专利名称：锌鳌合前列腺萃取物及其制造方法和应用的制作方法
一种锌螯合前列腺萃取物及其制造方法和应用。属于制药工业技术领域。
目前糖尿病是人类最常见的代谢障碍疾病之一，一型是胰岛素依赖型糖尿病，通常突发在儿童或青年期，另一型是非胰岛素依赖型糖尿糖，发作比较不突然，常出现在四十岁以上，两型糖尿病都损害人体利用血糖作为能源的能力，慢性血糖浓度高逐渐损害身体许多组织及器官，危及生命，具统计糖尿病人平均寿命缩短50％，虽然用胰岛素类药物，有助于调节血糖浓度，但是不能根治糖尿病，也不能防止糖尿病的并发症如盲目，血循环疾病和伤口难愈口等疾病。
本发明的目的是研制一种有效的治疗糖尿病的药物，即锌螯合前列腺萃取物。
本发明的目的是通过如下的技术方案实现的一种锌螯合前列腺萃取物，主要由用极性有机溶剂从前列腺中萃取的不饱和脂肪酸、锌盐和蛋白质水解产物形成的螯合物。所述脂肪酸、锌和蛋白质水解产物的重量比最好为10∶1∶5。所述极性有机溶剂包括乙酸乙酯、异丙醇和氯仿。所述锌盐包括ZnSO4和ZnCl2。所述蛋白质水解产物是氨基酸和末完全水解的蛋白质，包括蛋白 、蛋白胨和白蛋白。一种锌螯合前列腺萃取物的制造方法，将动物的前列腺剁碎，于-70℃冷冻，随后悬浮于10倍过量Tris-Hcl缓冲液中，调PH8.0，用均化器破坏，在4℃以3000×g离心分离20分钟，移去上部脂肪，将上清液于37℃培育1小时，用非极性溶剂除去饱和脂肪酸，剩下的含不饱和脂肪酸的水溶液用0.2N的Hcl酸化至PH3.0，用极性溶剂萃取，经冷冻，干燥后制得含不饱和脂肪酸的前列腺萃取物，再与锌盐和蛋白质水解产物按比例混合均匀，制得锌螯合前列腺萃取物，其中不饱和脂肪酸，锌和蛋白质水解产物的重量比最好为10∶1∶5。锌螯合前列腺萃取物的应用是用常规的制药方法加入赋形剂做成锭剂或胶囊状的药品，所述药品用于治疗糖尿病。本发明具有如下优点1、锌螯合前列腺萃取物的原料来源丰富，制造方法简便可行。
2、用锌螯合前列腺萃取物制成的药物，具有治疗糖尿病的显著疗效，具有降低血糖浓度和增高血糖廓清率的效果。
下面结合实例对本发明详细说明本发明所述的锌螯合前列腺萃取物是指用极性很强的有机溶剂如乙酸乙酯或氯仿等从动物的前列腺中提取不饱和脂脂酸，再以一定的比例与锌盐，如ZnCl2或ZnSO4和蛋白质水解产物，如蛋白 、蛋白胨或白蛋白形成螯合物。经发明人长期的科学研究证实锌缺乏时胰岛素储存量比锌浓度正常时少，锌代谢可改善糖尿病症状。同时科学研究也证实前列腺素中的不饱脂肪酸可有效的与锌螯合，就是带负电的不饱和脂肪酸与带正电的锌离子结合形成螯合物，这种螯合物对糖尿病有显著的疗效。
锌螯合前列腺萃取物的制备方法举例如下实施例1由屠宰场取得动物(牛、羊、山羊等)的前列腺，剁碎，于-70℃冷冻，随后悬浮于10倍过量Tris-Hcl缓冲液中，调PH8.0，用均化器破坏，在4℃以3000×g离心分离20分钟，移去上部脂肪，将上清液于37℃培育1小时，用非极性溶剂石油醚或己烷，提出饱和脂肪酸，剩下的含有不饱和脂肪酸的水溶液用0.2N的HCL酸化至PH3.0，以每次一倍体积的乙酸乙酯混合异丙醇(V/V 1∶1)或氯仿萃取2-3次，将乙酸乙酯或氯仿的几次萃取液混合，经冷冻，干燥，制得油状的含不饱和脂肪酸的前列腺萃取物，将上述前列腺萃取物200mg，含锌20mg的ZnCl2或ZnSO4及100mg蛋白质水介产物如蛋白胨混合均匀，制得锌螯合的前列腺萃取物。
