一种止血海绵及其制备方法和应用与流程

本技术涉及止血材料，尤其是涉及一种止血海绵及其制备方法和应用。

背景技术：

1、在日常生活中，由于外伤、手术等情况下导致大量出血的状况，如果不及时止血，可能会引起感染和创伤加剧，因此控制出血是急救和创伤治疗的重要步骤。合适的止血材料能明显缩短手术时间，对创伤或术后恢复至关重要。合格的止血材料不但具备良好的止血性能，还需要具有优良的生物相容性，无毒副作用，无刺激性，易于加工成型等。

2、明胶具有很好的生物活性，在生物医学领域具有极其广泛的用途。明胶海绵具有很强的止血作用，可快速吸收大量的水分及渗出液，可用作手术切口、各种创面的敷料，及各种介入治疗的栓塞剂。但明胶海绵的韧性也较差，尤其在血液中浸泡后，容易破碎，且吸水溶胀后体系变大压迫组织；同时为了提高与组织的粘附性，明胶海绵由于需要与戊二醛进行交合，导致其会对组织产生诱变性和致癌性。另外，明胶是胶原在酸、碱、酶或高温条件下的变性产物，虽然氨基酸的组成与胶原类似，但其三条肽链已经打开，失去了三螺旋结构，也完全失去了生物活性，分子量降低为数万到数十万道尔顿，遇温水会溶解。而胶原活性的完好体现是需要胶原生物活性物质和胶原三螺旋结构的协同作用来实现的，二者缺一不可，同时生物活性物质的存在与否也与结构密切相关。因此，保留完整的三螺旋结构，对于胶原活性至关重要。

3、鉴于上述明胶海绵所存在的缺陷，需要提供一种新的黏附性好、止血快速、低溶胀，且能促进愈合的可吸收止血材料。

技术实现思路

1、为了解决现有技术的不足，本技术提供一种止血海绵，该止血海绵为黏附性好、止血快速、低溶胀、无免疫原、无交联剂、并发症少、恢复快且可促进伤口愈合的可吸收止血材料，可较好地应用在止血相关领域。

2、为此，本技术第一方面提供了一种止血海绵，所述止血海绵的制备原料包括水溶性粘多糖溶液和脱细胞小肠粘膜下层颗粒；所述脱细胞小肠粘膜下层颗粒与水溶性粘多糖溶液的质量比为(0.1～0.9):1。

3、本技术所述止血海绵由充分溶胀的脱细胞小肠粘膜下层颗粒和水溶性粘多糖溶液制得，使得制得的止血海绵中同时包括多糖和胶原微粒(脱细胞小肠粘膜下层颗粒)，使用过程中止血海绵的多孔结构迅速吸收血液和组织液中的水分，进而多糖成分溶解成粘溶液，粘附在创伤面止血，胶原微粒包裹在多糖粘液中，随后多糖溶解在体内28天内降解成单糖被人体吸收，胶原微粒中的生长因子促进伤口愈合，且胶原颗粒的三螺旋结构能使血小板凝聚、活化、释放出颗粒成分，加速凝血因子释放，进一步促进伤口愈合。

4、进一步地，本技术通过将脱细胞小肠粘膜下层颗粒与水溶性粘多糖溶液的质量关系控制在(0.1～0.9):1，能使制得的止血海绵中多糖和胶原微粒的比例合适，进而使制得的止血海绵具有较佳的止血性能。

5、在一些具体实施例中，所述脱细胞小肠粘膜下层颗粒与水溶性粘多糖溶液的质量比可以为0.1:1、0.2:1、0.3:1、0.4:1、0.5:1、0.6:1、0.7:1、0.8:1或0.9:1等。在一些优选的实施方式中，所述脱细胞小肠粘膜下层颗粒与水溶性粘多糖溶液的质量比为(0.2～0.5):1。

6、本技术通过进一步优化脱细胞小肠粘膜下层颗粒与水溶性粘多糖溶液的质量比，使得制得的止血海绵吸水后的黏度优异，进而能更好地粘附在创伤面上，同时止血海绵中的脱细胞小肠粘膜下层颗粒能更好地促进伤口愈合。

