丝素蛋白微载体皮肤填充制剂及其制备方法和应用与流程

本发明属于丝素蛋白，具体涉及一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、丝素蛋白是一种高分子蛋白，主要含有18中氨基酸，丝素蛋白具有出色的机械性能、生物相容性和生物降解性，在生物材料和组织工程领域具有很好的应用前景。

2、目前，丝素蛋白以多种形式被应用(林楠,左保齐.医用再生丝素蛋白材料制备与研究进展[j].现代丝绸科学与技术,2020,35(3):9.)，包括：

3、(1)制备再生丝素溶液，具体包括脱胶步骤、溶解步骤。由于丝素蛋白和丝胶蛋白的协同作用会产生一定的免疫反应，所以脱胶是将丝素蛋白用作生物材料的关键步骤。蚕丝经过脱胶后可以溶解，溶解后的丝素蛋白可以制成多种剂型。

4、(2)制备丝素蛋白材料，包括制备水凝胶、多孔支架、薄膜、微球等材料。水凝胶的制备方法包括旋流剪切、超声振荡、酸处理、自然凝胶等；多孔支架通过冷冻干燥、粒子致孔等步骤制备；薄膜采用浇筑法等方法制备；微球采用喷雾干燥、冷冻干燥等方法制备。

5、皮肤填充制剂的主要作用是组织修复，通过局部注射的微创疗法，将具有皮肤组织修复功能的物质注入结构松弛的软组织局部，以改善皮肤松弛度，从而使该组织恢复正常的功能和外观。已有专利研究了利用丝素蛋白制备组织填充材料技术，如中国专利cn102836465b记载的方案，该专利将丝素蛋白与透明质酸复合，制备了复合凝胶，使得凝胶的体外抗酶解能显著提高，进而减缓了复合凝胶的降解速度，最终可延长复合凝胶在组织修补和填充的作用时间，另外，该专利由于在丝素蛋白颗粒中增加了透明质酸，增加了吸水性和储水功能，所以制得的复合凝胶储水功能和填充效果也不错。然而仅有透明质酸的皮肤修复功能，还是不能满足皮肤填充剂的需求，有些皮肤差的患者需要增加其他辅助因子来改善皮肤状况。

技术实现思路

1、为了解决“增加其他的辅助因子来改善皮肤状况”的技术问题，我们以丝素蛋白等物质为原料制成凝胶，开发出一种新的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。具体的，本发明提供一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂及其制备方法和应用，相比于现有技术的复合凝胶，我们的技术方案可以负载维生素b5、i型胶原蛋白等多种辅助因子，辅助因子负载率高，有助于改善皮肤状况。

2、本发明的一个目的是提供一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，包括：

3、桑蚕丝脱胶、浓缩、干燥，得到干燥丝素；

4、干燥丝素配置成水溶液，该水溶液与维生素c混合，搅拌，冻干，得到vc负载丝素蛋白；

5、将vc负载丝素蛋白配置成丝素水溶液，将丝素水溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂混合，35-40℃静置，得到复合凝胶，灭菌，即得到丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。

6、优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，干燥丝素用双蒸水作为溶剂，配置成质量分数5-10％的水溶液，该水溶液与维生素c按照90-110:1的质量比例混合，搅拌15-30min，冻干，得到vc负载丝素蛋白。

7、优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，干燥丝素用双蒸水作为溶剂，配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素c按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，冻干，得到vc负载丝素蛋白。

8、优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，以peg300-peg600为溶剂，将vc负载丝素蛋白配置成30-40g/l的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂按照10:1:0.5-0.8:0.2-0.5的质量比例混合，35-40℃静置，得到复合凝胶。麦芽糊精的加入可以提高复合凝胶的辅助因子负载性能。

9、优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，以peg300为溶剂，将vc负载丝素蛋白配置成30g/l的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂按照10:1:0.5:0.2的质量比例混合，40℃静置，得到复合凝胶。

10、优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，交联剂为辛基硫酸钠溶液、十二烷基磺酸钠中的一种或几种。进一步优选的，交联剂为浓度15g/l的辛基硫酸钠溶液、15g/l十二烷基磺酸钠的一种或几种。优选的，将所述交联剂与高分子化合物混合后，再与丝素溶液、麦芽糊精混合，35-40℃静置，得到复合凝胶。

11、在适合交联的条件下，高分子化合物在所述交联剂的存在下发生交联反应，例如，所述高分子化合物为选自下组中的一种或多种：透明质酸、透明质酸钠、壳聚糖、羧甲基壳聚糖、几丁质、羧甲基几丁质、胶原蛋白、明胶、丝素蛋白、羧甲基葡聚糖、羧甲基纤维素、氨基聚乙二醇、羧基聚乙二醇。所述高分子化合物在溶液中的起始质量浓度为0.5％-10％，例如0.6％-8％。

12、优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，所述脱胶的方法包括：

13、(1)用碱溶液煮沸桑蚕丝30min，过滤，收集沉淀；其中，所述碱溶液为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液与质量分数0.03％的l-谷氨酸钠水溶液按照20:1体积比例混合而成的；

14、(2)将沉淀继续用所述碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，收集溶液；

15、(3)重复(2)操作，直至桑蚕丝脱胶完全，脱胶完全的物料称作丝素蛋白溶液。

16、本发明还提供了一种上述方法制备的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。

17、本发明还提供了一种负载辅助因子的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂，制备方法如下：桑蚕丝脱胶、干燥，得到干燥丝素；

18、干燥丝素配置成水溶液，该水溶液与维生素c混合，搅拌，冻干，得到vc负载丝素蛋白；

19、以peg300-peg600为溶剂，将vc负载丝素蛋白配置成丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.5-0.8:0.1:0.2-0.5的质量比例混合，35-40℃静置，得到复合凝胶，灭菌，即得到丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。优选的，采用peg300、peg400、或者peg600为溶剂。

20、需要说明的是，在本发明的发明构思下，辅助因子可以是以下选择：维生素b5、皮肤生长因子、维生素e、维生素a、i型胶原蛋白等具有皮肤修复效果的任何物质。

21、本发明还提供了一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的应用，具体的，丝素蛋白微载体皮肤填充制剂用于填充皮肤皱纹处或皮肤凹陷处。

22、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

23、本发明通过对丝素蛋白进行改良，使其先负载vc，然后再用于制备填充制剂，这样能提高填充制剂的抗酶解能力，呈现好的皮肤填充效果。原理：丝素蛋白具有吸附性能，已有研究显示其可以吸附金属，本发明利用丝素蛋白吸附vc，然后再用该vc负载丝素蛋白制备填充制剂，既能将vc包裹入填充制剂中，作为营养成分使用，还能提高填充制剂的抗酶解能力，提高材料填充皮肤的有效性。

24、进一步的，本发明中，麦芽糊精与改良的丝素蛋白溶液组合使用，制成的填充制剂抗酶解效果和辅助因子负载性能均更好。原理：麦芽糊精是介于淀粉和淀粉糖之间的低转化产品，具有填充效果，载体性好，稳定性也好，医药领域常用麦芽糊精作为药物载体，本发明考虑到麦芽糊精和维生素b5、i型胶原蛋白等多种辅助因子化学结构，提供一种具体的负载方法，在本发明的负载方法下，对辅助因子的负载率高，且制得的填充制剂的抗酶解性能也得到提高。

25、基于上述原理和我们的实验结果，本发明制备的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂抗酶解效果和辅助因子负载性能好，生物相容性也好，应用价值高。