一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用与流程

本发明涉及生物的，更具体地说，涉及一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用。

背景技术：

1、夏秋季节，天气炎热多雨，是蚊虫活动最频繁的季节。被蚊虫叮咬也是无法避免的，因一只微小的蚊虫叮咬引起的虫咬包，会连带着整个人的面部、四肢都出现风团样“包包”，强烈地瘙痒，并且持续很长时间不见好转。这种由虫咬引起的过敏性皮炎，是最常见的皮肤疾病，孩子以及身体免疫力较强的成年人，也常被这种皮肤病困扰。经常是一处虫咬包，半个月全身过敏不消退，发烧、头痛、呕吐，样样不拉。

2、目前，唯一能阻止过敏疾病进程的方式是脱敏治疗。脱敏疗法又称为特异性免疫治疗，是在确定过敏性疾病患者的过敏原后，使用该过敏原制剂，经过反复注射或舌下含服或通过其他给药途径与患者反复接触，剂量由小到大，浓度由低到高，从而提高患者对该过敏原的耐受性，当再次接触此种过敏原时，过敏现象得以减轻或不再产生过敏现象。

3、发明人认为，目前，市面上的蚊虫叮咬产品都是止痒的，部分可缓解疼痛，多数是治标不治本，国内暂无针对蚊虫叮咬过敏的治疗药物，基于上述问题，我们提供了一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用。

4、本背景技术所公开的上述信息仅仅用于增加对本发明背景技术的理解，因此，其可能包括不构成本领域普通技术人员已知的现有技术。

技术实现思路

1、为了解决上述背景技术中提出的问题，本发明提供一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用。

2、本发明提供的一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用采用如下的技术方案：

3、一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，包括以下步骤：

4、步骤一、蚊虫采集：采集幼虫和蛹以及采集成蚊；

5、步骤二、蚊虫养殖：成蚊放入蚊笼中，定时向放在笼子顶部的海绵里加注葡萄糖水，对于雌蚊子，定期将小白鼠放到蚊帐里供雌蚊子吸血，蚊笼中放入水盆，供吸血的雌蚊子产卵，幼虫和蛹转移到水盆中，定时喂养干粉和饲料，当幼虫变成蛹时，将它们放到蚊笼里，等待它羽化成蚊子；

6、步骤三、收获：将养殖好的蚊虫放入冰箱，进行-18℃冷冻且保持24小时以上，收集得到蚊虫过敏原原材料；

7、步骤四、去脂：将收集得到的蚊虫过敏原原材料用脱脂溶剂反复浸洗进行脱脂处理；

8、步骤五、干燥：将脱脂后的蚊虫均匀摊开，采用室温、真空或流化床进行干燥处理，得到蚊虫过敏原原材料；

9、步骤六、保存：将蚊虫过敏原原材料进行冷冻保存；

10、步骤七、蚊虫过敏诊断与治疗用的浸提液制备：按重量体积比1:50～1:10将ph7.9～8.5缓冲盐水提取液加入到蚊虫过敏原原材料中，边加边振摇，使蚊虫过敏原原材料分散在缓冲盐水提取液中，保障混合液中无结块现象；在2-8℃下浸提48-72小时；通过离心机对缓冲盐水提取液进行离心处理；并收取上清液，对上清液依次进行多重过滤；然后在a级无菌洁净环境下，进行滤膜除菌过滤，最后分装保存。

11、通过采用上述技术方案，可有效用于变态反应疾病的过敏原诊断及特异性免疫治疗，可有效诊断由蚊虫诱发的变态反应疾病并对其进行特异性免疫治疗。

12、优选的，在步骤一中，对于幼虫和蛹的采集，是在大面积水域或积水较多的环境，取该水域的水，然后用胶头吸管吸取采集到的幼虫或蛹；对于成蚊的采集，是在草丛、灌木丛、树林、沼泽地、潮湿的地方采用电动吸蚊器或吸蚊管采集。

