嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液在制备防治肿瘤的药物中的用途

本发明涉及一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液在制备防治肿瘤的药物中的用途。

背景技术：

1、嗜粘蛋白阿克曼氏菌(akkermansia muciniphila，akk菌)是一种粘蛋白分解细菌，它栖息在人类和许多其他动物的肠道中。菌株muct于2004年由derrien分离，为卵圆形，革兰阴性的厌氧菌。作为在粪便中发现的疣微菌门的代表，嗜粘蛋白阿克曼菌能以肠上皮表面的肠粘液作为其碳源、氮源和生长能量来源。

2、akk菌被誉为下一代益生菌，据多篇文献所述，它可以改善肥胖、糖尿病、脂肪肝等代谢性疾病的症状，还具有抗炎，提高免疫治疗的功效。更具有延缓衰老，抑制疾病进展的作用。其通过“脑肠菌轴”参与治疗神经性疾病的机制也在不断地被探寻中。另有多项研究表明它的存在还具有抗癌作用，疑似为药物抗癌的作用靶点之一，但具体机制及作用成分目前并没有得到充分阐释。

3、cn116421630a公开了一种防治肿瘤的嗜粘蛋白阿克曼氏菌产品及其应用，其中，所述防治肿瘤的嗜粘蛋白阿克曼氏菌产品中至少包括嗜粘蛋白阿克曼氏菌，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌包括am06和am02中的一种或两种；其中，am06为保藏编号为cgmccno.22793的嗜粘蛋白阿克曼氏菌am06；所述am02为保藏编号为cgmcc no.22794的嗜粘蛋白阿克曼氏菌am02。该专利文献指出，其提供的嗜粘蛋白阿克曼氏菌产品中的嗜粘蛋白阿克曼氏菌(am06和am02)相对于现有的atcc baa-835菌株均具有显著的防治肿瘤的作用。

4、cn116855397a公开了一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌及其在制备抗肿瘤药物中的应用，该专利文献公开的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的保藏号为cgmcc no.23185。该专利文献指出嗜粘蛋白阿克曼氏菌cgmccno.23185具有比atcc株更好的生长和增殖能力，能够分泌更多的棕榈油酸等关键免疫调节物质的能力，并能够更有效第一只cd8+t细胞的数量进而遏制胰腺肿瘤细胞的生长。

5、cn116686904a公开了一种益生菌制剂在提高奶牛乳腺健康上的应用，该专利文献公开了利用嗜粘蛋白阿克曼氏菌制成的微生物制剂，通过促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖，抑制其凋亡有助于维持奶牛乳腺健康。所述益生菌制剂中嗜粘蛋白阿克曼氏菌为akkermansia muciniphila baa-835菌株。

6、以上文献分别研究了不同菌株的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的应用。目前为止，仍未有关于嗜粘蛋白阿克曼氏菌atccbaa-835菌株的上清液代谢物在防治肿瘤方面的报道。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液在制备防治肿瘤的药物中的用途。本发明意外发现，将嗜粘蛋白阿克曼氏菌atccbaa-835菌株经过培养、离心得到的上清液代谢物对一些肿瘤细胞和在体肺癌活性具有较好的抑制作用，且对正常肺上皮细胞无明显毒性作用。上清液相对于菌体有显著的防治肿瘤的作用。

2、本发明的目的是通过如下技术方案实现的。

3、本发明提供一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液在制备防治肿瘤的药物中的用途，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液为将嗜粘蛋白阿克曼氏菌经过培养基培养，并经过离心后得到的上清液；所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌为atccbaa-835菌株。

4、根据本发明所述的用途，优选地，所述培养基为bhi培养基。

5、根据本发明所述的用途，优选地，所述培养基中添加l-苏氨酸和n-乙酰葡萄糖胺。

6、根据本发明所述的用途，优选地，所述上清液中不含活菌。

7、根据本发明所述的用途，优选地，培养时间为72h以上。

8、根据本发明所述的用途，优选地，所述肿瘤包括肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、结直肠癌、宫颈癌、脑胶质瘤和白血病。

9、根据本发明所述的用途，优选地，所述药物形成用于防治肿瘤的药物制剂，所述药物制剂包含嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液，还包含药学上可接受的辅料。

10、根据本发明所述的用途，优选地，所述药物制剂的剂型为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂或口服液。

11、根据本发明所述的用途，优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液由包括以下的具体步骤制备而得：

12、将在流乙醇酸盐流体培养基管厌氧培养的嗜粘蛋白阿克曼氏菌离心，弃上清，用pbs重悬菌体后离心，重复多次收集细菌菌体，用pbs调菌液od595值为1.0～1.5；然后取菌液接种至改良bhi培养基，同厌氧产气袋一同放入厌氧培养袋，孵育72h以上；

13、将各管菌液集中，用改良bhi培养基调菌液od595值为0.4～0.6，离心至少一次，分离菌体和上清，用微米滤膜过滤上清，得到嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液。

14、根据本发明所述的用途，优选地，每次离心时的转速均为3500～4500rpm；每次离心的时间均为10～20min。

15、本发明发现，嗜粘蛋白阿克曼氏菌atcc baa-835菌株的上清液可以对一些肿瘤细胞活性具有较好的抑制作用，例如肿瘤包括肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、结直肠癌、宫颈癌、脑胶质瘤和白血病。优选地，嗜粘蛋白阿克曼氏菌atcc baa-835菌株的上清液对胃癌ags细胞、人肝癌细胞株hep g2、结直肠癌caco-2细胞活性具有更好的抑制作用。

技术特征：

1.一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液在制备防治肿瘤的药物中的用途，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液为将嗜粘蛋白阿克曼氏菌经过培养基培养，并经过离心后得到的上清液；所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌为atcc baa-835菌株。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述培养基为bhi培养基。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述培养基中添加l-苏氨酸和n-乙酰葡萄糖胺。

4.根据权利要求1的用途，其特征在于，所述上清液中不含活菌。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，培养时间为72h以上。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、结直肠癌、宫颈癌、脑胶质瘤和白血病。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物形成用于防治肿瘤的药物制剂，所述药物制剂包含嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液，还包含药学上可接受的辅料。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述药物制剂的剂型为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂或口服液。

9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液由包括以下的具体步骤制备而得：

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，每次离心时的转速均为3500～4500rpm；每次离心的时间均为10～20min。

技术总结
本发明公开了一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液在制备防治肿瘤的药物中的用途，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液为将嗜粘蛋白阿克曼氏菌经过培养基培养，并经过离心后得到的上清液；所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌为ATCC BAA‑835菌株。该嗜粘蛋白阿克曼氏菌的上清液对一些肿瘤细胞活性具有较好的抑制作用。

技术研发人员：侯春英,宋月晗,吕心怡
受保护的技术使用者：北京中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7