一种眼表润滑液及其制备工艺、质量控制方法和应用与流程

本发明属于医疗器械及医药，具体的说，是一种眼表润滑液及其制备工艺、质量控制方法和应用。

背景技术：

1、眼表润滑液可作为“隐形眼镜润滑液”，能够缓解眼睛干涩、疲劳等不适症状。目前市面上有售的隐形眼镜润滑液的主要成分通常为透明质酸钠，能够起到润滑和保湿的作用。羊膜是胎盘的最内层，成分中主要含有蛋白质和总糖（特别是糖胺聚糖），羊膜或羊膜提取物作为医疗器械或药物使用，其成分中的蛋白质可以作为细胞生长黏合的天然支架，具有促进组织修复的功能，总糖中的糖胺聚糖具有亲水润滑作用。目前，已有将羊膜提取物或羊膜混悬液制备的羊膜滴眼液用于各种眼科疾病的术后治疗中，并具有较好的临床使用效果。但将其作为隐形眼镜润滑液的主要成分目前还鲜有报道。

2、参考现有文献中羊膜滴眼液的制备工艺，如：论文“治疗严重眼表病变的新方法”，《细胞和组织库》杂志，2022, 23(3), 473–481 报道了将羊膜制备成为滴眼液在用于治疗慢性干眼病、角膜缘干细胞缺乏性等眼表疾病患者（25例患者的36只眼睛）的临床随访研究。羊膜提取物粉碎工艺为：液氮冷冻粉碎，纯化工艺为：离心取上清液。其结果表明：局部应用羊膜滴眼液是安全的，患者耐受性良好，能够显著改善眼部症状，如异物感，瘙痒和刺痛。其中，羊膜滴眼液的制备方法如下：经捐赠者知情同意后，收集胎盘。冲洗胎盘以清除血凝块后，通过钝性工具剥离羊膜。然后用抗生素/抗真菌溶液对羊膜进行冲洗和净化。第二天，将羊膜用盐水冲洗以去除抗生素，然后浸泡在液氮中冷冻。将冷冻的羊膜在室温下研磨并离心。将上清液分成1毫升小瓶，冷冻干燥，并在室温下保存直到使用。

3、又如：申请号为200910178422.7的发明专利公开的一种羊膜滴眼液及其制备方法，该专利的羊膜提取物粉碎工艺为：pbs液体粉碎，纯化工艺为：离心取上清液。是以羊膜匀浆上清液为主要活性成分，再加入海藻糖，玻璃酸或其盐，肝素或其盐，氯化钠，苯扎溴铵，维生素等物质。所述羊膜匀浆上清液是采用如下方法制备得到：在超净台上将羊膜在pbs 液中清洗3次，约10～15分钟，取适当大小称湿重，按1:1加pbs液放入匀浆机中，每分钟5000转，10冲程磨制匀浆，每冲程30秒。取出匀浆按1:5加 pbs液于离心管中离心2000 r/min，10分钟，取上清液备用。

4、以及，申请号为202310856867.6的发明专利还公开了一种组织再生型生物膜组织复合物及制备方法及应用，该专利的羊膜提取物粉碎工艺为：生理盐水液体粉碎，纯化工艺为：离心取上清液。包括生物膜组织提取物和促进吸附凝胶缓释系统，其中生物膜组织提取物包括羊膜提取物，制备方法为：采用生理盐水清除血凝块后，通过钝性工具剥离得到新鲜人体羊膜。将新鲜羊膜在同时含有两性霉素b（10 mg/ml）、青霉素（100 u/ml）、链霉素（10mg/ml）的生理盐水中浸泡2小时。保持羊膜湿重与生理盐水体积比值为1g/l, 在无菌条件和中性ph值下进行，将羊膜用生理盐水连续漂洗三次。采用组织粉碎机处理并离心后收集上清液：在无菌条件下进行，组织粉碎机处理时间为10分钟，离心速率为800rpm，离心时间为10分钟。

5、由此可见，现有技术在制备羊膜滴眼液用羊膜提取物时仍然以下问题亟待解决：一，粉碎工艺采用液氮冷冻粉碎或加入pbs/生理盐水液体粉碎，粉碎效果不佳，进而导致对羊膜提取物中有效成分（如总蛋白质及总糖）提取效果不佳；二，纯化工艺采用离心后取上清液的方法，所获得的羊膜提取物中仍可能含有较大颗粒物质（＞50μm），导致滴加到患者眼部后出现异物不适感；三，羊膜提取物中含有较高含量非功能杂质（如脂肪及炽灼残渣）。

