一种用于治疗HPV感染的组合物、纳米微粒、外用制剂及用途的制作方法

本发明属于生物技术及药物制剂领域；尤其涉及一种用于治疗hpv感染的组合物、纳米微粒、外用制剂及用途。

背景技术：

1、人乳头瘤病毒(hpv)属于乳头多瘤空泡病毒科乳头瘤病毒属，是一种环状双链dna病毒。hpv主要感染人体特异部位皮肤、黏膜的复层鳞状上皮，性接触为其主要的传染途径，其他途径如接触传播或母婴直接传播。据报道，妇女可反复感染hpv，也可同时感染多种不同类型的hpv。

2、我国对3381例女性生殖道人乳头瘤病毒检测结果分析的一份研究报告显示，3381例女性中hpv阳性率高达18.75％。在2021年第十四届中华女性生殖道感染峰会上，有学者指出全球细胞学正常妇女hpv平均感染率估计约11.7％，中国女性高危hpv的总体感染率为15％左右。大量检测资料显示，hpv感染在18～28岁之间的青年人中最常见，高达80％的妇女在50岁之前有过hpv感染，这是一个令人触目惊心的数字。

3、宫颈癌是严重危害妇女健康和生命的疾病，也是迄今为止最常见的与hpv有关的疾病。宫颈癌发生在女性的子宫颈(从阴道进入子宫的入口)，是女性第四大常见癌症。现代医学己证实宫颈癌源自一种hpv感染，这是目前人类所有癌症中唯一病因明确的癌症。

4、另外，宫颈炎症也是妇科常见下生殖道炎症，约占妇科门诊总数的40％～50％。子宫颈管上皮为单层柱状上皮，黏膜皱襞较多，易感染，易持续。慢性宫颈炎的病原体可以上行造成子宫内膜炎，还会通过宫旁韧带淋巴管蔓延引起慢性盆腔炎，出现白带异常；当炎症涉及膀胱三角区可以引起泌尿系统的疾病而出现尿痛尿频或者是排尿困难等刺激症状。若不及时诊断和正确治疗，可引起一些严重疾病，比如不孕、宫外孕、流产、早产、胎死宫内等并发症，还会引起宫颈hpv感染及其相关病变，影响患者的性生活质量与家庭和睦。

5、迄今为止，医药界还没有开发出用于治疗hpv感染的有效的抗病毒药物，传统的抗生素和杀菌药物、消毒药对hpv完全没有作用。目前推出的hpv疫苗通常也只有预防作用，国际上已推广的预防性的二价、四价和九价疫苗，分别为预防2种、4种和9种型号的人乳头瘤病毒(hpv)感染，但却并没有治疗作用。对于已感染hpv的人注射这种疫苗是无效的。更困扰的是，人乳头瘤病毒(hpv)有100多种型号，不同的型别引起不同的临床表现，不同国家和地区流行的人乳头瘤病毒(hpv)也不同。即便是疫苗接种者仍有可能感染所接种的疫苗未包含的其它种类人乳头瘤病毒，且采用简单地增加疫苗靶抗原种类来达到完全预防各地不同的人乳头瘤病毒(hpv)感染的目的，是根本做不到的。

6、目前，除了口服和注射各种化学药物和中药以及生物制剂外，普遍都是采用各种方式把药物和生物制剂灌注或填塞到阴道，以期达到预防和治疗hpv感染以及治疗宫颈癌和宫颈炎的目的。经深层次研究发现，宫颈才是人乳头瘤病毒(hpv)和宫颈炎致病菌聚集和繁殖的主要部位，同时也是宫颈细胞病变和宫颈癌原发部位。要使受hpv感染的阳性患者转阴，就必须清除隐藏在宫颈的人乳头瘤病毒以及宫颈中的受感染细胞。但是，鉴于女性与生俱来的生理特性，宫颈口平时都是处于封闭状态的，影响阴道灌注或填塞的施药方式并不能将药物和生物制剂输送到宫颈位置，其结果必然造成药物未能到达病灶处发生作用，从而导致实际预防和治疗效果不佳，造成各种阳转阴的药实际疗效都很差。虽然采用扩宫术施药可以将药放入宫颈，但是，这需要去专门的医疗机构实施操作，不但费时费力，还要增加扩宫手术费用和手术痛苦，隐私也得不到保障，使患者的依从性降低，难于推广应用。另外，现在广泛使用的化学药和中药本身对这类疾病的治疗效果不太理想，而其它诸如激光、冷冻等物理类疗法则可能造成术中出血、术后宫颈管狭窄、粘连、不孕、感染等以及诱发各种并发症。

