一种筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法及其应用与流程

本技术涉及化妆品功效评价，尤其是一种筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法及其应用。

背景技术：

1、近年来，敏感性皮肤问题的发生率显著增高，直接影响着人们的生活质量，并成为了广泛关注的问题。随着全球经济持续发展，居民生活水平逐渐提高，带来的环境污染、工作压力、生活压力、紫外线辐射、快餐饮食、过度彩妆、电磁辐射等因素也使得敏感性皮肤人群不断增多。由内因和外因共同作用，皮肤受到刺激的概率和反应程度均有所提高。

2、《化妆品功效宣称评价规范》中对舒缓的定义为有助于改善皮肤刺激等状态。敏感性皮肤在内因和外因的互相作用下，皮肤屏障功能受损，引起感觉神经传入信号增加，从而导致皮肤对外界刺激的反应性增强，皮肤发生炎症反应，上述成因往往相互促进累积，最终导致恶性循环。可以通过增强皮肤的屏障功能，减轻刺激物对皮肤的伤害，镇静神经反应，减少皮肤对刺激物的反应性，以起到缓解敏感性皮肤的不适感，镇静舒缓的作用。

3、因此，设计一种敏感效果好、相对廉价、实验周期短、操作简便高效的舒缓模型，是研发具有舒缓功效产品的行业必然需求。

4、现有的舒缓评价方法主要包括的人体试验法和动物实验法。

5、现有的舒缓评价方法主要包括的人体试验法和动物实验法都存在一些明显的缺点。首先，人体试验法的试验周期长，成本高，且对参与者的身体状况有严格要求。这就意味着，如果想要进行大批量的高通量筛选，这种方法可能会面临巨大的时间和经济压力。同时，由于人体试验法涉及到人体生理和伦理问题，这也限制了其应用的广泛性。动物实验法也存在类似的问题，如需要长期的试验周期和高昂的成本。因此，有必要开发新的舒缓评价方法。

技术实现思路

1、本技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法及其应用。本技术旨在通过利用秀丽隐杆线虫作为生物模型，开发一种新的化妆品及其原料舒缓功能评价方法，通过建立秀丽隐杆线虫舒缓模型，快速筛选具有舒缓功效的候选成分，具有实验周期短、高效廉价的特点。

2、为实现上述目的，本技术采取的技术方案为：

3、本技术提供了一种筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法，包括以下步骤：

4、s1、收集d1期的秀丽隐杆线虫，用培养基培养秀丽隐杆线虫；

5、s2、调节秀丽隐杆线虫的密度，然后在培养基中加入乳酸，进行造模；将候选组分加入至培养基中，并通过检测秀丽隐杆线虫的指标来筛选具有舒缓功效组分；

6、所述指标包括秀丽隐杆线虫的头部摆动频率、秀丽隐杆线虫体壁颜色b值、秀丽隐杆线虫体内的相对ros水平中的至少一种。

7、秀丽隐杆线虫是一种被广泛用于生物医学研究的模式生物。由于其生命周期短，繁殖速度快，容易进行大批量培养，可以快速、高效地进行大批量的高通量筛选，显著降低时间和成本。此外，秀丽隐杆线虫与人类基因有较高的保守性，能够模拟人类的许多生理反应。因此，利用秀丽隐杆线虫作为新的舒缓评价方法具有很高的应用价值和广阔的发展前景。

8、其次，秀丽隐杆线虫具有高度保守的神经信号传导机制，可以感受光、接触、温度、化学物质、离子等刺激。这使得它能够用于模拟人类皮肤对环境刺激的响应。此外，秀丽隐杆线虫的神经元类型丰富，包含与人类相关的多种神经递质和离子通道基因，这意味着它能够准确地模拟人类的神经反应。

9、秀丽隐杆线虫发育周期短，能有效缩短实验周期短，方便开展快速筛选；秀丽隐杆线虫方便培养，能有效降低试验成本；秀丽隐杆线虫繁殖能力强，短时间可大量繁殖得到充足的样本量，便于开展高通量筛选，并保证实验准确性。秀丽隐杆线虫作为整体生物体具有更全面、准确的模拟人类皮肤反应的能力，能够模拟人类的生理反应。

10、本技术通过测定秀丽隐杆线虫的头部摆动频率，分析线虫在刺激下的神经反应，可以反应化妆品及其原料(候选组分)的对皮肤敏感反应的影响及其舒缓镇静效果。

11、通过测定在lab色彩模式下秀丽隐杆线虫体壁颜色b值反应刺激下对线虫屏障破坏导致的龙胆紫侵染的程度，可以反应化妆品及其原料(候选组分)的皮肤屏障舒缓屏障效果。

12、外界多种刺激容易诱发机体产生过量的氧自由基，使细胞的结构功能退化，进而破坏皮肤的正常屏障结构使之功能受损，本技术通过测定秀丽隐杆线虫体内的相对ros水平可以反应化妆品及其原料(候选组分)的皮肤舒缓修护效果。