6、因此，由于现有羊膜滴眼液中的羊膜提取物的质量难以保证，难以确保其在眼表使用的安全性和有效性。为此，在将羊膜提取物用于隐形眼镜润滑液等眼用制剂产品而言，提供一种优化的含有羊膜提取物的眼用制剂产品的制备方法并建立相关质量控制标准就迫切具有必要性。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种眼表润滑液的制备工艺，通过在羊膜提取物的制备过程中，利用冰水混合液对羊膜进行粉碎，再结合冰块与羊膜的质量比、粉碎时间、粉碎次数等工艺参数的配合及控制，能够获得有效成分总蛋白质及总糖优化的羊膜提取物，然后再用于制备眼表润滑液，使之能够更好用于眼表环境，安全性和有效性能均得到提升。为此，本发明还提供了由该制备工艺制得的眼表润滑液，以及该眼表润滑液的质量控制方法。

2、本发明通过下述技术方案实现：一种眼表润滑液的制备方法，将新鲜羊膜依次经消毒、清洗除杂、晾干后，进行冰浴粉碎，将粉碎液进行离心、抽滤后，制得羊膜提取物，再将羊膜提取物配制成预制液后，经过滤、封装、辐照灭菌后，即得眼表润滑液，

3、所述冰浴粉碎时，将晾干后的羊膜和冰块加入容器中，控制冰块与羊膜的质量比为1～5∶1，然后静置5min，获得冰水羊膜混合液后再采用粉碎机粉碎，控制粉碎过程中的料液温度＜8℃，粉碎10～60s后间隔1min再次进行粉碎，重复该过程30～90次，即完成冰浴粉碎，

4、羊膜提取物干物质满足：总蛋白质含量≥78.02%、总糖含量≥10.87%、脂肪含量≤3.53%、炽灼残渣含量≤1.64%，本发明所述羊膜提取物干物质是指将液体状态的羊膜提取物放置于50℃鼓风干燥箱中至恒定重量，通常干燥超过2天即至恒定重量，

5、所述预制液中含有以下质量百分浓度的组分：羊膜提取物0.1～10%，透明质酸钠0.1～0.4% ，甘油5～10%，氯化钠0.01～0.8%，硼酸0.2～0.6%，硼砂0.005～0.025%，其余为注射用水。

6、所述消毒时，在新鲜羊膜的包材上喷洒75%酒精进行消毒，然后再进行紫外杀菌30min。

7、所述清洗除杂时，将消毒后的羊膜拆袋后放入纯化水中，进行分散、清洗，并除去其表面的残留杂质。

8、所述晾干时，将清洗除杂后的羊膜平铺于筛网上晾干1h，且每15min翻面一次。

9、所述冰块采用边长为1～3cm的纯化水冰块。

10、所述离心时，将粉碎液分装入50ml的离心管中，每管均装入50ml粉碎液后再放入离心机离心10min，控制离心机的转速为1000～3000rpm。

11、所述抽滤是采用孔径为5～50μm的滤纸进行真空抽滤。

12、所述羊膜提取物干物质满足：总蛋白质含量为78.02～82.79%、总糖含量为10.87～13.11%、脂肪含量为1.83～3.53%、炽灼残渣含量为0.94～1.64%。

13、一种眼表润滑液，采用上述制备方法制得。

14、一种眼表润滑液的质量控制方法，包括对眼表润滑液中羊膜提取物用量的质量控制以及眼表润滑液指标体系的质量控制，

15、对眼表润滑液中羊膜提取物用量的质量控制包括以下步骤：

16、（1）设定眼表润滑液中目标总蛋白质质量浓度为w0；

17、（2）按照《中国药典》第2020年版中0731蛋白质含量测定法及《中国药典》第2020年版中0704第一法氮测定法，测定上述羊膜提取物中总蛋白质质量浓度为w1 ；

18、（3）比较w1与眼表润滑液中目标总蛋白质质量浓度w0的大小，当w1>w0时，加入其他眼表润滑液成分以及注射用水直至总蛋白质质量浓度稀释至w0 ；当w1= w0，直接向羊膜提取物中加入其他眼表润滑液成分；当w1<w0，将羊膜提取物进行冷冻干燥处理直至w1≥w0；如经过冷冻干燥之后复配溶液无法达到w1≥w0，则该批次羊膜提取物判定为质量不合格，进行废弃处理，