7、因此，本领域期待开发一种更为有效的用于治疗hpv感染的外用制剂，该制剂可以直接用于宫颈部位，实现精准用药、高效的预防和治疗效果。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供了一种用于治疗hpv感染的组合物、纳米微粒、外用制剂及用途。

2、本发明是通过以下技术方案实现的：

3、本发明涉及用于治疗hpv感染的组合物，包括偶联组合抗体的乳球蛋白和抗宫颈炎病原体igy；所述偶联组合抗体的乳球蛋白和抗宫颈炎病原体igy的质量比为(1-10)：(1-10)；所述抗hpv感染的组合物可有效预防及治疗hpv感染和宫颈炎等病症；

4、本发明还涉及抗hpv感染的纳米微粒，由脂质体为载体包裹所述抗hpv感染的组合物制备而成；所述抗hpv感染的组合物包括偶联组合抗体的乳球蛋白和抗宫颈炎病原体igy。

5、本发明所述抗hpv感染的组合物中偶联组合抗体的乳球蛋白中的β-乳球蛋白，基于带负电的酸酐化的β-乳球蛋白与带正电的hpv结合，形成蛋白质复合物，使hpv病载量下降；

6、本发明酸酐化的β-乳球蛋白偶联组合抗体可有效增加酶酸酐化β-乳球蛋白抑制e6/e7致癌基因的能力，赋予了酸酐化β-乳球蛋白新的药理作用，且利用了酸酐化β-乳球蛋白和组合抗体各自的优势，产生叠加效应，提高了治疗效果。

7、本发明所述抗hpv感染的纳米微粒是基于脂质液晶纳米粒(lipid liquidcrystalline nanoparticles，llcn)和脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle，lnp)以及固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticle，sln)等先进的载体进行包裹处理得到，可以显著提高组合抗体渗透进入宫颈隐窝和粘膜间隙的能力，同时赋予组织靶向特性，使组合抗体准确靶向聚集在宫颈粘膜层，并缓释药物；从而充分发挥由上述载体包裹偶联组合抗体的乳球蛋白和抗宫颈炎病原体igy的组合物制备而成的纳米微粒的功效，进而提高治疗效果。

8、本发明还涉及抗hpv感染的外用制剂，包括抗hpv感染的组合物和/或抗hpv感染的纳米微粒及辅料；所述抗hpv感染的组合物包括偶联组合抗体的乳球蛋白和抗宫颈炎病原体igy；所述抗hpv感染的纳米微粒由脂质体为载体包裹所述抗hpv感染的组合物制备而成。

9、优选地，所述偶联组合抗体的乳球蛋白中组合抗体包括广谱抗hpv-igy及其小分子抗体fab、复合抗e6/e7-igy及其小分子抗体fab、抗pd-1/l1-igy及其小分子抗体fab的混合物。

10、优选地，所述广谱抗hpv-igy、所述复合抗e6/e7-igy及所述抗pd-1/l1-igy的质量比为(1-10)：(1-10)：(1-10)；所述广谱抗hpv-igy、所述广谱抗hpv-igy小分子抗体fab、所述复合抗e6/e7-igy、所述复合抗e6/e7-igy小分子抗体fab、所述抗pd-1/l1-igy、所述抗pd-1/l1-igy小分子抗体fab的质量比为(1-10)：(1-10)：(1-10)：(1-10)：(1-10)：(1-10)。

11、其中，广谱抗hpv-igy及其小分子抗体fab可结合各种亚型的hpv且对hpv的结合力远超哺乳动物抗体igg；抗hpv-e6/e7-igy可最有效抑制致癌基因蛋白e6/e7，且只有鸡的抗体(igy)能够在阳性细胞中以及病变鳞状上皮内特异性结合并抑制hpv-e7致癌蛋白；抗pd-1/l1-igy是在国际诺贝尔医学奖技术基础上创新的可重启人体免疫机制、激活t细胞产生长效作用。本发明所述抗hpv感染的组合物，基于“三合一”抗体组合可显著提高免疫疗法的疗效，三种抗体协同作用，使本发明的组合制剂的实际疗效大幅度提升相比于注射pd-1抑制剂(阿替珠单抗、度伐单抗和阿维单抗等)由血液循环输送抗体到宫颈管所产生的疗效大幅提高。

