一种改善记忆的组合物及其制剂和制备方法与流程

本发明涉及生物医药，尤其涉及一种改善记忆的组合物及其制剂和制备方法。

背景技术：

1、dha(docosahexaenoicacid，22:6(n-3))中文名为二十二碳六烯酸。它是一类长链多不饱和脂肪酸，拥有二十二个碳原子，含有六个不饱和烯键，是omega-3(dha，epa和ala等)的重要成员。dha作为人体必需的营养物质，在大脑和视网膜中的含量尤其高，并作为其中细胞膜的重要组成部分，主要存在于其质膜上的磷脂中。

2、在《中国孕产妇及婴幼儿补充dha的专家共识》中认为：机体维持适宜的dha水平，有益于改善婴儿早期神经和视觉功能发育，也可能有益于改善产后抑郁，以及婴儿的免疫功能、睡眠模式等。合理的膳食有助于孕产妇维持dha水平，以利母婴健康。

3、最新的研究进一步探究了dha的作用机制。dha也可在特定的磷脂酶ipla2的作用下从质膜上释放下来，作为信号分子影响细胞内的信号通路，从而影响到突触的发育，进而影响大脑的状态及功能。该研究结合在体基因操纵(转基因小鼠、病毒注射和胚胎电转等)，药理学，荧光染料微注射，rna测序，脑片电生理及行为学等实验手段，不但发现脑内游离dha也参与大脑中神经突触的发育，而且找到游离dha可能作用的受体类视黄醇x受体α(rxra)，解析了dha促进大脑发育及功能的新机制。

4、脑卵磷脂群，即存在于脑部的5种磷脂成分，约占脑组织干重的25％；也是母乳天然存在的成分，包含：pe(脑磷脂)、pc(卵磷脂)、pi(磷脂酰肌醇)、sm(神经鞘磷脂)、ps(磷脂酰丝氨酸)。

5、脑磷脂群参与维持生物膜的稳定性，对细胞之间的正常信息传导不可或缺。pi(磷脂酰肌醇)的代谢产物三磷酸肌醇(ip3)和甘油二酯(dg)在神经信息传递中有重要作用，其中，ip3能够调动钙离子，影响膜的去极化；dg能激活蛋白激酶c，介导信息传递。ps(磷脂酰丝氨酸)插入神经细胞膜，可影响神经递质乙酰胆碱、去甲肾上腺素、血清素和多巴胺的代谢；参与突触小泡和突出前膜的融合，以及随后神经递质分子向突触间隙的释放，能刺激正常人体胆碱进行神经传递。pc(卵磷脂)是神经信息的传递者，也是长链不饱和脂肪酸的重要载体，以磷脂为载体的dha转运更容易通过血脑屏障，进入脑部。

6、在美国乳制品科学协会2018年会中，脑磷脂的重要作用被重点提出——促进大脑发育和改善认知；在第九届胎儿医学大会上，营养学专家发表了《脑磷脂群脑发现营养的前沿探究》的专题报告，与会专家一致认为：“脑磷脂在婴幼儿大脑的早期发育中起到非常关键的作用，对于提升宝宝语言力有明确影响，被誉为“铂金级”脑营养素新发现”。

7、将dha与脑磷脂群相结合，一方面两者可协同作用，增强大脑神经传递，加快脑连接信息传递速度，增强反应速度、记忆力；另一方面，脑磷脂群携带dha更容易突破血脑屏障，更容易吸收利用。

8、先天性甲状腺功能减低症(congenital hypothyroidism,ht)因甲状腺激素产生不足或其受体缺陷所致的先天性疾病。如果出生后未及时治疗，将导致生长迟缓和智力低下，表现为：记忆力、注意力下降，运动发育障碍，听力下降，反应迟钝，神经系统功能障碍等。除先天性甲低患儿，还有继发性加减、甲低患者，同时患有精神神经系统问题：智力低下、精神抑郁、痴呆、昏睡等。

9、为改善上述智力发育及神经系统功能问题，应适当补充dha。静脉注射dha是最有效、生物利用度最高的补充方式，但是目前仍没有dha注射液，本发明提供了一种可用于静脉和肌肉注射的dha脑磷脂群冻干乳剂，注射级辅料，dha浓度高，质量可控，安全有效。

