一种纳米疫苗佐剂及其制备方法与流程

本发明属于生物医药，具体涉及一种纳米疫苗佐剂及其制备方法。

背景技术：

1、疫苗佐剂是指先于抗原或与抗原同时应用，能够非特异地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，以及增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身无抗原性的物质。佐剂不仅是灭活疫苗生产中的重要组成成分，对提高弱毒疫苗的免疫效果也有作用。

2、铝佐剂在机体的固有免疫、获得性免疫、补体系统的反应中均发挥着一定作用且具有低成本及普适性，得到了长久的广泛应用，可以促进机体的th2型体液免疫应答，但其缺乏提升细胞免疫的能力、存在注射后的局部发热、红肿的症状、神经毒性等副作用。生物可降解纳米粒作为疫苗佐剂有许多优势，被认为是有潜力的可替代铝盐传剂的新型佐剂。目前应用于纳米粒的疫苗佐剂材料主要有海藻酸钠、壳聚糖、透明质酸和淀粉等天然聚合物，特别是壳聚糖及其衍生物由于其生物相容性、生物可降解性、易于制造、水溶性、无毒性以及易于修饰成所需形状和大小的能力而受到广泛关注和研究，但壳聚糖作为疫苗佐剂时常常因其生理ph值下的不溶性，从而限制了其应用范围。聚乳酸(pla)和聚乳酸-羟基乙酸(plag)共聚物等人工合成聚合物，plag纳米粒作为抗原载体包裹生物活性大分子药物如多肽、蛋白质或核酸等，达到保护药物和抗原不被降解、提供连续和可控的抗原和药物从纳米粒子释放等，但是其纳米粒表面缺乏可共价修饰的功能基团以及在体内停留时间短，纳米粒载药量低，因此限制了其在疫苗佐剂领域大规模的应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种纳米疫苗佐剂及其制备方法，以解决plga纳米粒装载量低的问题。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

3、本发明提供一种纳米疫苗佐剂的制备方法，包括如下步骤：

4、步骤一：将明胶加入磷酸二氢钠溶液中，升温至60℃，搅拌，加入乙二胺，调节ph，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，35-40℃下搅拌，透析3-4天，每天更换5-6次去离子水，冷冻干燥得到氨基化明胶；再将羧基化碳纳米管加入高纯水中，超声溶解，加入氨基化明胶/醋酸溶液，搅拌，离心过滤，冷冻干燥后得到改性碳纳米管；

5、步骤二：将plga和改性碳纳米管加入有机溶剂中超声溶解，得到混合液；

6、步骤三：将聚乙烯醇加入水中搅拌，得到pva水溶液；

7、步骤四：将步骤二中的混合液加入步骤三中的pva水溶液中，搅拌，过滤收集，去离子水洗涤，冷冻干燥得到plga纳米粒。

8、进一步地，步骤一中ph调节为5-5.5。

9、进一步地，碳纳米管为单壁碳纳米管和多壁碳纳米管中的一种。

10、进一步地，步骤二中有机溶剂为二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯中的一种。

11、进一步地，步骤一中明胶、磷酸二氢钠溶液、乙二胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的用量比为1g：40ml：0.15g：0.12g；羧基化碳纳米管、高纯水和氨基化明胶/醋酸溶液的用量比为0.1-0.3g：100ml：10-15ml；其中氨基化明胶/醋酸溶液的质量分数为2.5-3％。

12、进一步地，步骤二中plga、改性碳纳米管和有机溶剂的用量比为0.3-0.5g：0.15-0.25g：10ml。

13、进一步地，步骤三中聚乙烯醇和水的用量比为0.15-0.3g：15ml。

14、进一步地，步骤四中混合液和pva水溶液的用量比为1-2ml：10ml。

15、一种纳米疫苗佐剂，通过上述制备而得。

16、本发明的有益效果：

17、本发明中添加的改性碳纳米管由氨基化明胶包覆在羧基化碳纳米管表面制备而成，提高了碳纳米管的分散性能，同时引入了大量氨基，扩大了其在生物医药领域的应用范围。

18、本发明在plga纳米粒制备的过程中加入的改性碳纳米管作为致孔剂，使plga纳米粒上具有大量规则开口小孔，形成的多孔壳层结构增加了纳米粒孔隙率；且其氨基化明胶聚合物骨架上的氨基能够和plga相互作用减小静电斥力，使得纳米粒具有较大灵活性并形成更紧凑的结构；另一方面碳纳米管能在plga纳米粒上起支撑作用并赋予表面大量氨基，可促进与表面带负电荷的细胞结合，大大地提高了plga纳米粒对抗原的吸附率。

19、本发明制备的plga纳米颗粒作为疫苗佐剂不仅具有良好的生物安全性，而且由纳米粒子组成的受控递送系统可以以预定的速率和时间将抗原或佐剂递送到期望的位置，从而产生最佳的免疫应答，在有效疫苗方面显示出良好的应用前景。

技术特征：

1.一种纳米疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种纳米疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，步骤一中ph调节为5-5.5。

3.根据权利要求1所述的一种纳米疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，碳纳米管为单壁碳纳米管和多壁碳纳米管中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种纳米疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，步骤二中有机溶剂为二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯中的一种。

5.根据权利要求1所述的一种纳米疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，步骤一中明胶、磷酸二氢钠溶液、乙二胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的用量比为1g：40ml：0.15g：0.12g；羧基化碳纳米管、高纯水和氨基化明胶/醋酸溶液的用量比为0.1-0.3g：100ml：10-15ml；其中氨基化明胶/醋酸溶液的质量分数为2.5-3％。

6.根据权利要求1所述的一种纳米疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，步骤二中plga、改性碳纳米管和有机溶剂的用量比为0.3-0.5g：0.15-0.25g：10ml。

7.根据权利要求1所述的一种纳米疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，步骤三中聚乙烯醇和水的用量比为0.15-0.3g：15ml。

8.根据权利要求1所述的一种纳米疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，步骤四中混合液和pva水溶液的用量比为1-2ml：10ml。

9.一种纳米疫苗佐剂，其特征在于，由权利要求1-8任意一项所述的制备方法制备而成。

技术总结
本发明公开了一种纳米疫苗佐剂及其制备方法，属于生物医药技术领域。其制备方法具体包括如下步骤：将PLGA和改性碳纳米管加入有机溶剂中超声溶解，得到混合液；再将聚乙烯醇加入水中搅拌，得到PVA水溶液；最后将步骤二中的混合液加入步骤三中的PVA水溶液中，搅拌，过滤收集，去离子水洗涤，冷冻干燥得到PLGA纳米粒。其中改性碳纳米管由氨基化明胶包覆在羧基化碳纳米管表面制备而成，使得PLGA纳米粒具有较高的孔隙率，同时大大地提高了纳米粒对抗原的吸附率。

技术研发人员：刘宗文,雍金贵,刘奇,高恩,潘红
受保护的技术使用者：安徽瑞拜药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17