用常规的制药方法加上赋形剂将上述螯合前列腺萃取物制成适合口服的锭剂或胶囊形式药品。赋形剂包括惰性稀释剂、粘结剂、润滑剂和被覆层等，常用的惰性稀释剂有碳酸钙、碳酸钠、碳酸氢盐乳糖和磷酸钙等，常用的粘结剂有淀粉、明胶和阿拉伯胶等，常用的润滑剂有硬脂酸镁，硬脂酸和滑石等，胶囊被覆层常用明胶或可溶性聚合物等。
下面结合实例阐述本发明的医疗效果。
实例2大鼠实验；使用和未使用前列腺萃取物时大鼠器官组织锌的浓度。
实验方法麻醉大鼠，经胃插管给予200mg前列腺萃取物和200mg锌溶于2ml蒸馏水的溶液，两小时后，杀死大鼠。测定大鼠各器官组织中锌的浓度，6次测定平均值±SEM
图1表示使用和末使用前列腺萃取物的正常大鼠器官组织的锌浓度。 图1正常大鼠锌浓度空心长条表示末使用前列腺萃取物。
斜线长条表示使用前列腺萃取物。
图2表示使用和未使用前列腺萃取物治疗的糖尿病大鼠器官组织的锌浓度。 图2糖尿病大鼠锌浓度。
空心长条表示未使用前列腺萃取物。
斜线长条表示使用前列腺萃取物。
从图1和图2可见，对正常大鼠和糖尿病大鼠使用锌前列腺萃取物后，对器官组织的锌浓度都有增高的效果。
图3综合图1和图2的结果表示使用和末使用锌前列腺萃取物的正常和糖尿病大鼠器官组织锌浓度比较。 图3正常和糖尿病大鼠器官组织锌浓度比较。
NC末接受前列腺萃取物的正常大鼠。
NP接受前列腺萃取物的正常大鼠。
DC末接受前列腺萃取物的糖尿病大鼠。
DP接受前列腺萃取物的糖尿病大鼠。
从图3中显示锌前列腺萃取物对正常和糖尿病大鼠器官组织中锌浓度的增高均有显著效果。
实施例3膳食锌对糖尿病大鼠存活率的影响。
取51只大鼠分成三组，全部注射药剂Stretozotocin(50mg/kg)使大鼠得糖尿病，一周后三组大鼠分别喂给含锌量不同膳食，第一组喂给锌缺乏膳食(1μg Zn/g)，第二组喂给锌足够膳食(37.5μg Zn/g)，第三组喂给锌过量膳食(1mg Zn/g)，25日后，计算大鼠存活只数见表1。
表1 喂给不同浓度锌的糖尿病大鼠存活率
从表1可见，每组17只糖尿病大鼠，锌缺乏条件下，死了9只，而锌过量条件下，只死了2只，可以证明，锌对医治糖尿病有显著疗效。
实施例4 比较三种不饱和脂肪酸对改善糖尿病大鼠症状的相对能力。
三种不饱和脂肪酸选用前列腺萃取的不饱和脂肪酸、花生四烯酸和夜樱草油，其中夜樱草油来源于亚油酸和亚麻酸。
实验方法先注射药剂Stretozotocin(50mg/kg)使大鼠得糖尿病，分别喂给含有ZnSO4和三种不饱和脂肪酸的饮水，其中锌浓度为10mg/l，花生四烯酸和前列腺萃取不饱和酸浓度100mg/l，夜樱草油浓度为500mg/l，此配比等于每kg体重喂给10mg前列腺萃取物和1mg锌，每日喂水量为40ml，18日后，对全部试验大鼠测血糖浓度见表2。
表2 饮用含不同成分的水后，糖尿病大鼠血糖浓度变化。
mg/100ml
注* P＜0.05与D-18d-zn-pe比较**P＜0.05与D-18d-zn-pe比较D-18d表示诱发糖尿病后18日Zn-PE表示饮水含10mgzn加100mg前列腺萃取物/l
Zn-AA表示饮水含10mgzn加100mg花生四烯酸/lzn-18d-EPO表示饮水含8mgzn加500mg夜樱草油/lzn-单独表示饮水含10mgzn/lDW表示蒸馏水表2结果证实糖尿病大鼠具有比正常大鼠更高的血糖浓度，单独喂锌给糖尿病大鼠无法改变血糖浓度，膳食喂锌和夜樱草油对降低糖尿病大鼠血糖浓度也无效果，喂锌和前列腺萃取物后，血糖浓度的降低比任何其他处理更明显。