12、优选地，所述偶联组合抗体的乳球蛋白的制备方法为：

13、(a)按照选定的抗体种类分别制备所需抗原；

14、(b)分别利用制备的所述抗原制备相应的免疫蛋；

15、(c)分别制备所需种类的抗体-igy及其小分子抗体fab，并得到所需组合抗体；

16、(d)利用酸酐化乳球蛋白偶联所述组合抗体，即得。

17、优选地，所述抗宫颈炎病原体igy的病原体包括引起阴道炎的主要病原体类型，具体包括金黄色葡萄球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、无乳链球菌的混合物。

18、优选地，所述抗宫颈炎病原体igy的制备方法为：

19、(a)取选定类别的病原体进行培养，并制备相应的复合抗原；

20、(b)利用所述复合抗原制备免疫蛋；

21、(c)利用所述免疫蛋制备抗宫颈炎病原体igy，即得。

22、优选地，所述脂质体包括脂质液晶纳米粒、脂质纳米颗粒或固体脂质纳米粒中的至少一种。

23、优选地，所述抗hpv感染的外用制剂包括：凝胶剂、敷料剂、喷雾剂、妇科洗液、男士洗液、洗手液、粉剂、片剂、牙膏、口腔膏、漱口水、口含片、口服液、口服剂或胶囊剂。

24、本发明还涉及前述一种抗hpv感染的外用制剂的用途，用于制备预防及治疗hpv感染、宫颈感染性疾病或宫颈癌的药物的用途、用于制备非诊断性检测试剂或检测产品的用途或用于制备抗hpv感染医疗器械的用途。

25、本发明具有以下优点：

26、(1)本发明各成分之间相互作用，具体为：所涉及广谱抗hpv-igy及其小分子抗体fab可结合各种亚型的hpv且对hpv的结合力远超哺乳动物抗体igg；抗hpv-e6/e7-igy可最有效抑制致癌基因蛋白e6/e7，且只有鸡的抗体(igy)能够在阳性细胞中以及病变鳞状上皮内特异性结合并抑制hpv-e7致癌蛋白；抗pd-1/l1-igy是在国际诺贝尔医学奖技术基础上创新的可重启人体免疫机制、激活t细胞产生长效作用。

27、(2)本发明基于“三合一”抗体组合可显著提高免疫疗法的疗效，三种抗体协同作用，使本发明的组合制剂的实际疗效大幅度提升。由于宫颈部位毛细血管分布很少,本发明将组合抗体直接施加于宫颈病灶处，相比于注射pd-1抑制剂(阿替珠单抗、度伐单抗和阿维单抗等)由血液循环输送抗体到宫颈管所产生的疗效大幅提高。

28、(3)本发明基于带负电的酸酐化的β-乳球蛋白与带正电的hpv结合，形成蛋白质复合物，使hpv病载量下降；将酸酐化的β-乳球蛋白偶联组合將抗体可有效增加酶酸酐化β-乳球蛋白抑制e6/e7致癌基因的能力，赋予了酸酐化β-乳球蛋白新的药理作用，且利用了酸酐化β-乳球蛋白和组合抗体各自的优势，产生叠加效应，提高了治疗效果。

29、(4)本发明将所述抗hpv感染的纳米微粒，基于脂质液晶纳米粒(lipid liquidcrystalline nanoparticles，llcn)和脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle，lnp)以及固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticle，sln)等先进的载体进行包裹处理制备而成，可以显著提高组合抗体渗透进入宫颈隐窝和粘膜间隙的能力，同时赋予组织靶向特性，使组合抗体准确靶向聚集在宫颈粘膜层，并缓释药物；从而充分发挥偶联组合抗体的乳球蛋白和抗宫颈炎病原体igy组合物的纳米微粒的功效，提高治疗效果。