7、在一些实施方式中，所述水溶性粘多糖溶液中水溶性粘多糖的含量为0.1～20wt％。

8、在一些优选的实施方式中，所述水溶性粘多糖溶液中水溶性粘多糖的含量为5～10wt％。

9、本技术中，所述止血海绵中多糖的含量是由水溶性粘多糖溶液的用量以及水溶性粘多糖溶液中水溶性粘多糖的占比共同决定的，通过将水溶性粘多糖溶液中水溶性粘多糖含量控制在上述范围内能使制得的止血海鲜吸水后的黏度较佳，同时能更好地促进伤口愈合。

10、在一些实施方式中，所述水溶性粘多糖选自透明质酸钠及其衍生物、水溶性纤维素及其衍生物、海藻酸钠及其衍生物和水溶性壳聚糖及其衍生物中的一种或多种。

11、本技术中对水溶性粘多糖中透明质酸钠衍生物、水溶性纤维素衍生物、海藻酸钠衍生物以及水溶性壳聚糖衍生物的具体种类没有明确限定，本领域技术人员可根据需要进行常规选择。例如，所述透明质酸钠的衍生物可以为乙酰化透明质酸钠等，水溶性纤维素的衍生物可以为羧甲基纤维素等，水溶性壳聚糖衍生物可以为羧甲基壳聚糖等。

12、在一些实施方式中，所述水溶性粘多糖包括羧甲基纤维素、海藻酸钠和羧甲基壳聚糖；且所述羧甲基纤维素、海藻酸钠和羧甲基壳聚糖的质量比为(1～3):(1～3):1。

13、本技术止血海绵中的粘多糖可以在创面形成保护层，起物理屏障作用，防止细菌感染，为创面提供愈合微环境，同时降解产物可以为细胞生长提供能量。本技术的发明人通过研究发现，当水溶性粘多糖采用羧甲基纤维素、海藻酸钠和羧甲基壳聚糖的混合物时，羧甲基纤维素、海藻酸钠和羧甲基壳聚糖之间能发挥协同增效作用，进而使制得的止血海绵的效果更好。

14、在一些具体实施例中，所述水溶性粘多糖中羧甲基纤维素、海藻酸钠和羧甲基壳聚糖的质量比可以为1:1:1、2:2:1、3:3:1、2:1:1、3:1:1、1:2:1、1:3:1等。

15、在一些优选的实施方式中，所述羧甲基纤维素、海藻酸钠和羧甲基壳聚糖的质量比为(2～3):(2～3):1。在一些更优选的实施方式中，所述羧甲基纤维素、海藻酸钠和羧甲基壳聚糖的质量比为2:2:1。

16、本技术通过优化水溶性粘多糖中羧甲基纤维素、海藻酸钠和羧甲基壳聚糖的质量关系，能进一步提升制得的止血海绵的止血效果。

17、在一些实施方式中，所述脱细胞小肠粘膜下层颗粒的粒径为75～850μm。

18、在一些优选的实施方式中，所述脱细胞小肠粘膜下层颗粒的粒径为300～500μm。

19、本技术中，若脱细胞小肠粘膜下层颗粒过小，则后续不易在水溶性粘多糖中进行均匀分散，且容易被巨噬细胞吞噬掉；若脱细胞小肠粘膜下层颗粒过大，过大的脱细胞小肠粘膜下层颗粒不易充分进行溶胀，导致制备的止血海绵的低溶胀性能较差，同时也会影响其降解周期。

20、在一些实施方式中，所述脱细胞小肠粘膜下层颗粒选自脱细胞猪小肠粘膜下层颗粒、脱细胞牛小肠粘膜下层颗粒、脱细胞羊小肠粘膜下层颗粒和脱细胞狗小肠粘膜下层颗粒中的任意一种。

