本发明涉及细胞生物和分子生物领域,特别涉及一种缺氧诱导的星形胶质细胞外泌体在治疗视网膜疾病中的应用。
背景技术:
1、众多视网膜疾病包括糖尿病视网膜病变、视网膜血管闭塞、早产儿视网膜病变、急性青光眼视网膜损伤等,而大部分视网膜疾病的转归是引起视网膜神经节细胞死亡,最终都可以导致视网膜神经节细胞损伤或丢失,引起视功能受损甚至盲目。由于视网膜神经节细胞死亡后不能再生,目前尚无有效的药物可逆转其损伤,因此此类疾病的治疗仍无有效方法、面临巨大的挑战,探索新的安全有效的治疗策略以减轻或逆转视网膜神经节细胞的死亡具有重大意义。
2、外泌体是一种由内体途径生成的直径约40~60nm细胞外囊泡。外泌体可以携带各种特定的内容物,包括核酸、蛋白质、脂质等。从供体细胞释放的外泌体可以被受体细胞摄取,从而作为细胞通讯和功能调节的一种方式。
3、星型胶质细胞在视网膜组织中位于神经纤维层和神经节细胞层,不仅在视网膜的血管发育和血管内屏障的维持上起到关键的作用,在维持各种神经胶质稳态功能方面也至关重要。但其在上述视网膜疾病中的功能及其对视网膜神经节细胞的作用目前还不明确。
技术实现思路
1、本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足,提供一种缺氧诱导的星形胶质细胞外泌体在制备治疗视网膜疾病的产品中的应用。
2、本发明的目的通过下述技术方案实现:
3、一种缺氧诱导的星形胶质细胞外泌体在制备治疗视网膜疾病的产品中的应用。
4、所述的缺氧诱导的条件为:o2浓度为体积百分比1±0.1%、co2浓度为体积百分比5±0.1%,缺氧诱导温度为37±1℃,临界相对湿度(crh)为90±1%,缺氧诱导时间为24±1小时。
5、所述的缺氧诱导的条件优选为:o2浓度为体积百分比1%、co2浓度为体积百分比5%,缺氧诱导温度为37℃,临界相对湿度(crh)为90%,缺氧诱导时间为24小时。
6、所述的星形胶质细胞包括原代小鼠星形胶质细胞(mac)和人视网膜星形胶质细胞(hrac)中的至少一种。
7、所述的缺氧诱导的星形胶质细胞外泌体能够被视网膜神经节细胞吞噬,进而达到治疗视网膜疾病的目的。
8、所述的视网膜神经节细胞包括原代小鼠视网膜神经节细胞(rgc)。
9、所述的缺氧诱导的星形胶质细胞外泌体可采用本领域常规方法提取;优选为采用超速离心法提取缺氧诱导后的星形胶质细胞上清中的外泌体,具体步骤如下:
10、(1)离心收集缺氧诱导处理后的星形胶质细胞的上清液,4℃、300g离心10分钟,取上清,得到上清液i;然后将上清液i置于4℃下以2000g离心10分钟,取上清,得到上清液ii;
11、(2)将上清液ii置于4℃下以10000g离心30分钟,取上清,得到上清液iii;然后将上清液iii置于4℃下以100000g离心70分钟,弃上清,使用过滤后的pbs缓冲液重悬;再将重悬后的溶液置于4℃下以100000g离心70分钟,弃上清,最后用pbs缓冲液重悬外泌体,得到所述缺氧诱导的星形胶质细胞外泌体。
12、步骤(2)中所述的pbs缓冲液优选为过滤后的pbs缓冲液。
13、所述的缺氧诱导的星形胶质细胞外泌体通过增加视网膜神经节细胞存活率、抑制视网膜神经节细胞的死亡(降低视网膜组织细胞凋亡)、和/或减轻视网膜组织损伤(减轻视网膜厚度减薄程度),达到治疗视网膜疾病的目的。
14、所述的视网膜疾病包括引起视网膜神经节细胞死亡的疾病;具体包括糖尿病视网膜病变、视网膜血管闭塞、早产儿视网膜病变、青光眼和急性青光眼视网膜损伤中的至少一种。
15、所述的产品包括药物或试验试剂等。
16、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
17、1、本发明中通过实验发现,缺氧诱导24小时的星形胶质细胞外泌体相对于正常的星形胶质细胞外泌体,可以显著减轻视网膜疾病的严重程度,抑制视网膜神经节细胞(rgcs)的死亡,具有重要的临床价值,为外泌体治疗视网膜疾病提供了新的思路,可用于开发视网膜疾病(包括但不限于糖尿病视网膜病变、视网膜血管闭塞、早产儿视网膜病变、青光眼等最终会引起视网膜神经节细胞死亡的疾病)治疗药物。
18、2、本发明中采用缺氧处理的星型胶质细胞外泌体治疗视网膜疾病,结果表明,给予缺氧处理的星型胶质细胞外泌体治疗小鼠视网膜缺血再灌注诱导的视网膜疾病后,视网膜厚度减薄程度减轻,视神经节细胞存活率增高,说明缺氧处理的星型胶质细胞分泌的外泌体可以有效治疗视网膜疾病,为该类疾病提供了一种新的治疗手段。
19、3、本发明中采用缺氧处理的星型胶质细胞外泌体与原代小鼠视网膜神经节细胞(rgc)共孵育,发现视网膜神经节细胞会吞噬星形胶质细胞外泌体,说明缺氧诱导的星型胶质细胞分泌的外泌体可以被rgc吸收摄取,进而达到治疗视网膜疾病的目的。
1.一种缺氧诱导的星形胶质细胞外泌体在制备治疗视网膜疾病的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的缺氧诱导的条件为:o2浓度为体积百分比1±0.1%、co2浓度为体积百分比5±0.1%,缺氧诱导温度为37±1℃,临界相对湿度为90±1%,缺氧诱导时间为24±1小时。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述的星形胶质细胞包括原代小鼠星形胶质细胞和人视网膜星形胶质细胞中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述的缺氧诱导的星形胶质细胞外泌体通过增加视网膜神经节细胞存活率、抑制视网膜神经节细胞的死亡和/或减轻视网膜组织损伤,达到治疗视网膜疾病的目的。
5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述的视网膜疾病包括引起视网膜神经节细胞死亡的疾病。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述的视网膜疾病包括糖尿病视网膜病变、视网膜血管闭塞、早产儿视网膜病变、青光眼和急性青光眼视网膜损伤中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述的产品包括药物或试验试剂。