实验证明各种不饱和脂肪酸对改善糖尿病症状的能力不同。
锌前列腺萃取物可有效降低糖尿病动物血糖浓度，夜樱草油无效，花生四烯酸中等有效。
实施例5 评价糖尿病的第二个指标是测定溶胞葡萄糖浓度。
实验方法用实验4的实验糖尿病大鼠，注射nenButal(50mg/kg)后，杀死大鼠，即刻取出各器官并储存在-70℃，分别用均化器破坏，再以2000×g离心分离20分钟，上清液冷冻储存或即刻测定葡萄糖和蛋白质浓度。用葡萄糖读值除以蛋白质浓度得规化测量值，此规化测量值用来区别各不同器官的变数质量及蛋白质产量，结果见表3。
表3喂给不同膳食的糖尿病大鼠不同器官溶胞葡萄糖浓度
注#与喂前列腺萃取物(PE)加锌的水组里大鼠的值比较时，显著情况为P＝0.05。
*与喂给PE加锌的水组里大鼠的值比较时，显著情况为P＜0.05，**与喂给PE加锌的水组里大鼠的值比较时，显著情况为P＜0.01。
表3的结果表明，膳食喂给前列腺萃取物(PE)与促进细胞层面的葡萄糖摄取有关，典型的糖尿病各器官组织的自由态葡萄糖含量低，实验结果显示喂给前列腺萃取物和锌的大鼠，溶胞葡萄糖浓度显著增加，喂给花生四烯酸或夜樱草油和锌的大鼠，对溶胞葡萄糖浓度并无影响。
实例6。临床实验；研究本发明的药品降低糖尿病人血糖浓度的效果。
实验方法16名轻度糖尿病人，经过鉴别作为服用本发明药品的自愿试验者，先测得每个人的初血糖浓度，随后16位病人每日服用实例1详述的方法制备的本发明的药品胶囊2-4粒，每粒胶囊含200mg前列腺萃取物和20mg锌，经过1-3个月后，测得每位志愿者的血糖浓度。见表4。
表4 轻度糖尿病人服药前后的血糖浓度病人性 病人 病人 服药前血 服药后血名缩写 年龄 性别 糖浓度范围 糖浓度范围Jss 56 女190-190mg/100ml 90-135mg/100mlKIN 76 女270-370mg/100ml 95-179mg/100mlSHK 63 男180-280mg/100ml 120-180mg/100mlDHS 61 女180-280mg/100ml 130-170mg/100mlHGL 59 男150-240mg/100ml 100-160mg/100mlHKK 57 男180-280mg/100ml 130-180mg/100mlSBS 61 男200-290mg/100ml 130-200mg/100mlSES 62 男180-250mg/100ml 130-210mg/100mlCLC 64 男150-260mg/100ml 90-160mg/100mlJJK 49 女280-320mg/100ml 180-240mg/100mlBSK 59 男210-350mg/100ml 150-210mg/100mlJAK 51 男160-250mg/100ml 100-190mg/100mlKUK 59 男180-260mg/100ml 140-210mg/100ml
ESL58女150-240mg/100ml110-180mg/100mlPHL62男180-250mg/100ml110-160mg/100mlHSC78女210-310mg/100ml150-210mg/100ml取各值中点的平均值±seM236.56±9.19152.43±6.88从表4中看到糖尿病人服用本发明的药品后，血糖浓度明显的降低。由于每个人的年龄、体质、病情等不同，血糖浓度降低情况也有不同。
实例7 临床实验研究本发明的药品对糖尿病人增高血糖廓清率的效果。