21、本技术中的脱细胞小肠粘膜下层颗粒来源于哺乳动物(包括猪、牛、羊、狗等)的小肠粘膜下层，采用哺乳动物的小肠粘膜下层经常规的脱细胞处理并粉碎后，即可获得脱细胞小肠粘膜下层颗粒。例如制得的脱细胞小肠粘膜下层颗粒可以为脱细胞猪小肠粘膜下层颗粒、脱细胞牛小肠粘膜下层颗粒、脱细胞羊小肠粘膜下层颗粒和脱细胞狗小肠粘膜下层颗粒。

22、本技术第二方面提供了一种如本技术第一方面所述的止血海绵的制备方法，所述方法包括以下步骤：

23、s1，将所述脱细胞小肠粘膜下层颗粒与水溶性粘多糖溶液混合，获得混合液；

24、s2，对所述混合液进行真空冷冻干燥，制得冻干产物；

25、s3，对所述冻干产物进行裁剪和灭菌，制得所述止血海绵。

26、本技术所述止血海绵的制备方法简单，且制备过程无需添加交联剂，制备的止血海绵除了具有黏附性好、止血快速、可促进伤口愈合以及可吸收的优势外，同时还具有无免疫原、无交联剂、并发症少和恢复快等优势。

27、本技术步骤s1中，所述脱细胞小肠粘膜下层颗粒与水溶性粘多糖溶液的混合在搅拌条件下进行，所述搅拌的转速可以为100～1000r/min，所述搅拌的时间可以为1～24h。本技术在上述搅拌条件下，能使脱细胞小肠粘膜下层颗粒充分溶胀并均匀分散在水溶性粘多糖溶液中，进而使制备的止血海绵孔隙分布均匀同时还具有低溶胀性能。

28、在一些实施方式中，所述真空冷冻干燥的过程为：将所述混合液在-10℃～-80℃下预冷冻0.5～48小时，然后在真空条件下将温度提升至4℃～60℃进行干燥。

29、在一些优选的实施方式中，所述预冷冻在-30℃下进行，预冷冻时间为4小时。在上述预冷冻条件下，能够最大程度的保持止血海绵中各原料的结构不受到破环。在一些实施方式中，所述真空条件的真空度可以为1～100pa。

30、本技术中，通过裁剪可以获得所需的止血海绵的形状。本技术对止血海绵的形状没有明确限定，本领域技术人员可以根据实际需要进行常规选择，例如止血海绵的形状可以为圆形、方形、椭圆形等。

31、本技术中，所述灭菌的方式可以为辐照灭菌，辐照灭菌是指利用电子加速器的电子束照射来杀死细菌，具有灭菌彻底、无化学残留物、不需加热的“冷消毒”、工艺简单、快速等特点。采用辐照灭菌能够有效杀死止血海绵上的微生物，同时不会影响止血海绵中生物成分的活性。

32、本技术第三方面提供了一种如本技术第一方面所述的止血海绵或者第二方面所述的方法制备的止血海绵在制备用于止血的材料中的应用。

33、本技术所述止血海绵具有黏附性好、止血快速、低溶胀、无免疫原、无交联剂、并发症少、恢复快、可促进伤口愈合且可吸收等优势，同时制备方法简单、高效，因此能较好地应用在止血材料中，应用前景广阔。

34、本技术的有益技术效果为：本技术所提供的止血海绵中同时包括多糖和脱细胞小肠粘膜下层颗粒，使用过程中止血海绵的多孔结构迅速吸收血液和组织液中的水分，进而多糖成分溶解成粘溶液，粘附在创伤面止血，脱细胞小肠粘膜下层颗粒包裹在多糖粘液中，随后多糖溶解在体内28天内降解成单糖被人体吸收，脱细胞小肠粘膜下层颗粒中的生长因子促进伤口愈合，且脱细胞小肠粘膜下层颗粒能够维持三螺旋结构，进而使血小板凝聚、活化、释放出颗粒成分，加速凝血因子释放，进一步促进伤口愈合。同时该止血海绵还具有低溶胀、无免疫原、无交联剂、并发症少、恢复快等优势，能较好地应用在止血材料中，应用前景广阔。