无动物源性蛋白成分的疫苗冻干保护剂及其应用的制作方法

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种无动物源性蛋白成分的疫苗冻干保护剂配方，及其在水痘减毒活疫苗冻干制剂中的应用。

背景技术：

1、水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,vzv)属于疱疹病毒科，α-疱疹病毒亚科(subfamilyαherpesviridae)，是引起水痘(varicella,chickenpox)和带状疱疹(herpes zoster，hz)两种疾病的病原体。vzv具有高度传染性，全球感染率超过90％，主要通过吸入水痘或带状疱疹患者的传染性空气飞沫或接触而被感染。水痘的典型症状为瘙痒型水泡疹，并伴有轻微发热；该疾病具有明显的季节性，以冬春两季多见；其发病率高，但死亡率低，愈后良好。水痘痊愈后，感染的vzv会以一种潜伏的状态存在于神经节内，当机体免疫功能下降，针对vzv特异性的细胞介导免疫反应(cell mediated immunologicalreaction，cmir)减弱时，vzv被再次激活引发带状疱疹。

2、针对水痘疾病最有效的方式为接种疫苗，目前国际上广泛使用的水痘疫苗为水痘减毒活疫苗，该疫苗已经使用多年，其安全性和有效性已经得到充分证明。水痘减毒活疫苗生产用减毒的水痘-带状疱疹病毒株主要为oka株减毒株，为who公认且广泛使用的毒株。oka株减毒株是于1974年，由日本takahashi博士分离和减毒获得的。该减毒株是从一名叫oka的3岁男孩的水痘水疱液中分离得到的一株水痘-带状疱疹病毒，即为oka株水痘-带状疱疹病毒。该oka毒株在takahashi博士实验室中，于34℃条件下，在人成纤维细胞(humanembryonic lung fibroblast，helf)内连续培养11代；然后，于37℃条件下，在豚鼠成纤维细胞(guinea pig embryo fibroblast，gplf)中培养12代，以进一步减弱病毒毒力；在wi-38人二倍体细胞中连续传代两次制备主种子病毒，最后在mrc-5(人胚肺成纤维细胞)人二倍体细胞中连续传代3次制备工作种子病毒，即为目前广泛使用的oka株减毒株。

3、水痘减毒活疫苗的生产工艺主要为将减毒的水痘-带状疱疹病毒接种于细胞基质，病毒在细胞基质中增殖；然后，收获病毒感染的细胞，破碎细胞释放病毒，再加入冻干稳定剂后进行冻干制成。

4、为保证疫苗的有效性，上市的水痘减毒活疫苗均为冻干制剂，冻干制剂配方中常加入明胶或人血白蛋白等动物源性蛋白成分作为保护剂。明胶为非人源成分，不仅容易引起过敏反应，还存在潜在动物源性病毒的安全隐患；虽然人血白蛋白为人源成分且为批签发产品，但也存在血浆来源病毒的安全隐患，并且价格昂贵。现有技术中也有使用右旋糖酐大分子物质替代明胶和人血白蛋白制剂，但右旋糖酐的使用增加了不良反应；或采用小分子化学成分作为保护剂，但会影响疫苗的稳定性。

5、公开号为cn105582534a的中国专利公开了一种水痘减毒活疫苗的冻干保护剂，其含有蔗糖和谷氨酸钠，用于水痘减毒活疫苗制备。但是，由该冻干保护剂制备的水痘减毒活疫苗稳定性较差，2～8℃放置24个月后病毒滴度显著下降，基本临近标准要求下限。

6、因此，开发一种安全、有效、稳定且副作用小的水痘减毒活疫苗保护剂是该领域亟待解决的课题之一。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的是提供一种不含动物源性蛋白，且不含右旋糖酐等大分子物质的疫苗冻干保护剂配方，其在水痘减毒活疫苗冻干制剂中的应用，以及由其制成的疫苗半成品或成品及制备方法。