10、cn102512367a提供了一种新型二十二碳六烯酸(dha)脂肪乳制剂配方和制备方法，该专利中①使用油溶性稀释剂用于稀释dha形成油相，由于dha被稀释浓度较低，效果大打折扣；②采用大豆油作为油溶性稀释剂，适于制备脂肪乳制剂，但对于甲状腺低下患者，不易使用，因为这些患者需要长期服用左甲状腺素钠片，说明书中明确提出：由于药物间的相互作用，豆类会降低此药在体内的吸收和利用，因此应避免使用；③专利制备的dha脂肪乳剂的粒径较大、分布较宽，不能满足过滤除菌的要求，因此采用高温灭菌，高温下会造成dha的降解，产生杂质，制剂质量不可控，增加用药安全性风险。

11、虽然静脉给药是最有效的补充dha方式，但是，不利于甲低患者及其他人群日常补充以保护大脑，缓解脑疲劳，增强记忆力。因此，本发明还提供了可用于口服补充dha的dha脑磷脂群冻干乳剂，此技术解决了dha油的水溶性问题，液体dha好吸收、生物利用度高，优于油剂型；同时，dha被包裹在脂肪乳中，避免了被氧、光、热影响，提高了稳定性，减少药物分解及氧化，遮盖了腥味，口感佳；此外，添加的辅料均为注射级辅料，不添加防腐剂、香精、色素等，安全可靠，极其适用于特殊人群，如：婴幼儿、孕妇和老人。

12、cn115919912a提供了一种防治神经系统疾病的组合物及制备方法，它包括活性成分：元宝枫籽油、顺-15-二十四碳烯酸、dna藻油、遏蓝菜籽油、牛磺酸，余者为辅料。

13、cn114766582a提供了一种内容物组合、植物型磷脂藻油dha凝胶糖果及制备方法，包括如下组分：dha藻油、亚麻籽油、ara油、磷脂、叶黄素油、罗汉果苷，剂型为凝胶糖果。

14、cn115669784a提供了一种增强记忆力的dha藻油凝胶糖果及其制备方法，包括如下原料制成：dha藻油、淀粉、果胶粉、甘油、亚麻籽油、花生四烯酸油、甜橙油、甜菊糖苷和水，剂型为凝胶糖果。

15、这些专利中，dha以油的形式存在，口服后，在胃消化道中容易受到破坏，同时难以吸收利用。

16、cn115969038 a提供了一种dha纳米乳液及其制备方法，包括：κ-卡拉胶或低熔点琼脂0.1％～0.2％、辛癸酸甘油酯0.5％～0.7％、大豆卵磷脂0.4％～0.6％、乙酸0.8％～1.2％，dha藻油0.7％～1.2％，余量为水。

17、cn104490773 a提供了一种含有卵磷脂和dha的水基质乳化液及其制备方法和应用，其制备过程中将乳液经100～500目过滤，过滤液于温度50～98℃、压力为15～58mpa进行均值，并使乳液中的脂肪球粒径小于5um；然后脱气，灌装，封口，并在85～135℃条件下灭菌4秒～35分钟。

18、cn115581301 a提供了一种富含欧米伽-3多不饱和脂肪酸的肠内营养乳剂及其制备方法，含有dha、六聚或十聚甘油单油酸酯、黄原胶、异vc、山梨酸钾、柠檬酸。

19、以上方案中，制备的纳米乳液平均粒径均在200nm以上，无法过滤除菌，采用高温灭菌，高温下会造成dha的降解，产生杂质，制剂质量不可控；同时，添加了防腐剂或其他不适用于婴幼儿及孕妇的成分，增加用药及食品安全性风险。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种改善记忆的组合物及其制剂和制备方法。本发明组合物中dha和特定种类组成的脑磷脂群在改善记忆力方面具有协同作用。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、组合物，包括dha和脑磷脂群；