本实验是用测量糖尿病人血流去除定量葡萄糖的速率。非糖尿病人的葡萄糖廓清率较高，但糖尿病人的葡萄糖廓清率较低，这是由于糖尿病人的特征性胰岛素活动减低所致，服用本发明的药品后，葡萄糖廓清率增高，表示有疗效，使用血糖廓清率作为疗效指标的优点是不受运动和膳食的变化影响。而测量血糖浓度会受运动和膳食的影响，因此比较服药前后血糖廓清率的变化，最能正确评价药品的治疗效果。
实验方法四名糖尿病志愿者首先由医学中心确认，其碳水化合物食物量预定在150-200g/日，三日后，饮用含75g葡萄糖的225ml溶液，随即于饮用葡萄糖后0、30、60、90、120、150和180分钟进行血糖测量，血糖廓清率定为血糖达到最高浓度后，葡萄糖浓度降低的速率，确定四名志愿者初血糖廓清率后，三名志愿者每日服4粒本发明的药物胶囊三个月，另一名志愿者服安慰剂，3个月后再测定四名志愿者的血糖廓清率测试结果见表5。
表5血糖廓清率测试结果
从表5果表明全部糖尿病志愿者服用本发明的药品3个月后，葡萄糖廓清率都增高，证明本发明的药品可改善糖尿病人的症状，虽然本发明的药品治疗糖尿病的机理还要进一步研究探讨。但是可以确定本发明的药品对增加肠吸收锌浓度十分有利，发明人已经反复验证服用本发明的药品，或单独膳食服锌，或与其他不饱和脂肪酸组合服锌，对比治疗糖尿病的结果时，很显然是本发明的药品治疗效果最佳。
表5中接受安慰剂试验的志愿者，因患轻度糖尿病，故初始血糖廓清率比其人试验者高，接近正常人，在试验中，接受安慰剂的病人出现血糖廓清率下降表示病人的糖尿病有转重趋势，故血糖廓清率随试验过程下降。
权利要求
1.一种锌螯合前列腺萃取物，其特征在于主要由用极性有机溶剂从前列腺中萃取的不饱和脂肪酸、锌盐和蛋白质水解产物形成的螯合物。
2.根据权利要求1所述的锌螯合前列腺萃取物，其特征在于所述脂肪酸、锌和蛋白质水解产物的重量比最好为10∶1∶5。
3.根据权利要求1所述的锌螯合前列腺萃取物，其特征在于所述极性有机溶剂包括乙酸乙酯、异丙醇和氯仿。
4.根据权利要求1所述的锌螯合前列腺萃取物，其特征在于所述锌盐包括ZnSO4和ZnCl2。
5.根据权利要求1所述的锌螯合前列腺萃取物，其特征在于所述蛋白质水解产物是氮基酸和未完全水解的蛋白质，包括蛋白 、蛋白胨和白蛋白。
6.一种锌螯合前列腺萃取物的制造方法，其特征在于将动物的前列腺剁碎，于-70℃冷冻，随后悬浮于10倍过量Tris-Hcl缓冲液中，调PH8.0，用均化器破坏，在4℃以3000×g离心分离20分钟，移去上部脂肪，将上清液于37℃培育1小时，用非极性溶剂除去饱和脂肪酸，剩下的含不饱和脂肪酸的水溶液用0.2N的Hcl酸化至PH3.0，用极性溶剂萃取，经冷冻，干燥后制得含不饱和脂肪酸的前列腺萃取物，再与锌盐和蛋白质水解产物按比例混合均匀，制得锌螯合前列腺萃取物，其中不饱和脂肪酸，锌和蛋白质水解产物的重量比最好为10∶1∶5。
7.锌螯合前列腺萃取物的应用是用常规的制药方法加入赋形剂做成锭剂或胶囊状的药品，其特征在于所述药品用于治疗糖尿病。
全文摘要
一种锌螯合前列腺萃取物及其制造方法和应用，从动物前列腺中萃取的不饱和脂肪酸，再与锌盐和蛋白质水解产物形成的螯合物，对治疗糖尿病有显著的疗仪，具有降低血糖浓度和增高血糖廓清率的效果。
文档编号A61K38/01GK1141195SQ9610105
公开日1997年1月29日 申请日期1996年2月13日 优先权日1996年2月13日
发明者穆恩·K·桑 申请人:杜学域