13、优选的，在步骤四中，将脱脂溶剂加入到过敏原原材料中，并搅拌或振荡脱脂1-3小时，然后静置分层，倒出上层液，加入新的脱脂溶剂，重复脱脂至上层液体澄清，所述过敏原原材料与脱脂溶剂的重量体积比为1：5～1:1，所述脱脂溶剂为丙酮、石油醚、乙醇、甲醇或环己烷中的至少一种。

14、优选的，在步骤六中，蚊虫过敏原原材料冷冻保存为-40℃保存。

15、优选的，在步骤七中，缓冲盐水提取液为碳酸氢盐提取液或磷酸氢盐提取液。

16、优选的，在步骤七中，离心机的离心速度为6000～12000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间设定为10～20分钟。

17、优选的，在步骤七中，对上清液依次进行多重过滤，上清液先经过滤纸过滤，然后依次经过0.65μm、0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，且为正压过滤。

18、优选的，在步骤七中，在a级无菌洁净环境下，进行滤膜除菌过滤为经过0.22μm的滤膜进行除菌过滤。

19、一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法制得的蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液在变态反应疾病的过敏原诊断及特异性免疫治疗中具有广阔的应用前景和临床应用价值。

20、综上所述，本发明包括以下有益技术效果：

21、本发明所述蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液，可以作为一种蚊虫过敏原原液，能够一定程度的引起对蚊虫过敏原过敏患者的过敏反应，具有极大的研究及临床应用价值。可有效用于变态反应疾病的过敏原诊断及特异性免疫治疗，可有效诊断由蚊虫诱发的变态反应疾病并对其进行特异性免疫治疗。

技术特征：

1.一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤一中，对于幼虫和蛹的采集，是在大面积水域或积水较多的环境，取该水域的水，然后用胶头吸管吸取采集到的幼虫或蛹；对于成蚊的采集，是在草丛、灌木丛、树林、沼泽地、潮湿的地方采用电动吸蚊器或吸蚊管采集。

3.根据权利要求1所述的一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤四中，蚊虫过敏原原材料用脱脂溶剂反复浸洗进行脱脂处理的过程包括：将脱脂溶剂加入到过敏原原材料中，并搅拌或振荡脱脂1-3小时，然后静置分层，倒出上层液，加入新的脱脂溶剂，重复脱脂至上层液体澄清，所述过敏原原材料与脱脂溶剂的重量体积比为1：5～1:1，所述脱脂溶剂为丙酮、石油醚、乙醇、甲醇或环己烷中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤六中，蚊虫过敏原原材料冷冻保存为-40℃保存。

5.根据权利要求1所述的一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤七中，缓冲盐水提取液为碳酸氢盐提取液或磷酸氢盐提取液。

6.根据权利要求1所述的一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤七中，离心机的离心速度为6000～12000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间设定为10～20分钟。

7.根据权利要求1所述的一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤七中，对上清液依次进行多重过滤过程包括，上清液先经过滤纸过滤，然后依次经过0.65μm、0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，且为正压过滤。

8.根据权利要求1所述的一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤七中，在a级无菌洁净环境下，进行滤膜除菌过滤为经过0.22μm的滤膜进行除菌过滤。

9.一种如权利要求1-8任一项所述的制备方法制得的蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液在变态反应疾病的过敏原诊断及特异性免疫治疗中的应用。

技术总结
本发明公开了一种蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用，涉及生物的技术领域，包括按重量体积比1:50～1:10将pH7.9～8.5缓冲盐水提取液加入到蚊虫过敏原原材料中，边加边振摇，使蚊虫过敏原原材料分散在缓冲盐水提取液中，保障混合液中无结块现象；在2‑8℃下浸提48‑72小时；通过离心机对缓冲盐水提取液进行离心处理；并收取上清液，对上清液依次进行多重过滤；然后在A级无菌洁净环境下，进行滤膜除菌过滤，最后分装保存。该制备方法能够制备得到蚊虫过敏诊断与治疗用浸提液，该浸提液可有效用于变态反应疾病的过敏原诊断及特异性免疫治疗，可有效诊断由蚊虫诱发的变态反应疾病并对其进行特异性免疫治疗。

技术研发人员：朱杰麟,苏继姣,王雅玲
受保护的技术使用者：深圳市华仁医学科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7