuteri、唾液乳杆菌lactobacillus salivarius、嗜酸乳杆菌lactobacillus acidophilus中的一种或几种，接种量为0.1～10×106cfu/ml。

22、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述发酵培养具体为：于摇瓶机中，200～300rpm，37℃条件下培养7～10天。

23、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述步骤s5具体为，将发酵物放置在95～100℃的装置中煮沸10～20min。

24、根据本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式，所述步骤s6具体为：发酵物进行过滤，弃药渣，5000～10000rpm离心15～30min，取上清液，得四妙丸复方发酵液。

25、本发明还提供了一种四妙丸复方发酵液，由前述方法制备得到。

26、本发明还提供了所述四妙丸复方发酵液在降低人体尿酸水平中的应用。

27、与现有技术相比，上述技术方案中的一个技术方案具有如下优点：

28、a)本发明首次利用微生物发酵技术特别是用乳酸复合菌对四妙丸复方进行微生物发酵，经过对发酵的四妙丸复方与未发酵四妙丸复方指纹图谱进行成分分析，利用发酵液探索微生物发酵四妙丸复方所产生的微生物发酵产物对小鼠体内尿酸水平及肾脏保护的作用。

29、b)本发明四妙丸复方发酵液制备方法的一个实施方式中，采用乳酸复合菌对四妙丸复方进行微生物发酵，乳酸复合菌为可食用益生菌，四妙丸复方中有3味中药是药食同源中药材，为后续研发营养价值更高的四妙丸复方保健食品奠定了研究基础。

30、c)发明人基于hplc指纹图谱检测，分析出未发酵四妙丸复方与发酵四妙丸复方指纹图谱化学成分具有极大的区别。

31、d)小鼠体内研究结果表明四妙丸复方发酵液降尿酸作用及肾脏保护作用均优于未发酵四妙丸复方，发酵四妙丸高剂量组可有效降低高尿酸血症小鼠体内尿酸水平并且起倒保护肾脏的作用；肝脏毒性实验结果得知发酵四妙丸复方对小鼠肝脏不产生毒性。

32、四妙丸降尿酸原理：

33、虽然四妙丸具有降低机体尿酸的作用，但个体差异显著。人体服用中药后，中药需要胃肠道的消化吸收并代谢。由于个体差异，机体内胃肠道的菌群不一致，是导致机体吸收差异的重要因素。乳酸菌可促进机体胃肠道的吸收，改善胃肠道菌群。发酵可改变乳酸菌的活性，增加乳酸菌的数量。采用乳酸复合菌与四妙丸进行发酵，这模拟了人机体胃肠道吸收的体内模式。

34、经过发酵，微生物吸收了四妙丸植物体中的纤维素、糖类、蛋白质等大分子，破坏植物的细胞壁而释放出药物的活性成分；活性成分在微生物酶的作用下，激发四妙丸中的活性物质，使四妙丸中的活性物质成分显著增加。动物实验证明，发酵产生的次生代谢产物有利于机体对四妙丸的吸收，改善了机体吸收代谢不足导致的个体吸收差异，提高四妙丸的利用率，增强四妙丸对机体降尿酸的作用。未发酵四妙丸和已发酵四妙丸的疗效差异由此产生。

35、乳酸复合菌发酵的四妙丸复方可抑制体内嘌呤的生成，降低血尿酸的含量。由于四妙丸发酵后化学成分改变，使得发酵四妙丸比未发酵四妙丸具有更高的降尿酸作用。发酵四妙丸促进了机体尿酸盐的排泄，使机体肾脏中的尿酸盐沉积减少，炎症减轻，从而起到保护肾损伤的作用。

36、由此可见，发酵后生物转化的四妙丸，相比于未发酵四妙丸来说，极大提高了四妙丸的生物利用率，充分体现了中药生物转化后化学成分增效的预期效果，还为四妙丸药食同源大健康产品的开发提供了依据。