4、所述脑磷脂群包括脑磷脂、卵磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸。

5、本发明中，所述dha可来自dha藻油、鱼油、磷虾油或更高纯度的其他来源，所述dha包含：磷脂型dha、乙酯型dha、甘油三酯型dha。在本发明的一些具体实施例中，所述dha来源于dha藻油，所述dha藻油利用裂壶藻(schizochytrium sp.)或吾肯氏壶藻(ulkeniaamoeboida)或蔻氏隐甲澡(crypthecodinium cohnii)菌种，经过生物发酵制得。在一个具体实施例中，dha藻油中dha纯度为40％，dha藻油中所含二十二碳六烯酸(dha)，以c22h32o2甘油三酯计，g/100g，应≥35，其他指标应满足dha藻油原料技术要求。dha的化合物名称为顺式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸，分子式为c22h32o2。

6、本发明根据dha藻油或其他来源中dha的纯度，折算出dha的量，然后计算dha和脑磷脂群的质量比，所述dha和脑磷脂群的质量比为(10～3000)：(5～2500)，最优为(500～1500)：(60～100)。

7、本发明中，所述脑磷脂、卵磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸的质量比为(0～2500):(0～2500)：(0～2500):(0～2500)：(0～2500)，最优为(5～10):(10～30)：(5～10):(15～60)：(5～10)，具体可为5:20:5:20:10、5:10:10:30:5、10:10:10:60:10、5:30:5:15:5、10:10:10:30:10、10:30:10:40:10。

8、本发明中，所述dha、脑磷脂、卵磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸的质量比最优为(500～1500)：(5～10):(10～30)：(5～10):(15～60)：(5～10)，具体可为500:5:20:5:20:10、1000:5:10:10:30:5、1500:10:10:10:60:10、500:5:30:5:15:5、1000:10:10:10:30:10、1500:10:30:10:40:10。

9、本发明中，所述脑磷脂为二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或者几种的混合物；

10、所述卵磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、人工合成卵磷脂中的一种或者几种的混合物；

11、所述的磷脂酰丝氨酸为二棕榈酰磷脂酰丝氨酸和/或二油酰基磷脂酰丝氨酸。

12、本发明还提供了所述组合物在制备改善记忆的制剂中的应用。

13、本发明还提供一种改善记忆的制剂，包括本发明所述的组合物和药学上可接受的辅料；所述药学上可接受的辅料包括：注射用水，和助乳剂、等渗调节剂、冻干赋形剂中的一种或多种。

14、本发明中，所述助乳剂为f68、油酸钠盐、油酸钾盐、油酸、聚乙二醇-脑磷脂衍生物、聚乙二醇-胆固醇衍生物、聚乙二醇-二-脂肪酸甘油酯衍生物、聚乙二醇-脂肪酸酯衍生物、聚乙二醇-脂肪胺衍生物、聚乙二醇-脂肪醇衍生物、聚乙二醇-400、聚乙二醇-600、聚乙二醇-1000、聚乙二醇-1500或聚乙二醇-4000中的任一种或两种以上的混合物；

15、所述乳剂和冻干剂中，等渗调节剂为甘油、葡萄糖或木糖醇中的一种或者两种以上的混合物；

16、所述冻干赋型剂为甘露醇、山梨酸、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、单糖或者多糖、氨基酸类或者寡肽中的一种或者两种以上的混合物。

17、本发明中，所述制剂的剂型为乳剂，所述乳剂由注射用水和如下组分制得：

18、

19、

20、所述等渗调节剂为甘油，所述助乳剂为油酸。

21、本发明中，所述制剂的剂型为冻干剂，所述冻干剂由注射用水和如下组分冻干制得：

22、

23、所述冻干保护剂为葡萄糖、海藻糖、甘露醇、右旋糖酐或蔗糖。

24、本发明还提供了所述制剂的制备方法，所述制剂为乳剂时，所述乳剂的制备方法包括：

25、(1)将所述dha与所述的脑磷脂群混合，在氮气保护下加入助乳剂，加热形成油相混合物；

26、(2)将所述等渗调节剂和注射用水混合，形成水相混合物；

27、(3)在氮气保护下，将步骤(2)得到的水相混合物与步骤(1)得到的油相混合物混合，获得油水混合物；将所述油水混合物于8000～28000r/min高速分散20min，调节ph至7.0～9.0，800～1400bar下均质6～12次，每次5～10min，获得脂肪乳。