2、本发明第一方法涉及一种无动物源性蛋白成分的疫苗冻干保护剂，其包含以下组分：

3、蔗糖：0.2wt.％～8wt.％；

4、海藻糖：1.0wt.％～10wt.％；

5、谷氨酸钠：0.2wt.％～4.0wt.％；

6、尿素：0.05wt.％～1.0wt.％；

7、精氨酸：0.05wt.％～1.0wt.％；

8、葡萄糖：0.05wt.％～2.0wt.％；

9、余量为ph在6.8-7.8范围内的磷酸盐缓冲液。优选地，所述疫苗为水痘减毒活疫苗。

10、在优选的技术方案中，该保护剂中不含分子量大于500的大分子化学成分，优选不含分子量大于400的大分子化学成分，更优选不含分子量大于350的大分子化学成分；例如右旋糖酐等。

11、在优选的技术方案中，该保护剂包含以下组分：

12、蔗糖：0.4wt.％～7wt.％；优选为0.5wt.％～6wt.％；

13、海藻糖：1.5wt.％～9wt.％；优选为2wt.％～8wt.％；

14、谷氨酸钠：0.4wt.％～3wt.％；优选为0.5wt.％～2wt.％；

15、尿素：0.08wt.％～0.75wt.％；优选为0.1wt.％～0.5wt.％；

16、精氨酸：0.08wt.％～0.75wt.％；优选为0.1wt.％～0.5wt.％；

17、葡萄糖：0.08wt.％～1.5wt.％；优选为0.1wt.％～1.0wt.％；

18、余量为ph在7.1-7.4范围内的磷酸盐缓冲液。

19、在优选的技术方案中，该保护剂由以下组分组成：

20、蔗糖：0.5wt.％～6wt.％；

21、海藻糖：2wt.％～8wt.％；

22、谷氨酸钠：0.5wt.％～2wt.％；

23、尿素：0.1wt.％～0.5wt.％；

24、精氨酸：0.1wt.％～0.5wt.％；

25、葡萄糖：0.1wt.％～1.0wt.％；

26、余量为ph在7.2-7.3范围内的磷酸盐缓冲液。

27、本发明第二方面涉及根据本发明第一方面所述的疫苗冻干保护剂的制备方法，其包括以下步骤：按照各组分的含量称取各组分，充分溶解于适量的磷酸盐缓冲液中，定容并调节ph，高压灭菌或过滤除菌，即得。或者按照各组分的含量依次称取各组分，分别使各组分充分溶解于适量的磷酸盐缓冲液中，混合后定容并调节ph，高压灭菌或过滤除菌，即得。优选地，所述疫苗为水痘减毒活疫苗。

28、本发明第三方面涉及根据本发明第一方面所述的疫苗冻干保护剂在制备疫苗中的用途。优选地，所述疫苗为水痘减毒活疫苗。

29、本发明第四方面涉及一种疫苗半成品，其包含检定合格的疫苗原液和根据本发明第一方面所述的疫苗冻干保护剂。优选地，所述疫苗为水痘减毒活疫苗。

30、本发明第五方面涉及一种疫苗冻干制剂，其包含检定合格的疫苗原液和根据本发明第一方面所述的疫苗冻干保护剂。优选地，所述疫苗为水痘减毒活疫苗。该疫苗冻干制剂通过将检定合格的疫苗原液和根据本发明第一方面所述的疫苗冻干保护剂混合并冻干制成。

31、本发明第六方面涉及一种制备根据本发明第五方面所述的疫苗冻干制剂的方法，其包括以下步骤：将检定合格的疫苗原液根据病毒滴度与根据本发明第一方面所述的疫苗冻干保护剂进行稀释，分装冻干，即得。优选地，所述疫苗为水痘减毒活疫苗，进一步优选地，疫苗病毒滴度≥2000pfu/ml，例如为3000pfu/ml、4000pfu/ml。

32、本发明的有益效果：

33、1.本发明的疫苗冻干保护剂不含动物源(包括人源)蛋白，如明胶、人血白蛋白等，且不含右旋糖酐等大分子物质，所含成分均为小分子物质；由于本发明的冻干保护剂不含大分子过敏原性成分，使疫苗更加安全，不易发生过敏反应，是新一代冻干保护剂，可用于水痘减毒活疫苗的冻干。

34、2.用本发明的疫苗冻干保护剂制成的水痘减毒活疫苗稳定性好且成本低。