一种F1/F3多肽在制备诱导肿瘤细胞焦亡药物中的应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种f1/f3多肽在制备诱导肿瘤细胞焦亡药物中的应用。

背景技术：

1、caerin多肽是一类发现于澳大利亚树蛙（litoria）皮肤分泌物中的天然抗菌肽。研究表明，在体外，caerin1.1/1.9对多种癌细胞系具有细胞毒性。在体内小鼠模型中，caerin1.1/1.9可以抑制多种肿瘤生长；并吸引t细胞，nk细胞到肿瘤内，并增强适应性t细胞免疫应答。此外，caerin1.1/1.9可以增强肿瘤治疗型疫苗，免疫检查点抑制剂，如抗-pd1抗体，抗-cd47抗体的效率。重要的是，caerin 1.1/1.9肽能够显著提高免疫检查点阻断（icbs）和治疗性疫苗的疗效；显著增加荷瘤小鼠的生存时间，使30%-50%的小鼠完全清除肿瘤，并可以耐受第二次肿瘤接种而继续生存。

2、检测瘤内细胞发现，caerin1.1/1.9可以促进巨噬细胞肿瘤浸润，提高炎性巨噬细胞在瘤内占比，提高巨噬细胞分泌白介素12分泌水平，减少白介素10的分泌，使肿瘤内巨噬细胞从免疫抑制的m2型，向具有免疫刺激功能的m1型转化，并且caerin1.1/1.9的抗肿瘤效果，依赖于瘤内巨噬细胞的存在。进一步分析表明，肿瘤内的巨噬细胞，t细胞，nk细胞，树突状细胞等均处于免疫激活状态。

3、程序性细胞死亡（programed cell death）在所有多细胞生物的生长、存活、稳态和先天免疫中发挥着重要的生理作用。程序性细胞死亡包括凋亡，焦亡和铁死亡等。凋亡（apoptosis）通常分为外源性和内源性凋亡。外源性凋亡通路通过死亡受体配体与其在细胞膜上的同源受体结合而被激活，使caspase 7激活，从而引发凋亡一系列反应过程。内源性凋亡通路由线粒体损伤介导，通过激活促凋亡蛋白bax和bak，导致线粒体外膜通透性增高，释放细胞色素c并与apaf-1结合形成凋亡体，招募并激活caspase 9，随后激活caspase3和caspase7，最终导致细胞凋亡。

4、细胞焦亡是一种依赖于gasdermin家族蛋白形成质膜膜孔的可调控的细胞死亡，与细胞凋亡不同的是细胞焦亡以细胞膜破裂为特征，诸多细胞因子和危险信号(例如hmgb1，atp，hsp等)在细胞焦亡过程中被释放，激活免疫系统，导致炎症反应。细胞焦亡是机体一种非常重要的天然免疫反应，在拮抗病原感染中发挥重要作用。

5、因此，对肿瘤细胞死亡方式的进一步深入研究，对于扩大多肽的应用范围具有重要意义。

技术实现思路

1、针对现有技术普遍具有的难题，本发明深入探究了天然多肽制备诱导肿瘤细胞焦亡药物中的新应用，为进一步扩大天然多肽的应用范围奠定了坚实基础。

2、为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

3、一种f1/f3多肽在制备诱导肿瘤细胞焦亡药物中的应用。

4、优选地，所述f1多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示；或者所述f1多肽为改造后的f1多肽，其氨基酸序列如seq id no.2所示。