19、眼表润滑液指标体系的质量控制是按以下方法检测上述眼表润滑液，并达到以下性能指标体系：

20、（1）按照《中国药典》第2020年版中0631ph值测定法测定，其ph值为6.5～7.8；

21、（2）按照《中国药典》第2020年版中0632渗透压摩尔浓度测定法测定，其渗透压摩尔浓度为240～340mosm/kgh2o；

22、（3）按照《中国药典》第2020年版中0633黏度测定法测定，其黏度值为1.0～50mpas；

23、（4）按照《中国药典》第2020年版中0731蛋白质含量测定法及《中国药典》第2020年版中0704第一法氮测定法测定，其总蛋白质质量百分浓度为0.001～0.1%；

24、（5）按照《中国药典》第2020年版中0821重金属检查法测定，其重金属含量＜10μg/ml；

25、（6）按照《中国药典》第2020年版中1101无菌检查法检验为无菌；

26、（7）按照《中国药典》第2020年版中1143细菌内毒素检查法的方法中凝胶法的凝胶限度试验规定的方法测定，其浸提液的细菌内毒素含量＜0.5 eu/ml。

27、如上述眼表润滑液或与其他眼表敷料联合在制备眼表疾病治疗产品中的应用。如进行羊膜遮盖术时，可于术后将本发明制备的眼表润滑液滴于眼表，可有效减轻术后的异物感，提高治疗效果。

28、本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

29、（1）本发明改进了眼表润滑液中羊膜提取物的制备方法。

30、一方面，本发明对羊膜提取物的粉碎工艺进行了改进，改变了现有技术粉碎工艺采用液氮冷冻粉碎或加入pbs/生理盐水液体粉碎，存在粉碎效果不佳，进而导致对羊膜提取物中有效成分（如总蛋白质）提取效果不佳的问题，采用冰浴粉碎，对“使用冰块的尺寸、冰块与样品重量比、粉碎时间、粉碎次数”等工艺参数进行了优化，大幅提高了羊膜提取物作为眼科用医疗器械或药物有效成分（即总蛋白质）的提取效率。

31、另一方面，本发明还对羊膜提取物的纯化工艺进行了改进，现有纯化工艺采用离心后取上清液的方法，所获得的羊膜提取物中仍可能含有较大颗粒物质（＞50μm），导致滴加到患者眼部后出现异物不适感。本发明采用离心及滤纸真空抽滤工艺，通过选取特定空隙尺寸（孔径为5～50μm）的滤纸，可以有效地将大颗粒（＞50μm）尺寸杂质滤除，避免其滴加到患者眼部后出现异物不适感，同时大幅减少了不具有功能的杂质（脂肪及炽灼残渣）的含量。此外，真空抽滤工艺通过在外加真空泵的辅助下，加快过滤速度，提高生产效率。

32、（2）本发明改进了眼表润滑液的配方。相比于现有市售的同类产品“隐形眼镜润滑液”（国械注进20163160145或国械注许20173160321）而言，其功能成分一般仅为具有润滑作用的透明质酸钠，而本发明所述眼表润滑液中功能成分除了透明质酸钠，另外还包括促进组织修复功能成分（即：羊膜提取物）。羊膜提取物中含有多种蛋白质，有助于覆盖于眼表形成蛋白质支架，以使患者的眼表上皮细胞移行其上，促进眼表上皮愈合。另外本发明所述眼表润滑液配方中还添加了较少辐照对黏度影响的功能成分（即：甘油）。经实验测试结果可知，大分子量黏度调节物质（如分子量大于1mda的透明质酸钠）在经过辐照灭菌（灭菌剂量为25～35kgy）后其黏度值下降至初始值的十分之一以下，而本发明所述眼表润滑液的配方，添加了小分子量黏度调节物质（即：甘油，分子量92.09 da），有效地减少了辐照灭菌对黏度的影响。较高黏度的眼用制剂可以提高其在眼表的驻留时间，进而延长其发挥功能的时间。

33、（3）本发明首次建立了眼表润滑液中羊膜提取物用量的质量控制方法，现有公开文献并没有建立对羊膜混悬液或羊膜滴眼液的产品质量控制方法，无法对羊膜提取物的用量进行质量控制，为此，本发明所述“眼表润滑液中羊膜提取物用量的质量控制方法”，可以实现对羊膜提取物的用量进行质量控制。

34、（4）本发明建立的眼表润滑液的质量控制方法，可以对眼表润滑液的关键性能指标，包括ph值、渗透压、黏度、总蛋白质含量、重金属、无菌、细菌内毒素，进行了限定，可以有力提升其在眼表使用的安全性和有效性。