28、步骤(3)中，所述高速分散的转速具体可为8000r/min、12000r/min、16000r/min、20000r/min、24000r/min、28000r/min；所述油水混合物经高速分散后调节ph，调节后的ph具体可为7、7.5、8、8.5、9。所述均质的压力具体可为800bar、1000bar、1200bar、1400bar；均质的次数具体可为6次、8次、10次、12次。

29、所述制剂为冻干剂时，所述制备方法包括：

30、将冻干保护剂和步骤(3)所述的脂肪乳混合，经滤膜过滤、氮气密封、分装后，-45℃下预冻9h，-20℃一次升华52h，40℃二次升华20h。

31、本发明中，步骤(3)制得的乳剂为液体形式，能够将冻干保护剂完全溶解。本领域技术人员也可根据实际需要加入适量的注射用水，帮助冻干保护剂更快地溶解。

32、本发明中，步骤(1)中所述加热至40～60℃，具体可为40℃、50℃、60℃。

33、本发明中，步骤(2)中所述混合在60～80℃下进行，具体可为60℃、70℃、80℃。

34、所述滤膜过滤的孔径为0.22um。

35、本发明还提供了由所述制备方法制得的制剂。

36、本发明制得的制剂(包括乳剂和冻干剂)的平均粒径<150nm，粒径分布99％≤220nm。在一个具体实施例中，本发明制得的乳剂平均粒径为116.1nm的乳剂，粒径均匀，且粒径分布达到90％小于147.8nm、99％小于183.1nm，可见99％的乳剂可以通过滤膜过滤除菌(见图3)。

37、本发明还提供了所述的制剂作为营养添加剂在制备食品、特医、特膳、乳品、保健品、药品或饲料中的应用。

38、本发明还提供一种产品，包括本发明所述的制剂，所述产品为食品、特医、特膳、乳品、保健品、药品或饲料。

39、本发明还提供另一种产品，包括本发明所述的制剂，所述产品为食品、特医、特膳、乳品、保健品、药品或饲料，还包括脂溶性维生素、水溶性维生素、微量元素、氨基酸、电解质，碳水化合物中的至少一种。

40、本发明公开了一种具有改善记忆的组合物及其制剂和制备方法。该组合物包括dha和特定种类组成的脑磷脂群。本发明将所述组合物制成脂肪乳剂和冻干制剂，所述制剂中dha及脑磷脂群包裹在平均粒径小于150nm的脂肪乳中。跳台实验、穿梭箱实验、morris水迷宫试验、避暗实验结果显示，给予本发明组合物的实验组小鼠的各行为指标与缺少dha或脑磷脂群的对比例组相比均存在显著差异，实验组改善记忆认知程度的效果更明显，说明本发明组合物中dha和脑磷脂群产生了增效协同作用。同时，本发明还提供了一种包含该组合物的制剂及其制备方法，该制剂包括液体形式的乳剂和冻干粉形式的冻干剂，所述乳剂中将dha及脑磷脂群包裹在平均粒径小于150nm的脂肪乳中，加入冻干保护赋型剂，冻干获得的冻干剂。液体形式或冻干粉复溶后均可用于静脉及肌肉注射，为低甲状腺患儿提供更有效的补脑营养支持，促进心脑系统及神经系统发育；其液体形式和冻干粉形式均可用于口服，为婴幼儿、孕妇、成年人及老人补充n-3多不饱和脂肪酸，促进智力发育，提高记忆力，预防抑郁、老年痴呆，脑中风后遗症。本发明制备工艺简单，一方面为dha水溶液剂型、好吸收、生物利用度高，优于油剂型；另一方面提高了dha的稳定性，减少药物分解及氧化，遮盖了腥味，口感佳；此外，添加的辅料均为注射级辅料，安全可靠，同时，不添加防腐剂、香精、色素等，极其适用于特殊人群，如：婴幼儿、孕妇和老人。