13、总的来说，本技术使用秀丽隐杆线虫进行化妆品及其原料舒缓评价，不仅可以提供更多元的评价维度，还可以实现更高效、更精确的评价效果。这种方法具有更低的成本和更快的试验速度，符合现代化妆品研发的需求，有很高的应用价值和发展潜力。

14、作为本技术所述筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法的优选实施方式，所述步骤s2中，在培养基中加入终体积浓度为1～5％的乳酸(造模剂)，优选地，所述乳酸终体积浓度为1～2％。

15、作为本技术所述筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法的优选实施方式，所述步骤s2中，造模的时间为5min～1h，优选为1h。

16、作为本技术所述筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法的优选实施方式，对秀丽隐杆线虫的头部摆动频率、秀丽隐杆线虫体壁颜色b值、秀丽隐杆线虫体内的相对ros水平测定的数值采用标准差标准化法处理，获得其标准化后的数值：秀丽隐杆线虫的头部摆动频率标准化后数值记为t1，秀丽隐杆线虫体壁颜色b值标准化后数值记为t2，秀丽隐杆线虫体内的相对ros水平标准化后数值记为t3；

17、将标准化后数值代入公式y＝0.484×t1+0.615×t2+0.608×t3中，其中y为候选组分的舒缓功效综合评价结果。

18、本技术引入了秀丽隐杆线虫的头部摆动频率、秀丽隐杆线虫体壁颜色b值、秀丽隐杆线虫体内的相对ros水平作为评估指标，这些指标直接关联到镇静效果、皮肤屏障功能修复和保护功能的评价。上述选用的指标选择更加贴切和综合，可以提供更全面的舒缓功能评估。

19、本技术首次引入了秀丽隐杆线虫舒缓模型，建造病理模型可以模拟特定的疾病状态或病理过程，例如炎症、损伤或疼痛等。通过在秀丽隐杆线虫中引入出皮肤敏感相关的变化，可以更真实地模拟人体舒缓功能评估中的实际情况。这样可以更好地了解和评估舒缓功能对皮肤敏感状态的影响，以及在皮肤屏障修复和保护方面的效果。模型可以更好地反映秀丽隐杆线虫的生理和行为特征，并将这些特征与舒缓功能相关联，从而提供更准确和可靠的评估结果。

20、作为本技术所述筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法的优选实施方式，所述培养基包括s培养基。

21、作为本技术所述筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法的优选实施方式，所述秀丽隐杆线虫的密度为100～500条/1000μl/孔。

22、作为本技术所述筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法的优选实施方式，所述候选组分包括甘草酸二钾、透明质酸钠和芦荟胶中的至少一种。

23、上述候选组分不仅仅局限于上述成分，还包括常见的化妆品及其原料，均可使用上述构建方法进行筛选。

24、作为本技术所述筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法的优选实施方式，所述甘草酸二钾的浓度为1～4mm；所述透明质酸钠200～600μg/ml；所述芦荟胶10～40mg/ml。

25、本技术所提供的候选组分呈现梯度变化，说明本技术的秀丽隐杆线虫舒缓模型)能够细致地捕捉到不同浓度对候选组分功效的影响。

26、本技术还提供了上述秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法获得的秀丽隐杆线虫舒缓模型在评价化妆品及其原料舒缓功效中的应用。

27、本技术引入了新的指标，以秀丽隐杆线虫的头部摆动频率、秀丽隐杆线虫体壁颜色b值、秀丽隐杆线虫体内的相对ros水平作为评估指标，分别反映了候选组分的镇静效果、皮肤屏障功能的修复和保护。相比现有使用的细胞毒性和一氧化氮释放抑制试验作为评价指标，更直接地与舒缓功效相关，能够更准确地评估候选组分对敏感性皮肤的舒缓作用。

28、与现有技术相比，本技术具有以下有益效果：

29、本技术提供了一种筛选具有舒缓功效组分的秀丽隐杆线虫舒缓模型构建方法及其应用，通过引入新的检测指标和模型，通过测定秀丽隐杆线虫的头部摆动频率，分析线虫在刺激下的神经反应，可以反应化妆品及其原料(候选组分)的对皮肤敏感反应的影响及其舒缓镇静效果；通过测定在lab色彩模式下秀丽隐杆线虫体壁颜色b值反应刺激下对线虫屏障破坏导致的龙胆紫侵染的程度，可以反应化妆品及其原料(候选组分)的皮肤屏障舒缓屏障效果；外界多种刺激容易诱发机体产生过量的氧自由基，使细胞的结构功能退化，进而破坏皮肤的正常屏障结构使之功能受损，本技术通过测定秀丽隐杆线虫体内的相对ros水平可以反应化妆品及其原料(候选组分)的皮肤舒缓修护效果。本技术的方法可以从皮肤屏障修护功能、皮肤屏障保护功能、镇静神经反应等多个角度进行评价，能够更全面、综合，可以更准确地评估秀丽隐杆线虫的舒缓功能。