5、caerin1.1命名为f1，gllsvlgsvakhvlphvvpviaehl-nh2（seq id no.1）；

6、改造后的caerin 1.1：gllsvlgsvakhvlphvlphvvpviaehl-nh2（seq id no.2）；

7、优选地，所述诱导肿瘤细胞焦亡药物中还包括f3多肽，所述f3多肽的氨基酸序列如seq id no.3所示。

8、caerin1.9命名为f3，glfgvlgsiakhvlphvvpviaekl-nh2（seq id no.3）；

9、优选地，所述诱导肿瘤细胞焦亡药物中f1多肽与f3多肽的添加比例为1:1，其中，f1、f3多肽的浓度5μg-20μg/ml。

10、优选地，所述肿瘤细胞为上皮细胞肿瘤的细胞。

11、优选地，所述上皮细胞肿瘤的细胞包括宫颈癌细胞系hela细胞，肺癌a549细胞，肝癌huh-7h细胞。

12、优选地，所述药物还包括生理盐水和药学上可接受的载体。

13、优选地，所述药学上可接受的载体包括药包括口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。

14、优选地，所述辅料包括淀粉葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、氯化钠、维生素c、半胱氨酸、柠檬酸、硬脂酸盐和明胶。

15、优选地，所述的药物递送系统包括但并不限于细菌，病毒，质粒，纳米递送系统，mrna等。

16、焦亡（pyroptosis）是由促炎小体启动的程序性细胞死亡，它激活caspase-1/4/5/11切割气胀素d（gasdermin d，gsdmd），gsdmd的n端在细胞膜上形成小孔，使细胞肿胀和膜破裂，释放乳酸脱氢酶和白介素18，白介素1β。与gsdmd不同，gsdme可以被caspase-3剪切，释放n端片段，可以导致细胞膜的穿孔。caspase-3可以通过肿瘤坏死因子-α（tnfα）或化疗药物的激活。 诱导肿瘤细胞焦亡可以激活机体的固有和适应性抗肿瘤免疫反应。

17、与现有技术相比，本发明具有如下优势：

18、（1）本发明证明了f1/f3多肽可以诱导细胞焦亡，且焦亡过程发生在凋亡之前，实现了将f1/f3多肽用于新药制备，扩大了天然多肽的应用范围；

19、（2）本发明证明了f1及f3多肽均可以诱导发生细胞焦亡，并进一步对f1的氨基酸序列进行优化，结果发现，与优化前的序列相比，优化后的f1多肽能更好地诱导肿瘤细胞发生焦亡。

技术特征：

1. 一种f1/f3多肽在制备诱导肿瘤细胞焦亡药物中的应用；其特征在于，所述f1多肽的氨基酸序列为seq id no.1、seq id no.2中的一种；所述f3多肽的氨基酸序列如seq idno.3所示。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诱导肿瘤细胞焦亡药物中f1多肽与f3多肽的添加质量比为1:1，且f1、f3多肽的浓度为5μg-20μg/ml。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞为上皮细胞肿瘤的细胞。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述上皮细胞肿瘤的细胞包括宫颈癌细胞系hela细胞，肺癌a549细胞，肝癌huh-7细胞。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包括生理盐水和药学上可接受的载体。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体包括口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述辅料包括淀粉葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、氯化钠、维生素c、半胱氨酸、柠檬酸、硬脂酸盐和明胶。

8. 如权利要求1所述的应用， 其特征在于，所述药物的递送系统包括细菌，病毒，质粒，纳米递送系统，mrna。

技术总结
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种F1/F3多肽在制备诱导肿瘤细胞焦亡药物中的应用。本发明首次证明天然多肽F1多肽，F3多肽或改造后的F1多肽可以通过激活Caspase 3/GSDME通路，诱导肿瘤细胞焦亡：肿瘤细胞死亡时，细胞膜鼓出一个泡，然后破裂，分泌大量白介素18和LDH。且当F1与F3联用时，效果最佳。经实验验证，IL18的分泌量呈时间和剂量依赖关系。且所述肿瘤细胞为上皮肿瘤细胞，包括宫颈癌细胞系Hela细胞，肺癌A549细胞，肝癌Huh‑7细胞等。本发明深入探究了天然多肽用于制备治疗肿瘤药物的机理，为进一步扩大天然多肽的应用范围奠定了坚实基础。

技术研发人员：倪国颖,罗远东,刘晓松,王天放
受保护的技术使用者：中奥生物医药技术（广东）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10